Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-09Bitstream added on 2014-06-13T19:45:10Z : No. of bitstreams: 1 000735059.pdf: 4335227 bytes, checksum: 7137c59ad39313bbb60a087cc2ad7500 (MD5) / O forskolin eleva as concentrações de adenosina monofosfato cíclica (cAMP) por meio da ativação da adenilato ciclase. Esse experimento possuiu o objetivo de utilizar o forskolin para melhorar a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos. No Experimento I o forskolin foi adicionado no meio de maturação in vitro (MIV) com o objetivo de bloquear a meiose nuclear induzindo sua sincronização com a maturação citoplasmática. O Experimento II possuiu o objetivo de induzir uma lipólise química em embriões do D 6 a partir da utilização do forskolin, diminuindo sua sensibilidade após a vitrificação. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6 horas na presença de três concentrações de forskolin: 0,025 mM; 0,05 mM; 0,1 mM e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de forskolin por 18 horas. Após esse tempo os oócitos foram fertilizados e cultivados in vitro. Foi avaliado o estágio de maturação nuclear, a atividade e distribuição mitocondrial, a ultraestrutura oocitária, contagem do número de células e a apoptose celular. O tratamento com forskolin por 6 horas não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, após a retirada do bloqueio e maturação por 18 horas um maior número de oócitos tratados com 0,1 mM de forskolin se encontrou em MI (P<0,05). Não houve diferença com relação a atividade e distribuição mitocondrial nos oócitos, no entanto a maior concentração da droga levou a alterações ultraestruturais nos oócitos, com excesso de metabolização lipídica e desorganização do citoesqueleto. Apesar disso, não se observou diferença na taxa de produção de blastocistos avaliados no D 7, bem como no número total de células íntegras dos embriões. Entretanto, observou-se uma maior taxa de apoptose no grupo de blastocistos produzidos a partir de oócitos bloqueados com a maior concentração... / The forskolin raises concentrations of cyclic adenosine monophosphate (cAMP) through the activation of adenylate cyclase. This experiment aimed the use of forskolin to enhance in vitro production (IVP) of bovine embryos. In Experiment I, forskolin was added in the medium of in vitro maturation (IVM) with the objective of blocking nuclear meiosis inducing your synchronization with cytoplasmic maturation. Experiment II aimed to induce lipolysis chemical in D 6 embryos from the use of forskolin, decreasing its sensitivity after vitrification. In the first experiment, the oocytes remained in IVM medium for 6 hours in the presence of three concentrations of forskolin: 0.025 mM, 0.05 mM, 0.1 mM and then were cultured in medium free forskolin for 18 hours. After this time the oocytes were in vitro fertilized and cultured. We assessed the stage of nuclear maturation, activity and distribution mitochondrial, ultrastructure oocyte, total number of cells and apoptosis. The treatment with forskolin for 6 hours did not resulted in delay in VCBD in relation to control group. However, after the removal of the drug and maturation for 18 hours a higher number of oocytes treated with 0.1 mM of forskolin were still in MI (P<0.05). No differences in relation to mitochondrial activity and distribution were observed between groups. However the higher concentration of the drug induced ultrastructural damage to oocytes, with excess of lipid metabolization and cytoskeleton disorganization. Nevertheless, no statistical differences were observed on blastocyst production and on the number of total cells. Despite of that, a higher rate of ...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-05-05Bitstream added on 2014-06-13T19:05:29Z : No. of bitstreams: 1 leal_ls_dr_botfmvz.pdf: 1424462 bytes, checksum: bbd9bf26b7adb5dc3b7bb266434ac12a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Pesquisadores do mundo inteiro têm investigado a função de fatores e eventos biológicos envolvidos na foliculogênese e no processo de maturação ovocitária in vitro em várias espécies, com o intuito de aprimorar tecnologias de produção e manipulação de embriões. O objetivo do presente estudo foi avaliar: a morfometria ovariana; os aspectos morfométricos e ultra-estruturais dos folículos ovarianos; os fatores que influenciam a recuperação, qualidade ovocitária e taxas de maturação nuclear in vitro; as concentrações de progesterona e insulina plasmáticas e os níveis de hormônios esteróides (estradiol e progesterona) e IGF-I no líquido folicular, em búfalas e vacas. Amostras de sangue e os ovários de 86 búfalas (33 gestantes e 53 não gestantes) e de 95 vacas (36 gestantes e 59 não gestantes) foram colhidos em abatedouros. Os ovários foram transportados ao laboratório em solução salina acrescida de penicilina e estreptomicina a 36ºC. As dimensões ovarianas foram mensuradas com o auxílio de paquímetro e balança digitais. Para a maturação ovocitária in vitro, os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram recuperados por aspiração folicular, selecionados e cultivados em meio TCM-199 suplementado com 10% de soro fetal bovino, piruvato de sódio, FSH, LH, estradiol, cisteamina e gentamicina, por 22 a 24 horas, a uma temperatura de 38,5ºC, em atmosfera úmida com 5% de CO2 em ar. Para as técnicas de histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão foram processados 10 e 5 ovários de cada espécie, respectivamente. As concentrações de progesterona, insulina, estradiol e IGF-I nas amostras de sangue e fluido folicular foram determinadas por procedimento de radioimunoensaio, utilizando-se kits comerciais. Na análise histológica, verificou-se... / Researchers around the world have investigated the function of biological factors and events during folliculogenisis and in the process of in vitro maturation of oocytes in several species in order to improve technologies of embryo production and manipulation. The aim of the present study was to evaluate: ovarian morphometry; morphological and ultrastructural aspects of ovarian follicles; factors affecting the recovery and competence of oocytes and in vitro nuclear maturation; plasma progesterone and insulin concentrations; progesterone, estradiol and IGF-I in follicular fluid, in bubaline and bovine species. Blood samples and ovaries of 86 buffaloes (33 pregnant and 53 non pregnant) and 95 cows (36 pregnant and 59 non pregnant) were collected at slaughterhouses. The ovaries were transported to the laboratory in saline solution enriched with penicillin and streptomycin at 36ºC. The ovarian dimensions were measured using digital paquimeter and balance. For in vitro maturation process, cumulus-oocyte complexes (COCs) were recovered by follicular aspiration, selected and matured in TCM 199 supplemented with 10% fetal calf serum, sodium pyruvate, LH, FSH, estradiol, gentamicin and cysteamin. In vitro maturation was carried out at 38.5ºC under a controlled gas atmosphere of 5% CO2 in humidified air for 22-24 hours. For classical histology and transmission electron microscopy, 10 and 5 ovaries of each species respectively were processed. Progesterone, insulin, estradiol and IGF-I concentrations of blood and follicular fluid were determined by use of radioimmunoassay and commercial kits. In histological evaluation, the diameters of follicles and oocytes increased according to follicular development. Ultrastructural characterization of bubaline and bovine ovarian follicles showed a differentiated cell apparatus for substrate metabolization, ...(Complete abstract click electronic access below)

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2017. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-07T15:34:43Z No. of bitstreams: 1 2017_CarolinaGonzalesdaSilva.pdf: 2680968 bytes, checksum: 8580b3b573218ef34ac470e14ff48768 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-06-04T21:08:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_CarolinaGonzalesdaSilva.pdf: 2680968 bytes, checksum: 8580b3b573218ef34ac470e14ff48768 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-06-04T21:08:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_CarolinaGonzalesdaSilva.pdf: 2680968 bytes, checksum: 8580b3b573218ef34ac470e14ff48768 (MD5) Previous issue date: 2018-06-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). / O sucesso da clonagem por transferência nuclear (TN) está diretamente relacionado ao status epigenético da célula doadora de núcleo. Quanto menos diferenciada a célula, mais fácil é a reprogramação nuclear a um estado embrionário. Da mesma forma, o uso de drogas que atuem nos mecanismos de regulação epigenética, tal como a Tricostatina A (TSA), ajudam nessa reprogramação. O objetivo desse trabalho foi realizar a caracterização epigenética de três tipos de células doadoras de núcleo, sendo elas células-tronco mesenquimais (CTM) provenientes de duas fontes: fluido amniótico (CTM-FA) e tecido adiposo (CTM-TA), e fibroblastos (FIB) da orelha de bovinos; testar o efeito de sua utilização na TN com e sem a adição de TSA; verificar a expressão de genes ligados à epigenética: KAT2A, HDAC1 e HDAC3. Para isso, foram coletas CTM-FA por amniocentese in vivo de dois bovinos (BOV 1 e BOV 2) da raça Gir durante a gestação. Após o nascimento, foram realizadas biópsias de tecido adiposo e pele para isolamento de CTM-TA e FIB, respectivamente. As células foram cultivadas em incubadora a 38,5°C, 5% de CO2 e umidade elevada. Após isolamento, as células foram utilizadas para caracterização de sua origem mesenquimal por meio de marcadores de superfície celular verificados por citometria de fluxo e capacidade de diferenciação em adipócitos, condrócitos e osteócitos. O DNA genômico de todos os tipos celulares foi extraído pelo método de salting out e os status de metilação e hidroximetilação global do DNA foram determinados utilizando os kits MethylFlashTM Methylated DNA Quantification (Colorimetric) e MethylFlashTM Hydroxymethylated DNA Quantification (Colorimetric) (Epigentek), respectivamente. Para a clonagem, ovários foram coletados de abatedouros-frigoríficos para isolamento de ovócitos, que foram submetidos a 18 horas de maturação in vitro. Após a maturação os ovócitos foram enucleados e a célula doadora foi inserida no espaço perivitelínico. Para incorporação da célula ao citoplasma ovocitário, foi realizada a eletrofusão e então, os citoplastos foram submetidos ao cultivo com 50 nM de TSA por 20 h ou em meio sem a TSA. Após sete e oito dias de cultivo a taxa de produção de embriões foi calculada e comparada pelo teste de Tukey (p < 0,05). As culturas celulares das células provenientes do tecido adiposo e do fluido amniótico exibiram os marcadores típicos de CTM na maior porcentagem das células. Observaram-se resultados opostos entre os animais para a metilação do DNA, pois no animal BOV1, as CTM mostraram-se mais metiladas que os FIB, ao contrário do animal BOV2 onde FIB foram mais metilados que as células-tronco. Já o resultado de hidroximetilação seguiu o mesmo padrão para todas as células nos animais BOV1 e BOV2, respectivamente, sendo que CTM-FA foram as menos hidroximetiladas (0,008 e 0,002%), seguidas de FIB (0,013 e 0,009%) e CTM-TA (0,072 e 0,03%). Ao analisar as taxas de produção de embriões com sete dias de desenvolvimento, para o animal BOV1 nenhuma diferença significativa foi encontrada entre os tratamentos. Já para o animal BOV2, as CTM-FA produziram 44,92 ± 8,88% de blastocistos clonados quando os embriões foram expostos a 20 h com a TSA. Esse resultado foi superior a todos os outros tratamentos sem a TSA e semelhante ao tratamento com CTM-TA também com uso da TSA (37,96 ± 15,80%). Os embriões produzidos a partir das CTM-FA do BOV2 expressaram menos HDAC3 quando foram tratados com TSA, além disso, quando não foi utilizada TSA no cultivo, os embriões reconstruídos com FIB apresentaram menor expressão, semelhante aos embriões reconstruídos com CTM-TA. Por fim, a expressão de KTA2A foi maior em embriões tratados com TSA por 20 h quando foram utilizadas CTM, independente da fonte, como doadoras de núcleo. Estes resultados demonstram que quando as CTM foram menos metiladas que FIB, sua associação com TSA foi efetiva em aumentar a produção dos embriões bovinos clonados, entretanto, em contraste, quando as CTM foram mais metiladas sua associação com TSA gerou embriões numa proporção estatisticamente semelhante àquela obtida com CTM na ausência de TSA. Ademais, o uso da TSA foi efetivo em reduzir a expressão da HDAC3 quando CTM-FA foram utilizadas. / The success of cloning by Nuclear Transfer (NT) is directly related to the epigenetic status of the nucleus donor cell. The less differentiated is the cell, the easier is nuclear reprogramming to an embryonic state. Likewise, the use of drugs acting on mechanisms of epigenetic regulation, such as Trichostatin A (TSA), would aid in reprogramming. The objective of this work was to perform the epigenetic characterization of three types of donor nucleus cells, being mesenchymal stem cells (MSC) from two sources: amniotic fluid (MSC-AF) and adipose tissue (MSC-AT), and fibroblasts (FIB) of bovine ear; test the effect of its use on NT with and without the addition of TSA; to verify the expression of genes linked to epigenetics: KAT2A, HDAC1 and HDAC3. For this, MSC-AF samples were collected by amniocentesis in vivo of two Gyr cows (BOV 1 and BOV 2) during gestation. After birth, adipose tissue and skin biopsies were collected for isolation of MSC-AT and FIB, respectively. Cells were grown in incubator at 38.5°C, 5% CO2 and elevated humidity. After isolation, the cells were used to characterize their mesenchymal origin by means of cell surface markers verified by flow cytometry and differentiation capacity in adipocytes, chondrocytes and osteocytes. The genomic DNA of all cell types was extracted by the salting out method and the methylation and hydroxymethylation status of the DNA were determined using the MethylFlash ™ Methylated DNA Quantification (Colorimetric) and MethylFlash ™ Hydroxymethylated DNA Quantification (Colorimetric) (Epigentek) kits, respectively. For cloning, ovaries were collected from slaughterhouses to isolate oocytes, which were submitted to 18 hours of in vitro maturation. After maturation, the oocytes were enucleated and the donor cell was inserted into the perivitelinic space. For incorporation of the cell into the oocyte cytoplasm, electrofusion was performed and then the cytoplasts were cultured with 50 nM TSA for 20 h or in medium without TSA. After seven and eight days of culture the rate of embryo production was calculated and compared by Tukey's test (p <0.05). Cellular cultures of cells from adipose tissue and amniotic fluid exhibited typical MSC markers in the highest percentage of cells. Opposite results were observed among the animals for DNA methylation, because in the BOV1, the MSC were more methylated than the FIB, unlike the BOV2 where FIB were more methylated than the MSC. The hydroxymethylation result followed the same pattern for all cells: MSC-AF were the least hydroxymethylated (0.008 and 0.002%), followed by FIB (0.013 and 0.009%) and MSC-AT (0.072 and 0.03%), respectively for BOV1 and BOV2. When analyzing the production rates of embryos with seven days of development, for the BOV1 no significant difference was found between the treatments. For the BOV2, the MSC-AF produced 44.92 ± 8.88% of cloned blastocysts when the embryos were exposed at 20 h with TSA. This result was superior to all other treatments without TSA and similar to treatment with MSC-AT also using TSA (37.96 ± 15.80%). Embryos produced from the BOV2 with MSC-AF expressed less HDAC3 when treated with TSA; in addition, when TSA was not used in the culture, the embryos reconstructed with FIB presented lower expression, similar to embryos reconstructed with MSC-AT. Finally, KTA2A expression was higher in TSA treated embryos for 20 h when MSC, regardless of source, were used as donor nuclei. These results demonstrate that when MSC was less methylated than FIB, its association with TSA was effective in increasing the production of cloned bovine embryos, however, in contrast, when MSC was more methylated its association with TSA generated embryos in a ratio statistically similar to that obtained with MSC in the absence of TSA. In addition, the use of TSA was effective in reducing the expression of HDAC3 when MSC-AF were used.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2012-04-17T15:50:19Z No. of bitstreams: 1 2011_JoseFelipeWarmilingSpricigo.pdf: 776198 bytes, checksum: 7dc5f032a4e8d4be9695b31ffaede77b (MD5) / Approved for entry into archive by Patrícia Nunes da Silva(patricia@bce.unb.br) on 2012-04-20T15:27:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_JoseFelipeWarmilingSpricigo.pdf: 776198 bytes, checksum: 7dc5f032a4e8d4be9695b31ffaede77b (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-20T15:27:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_JoseFelipeWarmilingSpricigo.pdf: 776198 bytes, checksum: 7dc5f032a4e8d4be9695b31ffaede77b (MD5) / A vitrificaçào com cryotop surgiu como uma opçào promissora para a criopreservaçào de ovócitos, por minimizar efeitos negativos e melhorar as taxas de sobrevivência. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da vitrificaçào em diferentes momentos da maturação in vitro (MTV), quanto às características morfológieas, funcionais e moleculares, em ovócitos bovinos. Foram utilizados complexos-cumulus-ovócitos (CCOs) obtidos de ovários de abatedouio. Paia os experimentos 1 e 2, os ovócitos foram distribuídos em 4 grupos: controle (GC), não vitrificado; 0 hora vitrificado (VO); S horas vitrificado (VS) e 22 horas vitrificado (V22). Todos os grupos vitrificados foram desvitrifícados e retornaram para a MrV até completar 24 horas. Para a avaliação da cromatina, CCOs foram desnudados, fixados e corados com lacmoide. Para a taxa de fecundação, ovócitos foram submetidos à fecundação in vitro (FIV), e após 18 horas de co-cultivo com os espermatozóides foram fixados e corados com lacmoide. O desenvolvimento embrionário foi avaliado, pelas taxas de clivagem e blastocistos em D2. D7 e D8, após a inseminação (pi). Para análise estatística foi empregado o teste Qui-quadrado (P<0,05). Quanto ao experimento 3. primeiramente foi quantificada a expressão de genes ligados à apoptose (Caspase-3 e P-53) e ao controle epigenético (HDAC 2, Dnmt-1 e SUV39H1) em ovócitos maturados m vitro por : 0 (GCO), 8 (GC E), 22 (GC22) e 24 horas (GC24). Posteriormente, foi avaliado o efeito da vitrificaçào em diferentes momentos da MIV (0, 8 e 22 horas) na expressão desses mesmos genes. Para isso ovócitos de todos os grupos vitrifícados e do controle foram coletados ás 24 horas de MIV. A avaliação da expressão gênica. foi realizada por qPCR e os dados analisados por ANOVA one-way. (P<0,0S). A capacidade do ovócito de atingir Mil, após a maturação, clival e se desenvolver até blastocisto foi superior no grupo controle (P<0,05) comparado aos grupos vitrifícados. não havendo diferenças significativas entre estes (P>0.05). Já a taxa de fecundação, apesar de ser superior no grupo controle (P<0.05) o grupo VO apresentou a menor porcentagem de ovócitos fecundados e maior de ovócitos degenerados (P<0,05). comparado aos demais grupos. Quanto ao perfil de expressão gêmea em ovócitos durante a MIV. foi observado que os níveis de transcritos do gene Caspase-3 estavam aumentados (P<0,05). nos grupos GC22 e GC24. comparados á GCO e GCS, também foi observado um aumento (P<0.05) da expressão do gene Dnmt-1. nos grupos GC8. GC22 e GC24 comparados ao GCO. Entretanto, não foi observada alteração na abundância dos transcritos em nenhum dos grupos submetidos à vitnficação (P>0,0:j), comparados ao CG24. Conclui-se que. apesar dos baixos resultados, a vitnficação pode ser empregada para a conservação de ovócitos bovinos, independente do momento da MIV. Os níveis de transcritos avaliados nào foram alterados em resposta à vitrificaçào. Entretanto, foi constatado um aumento na expressão da Caspase-3 e Dnmt-1, durante a MIV. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Vitrification by cryorop method has emerged as a promising option for oocytes cryopreservation, by minimizing negative effects and improving survival rates. The aim of this research was to evaluate the effect of vitrification at different tunes point during in vitro maturation (TVM) on functional, morphological and molecular characteristics of bovine oocytes. For all the experiments cumulus-oocytes-complexes (COCs) were obtained from slaughterhouse ovaries. In first and second experiments, oocytes were distributed into 4 groups: control non-vitrified(C&); 0 hour vitrified (VO); 8 hours vitrified (VS) and 22 hours vitrified (V22). In all groups oocytes were vitrified and wanned, and then returned to incubator until 24 hours of IVM. For chromatin evaluation, COCs were denuded, fixed and stained with lacmoid. To evaluate fertilization rates, oocytes, were fixed and stained with lacmoid 18 hours after in vitro insemination (pi). Embryonic development was accessed by cleavage and blastocyst rates at D2. D7 and D8 (pi). Data were analyzed by Chi-square test (P <0.05). A third experiment was designed to evaluated inRNA expression of apoptosis (Caspase-3 and P-53) and epigenetic control related genes (HDAC 2, SUV39H1 and Dnmtl).First gene expression was quantified at different time points during oocyte IVM: 0 (CGO). 8 (CG 8), 22 (CG22) and 24 hours (CG24). Then, the effect of vitrification at different moments of IVM (0, 8 and 22 hours) on genes expression was studies. Gene expression was performed by qPCR and data were analyzed by one-way ANOVA (P <0.05).. The ability of the oocyte to reach Mil after maturation, to cleave and to develop to blastocyst w:as higher in CG (P <0.05), compared to vitrified groups, which did not differ among them (P:: 0.05). For fertilization rates, CG also presented superior results compared to all vitrified groups (P <0 05). However, when vitrified groups were compared. VO had the lowest rate of fertilized oocytes and higher rate degenerated oocytes than the other groups (P <0.05). Gene expression profile in oocytes during IVM, showed that mRNA levels of Caspase-3 were increased (P <0.05) in both CG22 and C&24 compared to CGO and CGE. An increase in Dnnit-1 gene expression was also observed (P <0.05) in CGS, CG22 and CG24 compared to CGO. No difference in mRNA relative abundance was observed in any of the vitnficated group (P> 0.05), compared to CG24. hi conclusion, despite the poor results, vitrification can be used to preserve bovine oocytes , regardless to IVM time. Transcript levels of the studied genes were not affected by vitrification procedure. However, an increase in mRNA levels of Caspase-3 and Dntnt-1 genes was observed during IVM, suggesting transcription processes during this period.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2013. / Submitted by Luiza Silva Almeida (luizaalmeida@bce.unb.br) on 2013-07-31T19:05:31Z No. of bitstreams: 1 2013_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 2169146 bytes, checksum: 87f2ae8fc25acacc8e11de1b9155d59f (MD5) / Approved for entry into archive by Leandro Silva Borges(leandroborges@bce.unb.br) on 2013-07-31T20:42:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 2169146 bytes, checksum: 87f2ae8fc25acacc8e11de1b9155d59f (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-31T20:42:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_AnaLuizaSilvaGuimarães.pdf: 2169146 bytes, checksum: 87f2ae8fc25acacc8e11de1b9155d59f (MD5) / O sucesso da utilização da maioria das técnicas de reprodução assistida (TRA) depende da disponibilidade de ovócitos saudáveis e no estágio adequado para seu uso. Como um dos fatores limitantes na utilização das TRAs é a disponibilidade de ovócitos competentes, é importante buscar alternativas para auxiliar esses ovócitos melhorando com isso a eficiência dessas técnicas. O objetivo deste trabalho foi testar dois diferentes sistemas de maturação, o sistema SPOM (Simulated Physiological Oocyte Maturation) e a retenção meiótica na presença de ITS (Insulina-transferrina-Selênio), para aumentar a competência do ovócito e consequentemente incrementar a produção de embriões in vitro. Os ovócitos foram obtidos de ovários de abatedouro, sendo que os provenientes de folículos de 1-3 mm foram dissecados da córtex ovariana e os de 3-8 mm, obtidos por punção folicular. Para a avaliação dos estágios de maturação nuclear, os ovócitos foram corados com lacmóide e para verificar o efeito dos sistemas de MIV na produção de embriões, foi avaliada a taxa de clivagem, blastocisto, tamanho dos embriões e número total de células. O corante azul de Trypan foi utilizado para verificar a viabilidade das células do cumulus após a retenção. Os dados de taxa de maturação nuclear e desenvolvimento embrionário foram avaliados pelo teste do χ 2 , e os dados referentes a tamanho e número de células pelo teste de Kruskar-Wallis. O primeiro sistema de maturação a ser testado foi o sistema SPOM em ovócitos de folículos aspirados, com a dose 0,01 UI/ml de FSH, utilizada na MIV convencional, onde as taxas de clivagem, D7 e D8 foram drasticamente reduzidas (P<0,05) quando comparadas com as do grupo controle. O aumento da dose de FSH para 0,1 UI/ml, no sistema SPOM, em ovócitos obtidos de folículos de 1-3 mm não aumentou a produção de embriões (P0<0,05), entretanto em ovócitos obtidos de folículos de 3-6 mm teve efeito prejudicial, sendo as taxas de clivagem e blastocistos inferiores (P<0,05) as do grupo controle Da mesma forma, quando o SPOM foi utilizado na presença de FSH recombinante (FRSr), de BSA como suplemento dos meios e o cultivo realizado sob baixa tensão de O2, uma redução (P<0,05) na taxa de blastocisto foi observada, mas o tamanho e número de células dos embriões foram semelhantes (P>0,05) aos do controle. A segunda alternativa testada foi o uso da cilostamida, inibidor da PDE3, e ITS no cultivo de pré-maturação por 8 e 24 horas. Na concentração de 20µM, a cilostamida reteve 91% dos ovócitos em VG por até 24 horas, entretanto o desenvolvimento embrionário destes embriões foi comprometido, com baixas taxas de clivagem e de embriões em D7 (P<0,05). Foi também avaliada a diminuição da concentração de cilostamida durante o bloqueio e a presença do ITS. Foi observado que a redução da concentração de cilostamida associada ao período menor de retenção causou um aumento da produção de blastocisto semelhante às taxas obtidas para o controle e que o ITS não afetou (P>0,05) à resposta dos ovócitos a retenção com cilostamida. Conclui-se que o sistema SPOM utilizando FSHr, BSA e baixa tensão de O2 afetou o desenvolvimento embrionário. Além disso, a cilostamida quando utilizada para bloquear a meiose tem efeito deletério nos ovócitos e células do cumulus se utilizada por 24 horas na concentração de 20 μM. A menor concentração (10μM) e menor tempo de exposição (8 horas) pode amenizar esse efeito, mas também não causa nenhum incremento na produção de embriões. A presença de ITS durante o bloqueio não afeta a produção de embriões. Mais estudos devem ser realizados na tentativa de utilizar a retenção para incrementar a qualidade de ovócitos utilizados para as TRAs. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The successful use of most assisted reproductive techniques (ART) depends on the availability of healthy and competent oocytes. Considering that one of the limiting factors for using ART's is the availability of good quality oocytes, it is important to find new alternatives which could help those oocytes and then improving the efficiency of these biotechnology. The aim of this study was to test two different maturation systems, the SPOM (simulated physiological oocyte maturation) methodology and the meiotic inhibition in the presence of ITS (Insulin-Transferrin- Selenium), to improve oocyte competence and consequently, the in vitro embryos production. Oocytes were obtained from slaughter house ovaries, being those from follicles from 3-8 mm diameter were obtained by aspiration and those from 1-3mm follicles by dissection. To evaluate maturational stage oocytes were stained with lacmoid, and to verify the effect of maturation system on in vitro embryos production cleavage rate, blastocyst at D7 and D8 rates, embryo size and total cell number were used. The trypan blued stain was used to evaluate cumulus cells viability after meiotic inhibition. Data of nuclear maturation and embryo development were evaluated by the χ2 test and those of embryo size and total cell number by Kruskar-Wallis test. At first, SPOM system was tested in aspirated oocytes, with 0.01 IU/ml of FSH, used in conventional IVM, where rates of cleavage, D7 and D8 were drastically reduced compared to control (P<0.05). Increasing the dose of FSH to 0.1 IU/ml in the SPOM system did not affect (P<0.05) the results and embryos production remained low. When oocytes from follicles of 1- 3 mm were used, although the embryo rate was low for both group, no effect of SPOM system was observed. However, when recombinant FSH (FSHr) was associated with BSA instead of FCS and culture was performed under low oxygen a reduction (P<0.05) on blastocyst rates were observed, but the size and total cell number were similar to the control (P>0.05). The second alternative to be tested was the use of cilostamide, an inhibitor of PDE3A, associated with ITS on pre- maturation culture for 8 and 24 h. Cilostamide concentration of 20μM retained 91% of oocytes in GV for 24 hours, however, embryonic development and quality of these embryos were compromised presented lower cleavage and blastocyst rates than the control (P<0.05). Decreasing cilostamide concentration and the presence of ITS associated with lower period of meiotic inhibition was also evaluated. It was observed that lower concentration (10µM) during less time of inhibition (8h) caused an increase in embryo production being the rates similar to the control (40.7% vs 51.8%) and that ITS had no effect (P>0.05) oocyte response to cilosminde inhibition. It can be concluded that SPOM using FSHr, BSA and low O2 tension does not affect embryo development. In addition, cilostamide had a deleterious effect in oocytes and cumulus cells when used for 24 h at 20 μM concentration to inhibit meiosis. Lower concentration (10μM) with less time of exposure (8 hours) eliminated the deleterious effect but did not increase embryo production. More studies are needed to establish the use of meiotic inhibition associated with other substances to improve oocyte quality to be use on ART’s.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-06-23T16:26:27Z No. of bitstreams: 1 2016_GabrielBatistadeOliveiraBorges.pdf: 2686944 bytes, checksum: f1781800184174c39d644daa64b2a698 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-06-25T18:39:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_GabrielBatistadeOliveiraBorges.pdf: 2686944 bytes, checksum: f1781800184174c39d644daa64b2a698 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-25T18:39:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_GabrielBatistadeOliveiraBorges.pdf: 2686944 bytes, checksum: f1781800184174c39d644daa64b2a698 (MD5) / A bovinocultura de corte é uma das atividades do agronegócio brasileiro que mais movimentam capitais, bens e serviços, sendo que, segundo dados das associações de criadores e exportadores, cerca de 80% dos bovinos criados no país são oriundos de raças zebuínas (Bos taurus indicus), e destes, a maioria é pertencente à raça Nelore ou seus cruzamentos. Os trabalhos conduzidos com a utilização de dados obtidos em frigoríficos podem ser considerados bastante fiéis e valorosos, já que representam uma amostra do que ocorre nos rebanhos comerciais, e entre os dados que podem ser extraídos nessas investigações estão aqueles relacionados à fisiologia da reprodução, como a ocorrência de migração transuterina dos conceptos, simetria da frequência gestacional entre os cornos uterinos, razão sexual e existência de predileção cornual para o sexo do concepto, e associação e estabelecimento de medidas comumente utilizadas em fetometria, que foram os objetivos da presente pesquisa. Foram avaliados 5431 tratos reprodutivos de vacas e novilhas da raça Nelore em um frigorifico no Mato Grosso do Sul, deste total, 1030 animais (19,0%) se encontravam prenhes no momento do abate (sendo 2 casos de gestações gemelares). Para os casos de gestações simples (n=1028), observou-se que em 39,5% delas, o concepto encontrava-se no corno uterino esquerdo (CE), e nos demais 60,5% no direito (CD), frequências estas que diferiram estatisticamente. Em todos os 1028 casos (100%) do presente estudo, havia a presença de um único corpo lúteo no ovário ipsilateral ao corno uterino gestante (seja ele direito ou esquerdo), mostrando a inexistência, ou mesmo a raridade da migração transuterina do concepto. Quanto à frequência de sexos obtida do número total de gestações simples, 46,5% eram de machos e 43,9% de fêmeas, sendo os 9,6% restantes (n=99) referentes aos fetos os quais não se obteve sucesso da determinação do sexo, pela metodologia aplicada. A distribuição dos sexos entre os cornos uterinos ocorreu da seguinte forma: CE com frequências de 47,3%, 45,8% e 6,9% para fêmeas, machos e de sexo indeterminado respectivamente. Para CD, 46,9%, 41,6% e 11,4% dos achados, para machos, fêmeas e indeterminados respectivamente. A razão sexual encontrada foi de 51,5%, considerando apenas as gestações com sexo do concepto identificado, não diferindo estatisticamente o número de machos do número de fêmeas. A suposta predileção de sexo pelos cornos uterinos, não foi verificada, uma vez que a diferença entre os números de machos e fêmeas para um mesmo corno uterino não foram significativas para α=0,05. Já entre os cornos uterinos o mesmo sexo apresentou diferença estatística em sua distribuição, sendo essa diferença maior significativamente para os machos (χ² 23,50) do que para as fêmeas (χ² 9,95). As medidas de crown-rump (CR) e crown-nose (CN), dos conceptos com tamanho de CR entre 2,00 cm e 15,00 cm apresentaram um coeficiente de correlação linear alto, no valor de r=0,990865, sendo CN = (0,3027 x CR) + 0,4491 r2 = 0,9818 equação que descreve o comportamento das variáveis no intervalo. Para a estimativa das idades gestacionais (IG), foi considerada a equação, CR = -10,76 + 0,0199 x IG2 nos quais foram obtidos valores mínimos e máximos de 28,6 dias e 89,9 dias, para o menor embrião encontrado (CR=0,55 cm) e para aqueles com CR=15,00 cm, respectivamente. Sendo assim, a migração transuterina do concepto inexiste, ou mesmo consiste de um evento raro para a raça Nelore, além das razões e predileções sexuais não serem distintas da distribuição simétrica, observada ainda uma maior atividade funcional do ovário direito em relação ao contralateral, e ainda podendo ser estabelecida uma equação com variáveis CR e CN que possa auxiliar, sobretudo na rotina para avaliação reprodutiva veterinária de campo. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Beef cattle is one of the wealthiest activities of Brazilian agribusiness, involving goods and services, and according to the breeders' and exporters’ associations, around 80% of cattle raised in the country 2 come from Zebu breeds (Bos taurus indicus) and of these, most of them are Nellore or their crossbreeding. The abattoir material retrieves reliable information on reproductive parameters in food animals as they represent a sample of what occurs in commercial herds. Data related to the physiology of reproduction can be extracted from these investigations, like the occurrence of transuterine migration of fetuses, symmetry of gestational frequency between uterine horns, sex ratio and sexual segregation in the uterine horns, and establishment of measures commonly used in fetometry, being all of them the objectives of this study. In this study 5,431 reproductive tracts of Nellore cows and heifers were evaluated in an abattoir in the state of Mato Grosso do Sul, from these, 1,030 animals (19.0%) were pregnant at the time of slaughter (including 2 cases of twin pregnancies). Regarding singleton pregnancies (n = 1,028), we observed that in 39.5% of them, the fetus was located in the left uterine horn (LH), and the remaining 60.5% in the right (RH), these frequencies differed statistically. In all 1,028 (100%) cases the presence of a single corpus luteum was perceived in the ovary ipsilateral (whether right or left) to the pregnant uterine horn, indicating the absence of intrauterine migration of the conceptus. The sex ratios obtained from the total number of singleton pregnancies were 46.5% of males, 43.9% of females, the remaining 9.6% (n = 99) from fetuses which, by the methodology applied, were not successfully sex determinate. The distribution of sexes between the uterine horns was as follows: LH with frequencies of 47.3%, 45.8% and 6.9% for females, males, and unknown gender respectively. For RH, 46.9%, 41.6% and 11.4% of the findings for males, females and unknown, respectively. The sex ratio found was 51.5%, considering only pregnancies with sex identified, not differing significantly between the number of males and the number of females. The supposed sex predilection for uterine horns was not observed, since the difference between the numbers of males and females for the same uterine horn were not significant at α = 0.05. Among the uterine horns the same sex showed statistical difference in distribution, and this difference was significantly higher for males (χ² 23.50) than females (χ² 9.95). The crown-rump (CR) and crown-nose (CN) measures, for the conceptus with CR length between 2.00 cm and 15.00 cm, showed a high linear correlation coefficient (r=0.990865), being CN = (0.3027 x CR) + 0.4491, r2 = 0.9818, the equation that describes the behavior between the variables in this range. About the prediction of gestational age (GA), was considered the equation CR = -10,76 + 0,0199 x IG2 that gave minimum and maximum values of 28.6 days and 89.9 days for the smaller embryo found (CR = 0.55 cm) and those with CR = 15.00 cm, respectively. Thus, in Nellore the transuterine migration of conceptus may not exist, or consists of a rare event, in addition, the sex ratio and predilection are not distinguished from the symmetrical distribution, still keeping in mind the higher functional activity of the right ovary compared to the left, and the establishment of fetometry equation being CR and CN as variables, that can be useful, especially in reproductive evaluation, the veterinary field routine.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2018. / Submitted by Fabiana Santos (fabianacamargo@bce.unb.br) on 2018-08-27T18:11:40Z No. of bitstreams: 1 2018_ViltonFranciscodeAssisJúnior.pdf: 916547 bytes, checksum: 4bad36fcd0b9483b066f076dd1f5e277 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-08-30T21:05:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_ViltonFranciscodeAssisJúnior.pdf: 916547 bytes, checksum: 4bad36fcd0b9483b066f076dd1f5e277 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-30T21:05:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_ViltonFranciscodeAssisJúnior.pdf: 916547 bytes, checksum: 4bad36fcd0b9483b066f076dd1f5e277 (MD5) Previous issue date: 2018-08-27 / A pecuária de corte moderna dispõe de diversas ferramentas a serem utilizadas na busca de maior eficiência econômica. Tal eficiência pressupõe uma maior produtividade de bezerros desmamados por hectare, além, da busca incessante de agregar um maior número de arrobas produzidas por hectare, para que a pecuária se torne tão competitiva quanto a agricultura. A fim de buscar um incremento nos índices de prenhez dentre as fêmeas bovinas trabalhadas com protocolos de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), o uso da Inseminação Artificial Intracornual pode ser utilizada como uma ferramenta para este fim. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência do uso desta técnica em vacas Nelore pluríparas não lactantes e suas correlações com as respectivas taxas de prenhez. Foram sincronizadas 400 fêmeas para o trabalho, sendo divididas em 2 grupos com 200 animais cada (grupo 1 e grupo 2). O grupo 1 foi trabalhado em um dia e o grupo 2 no dia seguinte, seguindo esta ordem em todos os manejos do protocolo hormonal. Todos os animais do experimento receberam o mesmo protocolo; no dia 0 foi inserido um dispositivo intravaginal novo com 1 g de progesterona (Sincrogest®, Ouro Fino, Brasil) e aplicação por via intramuscular de 2 mg de Benzoato de Estradiol (Sincrodiol®, Ouro Fino, Brasil). No dia 8 os dispositivos foram retirados e aplicado simultaneamente 1 mg de cipionato de estradiol (SincroCP®, Ourofino, Brasil); 0,526 mg de Cloprostenol Sódico (Sincrocio®, Ouro Fino, Brasil), 300 UI de eCG (SincroECG®, Ourofino, Brasil). A inseminação foi realizada a partir de 48 horas após a retirada do dispositivo intravaginal. Antes da realização da inseminação, os ovários das vacas foram avaliados por meio de ultrassom (Sonoscape A5VET, transdutor linear 7MHz, China); fêmeas com folículo pré-ovulatório menor que 11,0 mm ou sem folículo dominante foram descartadas do trabalho. Fêmeas com folículos maiores ou iguais a 11,0 mm eram inseminadas alternadamente, no corpo ou corno uterino, de modo que cada lote ficou composto por 50 fêmeas inseminadas no corpo e 50 no corno uterino, perfazendo um total de 100 animais para o grupo 1 e 100 animais para o grupo 2. O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a inseminação artificial. Utilizou-se a estatística descritiva seguida pelo teste de normalidade D' Agostino-Pearson omnibus, seguido do teste Chi-quadrado para comparação entre dois grupos no programa GraphPad Prism ® 6. Os dados estão expressos em média ± desvio padrão da média, e P ≤ 0.05 considerado significativo. Entre as fêmeas que foram inseminadas no método convencional (inseminação no corpo do útero logo após a passagem da cérvix), a taxa média de gestação foi de 59,0% e no método experimental (deposição do sêmen dentro do corno uterino), a taxa média de gestação foi de 54,0%, não havendo diferença estatística entre os grupos (P>0,05). / The modern herd livestock has several tools to be used in the search for greater economic efficiency. Such efficiency presupposes a higher productivity of weaned calves per hectare, in addition to the incessant search to aggregate a larger number of kilograms per hectare, so that livestock farming becomes as competitive as agriculture. In order to increase the pregnancy rates among bovine females treated with IATF protocols, the use of Intracornual Artificial Insemination can be used as a tool for this purpose. The objective of the present study was to evaluate the efficiency of the use of this technique in non-lactating pluriparous Nelore cows and their correlations with the respective pregnancy rates. 400 females were synchronized for the work; divided into 2 groups with 200 animals each (group 1 and lot 2). Group 1 was worked on one day and group 2 the next day, following this order in all managements of the hormonal protocol. All animals in the experiment received the same protocol; on day 0 a new intravaginal device with 1 g of progesterone was inserted (Sincrogest®, Ouro Fino, Brazil) and intramuscular application of 2 mg of Estradiol Benzoate (Sincrodiol®, Ouro Fino, Brazil). On day 8 the devices were removed and simultaneously applied 1 mg of estradiol cypionate (SincroCP®, Ourofino, Brazil); 0.526 mg Cloprostenol Sodium (Sincrocio®, Ouro Fino, Brazil), 300 IU of eCG (SincroECG®, Ourofino, Brazil). Insemination was performed 48 hours after the remotion of the intravaginal device. Prior to insemination, cow ovaries were evaluated by ultrasound (Sonoscape A5VET, 7MHz linear transducer, China); females with preovulatory follicles smaller than 11.0 mm or without dominant follicle were discarded from work. Females with a follicle greater than or equal to 11.0 mm were inseminated alternately in the uterine body or horn, so that each group was composed of 50 cows inseminated in the body and 50 in the uterine horn, making a total of 100 cows for group 1 and 100 cows for group 2. The diagnosis of gestation was performed 30 days after artificial insemination. Descriptive statistics were used followed by the D 'Agostino-Pearson omnibus normality test, followed by the Chi-square test for comparison between two groups in the GraphPad Prism ® program. Data are expressed as mean ± standard deviation of the mean, and P ≤ 0.05 considered significant. Among the females that were inseminated in the conventional method (insemination in the body of the uterus shortly after the passage of the cervix), the mean pregnancy rate was 59.0% and in the experimental method (deposition of semen within the uterine horn), the rate mean of gestation was 54.0%, there being no statistical difference between the groups.

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Banca Eunice Oba / Banca: Maria Denise Lopes / Banca: Claudia Barbosa Fernandes / Banca: Gisele Zoccal Mingoti / Resumo: O forskolin eleva as concentrações de adenosina monofosfato cíclica (cAMP) por meio da ativação da adenilato ciclase. Esse experimento possuiu o objetivo de utilizar o forskolin para melhorar a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos. No Experimento I o forskolin foi adicionado no meio de maturação in vitro (MIV) com o objetivo de bloquear a meiose nuclear induzindo sua sincronização com a maturação citoplasmática. O Experimento II possuiu o objetivo de induzir uma lipólise química em embriões do D 6 a partir da utilização do forskolin, diminuindo sua sensibilidade após a vitrificação. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6 horas na presença de três concentrações de forskolin: 0,025 mM; 0,05 mM; 0,1 mM e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de forskolin por 18 horas. Após esse tempo os oócitos foram fertilizados e cultivados in vitro. Foi avaliado o estágio de maturação nuclear, a atividade e distribuição mitocondrial, a ultraestrutura oocitária, contagem do número de células e a apoptose celular. O tratamento com forskolin por 6 horas não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, após a retirada do bloqueio e maturação por 18 horas um maior número de oócitos tratados com 0,1 mM de forskolin se encontrou em MI (P<0,05). Não houve diferença com relação a atividade e distribuição mitocondrial nos oócitos, no entanto a maior concentração da droga levou a alterações ultraestruturais nos oócitos, com excesso de metabolização lipídica e desorganização do citoesqueleto. Apesar disso, não se observou diferença na taxa de produção de blastocistos avaliados no D 7, bem como no número total de células íntegras dos embriões. Entretanto, observou-se uma maior taxa de apoptose no grupo de blastocistos produzidos a partir de oócitos bloqueados com a maior concentração ... / Abstract: The forskolin raises concentrations of cyclic adenosine monophosphate (cAMP) through the activation of adenylate cyclase. This experiment aimed the use of forskolin to enhance in vitro production (IVP) of bovine embryos. In Experiment I, forskolin was added in the medium of in vitro maturation (IVM) with the objective of blocking nuclear meiosis inducing your synchronization with cytoplasmic maturation. Experiment II aimed to induce lipolysis chemical in D 6 embryos from the use of forskolin, decreasing its sensitivity after vitrification. In the first experiment, the oocytes remained in IVM medium for 6 hours in the presence of three concentrations of forskolin: 0.025 mM, 0.05 mM, 0.1 mM and then were cultured in medium free forskolin for 18 hours. After this time the oocytes were in vitro fertilized and cultured. We assessed the stage of nuclear maturation, activity and distribution mitochondrial, ultrastructure oocyte, total number of cells and apoptosis. The treatment with forskolin for 6 hours did not resulted in delay in VCBD in relation to control group. However, after the removal of the drug and maturation for 18 hours a higher number of oocytes treated with 0.1 mM of forskolin were still in MI (P<0.05). No differences in relation to mitochondrial activity and distribution were observed between groups. However the higher concentration of the drug induced ultrastructural damage to oocytes, with excess of lipid metabolization and cytoskeleton disorganization. Nevertheless, no statistical differences were observed on blastocyst production and on the number of total cells. Despite of that, a higher rate of ... / Doutor

Orientador: José Buratini Júnior / Banca: Fabíola Freitas de Paula-Lopes / Banca: fernanda da Cruz Landim / Resumo: O fator de crescimento dos fibroblastos 8 (FGF8) é expresso pelo oócito bovino, ativa os receptores expressos por células do cumulus e oócitos, e está envolvido na regulação da glicólise e meiose no CCO de murinos. O primeiro objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do FGF8 sobre a expansão das células do cumulus, a progressão da meiose e metabolismo energético em CCOs bovinos submetidos à MIV. Uma vez que foram observadas influências sobre a progressão da meiose e no metabolismo energético, os efeitos de FGF8 sobre a abundância de genes que codificam o RNAm que controlam estes processos foram avaliados. O FGF8 não afetou a expansão do cumulus, mas diminuiu a porcentagem de oócitos que alcançaram a metáfase II, consequentemente houve o aumento da porcentagem de oócitos na metáfase I. Tal efeito foi associado com um efeito inibitório do FGF8 sobre os níveis de RNAm que codifica a Ciclina B1 no oócito. Em contraste com os achados anteriores em murinos, o FGF8 leva à diminuição dos níveis de RNAm de NPR2 nas células do cumulus. O FGF8 tende a diminuir a absorção de glicose e produção de lactato, que foi acompanhada por uma redução significativa nos níveis de RNAm para PFKP em células de cumulus. O FGF8 também tende a diminuir a expressão de RNAm para o LDHA, mas não alterou os níveis de RNAm para GLUT1, GLUT4 e PDHA1 nas células do cumulus, enquanto que aumentou a expressão de RNAm para o PDHA1 no oócito. Este estudo apresenta evidências de que o FGF8 pode retardar a progressão da meiose durante a MIV em bovinos por meio de mecanismos que envolvam redução da expressão de Ciclina B1. Além disso, novamente em contraste com estudos em ratos, os dados sugerem um efeito inibidor modesto de FGF8 sobre o metabolismo glicolítico das células do cumulus durante a maturação in vitro de bovinos / Abstract: Fibroblast growth factor 8 (FGF8) is expressed by the bovine oocyte, activate receptors expressed by cumulus cells and oocytes, and is involved in the regulation of glycolysis and meiosis in the murine COC. The first aim of this study was to assess the effects of FGF8 on cumulus expansion, meiosis progression and energy metabolism in bovine COCs submitted to IVM. Then, once influences on meiosis progression and energy metabolism were observed, effects of FGF8 on abundance of mRNA encoding genes that control these processes were assessed. FGF8 did not affect cumulus expansion but decreased the percentage of oocytes reaching metaphase II, while increasing the percentage of oocytes in metaphase I. This was associated with an inhibitory effect of FGF8 on levels of mRNA encoding Cyclin B1 in the oocyte. In contrast with previous findings in mice, FGF8 decreased mRNA levels of NPR2 in cumulus cells. FGF8 tended to decrease glucose uptake and lactate production, which was accompanied by a significant reduction in PFKP mRNA abundance in cumulus cells. FGF8 also tended to decrease LDHA mRNA expression, but did not change GLUT1, GLUT4 and PDHA1 mRNA levels in cumulus cells, while it increased PDHA1 mRNA abundance in the oocyte. This study presents novel evidence that FGF8 can slow meiosis progression during IVM in cattle through mechanisms involving reduction of Cyclin B1 expression / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-02-20Bitstream added on 2014-06-13T19:38:35Z : No. of bitstreams: 1 moya_cf_me_botfmvz.pdf: 156959 bytes, checksum: 8445a2c6b5b162a42c66e3322c1bbd52 (MD5) / A proposta do presente estudo foi descrever as diferenças no padrão morfológico das células do fluido amniótico, no momento do parto. Comparando os resultados obtidos de bezerros nelores oriundos de produção in vitro, transferência de embriões e inseminação artificial. Utilizaram-se 60 animais, divididos em Grupo 01: vinte vacas inovuladas com embriões Nelore produzidos in vitro (PIV) a partir de colheita de oócitos por aspiração folicular de doadoras, Grupo 02: vinte vacas gestando bezerros nelores originados de inovulações de embriões oriundos de doadoras superovuladas pelo método convencional, e Grupo 03: vinte vacas nelores PO gestando bezerros oriundos de inseminação artificial (controle). Próximo ao parto as vacas foram transferidas para piquete maternidade com acompanhamento dos partos. Durante a fase de expulsão e após a ruptura do alantocórion realizou-se a punção do âmnion para colheita de 20mL de liquido, que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Para a classificação celular as amostras, pós-descongelação, foram centrifugadas na Citocentrifuga (Revan Centrifuga Ciclo Cito) a 4000rpm durante seis minutos e empregou-se a técnica de coloração Hematoxilina-Shorr. Ao final deste procedimento, as lâminas citológicas foram montadas com lamínulas empregando Bálsamo do Canadá e posteriormente (após o período de secagem) observadas em microscópio óptico com aumentos de 200x e 400x para visualização das características morfológicas e tintoriais das células epiteliais do feto. Para avaliação da maturidade epidérmica utilizou-se a técnica de coloração de Sulfato Azul do Nilo bem como a porcentagem de células queratinizadas (coloração Hematoxilina-Shorr). As células basais e parabasais não foram encontradas nas lâminas citológicas das amostras de líquido amniótico analisadas... / The aim of the present study was to describe the differences in the cytological pattern of the amniotic fluid, at the moment of delivery, comparing the data from Nelore calves obtained by in vitro production, embryo transfer and artificial insemination. Sixty (n=60) Nelore cows were divided in group 01: Twenty cows (n=20) pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production (IVP) after follicular aspiration; group 02: Twenty cows (n=20) pregnant with Nelore calves obtained by superovulation of embryo donors (ET); group 03: Twenty Nelore cows (n=20) pregnant of calves obtained by artificial insemination (AI; control). Near to the labor, the cows were transferred to a maternal paddock, permitting delivery observation. During the expulsion phase, after the rupture of the alantochorion the amnion was punctured and 20ml of fluid were collected in a plastic device and frozen. The samples, after being thawed, were centrifuged at 4000 rpm, during 06 minutes the Hematoxilin-Shorr stain was applied, after this, the glass slides were covered with Canadian balsame and analyzed in optical microscopy. To the evaluation of the epidermal maturity were used the Blue Nile Sulfate stain, as well the percent of keratinizaded cells observed in the Hematoxilin-Shorr stain. The basal and parabasal cells were not found on the slides of the amniotic fluid samples analyzed. The small intermediate cells (CIP) had its shape as an oval or polygonal form with large cytoplasm and central nucleus. The large intermediate cell (CIG) showed a central nucleus and a bigger nucleus-cytoplasm relation compared to the superficial cells. These were the largest cells found. They showed keratinization with angular edges, having both a picnotic nucleus (CSN) and no nucleus at all. (CSA). The technique of Blue Nile Sulfate stain did not showed satisfactory for the evaluation of the fetal maturity, in spite of some records... (Complete abstract click electronic access below)