p. 1-71 / Submitted by Antonio Geraldo Couto Barreto (ppgms@ufba.br) on 2013-10-04T11:24:18Z No. of bitstreams: 1 Maria Rosineide dos Santos Torres.pdf: 2871711 bytes, checksum: aeaaca3c584c2611b1ef6de5645f182b (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barroso(pbarroso@ufba.br) on 2013-10-08T17:06:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Maria Rosineide dos Santos Torres.pdf: 2871711 bytes, checksum: aeaaca3c584c2611b1ef6de5645f182b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-08T17:06:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maria Rosineide dos Santos Torres.pdf: 2871711 bytes, checksum: aeaaca3c584c2611b1ef6de5645f182b (MD5) Previous issue date: 2013 / O carcinoma papilífero de tireóide (CPT), apesar do prognóstico favorável, apresenta frequentemente metástases linfonodais e a citologia do aspirado de linfonodos cervicais (PAAF-C) é considerada a abordagem mais importante no rastreio dessas metástases. O objetivo desse estudo foi verificar a acurácia da tireoglobulina medida no aspirado de linfonodos cervicais (Tg-PAAF) no diagnóstico de metástases de pacientes com CPT e a importância da sua associação com a PAAF-C. Foram avaliados 195 linfonodos (LNs) de 160 pacientes com CPT após tireoidectomia total e ablação com I131. Os LN foram classificados à ultrassonografia (USG), em reacionais e suspeitos de metástase de CPT. A PAAF-C foi realizada pelas técnicas aspirativa e não-aspirativa e os esfregaços foram classificados em não diagnósticos, LN reacionais e suspeitos de metástase. A agulha da PAAF-C foi lavada com 1,0mL de soro fisiológico a 0,9% e a solução, processada para medir a tireoglobulina. O ponto de corte considerado foi de 10 ng/ml. Foram encaminhados à cirurgia os pacientes com LNs suspeitos com PAAF-C suspeita de malignidade e Tg- PAAF elevada ou não, com LNs reacionais com PAAF-C suspeita e Tg-PAAF elevada e com LNs suspeitos com PAAF-C insatisfatória e Tg-PAAF elevada. A PAAF-C falhou em diagnosticar cinco dos 52 LNs metastáticos ao histopatológico, enquanto a Tg-PAAF falhou em apenas um. A sensibilidade, a especificidade, o valor preditivo positivo (VPP), o valor preditivo negativo (VPN) e a acurácia foram respectivamente, de 96,1%, 96,5%, 90,9%, 98,6%, 96,4% para a USG, 90,4% 100%, 100%, 96,6% e 97,4% para a PAAF-C e 98,1%, 99,3%, 98,1% 99,3% e 98,9%, para a Tg-PAAF. O histopatológico confirmou metástase em 50 dos 55 LNs suspeitos à USG. A associação da USG com PAAF-C e Tg-PAAF elevou a especificidade e o VPP para 100%.O grau de concordância entre PAAF-C e Tg-PAAF foi elevado (K=0,9). Em conclusão, a Tg-PAAF é um procedimento útil na detecção de metástase de CPT, complementa a PAAF-C e pode substituí-la. / Salvador

Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2015-07-17T19:51:36Z No. of bitstreams: 1 PEREIRA, Danielle Pessôa.pdf: 2273847 bytes, checksum: 9fd911d989bc9942943233a4ba36bf38 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-17T19:51:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PEREIRA, Danielle Pessôa.pdf: 2273847 bytes, checksum: 9fd911d989bc9942943233a4ba36bf38 (MD5) / Este trabalho foi financiado pela Fundação de Amparo à Pesquisa no Estado da Bahia (FAPESB) / Introdução: A oncogênese tireoidiana frequentemente envolve a ativação constitutiva da via RAS-RAF-MEK-ERK. A mutação BRAFV600E contribui para a sua ativação e tem sido considerada o evento oncogênico mais frequente do carcinoma papilífero de tireoide (CPT). Estudos clínicos e experimentais têm predominantemente demonstrado associação positiva entre a presença da mutação BRAFV600E e mau prognóstico do CPT. No entanto, alguns estudos não constataram esta associação, indicando que ainda há discrepâncias e variabilidade nos resultados obtidos. Objetivos: Determinar a prevalência da mutação BRAFV600E em casos consecutivos de CPT em pacientes diagnosticados e tratados no Hospital São Rafael, SalvadorBahia-Brasil e associar a presença da mutação com aspectos clinicopatológicos conhecidos do CPT e risco de recorrência segundo protocolos do Consenso Brasileiro e a American Thyroid Association. Metodologia: Estudo retrospectivo de 135 casos consecutivos de CPT. Extração de DNA de tecido tumoral parafinado. Reação em cadeia da polimerase e sequenciamento direto do exon 15 do gene BRAF. Dados clínicos e patológicos foram obtidos através da revisão de prontuários físicos e eletrônicos. A positividade da mutação BRAFV600E foi confrontada com os aspectos clinicopatológicos dos pacientes utilizando Teste de Qui-Quadrado e análise multivariada de regressão logística. Resultados: A prevalência da mutação BRAFV600E foi de 65,1% (28/43). A mutação BRAFV600E esteve positivamente associada com idade avançada (40,96 ± 13,69 vs 29,73 ± 10,18; P = 0,008) e negativamente com presença de tireoidite de Hashimoto (TH) (25% vs 66,7%; P = 0,008). Contudo, o efeito independente foi somente observado para TH (OR: 0,14; P = 0,024). Neste estudo, não foram observadas associações com o sexo do paciente, história familiar, subtipo histológico, tamanho tumoral, multifocalidade, invasão vascular, metástases linfonodais e à distância, estádio clínico avançado (TNM/AJCC) e risco de recorrência tumoral. Conclusão: A prevalência da mutação BRAFV600E foi semelhante à apresentada em estudos prévios. A mutação BRAFV600E não esteve associada com a maioria dos aspectos clinicopatológicos investigados. Tireoidite de Hashimoto esteve negativamente associado com a mutação BRAFV600E . / Background: Thyroid oncogenesis often involves constitutive activation of the RAS-RAFMEK-ERK pathway. BRAFV600E mutation contributes to this activation and has been considered the most frequent oncogenic event in papillary thyroid carcinoma (PTC). Clinical and experimental studies have predominantly demonstrated positive association between presence of BRAFV600E mutation and poor PTC prognosis. However, some studies have not found this association, so there still are discrepancies and variability in the results obtained. Objectives: To determine the BRAFV600E mutation prevalence in consecutive cases of PTC in patients diagnosed and treated at São Rafael’s Hospital, Salvador-Bahia-Brazil, and associate its presence with known clinicopathological aspects of PTC and recurrence risk according to Brazilian's Consensus and American Thyroid Association guidelines. Methods: Retrospective study of 135 consecutive cases of PTC. DNA extraction from paraffin-embedded tumor tissue. Polymerase chain reaction and direct sequencing of exon 15 of BRAF gene. Clinical and pathological data were obtained through review of physical and electronic records. BRAFV600E mutation positivity was confronted with the clinicopathological features of patients using chisquare test and multivariate logistic regression analysis. Results: BRAFV600E mutation prevalence was 65.1% (28/43). BRAFV600E mutation was positively associated with older age (40.96 ± 13.69 vs 29.73 ± 10.18, P = 0.008) and negatively with the presence of Hashimoto's thyroiditis (HT) (25% vs 66.7%; P = 0.008). However, the independent effect was only observed for HT (OR: 0.14, P = 0.024). In this study, associations with patient gender, familial history, histologic subtype, tumor size, multifocality, vascular invasion, lymph node and distant metastases, advanced clinical stage (TNM/AJCC) and risk of tumor recurrence were not observed. Conclusion: BRAFV600E mutation prevalence was similar to the presented in previous studies. BRAFV600E mutation was not associated with most clinicopathological aspects investigated. Hashimoto's thyroiditis was negatively associated with BRAFV600E mutation.

Submitted by ROBERTO PAULO CORREIA DE ARAÚJO (ppgorgsistem@ufba.br) on 2015-07-17T20:13:43Z No. of bitstreams: 1 SILVA JUNIOR, Joaquim Custódio.pdf: 4910459 bytes, checksum: 7746a181edeca5d3d7a1104ec6e7fc66 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-07-17T20:13:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SILVA JUNIOR, Joaquim Custódio.pdf: 4910459 bytes, checksum: 7746a181edeca5d3d7a1104ec6e7fc66 (MD5) / FAPESB – Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia. / Introdução: A despeito de bom prognóstico na maioria dos casos, o manejo do câncer diferenciado de tireoide (CDT) ainda carece de avanços em situações de doença mais agressiva. O uso crescente da Biologia Molecular na Oncologia vem ganhando força como ferramenta útil no manejo de diversos tipos de câncer. Além da abordagem tradicional de busca de mutações relacionadas a tipos específicos de câncer, o estudo de características epigenéticas emerge como uma nova modalidade de análise e predição do comportamento dos tumores. HOPX é um gene homeobox com função de supressão tumoral, cuja hipermetilação e consequente redução de expressão gênica foi estudada em diversos tipos de câncer (pulmão, esôfago, estômago, pâncreas, cólon e útero). Em câncer colorretal, gástrico, pulmonar e de esôfago, a redução de expressão gênica de HOPX confere fenótipo mais agressivo e piora do prognóstico. HOPX possui papel controlador de diversas onco-proteínas (Cyr61, EMP1, EphA2, c-Fos, c-Jun, EGR1 e GLUT-3) e interage com fatores de transcrição tais como HDAC2/GATA4, SRF e EPC1. Objetivos: Analisar o perfil de expressão do gene homeobox HOPX em amostras de CDT, comparando com o tecido não-tumoral adjacente e com tecidos benignos, e buscar associação com aspectos clínico-patológicos. Metodologia: Estudo prospectivo envolvendo 32 pacientes submetidos à tireoidectomia total, dos quais 26 tiveram confirmação de diagnóstico de CDT e 6 com tumores benignos. Realizada dissecção de amostra de tecido tumoral (T) e tecido não-tumoral (NT) adjacente ao tumor. Extração de RNA das amostras pelo método Trizol® e conversão em cDNA. Análise de expressão gênica através da reação em cadeia da polimerase em tempo real utilizando aparelho 7500 Real Time PCR System (Applied Biosystems® ). O gene S8 foi utilizado como controle interno para normalização da expressão. Dados clínicos e patológicos foram obtidos através de entrevista com os pacientes e revisão de prontuários eletrônicos. Para cálculo da expressão gênica foi empregado o método ∆∆cT. A comparação da expressão gênica entre tecidos NT e T foi realizada utilizando testes de Wilcoxon. Para comparar os grupos benigno e maligno foi utilizado o teste ANOVA. As análises considerando os aspectos clínico-patológicos foram realizadas com o teste do Qui-Quadrado e o teste de Kruskal-Wallis. Resultados: A expressão de HOPX demonstrou marcada redução em amostras de CDT, quando comparado a neoplasias benignas de tireoide (p = 0,024). Verificou-se significativa redução (65,6%) da expressão gênica de HOPX nas amostras T quando comparadas com as NT (3,49 ± 8,3 vs. 10,14 ± 27,8) (p = 0,009). Em pacientes com CDT sem tireoidite associada, a redução da expressão de HOPX esteve associada a estádios mais iniciais de neoplasia (I e II, classificação TNM), em comparação com estádios mais avançados (III e IV) (p = 0,021). Redução de expressão de HOPX também esteve associada com idade menor que 45 anos (p = 0,048). Conclusão: Este é o primeiro estudo da literatura que evidencia redução da expressão de HOPX em câncer de tireoide, tanto em comparação com tecidos benignos, quanto comparado a tecido não-tumoral. Por outro lado, os achados de associação com estádios mais precoces e pacientes mais jovens sugerem uma possível especificidade dos mecanismos de controle da expressão gênica de HOPX em CDT, mediante influências microambientais e genéticas ainda não identificadas. Estudos adicionais permitirão confirmar estes achados em maior tamanho amostral, bem como definir o papel de HOPX como marcador de prognóstico clínico e risco de recorrência tumoral em câncer de tireoide. / Background: Despite good prognosis in majority of cases, differentiated thyroid cancer (DTC) management still lacks advances in more aggressive disease. Growing use of Molecular Biology in Oncology has emerged as useful tool in management of several types of cancer. In addition to the traditional approach of search tissue-specific related mutations, the study of epigenetic pattern constitutes a new way to analysis and prediction of tumor’s behavior. HOPX is a homeobox gene with tumor-suppressing function, whose hypermethylation and consequent reduction of gene expression was studied in several cancer types (lung, esophagus, stomach, pancreas, colorectal and uterus). In colorectal, gastric, lung and esophageal cancer, reduction of HOPX gene expression gives more aggressive phenotype and worse prognosis. HOPX acts controlling various oncoproteins (like Cyr61, EMP1, EphA2, c-Fos, c-Jun, EGR1 and GLUT-3) and interacts with transcription factors such as HDAC2/GATA4, SRF and EPC1. Objectives: Analysis of HOPX gene expression profile in DTC samples, comparing with the adjacent non-tumor tissue and benign thyroid samples, and looking for association with clinical-pathologic features. Methods: Prospective study enrolling 32 patients who undergone thyroidectomy, of which 26 has confirmed DTC diagnosis and 6 with benign tumors. Held sample dissection of tumor tissue (T) and nontumor tissue (NT) adjacent to the tumor. RNA extraction from samples with Trizol® method, and then converted in cDNA. Gene expression analysis with real time PCR method, using 7500 Real Time PCR System (Applied Biosystems® ). S8 ribosomal gene was used as housekeeping to normalize expression. Clinical and pathological data was obtained interviewing patients and reviewing electronic medical records. ∆∆cT method was used to calculate gene expression. Gene expression. comparison between T and NT tissues was done with Wilcoxon’s test. ANOVA test was used to compare malign and benign tumors. Clinicalpathologic features analysis were done with qui-square test and Kruskal-Wallis’s test. Results: HOPX expression markedly reduced in DTC samples, when compared to benign thyroid tissues (p = 0.024). There was a significant reduction (65.6%) of HOPX gene expression in tumor samples compared to non-tumoral (3.49 ± 8.3 vs. 10.14 ± 27.8) (p = 0.009). In DTC patients without thyroiditis, HOPX reduced expression was associated with earlier tumor stages (I and II, TNM staging system) compared with advanced stages (III and IV) (p = 0.021). HOPX reduced expression was also associated with age below 45 years (p = 0.048). Conclusion: This is the first study that evidences HOPX reduced expression in thyroid cancer, compared with benign thyroid tumors and non-tumoral tissues. However, finding of association with earlier stages and lower age suggests specific mechanisms controlling HOPX gene expression in DTC, mediated by microenvironmental and genetic influences, yet not identified. Additional studies may confirm these findings in larger samples, and establish the utility of HOPX use as prognostic and tumor recurrence marker in thyroid cancer.

Orientador: Silvia Regina Rogatto / Resumo: A identificação de fatores de predisposição e a caracterização de fatores genéticos de risco para odesenvolvimento do câncer são essenciais para o diagnóstico, prognóstico e aconselhamento genéticodos pacientes afetados e seus familiares. Há uma alta incidência de pacientes que possuem carcinomasde mama (CM) e/ou carcinoma de tireoide (CT) e com história familial destes tumores, sugerindo oenvolvimento de gene(s) associado(s) com a predisposição hereditária ao câncer. O objetivo destetrabalho foi investigar a presença de genes de predisposição ao desenvolvimento de CM e CT pormeio do sequenciamento total do exoma, em pacientes que sejam afetados por pelo menos um destestumores e possuam história familial de câncer. Foram incluídas seis pacientes que apresentavam CM,12 com CT e seis com ambos os tumores, todos com história destes tumores em suas famílias. O DNAde sangue periférico foi sequenciado pela plataforma HiSeq 1000 (Illumina). Após análise debioinformática foram identificadas alterações em genes de alta e baixa penetrância comuns e raras. Asalterações raras destes genes foram consideradas como patogênicas quando presentes em pelo menostrês bancos de dados e em até dois indivíduos. A paciente 14 teve diagnóstico de síndrome de Cowdenconfirmado pela presença da mutação p.R233X no gene PTEN. Também foram investigadas outrasalterações em novos genes o que resultou em 911 SNVs (single nucleotide variations), sendo 287 não-sinônimas e 50 alteraç... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The identification of predisposing genes and characterization of genetic risk factors for cancer development are essential for the diagnosis, prognosis and genetic counseling of affected patients and their families. A significant number of patients with breast (BC) and papillary thyroid carcinomas (TC) and family history of these tumors suggest the involvement a hereditary cancer predisposition gene. The aim of this study was to evaluate new predisposing genes related to BC and TC by whole exome sequencing, in patients who are affected by at least one of these tumors and have cancer family history. Six patients with CM, 12 with CT and six with both tumors were included in the study, all of them with family history of these tumors. DNA from peripheral blood sample was sequenced by HiSeq 1000 platform (Illumina). After the bioinformatics analysis, variations in high and lowpenetrance genes were identified; most of them were considered common according to 1000 Genomes and 6500 Exomes. Furthermore, rare variations were described in these genes, which were considered pathogenic in at least three databases and observed in up to two patients. Patient 14 presented the p.R233X mutation in PTEN confirming the diagnosis of Cowden Syndrome. Other genes were investigated in order to characterize new variations related to the phenotype studied. This analysis resulted in 911 SNVs (single nucleotide variations), 287 non-synonymous alterations and 50 rare pathogenic variations (detected in at... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O ácido araquidônico (AA) é precursor na formação dos eicosanoides, que são mediadores lipídicos com uma série de funções na fisiologia e patologia humana. A maioria dos eicosanoides atuam como mediadores pró-inflamatórios e contribuem para o desenvolvimento e proliferação de tumores. Nesta tese foram avaliados dois mediadores: a 15-deoxi-Δ12,14-PGJ2 (15d- PGJ2) e os ácidos Epoxieicosatrienoicos (EETs), ambos apresentam uma atividade oposta a da maioria dos eicosanoides, ou seja, com uma ação anti-inflamatória e antitumoral. Esses dois mediadores distintos da via do AA foram utilizados nesta tese em dois projetos distintos. Primeiro: A 15d- PGJ2 possui uma atividade antiproliferativa e induziu apoptose para diversos tipos de células tumorais, entretanto, o efeito da15d- PGJ2 em células de cancer da tireoide ainda estava desconhecido. Neste sentido, foram cultivadas in vitro células tumorais da tireoide, da linhagem TPC1, e tratadas com diferentes concentrações de 15d- PGJ2 (0 ate 20 μM), as células tratadas demonstraram uma diminuição na proliferação, e aumento na apoptose, e uma diminuição na liberação e expressão relativa de IL-6. Estes resultados em conjunto sugerem que a 15d- PGJ2 pode ser utilizada como uma nova terapia para o cancer da tireoide. Segundo: Os EETs são metabolizados em seus diois pela epóxi hidrolase solúvel (sEH), para manter a estabilidade dos EETs e a sua atividade antiiflamatoria, foi utilizado um inibidor (TPPU) para sEH em um modelo de periodontite induzida por Aggregatibacter actinomycetemcomitans. O tratamento oral com TPPU, assim como o uso de animais sEH Knockout, levou a uma redução na perda óssea acompanhada da diminuição de moléculas osteoclastogenicas como RANK, RANKL e OPG, demonstrando que a inibição farmacológica da sEH pode ter um valor terapêutico na periodontite e doenças inflamatórias que envolvem a reabsorção óssea. / Arachidonic acid (AA) a precursor in the formation of eicosanoids which are lipid mediators with a number of functions in human physiology and pathology. The most of the eicosanoids act as proinflammatory mediators and contribute to the development and proliferation of tumors. In this thesis we evaluated two mediators: 15-deoxy-Δ12,14-PGJ2 (15d- PGJ2) and epoxieicosatrienoic acids (EETs) both act with an opposite activity of most eicosanoids, with an anti-inflammatory and and anti-tumoral action these two distinct mediators from AA pathway were used in this thesis in two different projects. First: 15d- PGJ2, was described that to have an antiproliferative activity and to induce apoptosis in several types of tumor cells however, the effect of 15d- PGJ2 in thyroid cancer cells was unknown in this sense, we tested in vitro cultured thyroid tumor cells, here in TPC1 cells, and treated with different concentrations of 15d- PGJ2 (0 to 20 uM) the treated cells showed a decrease in proliferation and an increase in apoptosis and a decrease in IL-6 release and relative expression. These key results together demonstrate that 15d- PGJ2 can be used as a new therapy for thyroid cancer. Second: The EETs are converted to their diols by soluble epoxy hydrolase (sEH) to maintain the stability of EETs and their anti-inflammatory activity, an inhibitor (TPPU) against was used to sEH in a periodontitis model induced with Aggregatibacter actinomycetemcomitans. The oral treatment in mice with TPPU and sEH Knockout animals showed bone loss reduction accompanied by a decrease in the osteoclastogenic molecules, like RANK, RANKL and OPG, demonstrating that pharmacological inhibition of sEH may have therapeutic value in periodontitis and inflammatory diseases that involve bone resorption. / Tese (Doutorado)