Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2004Bitstream added on 2014-06-13T20:19:20Z : No. of bitstreams: 1 leal_ls_me_botfmvz.pdf: 1475432 bytes, checksum: 51e04a53c075c65b9b187c96415fdb1f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)

Orientador : Eunice Oba / Mestre

Orientador: Roberto Sartori Filho / Banca: Pietro Sampaio Baruselli / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Nereu Carlos Prestes / Resumo: A função ovariana e as concentrações circulantes dos hormônios reprodutivos e metabólicos foram comparadas em vacas Bos taurus e Bos indicus sob as mesmas condições climáticas e nutricionais. Vacas secas das raças Nelore (n=12) e Holandês Preto e Branco (HPB; n=12) foram mantidas em baias individuais, recebendo dieta de manutenção de acordo com o NRC (2000). O ECC e o PC se mantiveram em 3,1±0,1 e 2,8±0,2 (escala de 1 a 5) e 508±17 e 575±20 kg, para Nelore e HPB, respectivamente. Após 21 dias de adaptação, o estro foi sincronizado e os animais monitorados diariamente durante um intervalo ovulatório, através de ultrassonografia ovariana, usando um transdutor linear de 7,5 MHz. Durante a primeira onda folicular, os exames ultrassonográficos foram realizados duas vezes ao dia. Amostras de sangue foram colhidas uma vez ao dia para dosagens hormonais. Os resultados foram analisados pelo procedimento Mixed do SAS (P<0,05) e apresentados como média dos quadrados mínimos ± EP. Foi observado que 80% das vacas Nelore e 60% das vacas HPB apresentaram três ondas de crescimento folicular durante o ciclo estral. Todas as demais apresentaram duas ondas. O comprimento médio do ciclo estral foi similar entre Nelore e HPB (23 dias; variando de 21 a 26). Foram observadas diferenças substanciais quanto ao número de folículos antrais entre Nelore e HPB. À emergência da onda, o número de folículos de 2 a 5 mm presentes nos ovários foi de 42,7±5,9 para Nelore (variando de 25 a 100) e 19,7±3,2 para HPB (variando de 5 a 40). O desvio folicular ocorreu, em média, 2,3 dias após a ovulação, independente de raça, quando o maior folículo atingiu 7,0±0,2 e 8,9±0,4 mm de diâmetro em Nelore e HPB, respectivamente. O diâmetro máximo do folículo ovulatório (15,7±0,3 vs 13,4±0,3 mm), assim como o volume... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Doutor

Orientador: José Buratini Júnior / Banca: Mayra Elena Ortiz D'Avila Assumpção / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Resumo: Fatores de crescimento fibroblástico têm sido descritos como importantes reguladores locais do desenvolvimento folicular. Recentemente, foi relatada a expressão do FGF-8 e seus receptores, FGFR-3c e -4, em folículos antrais bovinos. O FGF-17 e o FGF-18 pertencem à subfamília do FGF-8 e ativam eficientemente o FGFR-3c e FGFR-4. Objetivando identificar outros FGFs capazes de ativar estes receptores, investigou-se (a) os padrões de expressão do FGF-17 e FGF-18 em folículos antrais bovinos; (b) a regulação da expressão do RNAm do FGF-17 pelo FSH e IGF-1 em células da granulosa; (c) a expressão do RNAm do FGF-17 em oócitos imaturos e maturados in vivo e in vitro, e (d) a expressão das proteínas FGF-17 e FGF-18 em folículos antrais bovinos. Amostras de células da teca e células da granulosa foram obtidas de ovários de vacas de abatedouro e o RNA total destas células foi extraído. As concentrações de estradiol (E2) e progesterona (P4) no fluido folicular foram mensuradas por Radioimunoensaio (RIA) e os folículos agrupados de acordo com a razão E2:P4 intrafoliculares (atrésicos; <0,01, transicionais; 1-0,01 e saudáveis; >1). "Pools" contendo 20 oócitos foram obtidos pela remoção das células do cumulus de complexos cumulus-oócito (CCOs) e o RNA total extraído. A expressão do FGF-17 e do FGF-18 foi investigada por RT-PCR em tempo real e normalizada pela expressão dos controles endógenos GAPDH, CYC-A ou Histona (H2a). Células da granulosa de folículos de 4 a 8 mm foram cultivadas em meio livre de soro fetal e tratadas com FSH (0; 0,1; 1; 10 ou 100 ng/mL) ou IGF-1 (0; 5; 10; 50; 100 ng/mL) para avaliar os efeitos dos tratamentos na expressão do RNAm do FGF-17. A presença das respectivas proteínas foi investigada por imunohistoquímica. Os dados foram analisados por ANOVA ou testes não-paramétricos quando a distribuição não foi normal.A expressão do RNAm... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fibroblast growth factors have been described as important local regulators of follicle development. FGF-8 and its receptors, FGFR-3c and FGFR-4, have already been reported in bovine antral follicle. Aiming to identify other FGFs capable to activate this receptors, we assessed (a) the spatial and temporal patterns of FGF-17 and FGF-18 gene expression in bovine antral follicles; (b) FGF-17 mRNA regulation by FSH and IGF-1 in cultured granulosa cells ; (c) FGF-17 mRNA expression in immature oocytes and in vivo and in vitro matured oocytes; and (d) FGF-17 and FGF-18 protein expression in bovine antral follicles. Theca and granulosa cells samples were obtained from abattoir ovaries for total RNA extraction. Estradiol (E2) and progesterone (P4) concentrations were measured by RIA in the follicular fluid. Follicles were grouped according to health status based on the E2:P4 ratio (atretic: <0.01; transitional: 0.01-1; healthy: >1). Pools containing 20 oocytes were obtained by removing cumulus cells of cumulus-oocyte complexes (COCs) and total RNA was extracted. FGF-17 and FGF-18 mRNA expression was examined by semiquantitative real time RT-PCR using GAPDH, CYC-A or histone H2a as controls. Granulosa cells from follicles (4-8 mm) were cultured in serum-free medium supplemented with FSH (0, 0.1, 1, 10, 100 ng/mL) or IGF-1 (0, 5, 10, 50, 100 ng/mL) to assess effects of treatments on FGF-17 mRNA expression. The presence of FGF-17 and FGF-18 proteins was investigated by immunohistochemistry. Data were analized by ANOVA or non-parametric analysis when not normally distributed. FGF-17 mRNA expression was detected predominantly in granulosa cells but also in theca cells, and was higher in atretic follicles. FGF-17 mRNA was also detected in immature oocytes, was reduced in in vivo matured oocytes and absent in in vitro matured oocytes. FSH and IGF-1 inhibited FGF-17 mRNA expression in cultured granulosa... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-11-21T14:22:35Z No. of bitstreams: 1 2012_RosanaCamargoNishimura.pdf: 5708270 bytes, checksum: 77b7bbcafa5c6d350028f17c8eb48482 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2012-11-21T14:41:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_RosanaCamargoNishimura.pdf: 5708270 bytes, checksum: 77b7bbcafa5c6d350028f17c8eb48482 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-11-21T14:41:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_RosanaCamargoNishimura.pdf: 5708270 bytes, checksum: 77b7bbcafa5c6d350028f17c8eb48482 (MD5) / Embriões de mamíferos sofrem duas ondas de reprogramação, uma no zigoto, onde os genomas maternos e paternos são desmetilados e em seguida metilados de novo, e outra nas células germinativas primordiais. Acredita-se que a metilação de novo nas células germinativas masculinas esteja estabelecida ainda antes do nascimento, no entanto, como e quando esse processo ocorre em bovinos ainda não foi estabelecido. Sendo assim, este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de verificar se há reprogramação epigenética durante a espermatogênese através da avaliação do perfil de metilação da região do éxon 1 do gene XIST em diferentes células espermáticas. Foram utilizados espermatócitos, espermátides alongadas e espermatozóides da cabeça e cauda do epidídimo coletados de testículos obtidos em abatedouro. As células coletadas tiveram o seu DNA extraído e em seguida tratado com bissulfito de sódio. O DNA tratado foi amplificado através de PCR nested, e o produto amplificado foi inserido em um vetor e clonado em bactérias. O DNA plasmidial foi extraído e sequenciado. As sequências do experimento foram comparadas com a sequência do gene XIST depositada no GenBank, e aquelas que apresentaram taxa de conversão do bissulfito de sódio ≥95% e homologia ≥97% com a sequência do GenBank foram utilizadas. Para a comparação do nível de metilação entre os grupos foram utilizados os testes de Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância de P<0,05. O grupo dos espermatócitos, espermátides alongadas, espermatozóides de cauda e cabeça de epidídimo apresentaram 15,70%±14,54, 1,96%±1,96, 74,09%±6,78 e 45,09%±20,19 de metilação, respectivamente, sendo que o grupo da cabeça de epidídimo apresentou-se mais metilado do que os grupos espermatócitos e espermátides alongadas (P<0,01). Quando foram formados e comparados dois grupos, um com espermatócitos e espermátides alongadas, e outro com espermatozoides de cabeça e cauda de epidídimo, a análise mostrou haver diferença entre eles (P<0,01) com relação a percentagem de metilação. Os resultados sugerem que a reprogramação epigenética em bovinos ainda está ocorrendo durante a formação do espermatozóide. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Mammalian embryos undergo two waves of genome reprogramming, the first in the zygote, when paternal and maternal genomes are demethylated and, just after, re-methylated, and the second in the primordial germ cells. It is believed that re-methylation is reestablished in male germ cells before birth, however, it is not clear when and how this process occurs in bovine. Thus, this work aimed to verify if there is epigenetic reprogramming during spermatogenesis through the evaluation of the methylation profile of XIST gene exon 1 in different spermatogenic cells. Spermatocytes, elongated spermatids and spermatozoa from epididymis head and tail were collected from bovine testes obtained from a slaughterhouse. The collected cells had their DNA extracted and treated with bisulfite. The treated DNA was amplified through nested PCR, and the product was inserted on a vector and cloned in bacteria. The plasmidial DNA was extracted and sequenced. The sequences of the experiment were compared with the sequence of gene XIST from the GenBank and those that presented bisulfite conversion rate of ≥95% and homology of ≥97% with the sequence from GenBank were utilized. To compare the methylation level between the groups Kruskal-Wallis and Mann-Whitney tests were used, with significance level of P<0.05. The spermatocytes, elongated spermatids and spermatozoa from epididymis head and tail groups presented 15.70%±14.54, 1.96%±1.96, 74.09%±6.78 and 45.09%±20.19 of methylation respectively. The epididymis head group was more methylated then spermatocytes and elongated spermatids groups (P<0.01). When arranged in two groups, one with spermatocytes and elongated spermatids, and another with epididymids spermatozoa, and compared, it was observed that the methylation level was different (P<0.01) between them. These results suggest that epigenetic reprogramming is still occurring during spermatozoa formation.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2006. / Submitted by Érika Rayanne Carvalho (carvalho.erika@ymail.com) on 2009-10-03T23:21:41Z No. of bitstreams: 1 2006_Carlos Frederico Martins.pdf: 1121178 bytes, checksum: b2ff281db7605650ff17aff1cbe0f4d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2010-01-04T14:24:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Carlos Frederico Martins.pdf: 1121178 bytes, checksum: b2ff281db7605650ff17aff1cbe0f4d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-04T14:24:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Carlos Frederico Martins.pdf: 1121178 bytes, checksum: b2ff281db7605650ff17aff1cbe0f4d0 (MD5) Previous issue date: 2006 / A liofilização é um método que visa à preservação celular através da retirada da água dos sistemas biológicos por sublimação do gelo. Recentemente, a liofilização tem sido aplicada para preservar espermatozóides de mamíferos, representando uma ferramenta alternativa para conservação do material genético. Nesta tese foi testado o efeito da liofilização com diferentes meios protetores sobre a estrutura e a função dos espermatozóides bovinos. Para isto foram testados os seguintes meios: (T 1) - TCM hank’s com 10% de SFB; (T 2) - TCM hank’s com 10% de SFB e trehalose 0,2 M; (T 3) – Solução de EGTA, composta de 50mM/L de EGTA [ethylene glycol-bis (-aminoethyl ether)-N,N,N’,N’-tetraacetic acid] e 10mM/L de tris-HCl. Os efeitos da liofilização espermática foram estudados utilizando-se a microscopia óptica, para avaliar motilidade, retenção de cauda e de acrossoma com o uso da coloração de giemsa; a microscopia eletrônica, para avaliar ultra-estruturas importantes, tais como: membrana plasmática, acrossoma, mitocôndrias e microtúbulos; microscopia de fluorescência para avaliar a condição nuclear, através das técnicas de acridine orange test (AOT) e terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP nick-end labeling (TUNEL); e finalmente a injeção intracitoplasmática de espermatozóide (ICSI), para verificar o potencial de fecundação e de desenvolvimento embrionário dos espermatozóides liofilizados. Os resultados do primeiro trabalho indicaram que a viabilidade nuclear pode ser preservada de acordo com o meio protetor utilizado. Ainda demonstrou que a técnica de TUNEL é mais sensível que AOT para identificar danos nucleares, sendo a mais indicada para esta finalidade. No segundo trabalho, os dados revelaram que a liofilização ainda é um método agressivo aos espermatozóides, danificando a membrana plasmática e tornando-os imóveis. Porém, algumas estruturas, como acrossomo e mitocôndrias foram preservadas em todos os tratamentos. O núcleo foi melhor preservado nos meios com trehalose e EGTA. Estes tratamentos com a menor porcentagem de fragmentação nuclear também apresentaram as melhores taxas de cabeças descondensadas, formação de pró-núcleos e desenvolvimento embrionário, confirmando a avaliação de TUNEL. Estes resultados indicaram que o espermatozóide liofilizado participa do processo de fecundação quando utilizado pela ICSI. Entretanto, estudos adicionais são necessários, sendo que a melhoria desta tecnologia dependente dos meios protetores e de avanços na técnica de ICSI nos bovinos. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Lyophilization is a procedure developed for cell preservation, as a result of restriction of active water from biological systems by ice sublimation. Recently, freezedrying process has been used to preserve mammalian spermatozoa, becoming an alternative tool for genetic material preservation. In the present thesis the effect of lyophilization with different protecting medium on the bovine sperm cells structure and function was evaluated. The following medium were tested: (T 1) - TCM Hank’s with 10% FCS; (T 2) - TCM Hank’s with 10% de SFB and trehalose 0,2 M; (T 3)–EGTA solution, composed of 50mM/L de EGTA [ethylene glycol-bis (-aminoethyl ether)- N,N,N’,N’- tetraacetic acid] and 10mM/L of Tris-HCl. Effects of sperm lyophilization were evaluated using optical microscopy analysis to assess motility, maintenance of the tail, and acrosome integrity by trypan-bleu/giensa stain; electron microscopy analysis was used to evaluated ultrastructure of important components such as plasma membrane, acrosome and microtubules; fluorescence microscopy was used to analyzed nuclear integrity by Acridine Orange Test (AOT) and terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUDP nick-end labeling (TUNEL); and finally, intracytoplasmic sperm injection (ICSI) to verify the fecundity and embryo development potential of lyophilized spermatozoa. The results of the first experiment indicated that nuclear viability preservation depends on the protector media utilized. In addition, it showed that TUNEL technique is more sensitive than AOT to detect nuclear damage, being the most indicated for nucleus evaluation. In the second experiment, data demonstrated that lyophilization is an aggressive procedure for the sperm cells, causing damage in the plasma membrane and lost of motility. However, other cell components such as acrosome and mitochondria were similarly preserved in all treatments. Nuclei were better conserved in medium containing EGTA and trehalose. Those treatments, which had lower of fragmented DNA, also presented higher rates of decondensed sperm head, pronucleus formation and embryo development, confirming TUNEL evaluation. Theses results suggested that freeze-drying spermatozoa participate in the process of fertilization when used for ICSI. However, additional studies are needed, being the improvements in this technology reliant on the adequate protector media and in the higher efficiency of ICSI technique.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2009. / Submitted by Larissa Ferreira dos Angelos (ferreirangelos@gmail.com) on 2010-03-22T18:17:53Z No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-05-11T01:39:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-05-11T01:39:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_EsterSiqueiraCaixeta.pdf: 758651 bytes, checksum: 45bc51487131a4d93e30e7209f9c9405 (MD5) Previous issue date: 2009-01 / O sucesso das várias técnicas de reprodução assistida depende da competência do ovócito. Entretanto, os fatores envolvidos na sua aquisição e as características moleculares de um ovócito competente não são completamente conhecidos. Com o objetivo de avaliar genes relacionados com a competência do ovócito foi quantificado o nível de transcritos de genes candidatos em ovócitos (H1Foo, H2A, H3A, GHR, GDF9, BMP15, OOSP1) e nas células do cumulus (FSHR, EGFR, GHR, PTX3, IGF-II) com diferentes níveis de competência. Folículos ovarianos foram dissecados e distribuídos de acordo com seu diâmetro em quatro grupos: (1) 1,0 a 3,0 mm; (2) 3,1 a 6,0 mm; (3) 6,1 a 8,0 mm; (4) ≥ 8,1 mm. Os complexos cumulus-ovócitos (COCs) foram liberados, classificados morfologicamente, maturados, fecundados e cultivados in vitro, ou desnudados para a mensuração do diâmetro do ovócito. Os ovócitos em estágio de vesícula germinativa desnudados e suas células do cumulus correspondentes foram utilizados para análise de expressão gênica por RT-qPCR. A taxa de blastocistos foi maior nos ovócitos recuperados de folículos >6 mm, que nos outros dois grupos, confirmando que o tamanho folicular é um bom modelo para o estudo da competência. Nos ovócitos, somente os transcritos da H2A aumentaram gradualmente de acordo com o tamanho do folículo, sendo maior (P<0,05) nos ovócitos originados de folículos ≥8,1 mm do que naqueles menores que 6,0 mm. Dos cinco genes avaliados nas células do cumulus, três (FSHR, EGFR, GHR) mostraram diferença no nível de RNAm, aumentando deacordo com o tamanho folicular. Com base nos resultados, foi confirmada a implicação crítica da H2A no desenvolvimento da competência. Além disso, foram identificados genes importantes nas células do cumulus, os quais estão associados com a competência do ovócito e podem refletir a sua qualidade. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The success of the various assisted reproductive techniques depends on oocyte competence. However, the factors involved on its acquisition and the molecular attributes of competent oocyte are generally unknown. In an attempt to assess genes related with oocyte competence we quantify transcripts for candidate genes in oocytes (H1Foo, H2A, H3A, GHR, GDF9, BMP15, OOSP1) and cumulus cells (FSHR, EGFR, GHR, PTX3, IGF-II) of different levels of competence. Follicles were dissected and distributed according to their diameter into 4 groups: (1) 1.0 to 3.0 mm; (2) 3.1 to 6.0 mm; (3) 6.1 to 8.0 mm; (4) ≥ 8.1 mm. The COCs were released, morphologically classified, matured, fertilized and cultured in vitro or denuded for diameter measurements. The denuded germinal vesicle oocytes and their correspondent cumulus cells were used for gene expression analysis by RT-qPCR. Blastocyst rate was higher for the oocytes recovered from follicles >6 mm than the other two groups, confirming that follicles size is a good model to study competence. In the oocyte, only H2A transcript increased gradually according to follicle size, being greater (P<0.05) in oocyte originated from follicles ≥8.1 mm than those lower than 6.0 mm. Of the 5 genes evaluated in the cumulus cells, 3 (FSHR, EGFR and GHR) showed differences in mRNA level, increasing according to follicular size. In conclusion, we confirmed the critical implication of H2A on developmental competence, and identify important genes in cumulus cells which are associated with oocyte competence and can reflect its quality.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2010-11-05T12:43:56Z No. of bitstreams: 1 2010_RodrigoDornelesTortorella.pdf: 468344 bytes, checksum: 91a0e5c62f623c71213943d33891f6b5 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-11-05T21:32:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RodrigoDornelesTortorella.pdf: 468344 bytes, checksum: 91a0e5c62f623c71213943d33891f6b5 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-11-05T21:32:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RodrigoDornelesTortorella.pdf: 468344 bytes, checksum: 91a0e5c62f623c71213943d33891f6b5 (MD5) / O objetivo do estudo foi verificar a influência da aplicação do hormônio folículo estimulante (FSHp) e da gonadotrofina coriônica equina (eCG) em um programa hormonal de inseminação artificial em tempo fixo (IATF) utilizado em vacas lactantes. Para todos os experimentos foram utilizadas vacas cruza Bos taurus x Bos indicus, amamentando, 40-60 dias pós-parto e com condição corporal média 3 (1- muito magra e 5- muito gorda). Foi utilizado um protocolo hormonal de IATF base para todos os experimentos, que consistia na aplicação de benzoato de estradiol (2 mg, IM) e colocação de pessário vaginal com acetato de medroxiprogesterona (250 mg MAP; Dia 0). No dia 6 foi aplicado cloprostenol sódico (0,265 mg, IM), no dia 8 o pessário vaginal foi retirado e 24 horas após os animais recebiam GnRH (100 g, IM), sendo inseminados 16 horas após. No experimento 1, os animais foram distribuídos em 4 grupos: Controle (n=6); eCG6 (n=6) foram aplicadas 400 UI de eCG IM no dia 6; FSH10 (n=5) 10 mg de FSHp IM no dia 6; FSH20 (n=5) 20 mg de FSHp IM no dia 6. Não houve diferença estatística entre os grupos quanto a tamanho dos folículos dominantes (P>0,05). No experimento 2, foram formados 5 grupos experimentais: Controle (n=4); eCG6 (n=7) foram aplicadas 400 UI de eCG IM no dia 6; FSH6 (n=6) 10 mg de FSHp IM no dia 6; eCG8 (n=6) 400UI de eCG no dia 8 e FSH8 (n=6) 10 mg de FSHp IM no dia 8. O tamanho médio dos folículos dominantes no dia 9 não diferiu, porém quando se analisa os dados das duas dinâmicas em conjunto existe diferença entre o grupo eCG6 (10,590,54 mm; n=12) para o Controle (9,510,55 mm; n=10) e FSH6 (9,120,52 mm; n=12) (P>0,05). O volume luteal no dia 5 após ovulação nos grupos Controle (n=2), eCG6 (n=6), FSH6 (n=2) e eCG8 (n=3) foi: 797,9562,33 mm3, 2.059,63247,79 mm3, 1.492,24655,73 mm3 e 1.615,74129,01 mm3, respectivamente. O grupo eCG6 foi superior ao Controle (P<0,05), porém não houve diferença entre os demais grupos. Nos dias 10 e 15 os corpos lúteos das vacas dos grupos Controle e FSH6 sofreram luteólise e os grupos eCG6 e eCG8 não diferiram (P>0,05). A taxa de prenhez entre os grupos eCG6 (23/96=23,96%) e eCG8 (14/103=13,59%) tendeu a diferir (P=0,06), porém o volume luteal no dia 10 após ovulação e taxa de ovulação não diferiram (P>0,05). A concentração de P4 foi maior no grupo eCG6 (9,381,01 ng/ml; n=13) em relação ao eCG8 (5,390,61 ng/ml; n=13) no dia 10 pós-ovulação. Os resultados mostram que o folículo necessita de um estímulo hormonal para o crescimento, com ação nos receptores de FSH e LH, antes da retirada da fonte de progesterona. Em conclusão, nosso resultados evidenciam que a substituição do eCG pelo FSHp em vacas com cria cruza Bos taurus x Bos indicus não é benéfica para aumentar os índices de prenhez do rebanho. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The objective of this study was to evaluate the influence of Follicule Stimulating Hormone (FSHp) and Equine Chorionic Gonadotropin (eCG) using a Timed Artificial Insemination (TAI) in suckled beef cows. Only suckling cows (Bos taurus x Bos indicus) with a body condition (3) score on a scale of 15 (1 very thin; 5 very fat) were used in this study. Cows were treated with estradiol benzoate (2 mg, IM) and a vaginal device containing 250 mg of medroxyprogesterone acetate (MPA) on the first day of treatment. On day six, cows were treated with cloprostenol (0.265 mg, IM). The devices were removed on day eight and cows were treated with Gonadotrophin Release Hormone (GnRH; 100 g, IM) 24 h after (day nine). All cows were inseminated after 16 h of GnRH administration. In experiment I, cows were randomly allocated in four treated groups as follow: Control (n=6), eCG6 (400 IU eCG on day six; n=6), FSH10 (10 mg FSHp on day six; n=5), and FSH20 (20 mg FSHp on day six; n=5). The average size of the dominant follicle on day nine did not differ (P>0.05). In experiment II, cows were randomly allocated in five treated groups as follow: Control (n=4); eCG6 (400 IU eCG on day six; n=6), FSH6 (10mg FSHp on day six; n=6), eCG8 (400UI eCG on day eight, n=6), and FSH8 (10mg FSHp on day eight; n=6). The average size of the dominant follicle on day nine did not differ. Both experiments showed no statistic differences. However, we observed a significative difference between the eCG6 group (10.590.54, n=12) compared to Control (9.510.55, n=10) and FSH6 (9.120.52, n=12) when data from both experiments were combined (P<0.05). In experiment II, we also observed the influences of the follicular growth and the day of hormone administration on the luteal volume on days 5, 10 and 15 after ovulation. On day five, the mean+S.E.M. luteal volume were: Control (797.9562.33 mm3, n=2), eCG6 (2059.63247.79 mm3, n=6), FSH6 (1492.24655.73 mm3, n=2), and eCG8 (1615.74129.01 mm3, n=3). The only difference was observed between Control and eCG6 treated groups (P<0.05) due to luteolysis occured after 5 days. On days 10 and 15 after ovulation no difference was observed. After experiment I and II, we decided to use the eCG6 and eCG8 protocols to evaluate the pregnancy rates of 199 cows. Pregnancy rates showed a tendency to be different (P=0.06) when compared the eCG6 (23/96, 23.96%) to eCG8 (14/103, 13.59%) treated cows, although there were no difference on ovulatory rate and CL volume on day 10. Serum P4 differ between eCG6 (9.381.01 ng/ml; n=13) and eCG8 (5.390.61 ng/ml; n=13) on day 10 post ovulation (P<0.05). Our results suggest that the follicle require a hormonal stimulus to its growth on FSHr and LHr before progestagens withdrawal. In conclusion, we provide evidence that the uses of FSHp instead of eCG in suckled beef cows in not beneficial to improve pregnancy rates.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2006. / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-10-19T22:24:40Z No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Rejected by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br), reason: Falta abstract. Está na p. xv on 2010-10-19T22:45:49Z (GMT) / Submitted by samara castro (sammy_roberta7@hotmail.com) on 2010-11-04T09:39:31Z No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2010-11-05T21:52:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-11-05T21:52:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006-Georgia Assis Corrêa.pdf: 547203 bytes, checksum: 9313c80c72e30acdf66d51b83b4d9867 (MD5) / Apesar dos avanços obtidos nos últimos anos nas técnicas de maturação, fecundação e cultivo in vitro de embriões bovinos, a qualidade dos embriões produzidos in vitro ainda é inferior a dos in vivo. O ambiente de cultivo após a fecundação é considerado responsável pela qualidade dos embriões. Dentre os fatores que podem influenciar o ambiente de cultivo, o estresse oxidativo causado pela alta tensão de O2 tem recebido especial atenção. Atualmente, a maioria dos sistemas de cultivo utilizada para a PIV usa o meio SOFaaci com atmosfera de 5% de O2. Portanto, o presente estudo teve por objetivo comparar a produção de embriões em sistema de cultivo com alta e baixa tensão de O2. Um total de 1118 ovócitos obtidos de ovários de abatedouro foram maturados e fecundados in vitro. Dezoito horas após a inseminação (pi) os zigotos foram separados em 2 grupos. No primeiro grupo (T1) os zigotos foram lavados e transferidos para o meio de cultivo SOFaaci e cultivados por 7 dias em atmosfera de 5% CO2 em ar, à 39°C. No outro grupo (T2), os zigotos foram desnudados por pipetagens sucessivas, e transferidos para o meio SOFaaci, onde foram cultivados em atmosfera de 5% CO2 e 5% de O2, a 39°C. As taxas de clivagem foram avaliadas 48 horas pi e as de blastocisto em D6 e D7 pi. De ambos os grupos, um total de 94 embriões no estágio de blastocisto expandido em D7 foram fixados e corados com aceto-orceína para contagem do número de células, e 7 "pools" com 15 embriões de cada tratamento, foram congelados para avaliação da expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo, sendo superóxido dismutase (Mn-SOD), catalase e glutationa peroxidase (GPX4). Os dados relativos à taxa de clivagem e blastocisto foram analisados pelo teste do Chi-quadrado, os de número de células pela análise de variância e os relativos à expressão gênica, pelo teste t de Student ou teste de Mann-Whitney. A taxa de clivagem foi semelhante (P>0,05) para os grupos sendo 77,4% para o T1 e 79,9% para o T2. A taxa de blastocisto em D6 foi maior (P<0,05) no grupo cultivado em baixa tensão de O2 (40,7%) do que no de alta tensão (33,8%). Entretanto, a taxa de blastocisto em D7 foi similar (P>0,05) para os dois grupos, sendo 44,7% e 47,1% para T1 e T2, respectivamente. O número total de células (T1= 175,6±54,1; T2= 160,6±41,8) dos embriões, não variou (P>0,05) entre os dois sistemas de cultivo. A quantidade relativa de transcritos para o gene Mn-SOD foi maior (P<0,05) na presença de alto O2, para a catalase e a GPX4 o nível de expressão foi semelhante nos dois sistemas de cultivo. Esses resultados sugerem que o cultivo de embriões bovinos em meio SOFaaci sob alta tensão de O2 na presença de células do cumulus não afeta a quantidade e qualidade dos embriões produzidos in vitro. É possível que as células do cumulus tenham um papel importante na retirada de substâncias indesejáveis minimizando o estresse oxidativo causado pela alta tensão de O2. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Although substantial progress has been made in the procedures for in vitro maturation, fertilization and culture of bovine oocytes, the percentage and quality of embryos produced in vitro are lower than those produced in vivo. The environment where embryos are cultured after fertilization is the main factor responsible for their quality. Among the factors that can influence the culture environment, oxidative stress caused by high O2 tension, has received special attention. Currently, the majority of the in vitro culture systems for embryo production (IVP) use SOFaaci medium under 5% of O2. Therefore, the present study had the objective to compare in vitro embryo production using high and low O2 during embryo culture. A total of 1118 oocytes obtained from abattoir ovaries were matured and fertilized in vitro. Twenty hours pos-insemination (hpi) the zygotes were divided into two groups. In the first group (T1) the zygotes were washed and transferred to SOFaaci medium and cultured for 7 days under 5% CO2 in air, at 39°C. In the second group (T2) the zygotes were denuded by successive pipetting and then, transferred to SOFaaci medium and cultured under 5% CO2 and 5% de O2 at 39°C. Cleavage rates were evaluated 48 hpi and the blastocyst rates at D6 and D7 pi. From both groups a total of 94 expanded blastocyst, from D7 of culture, were fixed and stained with acetoorcein to evaluate cell numbers. Seven pools of 15 embryos from each treatment were frozen for gene expression evaluation. The abundance of transcripts for genes related to oxidative stress, superoxide dismutase (Mn-SOD), catalase and gluthatione peroxidase (GPX) were determined using a semi-quantitative PCR. Data for cleavage and blastocyst rates were analyzed by Chi-square test and those for embryo cell number by analysis of variance. Data from gene expression were analyzed by t test or Mann-Whitney test. Cleavage rate was similar (P>0.05) for both groups, being 77.4 % for T1 and 79.9% for T2. The blastocyst rate at D6 pi was higher (P<0.05) in the group cultured under low O2 tension (40.7%) than in the high O2 tension (33.8%). However, blastocyst rate at D7 was similar (P>0.05) for both groups, being 44.7% and 47.1% for T1 and T2, respectively. Embryos total cell numbers (T1=175.654.1; T2=160.641.8) did not differ between culture systems (P>0.05). The relative abundance of transcripts for Mn-SOD gene was higher (P<0.05) for embryos cultured in high O2 tension. The catalase and GPX expression level was similar for both systems. The results suggested that culture of bovine embryos in SOFaaci medium under high O2 tension, in the presence of cumulus cells, does not affect quantity and quality of IVP embryos. It is possible that the cumulus cells have an important role in the removal of detrimental substances, minimizing the oxidative stress caused by the high O2 concentration.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2010. / Submitted by Shayane Marques Zica (marquacizh@uol.com.br) on 2011-02-24T20:21:38Z No. of bitstreams: 1 2010_TiagoOmarDiesel.pdf: 734259 bytes, checksum: 6e0b1eddf51b2a9c40945329b1aaffcb (MD5) / Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2011-03-21T14:01:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_TiagoOmarDiesel.pdf: 734259 bytes, checksum: 6e0b1eddf51b2a9c40945329b1aaffcb (MD5) / Made available in DSpace on 2011-03-21T14:01:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_TiagoOmarDiesel.pdf: 734259 bytes, checksum: 6e0b1eddf51b2a9c40945329b1aaffcb (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da estimulação ovariana na quantidade e qualidade de ovócitos obtidos por aspiração folicular transvaginal (OPU) em novilhas Nelore. Foram utilizadas 27 novilhas cíclicas da raça Nelore, sendo que todos os animais passaram pelos três tratamentos em delineamento “cross-over”. Os animais foram sincronizados e no D6 após a manifestação do cio foi realizada a ablação dos folículos ≥ 5mm de diâmetro, com colocação de implante intravaginal de progesterona e aplicação de prostaglandina F2α,. Nos animais do grupo controle (Tc) a OPU foi realizada no D12 após estro; no grupo SOV-LH (T1) no D8 após estro teve início a administração de FSH (162 UI-PLUSET ®) em 6 doses decrescentes de 12 em 12 horas, e a OPU foi realizada 36 horas após a última aplicação de FSH, sendo que 6 horas antes da OPU os animais receberam uma aplicação de 25mg de LH; no grupo SOV (T2) os animais receberam o mesmo tratamento do T1, porém sem aplicação de LH. No momento da OPU os folículos foram contados, classificados pelo tamanho em > 6 mm e < 6 mm e aspirados separadamente de acordo com o tamanho. Os CCOs recuperados foram classificados de acordo com a qualidade morfológica (1-4) e os de qualidade grau 1,2,3 foram utilizados para a PIV. Um total de 833 ovócitos foram maturados e fecundados in vitro, sendo que a taxa de clivagem foi avaliada no D2 (48h após a inseminação) a taxa de blastocisto avaliada nos dias 6,7,8 e a taxa de eclosão no dia 8. Para detectar a existência de efeito do tamanho dos folículos (>6 mm e <6 mm) e tratamentos hormonais (Tc, T1, T2), bem como suas interações sob a taxa de ovócitos recuperados e produção de embriões foi utilizado o modelo linear generalizado misto (MLGM). Para o número de folículos aspirados, ajustou-se um modelo linear generalizado misto família quase Poisson, com função de ligação log, para analisar a taxa de eclosão foi utilizado o modelo linear generalizado família binomial. Os resultados indicaram que o tratamento T2 (8,5 ± 5,5) apresentou número médio de ovócitos recuperados maior (P<0,05) do que o T1 (7,2 ± 4,3) e o Tc (6,7 ± 4,3). Quando as médias foram avaliadas por tamanho de folículo, foi observado número médio de ovócitos recuperados a por sessão maior (P<0,05) nos folículos <6 mm (9,3 ± 5,4) em comparação aos >6 mm (5,7 ± 3,2). O número de folículos <6 mm foi maior (P<0,05) no Tc (34,8 ± 16,3) em relação ao T1(8,5 ± 8,6) e T2 (10,1 ± 7,6), e estes foram semelhantes (P>0,05). Já para folículos >6mm um maior número foi observado no T1(23,5 ± 11,5) e T2 (19,1 ± 6,8) em comparação ao Tc (1,8 ± 1,4) (P<0,05). A produção de ovócitos de qualidade I, II e III de folículos < 6mm, foi maior no Tc em comparação aos tratamentos T1 e T2 (P<0,05). Para folículos < 6mm o T2 produziu mais ovócitos de qualidade I em média, 2,62 vezes maior (P<0,05) em relação ao T1. O contrário ocorreu na produção de ovócitos de qualidade I, II e III de folículos >6mm onde T1 e T2 foram semelhantes, porem produziram mais ovócitos que Tc (P<0,05). Os resultados mostraram que a taxa de blastocisto não diferiu entre os tratamentos (P>0,05) quando apenas os folículos menores do que 6 foram avaliados, sendo 31,2±12,2%, 31,0±16,9% e 24,3±14,1% para Tc, T1 e T2, respectivamente. Entretanto, quando o tamanho do folículo >6mm foi considerado, um aumento (P<0,05) na taxa de blastocistos foi observada nos tratamentos T1 (47,8±21,2%) e T2 (39,1±19,8%) em relação ao Tc (22,2±44,1%). O efeito do tratamento hormonal na produção embrionária também foi detectado quando a análise global foi realizada independente do tamanho do folículo, sendo a taxa de blastocisto maior (P<0,05) no T1 (39,4±20,5%) e T2 (31,7±18,4%) em relação ao Tc (26,7±31,7%). A taxa de eclosão foi semelhante entre todos os tratamentos considerando ou não o tamanho folicular (P>0,05). A superestimulação ovariana, com ou sem aplicação de LH, aumentou a produção de embriões in vitro em novilhas Nelore. Portanto a aplicação de FSH na onda sincronizada para aspiração folicular pode ser uma alternativa viável para a produção comercial de embriões in vitro. ________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of this study was to evaluate the effect of ovarian stimulation in quantity and quality of oocytes obtained by ovum pick up (OPU) in Nellore heifers. Twenty seven Nellore cyclical heifers were used in a cross-over experimental design, where all the animals passed by each of the three treatments. All animals were sincronized and on D6 after estrus detection the ablation of follicles ≥ 5 mm in diameter was performed and the animals received an intravaginal implant of progesterone and an application of prostaglandin F2α. In the animals of the control group (Tc) the OPU was performed on D12 after estrus; in the group SOV-LH (T1) on D8 after estrus, it has started the administration of FSH (162 UI-PLUSET ®) in 6 decreasing doses of 12 to 12 hours, the OPU was performed 36 hours after the last application of FSH and, 6 hours before OPU the animals received one application of 25 mg of LH; in the group SOV (T2) the animals received the same treatment as T1, but without the application of LH. At the time of OPU follicles were counted and classified by the size in > 6 mm and <6 mm, and then were aspirated separately. The recovered COCs were classified according to morphological quality (I-IV) to quality in grade I, II, III and were used for IVP. A total of 833 oocytes were matured in vitro, cleavage rate was evaluated on D2 [48 h post insemination (pi)] and blastocyst rate on day 6, 7 and 8 pi, being the hatching rate evaluated on D8 pi. To detect effect of the follicles size (> 6 mm and <6 mm) and hormonal treatments (Tc, T1, T2) and their interactions in the rate of retrieved oocytes and embryo production the generalized linear mixed model (MLGM) with normal distribution and log link function was used. For the number of aspirated follicles, a generalized linear mixed model almost Poisson family was adjusted with log link function. To analyze the hatching a generalized linear model binomial family was used. The results indicated that in T2 treatment (8.5 ± 5.5) a higher number of oocyte was recoverd (P<0.05) than in T1 (7.2 ± 4.3) and Tc (6.7 ± 4.3). When the means were evaluated by follicles size, it was observed a higher number of oocytes per session (P<0.05) in follicles <6 mm (9.3 ± 5.4) compared to >6 mm (5.7 ± 3.2). The number of follicles <6 mm was higher (P <0.05) in Tc (34.8 ± 16.3) compared to T1 (8.5 ± 8.6) and T2 (10.1 ± 7.6), which were similar between them (P>0.05). For follicles > 6 mm a larger number was observed in T1 (23.5 ± 11.5) and T2 (19.1 ± 6.8) compared to Tc (1.8 ± 1.4) (P<0.05). On follicles <6 mm, higher number of oocytes grade I, II and III were recovered in Tc compared to treatments T1 and T2 (P<0.05). For follicles <6 mm the T2 produced more oocytes quality I, being 2.62 times higher (P<0.05) than T1. In contrast, for follicles > 6 mm number of oocytes grade I, II and III was similar between T1 and T2, but it was lower in Tc (P<0.05). The results showed that the blastocyst production did not differ between treatments (P>0.05) when only the follicles smaller than 6 mm were considered, being 31.2 ± 12.2%, 31.0 ± 16.9% and 24.3 ± 14.1% for Tc, T1 and T3, respectively. However, when only follicle > 6 mm were considered, an increase (P<0.05) in blastocyst rate was observed in T1 treatments (47.8 ± 21.2%) and in T2 (39.1 ± 19.8%) compared to Tc (22.2 ± 44.1%). The effect of hormonal treatment on blastocyst production was also detected when a global analysis was conducted independent of follicle size, being the blastocyst rate higher (P<0.05) in T1 (39.4 ± 20.5%) and T2 (31.7 ± 18.4 %) than in Tc (26.7 ± 31.7%). The hatched rate was similar among all treatments considering or not the follicular size (P>0.05), in the general analysis the hatched rate was similar for Tc (39.0±12.2%), T1 (38.7±25.3%) and T2 (35.524.1%). The ovarian stimulation, with or without application of LH, increased the in vitro production of embryos in Nellore heifers. Therefore the application of FSH in the synchronized wave for follicular aspiration may be a viable alternative to the commercial production of embryos in vitro.