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Avaliação de ferramentas moleculares para detecção de fungos patogênicos relevantes para a saúde humanaLYRA, Juliana Maria Azevedo de 21 March 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014-03-21 / FACEPE / Infecções fúngicas tem aumentado sua incidência, principalmente em imunocomprometidos. No Brasil, os fungos são responsáveis por cerca de 10% das infecções hospitalares, sendo as espécies de Candida responsáveis por cerca de 50% dos casos, seguidas pelo Aspergillus e Cryptococcus neoformans. O diagnóstico fúngico é dado pelo exame direto, que possui reduzida sensibilidade, e cultura que é tecnicamente laboriosa e demorada. A detecção do genoma de fungos apresenta diversas vantagens como a instalação precoce da terapia antifúngica diminuindo a mortalidade relacionada à infecção fúngica, e o tempo de internação dos pacientes em unidades de saúde. Este estudo tem como objetivo o desenvolvimento e avaliação de teste molecular para a detecção de infecção fúngica em pacientes imunocomprometidos através de PCR do tipo multiplex utilizando a sequência ITS como alvo, e sequências de rDNA específicas para detecção de 6 espécie de fungos de importância para a saúde humana: A. fumigatus, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e C. neoformans. Dos 84 pacientes analisados, 46 foram adultos em tratamento oncológico e 38 neonatos. Das 144 amostras de sangue submetidas a PCR convencional com os iniciadores para a detecção da região ITS, 84 foram positivas e 60 negativas. As amostras positivas foram submetidas a PCR multiplex para a determinação da espécie do fungo. 46 foram positivas para uma ou mais espécie fúngica, sendo as espécies mais encontradas a C. parapsilosis (23,8%), C. glabrata (19,0%), C. neoformans (14,2%), C. tropicalis e C. albicans (ambas 4,7% dos casos). A baixa frequência de C. albicans possivelmente está relacionada ao uso profilático do antifúngico fluconazol. A PCR convencional apresentou sensibilidade de 67,3% (53,2-79,0), especificidade de 47,2% (36,6-58,0), valor preditivo positivo de 44,0% (33,4-55,3) e valor preditivo negativo de 70,0% (56,6-80,8) em relação ao diagnóstico da doença, baseado na clínica, comprovação microbiológica e teste terapêutico. As curvas melting da PCR em tempo real utilizando o sistema de detecção SYBR Green obtidas pela amplificação da sequência subclonada de rDNA de cada espécie em plasmídeo apresentaram formato alargado, possivelmente devido a homologia entre o iniciador e diferentes regiões das sequências de rDNA das espécies de fungos estudadas, principalmente nas espécies de Candida, permitindo a amplificação inespecífica em diferentes temperaturas de anelamento avaliadas. As curvas de amplificação das sequências subclonadas de rDNA de cada espécie utilizando o sistema TaqMan apresentaram reprodutibilidade, e especificidade nos experimentos utilizando o par de iniciador e sonda especifico para uma dada espécie com sequências de rDNA clonadas das demais espécies de fungos analisadas, executando o teste para C. neoformans, mostrando o potencial do teste para utilização em amostras clínicas. / Fungal infections have increased its incidence, especially in immunocompromised patients. In Brazil, the fungi are responsible for about 10 % of nosocomial infections, with Candida species account for about 50% of cases, followed by Aspergillus and Cryptococcus neoformans. Fungal diagnosis is made by direct examination, which has reduced sensitivity, and culture that is technically laborious and time consuming. The detection of the fungal genome has several advantages as the early onset of antifungal therapy decreased mortality related to fungal infection, and length of stay of patients in healthcare facilities. This study aims at the development and evaluation of molecular test for the detection of fungal infection in immunocompromised patients by multiplex PCR using ITS sequence targeted and specific rDNA sequences for detection of 6 species of fungi of importance to the human health: A. fumigatus, C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis and C. neoformans. Of the 84 patients studied, 46 were adults undergoing cancer treatment and 38 neonates. 144 of blood samples with conventional PCR primers for detection of the ITS region, 84 were positive and 60 negative. The positive samples were subjected to multiplex PCR to determine the species of fungus. 46 were positive for one or more fungal species and the species most commonly found in C. parapsilosis (23.8%), C. glabrata (19.0%), C. neoformans (14.2%), C. tropicalis and C. albicans (both 4.7% of cases). The low frequency of C. albicans is probably related to the prophylactic use of antifungal fluconazole. Conventional PCR had a sensitivity of 67.3% (53.2 to 79.0), specificity of 47.2% (36.6 to 58.0), positive predictive value of 44.0% (from 33.4 to 55,3) and negative predictive value of 70.0% (56.6 to 80.8) compared to diagnosis based on clinical, microbiological and therapeutic proof test. The melting curves of real-time PCR using SYBR Green obtained by amplification of rDNA subcloned sequence of each species present in plasmid extended, possibly due to the homology between the initiator sequences and regions of rDNA of fungal species format studied, especially in Candida species, allowing nonspecific amplification at different annealing temperatures evaluated. The amplification curves of the subcloned rDNA sequences of each type using the TaqMan system showed reproducibility and specificity of the experiments using the pair of primer and probe specific for a species with cloned rDNA sequences of other species of fungi analyzed by running test for C. neoformans, showing the potential for use in clinical test samples.
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Estudo dos efeitos da radiação ultravioleta C e TFD em células de Saccharomyces boulardii e Candida albicansVargas, Karina Colasso 26 April 2011 (has links)
CAPES / O estudo de alguns dos efeitos das radiações ultravioleta C (UV-C) e terapia fotodinâmica (TFD) em células das leveduras Saccharomyces boulardii e Candida albicans foi realizado expondo-se células destes micro-organismos a diferentes intensidades destas radiações, calculadas com base no tempo de exposição e potência das fontes utilizadas. A exposição à UV-C foi realizada após inoculação dos micro-organismos em ágar YEPD que em seguida foram expostos a uma distância de 35cm da fonte em tempos que variaram entre 5s e 40s para S. boulardii e 10s e 60s para C. albicans. Os experimentos foram realizados em triplicatas, sendo uma para verificação da sensibilidade da célula à radiação e uma para verificação da fotorreativação após a irradiação com UV-C. As células consideradas mutantes, isoladas em um segundo experimento, foram submetidas a provas bioquímicas, para avaliação de alterações em seu metabolismo, e posteriormente a microscopia, para avaliação de alterações morfológicas. Os experimentos com TFD foram realizados expondo-se os microrganismos aos agentes fotossensibilizantes e posteriormente a lâmpada de LEDs em tempos entre 3 min e 12min. Os resultados mostram que a radiação UV-C é eficiente na redução populacional dos micro-organismos estudados, além de terem sido observados, nos testes bioquímicos, alterações no metabolismo da S. boulardii, como perda da capacidade de assimilar açúcares e fontes de nitrogênio. As alterações morfológicas foram o alongamento celular e diminuição no tamanho da colônia. A TFD, por sua vez, não demonstrou ação antimicrobiana com a metodologia utilizada, apenas observou-se uma aparente recuperação das células que foram expostas às substâncias tóxicas utilizadas para sua fotossensibilização. Conclui-se que a levedura patogênica C. albicans é mais resistente à radiação UV-C comparando-se com a S. boulardii, pois necessita 60s de exposição à UV-C contra 40s para redução decimal de S. boulardii. A metodologia para TFD utilizada neste trabalho não provocou redução populacional as células estudas / The study of some effecs of ultraviolet C (UVC) and photodynamic therapy (PDT) in S. boulardii and C. albicans cells was performed by exposing the cells to different radiation intensities, and was computed based on the exposure time and power sources used. The exposure to UV-C was performed after the inoculation of microorganisms in YEPD agar and immediately exposed to UV-C rays at distance of 35 cm from the source for lengths of time ranging from 40s to 5s for S. boulardii and from 10s to 60s for C. albicans. The experiments were performed in triplicate, once for checking the cell’s sensitivity by radiation and once to test the occurrence of photoreactivation after irradiation with UV-C. The cells considered mutants, isolated in another experiment, were submitted to biochemical tests to assess changes in their metabolism, and, later, microscopy to assess morphological changes. The experiments with PDT were done by exposing the microorganisms to the photosensitizing agents and later to the LED bulb for lengths of time ranging from 3 min to 12 min. The results show that UV-C is effective in reducing the population of microorganisms. The biochemical tests also showed changes in the metabolism of the S. boulardii such as a loss in the ability to assimilate sugars and nitrogen sources. The morphological changes were cell elongation and reduction of the colony size. PDT, in turn, showed no antimicrobial action with this methodology. There was only an apparent recuperation of cells that were exposed to toxic substances used in its photosensitization. Our conclusion is that the pathogenic yeast C. albicans is more resistant to UV-C rays compared with the S. boulardii because it needs 60 seconds of exposure to UV-C against 40 seconds for a decimal reduction of S. boulardii. The methodology used for PDT in this study did not cause population reduction in the studied cells.
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O efeito do uso de fitoterápicos e da própolis nas propriedades físico-químicas, antimicrobiana e biocompatibilidade do MTA / The effect of the use of phytotherapics and propolis in physicochemical properties, antimicrobial and biocompatibility of MTACavenago, Bruno Cavalini 31 March 2015 (has links)
O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades físico-químicas, antimicrobianas e biocompatibilidade do MTA branco manipulado com extratos aquoso e/ou em propilenoglicol da Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. e própolis. Dentre os testes físico-químicos foram avaliados o tempo de presa, escoamento, pH, liberação de íons cálcio e alteração volumétrica. Para verificar o efeito antimicrobiano foram aplicadas as metodologias do contato direto (Enterococcus faecalis e a Cândida albicans) e da descontaminação dentinária, empregando a microscopia confocal de varredura laser para verificar a viabilidade de Enterococcus faecalis. Para a avaliação da biocompatibilidade, 162 ratos Wistar foram utilizados, onde cada animal recebeu dois implantes subcutâneos e um alveolar. Após os períodos experimentais de 15, 30 e 60 dias foram realizadas análises microtomográfica, histológica descritiva e histomorfométrica. Adicionalmente amostras do tecido alveolar foram processadas para dosagem das citocinas TNF-α e IL-10 por meio do ensaio imunoenzimático (ELISA). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente com os testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn. Os resultados revelaram que a variação do veículo associado ao MTA aumentou significativamente o tempo de presa, no entanto, não houve influência na alteração volumétrica (P>0,05) e na capacidade do cimento em manter o meio alcalino e liberar íons cálcio. Os cimentos manipulados com extratos em propilenoglicol apresentaram maior escoamento (P<0,05). Apenas o extrato da própolis agregou ao MTA efeito contra o Enterococcus faecalis após 24 e 48 horas (descontaminação dentinária e contato direto respectivamente) e contra a Cândida albicans após 10 horas (P<0,05). De acordo com as avaliações histológica e histomorfométrica dos implantes em tecidos subcutâneo e alveolar não foi constatada diferença significativa entre os grupos experimentais quando comparados com o grupo no qual o MTA foi manipulado com água destilada. Segundo a análise microtomográfica e a expressão das citocinas TNF-α e IL-10 houve similaridade (P>0,05) entre todos os grupos. Apesar de ter alterado algumas propriedades físico-químicas, o extrato da própolis potencializou o efeito antimicrobiano do MTA sem, contudo, alterar sua biocompatibilidade. / The aim of this study was to evaluate the physicochemical, antimicrobial properties and biocompatibility of white MTA mixed with aqueous or propylene glycol extracts of Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. and propolis. Among physicochemical tests were evaluated the setting time, flowability, pH, ion calcium release and volumetric change. To verify the antimicrobial effects were applied the methods of direct contact (Enterococcus faecalis and Candida albicans) and dentin decontamination by using the confocal laser scanning microscopy to verify the Enterococcus faecalis viability. To evaluate the biocompatibility were used 162 Wistar rats. Each animal received one alveolar and two subcutaneous implants. After the experimental periods of 15, 30 and 60 days were performed the microtomography, histological description and histomorphometric analyses. Additionally alveolar tissue samples were processed for the measurement of TNF-α e IL-10 cytokines by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The data were statistically analyzed by the ANOVA and Tukey or KruskalWallis and Dunns tests. The results revealed that the variation of the vehicle associated to MTA significantly increased its setting time, however did not influence the volumetric change (P>0,05) and the cement\'s ability to maintain the alkaline medium and ion calcium release. Cements mixed with propylene glycol extracts showed higher flowability (P<0,05). Only propolis extract added to MTA the effect against E. faecalis after 24 and 48 hours (dentin decontamination and direct contact respectively) and against Candida albicans after 10 hours (P<0,05). According to the histological and histomorphometric evaluation of the implants in subcutaneous and alveolar tissue was not observed significant differences between the experimental groups in comparison to the reference group (MTA was mixed with distilled water). The microtomography analysis and expression of TNF-α and IL-10 showed that the groups were similar (P>0,05). Although the propolis extract modified some physicochemical properties of MTA it is potentiated the antimicrobial effect and did not influence the biocompatibility.
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O efeito do uso de fitoterápicos e da própolis nas propriedades físico-químicas, antimicrobiana e biocompatibilidade do MTA / The effect of the use of phytotherapics and propolis in physicochemical properties, antimicrobial and biocompatibility of MTABruno Cavalini Cavenago 31 March 2015 (has links)
O objetivo deste estudo foi avaliar as propriedades físico-químicas, antimicrobianas e biocompatibilidade do MTA branco manipulado com extratos aquoso e/ou em propilenoglicol da Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. e própolis. Dentre os testes físico-químicos foram avaliados o tempo de presa, escoamento, pH, liberação de íons cálcio e alteração volumétrica. Para verificar o efeito antimicrobiano foram aplicadas as metodologias do contato direto (Enterococcus faecalis e a Cândida albicans) e da descontaminação dentinária, empregando a microscopia confocal de varredura laser para verificar a viabilidade de Enterococcus faecalis. Para a avaliação da biocompatibilidade, 162 ratos Wistar foram utilizados, onde cada animal recebeu dois implantes subcutâneos e um alveolar. Após os períodos experimentais de 15, 30 e 60 dias foram realizadas análises microtomográfica, histológica descritiva e histomorfométrica. Adicionalmente amostras do tecido alveolar foram processadas para dosagem das citocinas TNF-α e IL-10 por meio do ensaio imunoenzimático (ELISA). Os dados obtidos foram analisados estatisticamente com os testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn. Os resultados revelaram que a variação do veículo associado ao MTA aumentou significativamente o tempo de presa, no entanto, não houve influência na alteração volumétrica (P>0,05) e na capacidade do cimento em manter o meio alcalino e liberar íons cálcio. Os cimentos manipulados com extratos em propilenoglicol apresentaram maior escoamento (P<0,05). Apenas o extrato da própolis agregou ao MTA efeito contra o Enterococcus faecalis após 24 e 48 horas (descontaminação dentinária e contato direto respectivamente) e contra a Cândida albicans após 10 horas (P<0,05). De acordo com as avaliações histológica e histomorfométrica dos implantes em tecidos subcutâneo e alveolar não foi constatada diferença significativa entre os grupos experimentais quando comparados com o grupo no qual o MTA foi manipulado com água destilada. Segundo a análise microtomográfica e a expressão das citocinas TNF-α e IL-10 houve similaridade (P>0,05) entre todos os grupos. Apesar de ter alterado algumas propriedades físico-químicas, o extrato da própolis potencializou o efeito antimicrobiano do MTA sem, contudo, alterar sua biocompatibilidade. / The aim of this study was to evaluate the physicochemical, antimicrobial properties and biocompatibility of white MTA mixed with aqueous or propylene glycol extracts of Arctium lappa L., Casearia sylvestris Sw. and propolis. Among physicochemical tests were evaluated the setting time, flowability, pH, ion calcium release and volumetric change. To verify the antimicrobial effects were applied the methods of direct contact (Enterococcus faecalis and Candida albicans) and dentin decontamination by using the confocal laser scanning microscopy to verify the Enterococcus faecalis viability. To evaluate the biocompatibility were used 162 Wistar rats. Each animal received one alveolar and two subcutaneous implants. After the experimental periods of 15, 30 and 60 days were performed the microtomography, histological description and histomorphometric analyses. Additionally alveolar tissue samples were processed for the measurement of TNF-α e IL-10 cytokines by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The data were statistically analyzed by the ANOVA and Tukey or KruskalWallis and Dunns tests. The results revealed that the variation of the vehicle associated to MTA significantly increased its setting time, however did not influence the volumetric change (P>0,05) and the cement\'s ability to maintain the alkaline medium and ion calcium release. Cements mixed with propylene glycol extracts showed higher flowability (P<0,05). Only propolis extract added to MTA the effect against E. faecalis after 24 and 48 hours (dentin decontamination and direct contact respectively) and against Candida albicans after 10 hours (P<0,05). According to the histological and histomorphometric evaluation of the implants in subcutaneous and alveolar tissue was not observed significant differences between the experimental groups in comparison to the reference group (MTA was mixed with distilled water). The microtomography analysis and expression of TNF-α and IL-10 showed that the groups were similar (P>0,05). Although the propolis extract modified some physicochemical properties of MTA it is potentiated the antimicrobial effect and did not influence the biocompatibility.
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Avaliação da ação antimicrobiana de pastilhas efervescentes e do ultra-som sobre leveduras do gênero Candida e sobre estreptococos do grupo mutans, presentes em próteses totais / Avaliation of efervescent tabs and ultrasonic antimicrobial action against Candida sp yeasth and mutans streptococci, in total denturesAndrade, Ingrid Machado de 06 November 2007 (has links)
Com o aumento da expectativa de vida temos um maior contingente de pessoas portadoras de próteses totais, contudo não temos um protocolo bem estabelecido para higienização/desinfecção dessas próteses pelo paciente após a sua instalação. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a ação antimicrobiana de diferentes meios de higienização de próteses totais, afim de se estabelecer um protocolo eficaz para a manutenção das próteses e com isso prevenir futuras estomatites protéticas. Para tanto foi testada a ação antimicrobiana dos agentes químico - a pastilha efervescente; e físico - o ultra-som, contra leveduras do gênero Candida, freqüentemente associadas à estomatite protética e contra os estreptococos do grupo mutans, responsáveis pela consolidação e progressão de alguns tipos de biofilme. 113 indivíduos participaram desta pesquisa, distribuídos aleatoriamente em 4 grupos, a saber: A- controle (25 pacientes) - apenas escovaram suas próteses com água, 3 vezes ao dia; B- (29 pacientes) utilizaram 1 pastilha efervescente ao dia por 5 minutos, durante 21 dias; C- (28 pacientes) fizeram o mesmo procedimento que o grupo A, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos; D-(31 pacientes) fizeram o mesmo que o grupo B, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos. Todos os procedimentos foram realizados por 21 dias e todos os grupos realizaram escovação da prótese com escovas dentais de cerdas macias Bitufo® e água. As colheitas do material das próteses ocorreram durante o exame inicial e após 21 dias da realização dos procedimentos de higienização listados acima. Antes do início dos procedimentos de higienização, todas as próteses receberam profilaxia profissional, afim de remover completamente o biofilme existente. As colheitas foram feitas por meio de escovação das próteses com PBS (salina tamponada fosfatada). Estas amostras foram submetidas a diluição decimal seriada e semeadas em placas contendo BHIA (Brain Heart Infusion Agar), Chromagar-Candida e SB20 (Ágar Sacarose Bacitracina) para a quantificação de aeróbios totais, Candida sp e estreptococos do grupo mutans, respectivamente. Após incubação em aerobiose por 24 horas; em aerobiose por 48 horas e em microaerofilia por 48-72 horas respectivamente, era realizada a quantificação dos microrganismos pesquisados e a verificação da eficácia dos procedimentos testados. Os resultados entre os tratamentos foram comparados por espécie, por meio de ANOVA para um fator de variação; ou por meio do teste de Kruskal-Wallis (?=0,05), a depender da aderência à distribuição normal. Pôde-se verificar que, frente à C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803), os 3 tratamentos testados (pastilha efervescente, ultra-som e associação pastilha efervescente e ultra-som) não diferiram significativamente do controle (escovação e água), quanto à ação antimicrobiana. Por outro lado, o tratamento com pastilha efervescente e a associação pastilha efervescente e ultra-som, mostraram-se altamente eficientes em relação às cepas de estreptococos do grupo mutans (ANOVA, P<0,001). Em relação aos aeróbios totais, o tratamento com pastilhas efervescentes mostrou uma significante ação antimicrobiana, enquanto que a associação pastilha efervescente e ultra-som apresentou uma moderada ação sobre estes microrganismos (ANOVA, P=0,011). / With the increase of life expectation there is a greater number of people denture wearers. However, there isn\'t any protocol properly established about good oral hygiene/ disinfection these dentures by patient after its installation. The aim of this survey was evaluate the antimicrobial action of different hygiene methods to full maxillary dentures in order to establish some efficient protocol to maintenance of dentures and with this to prevent from future denture stomatitis. In this way, the antimicrobial action of a physical-chemical agent, effervescent tablets and of a physical agent, the ultrasonic were tested against Candida sp yeast which are frequently associated with denture stomatitis and against mutans streptococci which are responsible for consolidation and progression of some types of biofilm. 113 individuals who took part in this study were randomly assigned to one of 4 groups: A - Control (25 individuals): They just brushed their dentures with water, three times per day; B - (29 individuals): used of one effervescent tablet per day during five minutes; C - (28 individuals): the same of the group A, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes; D - (31 individuals): the same of the group B, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes. All procedures were carried out for 21 days and all groups brushed the dentures with dental brushes of soft bristles and water. The samples of dentures material were collected at baseline before any treatment after 21 days of treatment listed above. Prior to the beginning of these hygiene procedures, all dentures received professional prophylactic brushing in order to remote entirely the biofilm existent. The samples were collected by brushing the dentures with PBS, and sent to seriate decimal dilution and plated in BHIA (Brain Heart Infusion Agar), in Chromagar-Candida and in SB20 (Agar Sacarose Bacitracina) to quantification total aerobics, Candida sp and mutans streptococci, respectively. After incubation in aerobiosis for 24 hours, in aerobiosis for 48 hours and in microaerofilic for 48-72 hours, respectively. The outcomes among the treatments were compared by species, using ANOVA test to one factor of variation; or using Kruskal-Wallis test (=0,05), depending on adherence to normal distribution. It was verified that the antimicrobial action of the three treatments tested (effervescent tablets, the ultrasonic and the association between effervescent tablets and ultrasonic) weren\'t statistically different of the Control (brushing and water), against C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803). However, the effervescent tablets treatment and the association between effervescent tablets and ultrasonic were highly efficient in relation to mutans streptococci (ANOVA, P<0,001). As for to total aerobics, the treatment with effervescent tablets showed a significant antimicrobial action, whereas the association between effervescent tablets and ultrasonic showed a moderate action against these microorganisms (ANOVA, P=0,011).
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Avaliação da ação antimicrobiana de pastilhas efervescentes e do ultra-som sobre leveduras do gênero Candida e sobre estreptococos do grupo mutans, presentes em próteses totais / Avaliation of efervescent tabs and ultrasonic antimicrobial action against Candida sp yeasth and mutans streptococci, in total denturesIngrid Machado de Andrade 06 November 2007 (has links)
Com o aumento da expectativa de vida temos um maior contingente de pessoas portadoras de próteses totais, contudo não temos um protocolo bem estabelecido para higienização/desinfecção dessas próteses pelo paciente após a sua instalação. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a ação antimicrobiana de diferentes meios de higienização de próteses totais, afim de se estabelecer um protocolo eficaz para a manutenção das próteses e com isso prevenir futuras estomatites protéticas. Para tanto foi testada a ação antimicrobiana dos agentes químico - a pastilha efervescente; e físico - o ultra-som, contra leveduras do gênero Candida, freqüentemente associadas à estomatite protética e contra os estreptococos do grupo mutans, responsáveis pela consolidação e progressão de alguns tipos de biofilme. 113 indivíduos participaram desta pesquisa, distribuídos aleatoriamente em 4 grupos, a saber: A- controle (25 pacientes) - apenas escovaram suas próteses com água, 3 vezes ao dia; B- (29 pacientes) utilizaram 1 pastilha efervescente ao dia por 5 minutos, durante 21 dias; C- (28 pacientes) fizeram o mesmo procedimento que o grupo A, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos; D-(31 pacientes) fizeram o mesmo que o grupo B, com exceção de que, após 21 dias, as próteses foram submetidas ao ultra-som por 15 minutos. Todos os procedimentos foram realizados por 21 dias e todos os grupos realizaram escovação da prótese com escovas dentais de cerdas macias Bitufo® e água. As colheitas do material das próteses ocorreram durante o exame inicial e após 21 dias da realização dos procedimentos de higienização listados acima. Antes do início dos procedimentos de higienização, todas as próteses receberam profilaxia profissional, afim de remover completamente o biofilme existente. As colheitas foram feitas por meio de escovação das próteses com PBS (salina tamponada fosfatada). Estas amostras foram submetidas a diluição decimal seriada e semeadas em placas contendo BHIA (Brain Heart Infusion Agar), Chromagar-Candida e SB20 (Ágar Sacarose Bacitracina) para a quantificação de aeróbios totais, Candida sp e estreptococos do grupo mutans, respectivamente. Após incubação em aerobiose por 24 horas; em aerobiose por 48 horas e em microaerofilia por 48-72 horas respectivamente, era realizada a quantificação dos microrganismos pesquisados e a verificação da eficácia dos procedimentos testados. Os resultados entre os tratamentos foram comparados por espécie, por meio de ANOVA para um fator de variação; ou por meio do teste de Kruskal-Wallis (?=0,05), a depender da aderência à distribuição normal. Pôde-se verificar que, frente à C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803), os 3 tratamentos testados (pastilha efervescente, ultra-som e associação pastilha efervescente e ultra-som) não diferiram significativamente do controle (escovação e água), quanto à ação antimicrobiana. Por outro lado, o tratamento com pastilha efervescente e a associação pastilha efervescente e ultra-som, mostraram-se altamente eficientes em relação às cepas de estreptococos do grupo mutans (ANOVA, P<0,001). Em relação aos aeróbios totais, o tratamento com pastilhas efervescentes mostrou uma significante ação antimicrobiana, enquanto que a associação pastilha efervescente e ultra-som apresentou uma moderada ação sobre estes microrganismos (ANOVA, P=0,011). / With the increase of life expectation there is a greater number of people denture wearers. However, there isn\'t any protocol properly established about good oral hygiene/ disinfection these dentures by patient after its installation. The aim of this survey was evaluate the antimicrobial action of different hygiene methods to full maxillary dentures in order to establish some efficient protocol to maintenance of dentures and with this to prevent from future denture stomatitis. In this way, the antimicrobial action of a physical-chemical agent, effervescent tablets and of a physical agent, the ultrasonic were tested against Candida sp yeast which are frequently associated with denture stomatitis and against mutans streptococci which are responsible for consolidation and progression of some types of biofilm. 113 individuals who took part in this study were randomly assigned to one of 4 groups: A - Control (25 individuals): They just brushed their dentures with water, three times per day; B - (29 individuals): used of one effervescent tablet per day during five minutes; C - (28 individuals): the same of the group A, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes; D - (31 individuals): the same of the group B, with exception of that after 21 days they had had their dentures submitted to ultrasonic for 15 minutes. All procedures were carried out for 21 days and all groups brushed the dentures with dental brushes of soft bristles and water. The samples of dentures material were collected at baseline before any treatment after 21 days of treatment listed above. Prior to the beginning of these hygiene procedures, all dentures received professional prophylactic brushing in order to remote entirely the biofilm existent. The samples were collected by brushing the dentures with PBS, and sent to seriate decimal dilution and plated in BHIA (Brain Heart Infusion Agar), in Chromagar-Candida and in SB20 (Agar Sacarose Bacitracina) to quantification total aerobics, Candida sp and mutans streptococci, respectively. After incubation in aerobiosis for 24 hours, in aerobiosis for 48 hours and in microaerofilic for 48-72 hours, respectively. The outcomes among the treatments were compared by species, using ANOVA test to one factor of variation; or using Kruskal-Wallis test (=0,05), depending on adherence to normal distribution. It was verified that the antimicrobial action of the three treatments tested (effervescent tablets, the ultrasonic and the association between effervescent tablets and ultrasonic) weren\'t statistically different of the Control (brushing and water), against C. albicans (ANOVA, P=0,761), C. tropicalis (Kruskal-Wallis, P=0,944) e. C. glabrata (Kruskal-Wallis, P=0,803). However, the effervescent tablets treatment and the association between effervescent tablets and ultrasonic were highly efficient in relation to mutans streptococci (ANOVA, P<0,001). As for to total aerobics, the treatment with effervescent tablets showed a significant antimicrobial action, whereas the association between effervescent tablets and ultrasonic showed a moderate action against these microorganisms (ANOVA, P=0,011).
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