Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2018-09-17T22:21:01Z No. of bitstreams: 1 SUZIVANY-Disserta??o final_P?s defesa pronta.pdf: 1092823 bytes, checksum: d04950266649fc7c286bacbc00d0e7ed (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-17T22:21:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 SUZIVANY-Disserta??o final_P?s defesa pronta.pdf: 1092823 bytes, checksum: d04950266649fc7c286bacbc00d0e7ed (MD5) Previous issue date: 2017-09-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The genus Hyptis is composed of about 400 species distributed throughout several countries, the majority being in a native and non-domesticated state. The genus has great importance for the pharmaceutical industry because of the high diversity found in its species. It has excellent pharmacological potential and is of great economic interest. Biological properties like it?s antimicrobial, anti - inflammatory, anesthetic, and insecticidal potential have already been demonstrated. However, in addition to the endemism present in many species, there are few works related to conservation of the genus and more research is needed to elucidate potential methods for its preservation. The objective of this research was the in vitro conservation of the species Hyptis ramosa. In addition to adjusting the protocols of cryopreservation of axillary guides and shoots, we aimed to contribute to the conservation of germplasm of this species. The microplants used came from the germination of seeds in MS1/2 medium. For the in vitro conservation, 10 treatments were evaluated, with different combinations between sucrose, mannitol, and sorbitol. After inoculation, the plants were maintained in a growth room for 240 days and evaluated at 60, 120, 180, and 240 days. Each evaluation quantified the number of shoots, shoot length, root number, and root length. For cryopreservation, the techniques of vitrification for axillary calluses and buds and for encapsulation of axillary shoots were evaluated. The tests were carried out in the Laboratory of Germination (LAGER) and Vegetable Tissue Culture (LCTV) of the Horto Florestal Experimental Unit da Universidade Estadual de Feira de Santana. With the results obtained, we concluded that in vitro conservation of microplants of this species is possible using the combination of 87.64 mM sucrose combined with 87.64 mM mannitol in MS medium (MURASHIGE; SKOOG, 1969). With the methodology used, cryopreservation of calluses and shoots of the species was not possible. Cell death occurred in the first stages of the callus vitrification process and in the cryogenic stage for the shoots. / O g?nero Hyptis abrange cerca de 400 esp?cies distribu?das em v?rios pa?ses, sendo a grande maioria ainda encontrada em estado nativo e n?o domesticado. O g?nero apresenta grande import?ncia para a ind?stria farmac?utica por apresentar uma grande diversidade de esp?cies com grande potencial farmacol?gico e de interesse econ?mico, com diversas atividades biol?gicas j? comprovadas, como antimicrobiana, anti-inflamat?ria, anest?sica e inseticida. Contudo, al?m do endemismo presente em muitas esp?cies existem poucos trabalhos relacionados com a sua conserva??o, havendo a necessidade de mais pesquisas. No presente trabalho objetivou-se a conserva??o in vitro de plantas de Hyptis ramosa, al?m de ajustar protocolos para crioconserva??o de calos e gemas axilares, visando contribuir para a conserva??o de germoplasma desta esp?cie. As microplantas utilizadas foram provenientes da germina??o de sementes em meio MS1/2. Para conserva??o in vitro foram avaliados 10 tratamentos, com diferentes combina??es entre sacarose, manitol e sorbitol. Ap?s a inocula??o as plantas foram mantidas em sala de crescimento por 240 dias, com avalia??es aos 60, 120, 180 e 240 dias, quantificando-se o n?mero de brotos, comprimento da parte a?rea, n?mero de raiz e comprimento da raiz. Para a crioconserva??o foram avaliadas as t?cnicas de vitrifica??o para calos e gemas axilares e de encapsulamento de gemas axilares. Os ensaios foram realizados nos Laborat?rios de Germina??o (LAGER) e de Cultura de Tecidos Vegetais (LCTV) da Unidade Experimental Horto Florestal da Universidade Estadual de Feira de Santana. Com os resultados obtidos p?de-se concluir que ? poss?vel a conserva??o in vitro de microplantas dessa esp?cie, utilizando-se a combina??o de 87,64mM de sacarose combinado com 87,64mM de manitol, em meio MS (MURASHIGE; SKOOG, 1969). Com a metodologia utilizada n?o foi poss?vel a crioconserva??o de calos e gemas da esp?cie, havendo a morte celular nas primeiras etapas do processo de vitrifica??o dos calos e na etapa criog?nica para as gemas.

Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-06-15T16:27:53Z No. of bitstreams: 1 Claudia Ulisses de Carvalho Silva.pdf: 4146224 bytes, checksum: 6784f9f313a424713c8adbf526388205 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T16:27:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Claudia Ulisses de Carvalho Silva.pdf: 4146224 bytes, checksum: 6784f9f313a424713c8adbf526388205 (MD5) Previous issue date: 2005-06-16 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / The aim of this work was to establish protocols for the induction of embryogenic calluses in heliconia species. Two experiments were carried out. The first one had three assays. The first assay consisted of combinations of AIA (indole-3-acetic) (0, 1, 1.5, 2, and 2.5 mg.L-1) with 2,4-D (2,4-dichlorofenoxyacetic acid) (0, 3, 4, and 5 mg.L-1) and the second essay combined BAP (6-benzylamino purine) (0, 1, 1.5, 2, and 2.5 mg.L-1) with 2,4-D (0, 3, 4, and 5 mg.L-1). Sections of ovaries of H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink were used in the assays above. The third assay was established from combinations among three levels of AIA (0, 1 and 2 mg.L-1) and five levels of 2,4-D (0, 5, 10, 15, and 20 mg.L-1) within cultivars Sexy Pink and Sexy Scarlet of H.chartacea. The second experiment used explant zygotic embryos of H. bihai cv. (L.) L.Lobster Claw Two in combinations of AIA (0, 1 and 2 mg.L-1) and 2,4-D (0, 5, 10, 15, and 20 mg.L-1). Evaluations in both experiments were carried out on days 30, 60 and 90 after innoculation. Aspects of the callus and the presence of nodules were assessed by visual observations with the help of a stereomicroscope and cytochemical, histologic and scanning electron microscopy analyses were performed. At the end of experiment 1, the index of formation of callus in explants treated with AIA+2,4-D (Assay 1) was greater than that observed with the combinations of BAP+2,4-D (Assay 2). The AIA+2.4-D assay also produced proembryonary cells. In the third assay the Sexy Pink cultivar showed a greater index of formation of callus than the Sexy Scarlet cultivar, but these calluses didn t show somatic embryos at the end of 90 days of cultivation. In the second experiment, formation of somatic proembryos occurred only in zygotic embryos from mature fruit of H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivated in the absence of growth regulators. The objective of the second work was to evaluate micropropagation processes for cultivation of zygotic embryos. Initially, an analysis of the internal structure of the embyo was carried out using immature and mature fruits. This was accomplished by embedding the fruits in paraffin and sectioning them with a microtome. Embryos from immature and mature fruits were innoculated in an MS (Murashige and Skoog) environment with different concentrations of salts (full MS and ½ MS), AG3 (0, 2.5 and 5 mg.L-1) and saccharose or glucose (30 g.L-1), and their development was evaluated. Evaluations were carried out 15, 30 and 60 days after innoculation based on visual observations, quantitative parameters, and number of roots. Then, plants were replicated and transferred to an MS environment (full MS or ½ MS), added 0 or 2.5 mg.L-1 BAP, with the objective to evaluate their development after 30 and 45 days after innoculation. The genetic variability of plants from zygotic embryos was estimated using isoenzymatic analyses (PO, EST, ACP, GOT, ADH, and MDH). The internal structure of mature embryos showed tissues in more advanced stages of differentiation than immature embryos, as expected. In the ½ MS environment with saccharose, 85% of the innoculated embryos were converted into plants, just 41% converted into plants in the glucose environment. During the multiplication phase, plants cultivated in an MS environment with a 50% concentration of salts and 2.5 mg.L-1 of BAP showed a greater number of buds. The isoenzymatic analyses showed some changes of isoenzymatic patterns, for example in intensity of coloration and migration of some bands. These results can be associated respectively with the difference of the ages among mother plant and plants obtained in vitro and/or variations in eletrophoretic phenotypes of the plants from in vitro cultivation of zygotic embryos. / Visando estabelecer protocolos para a indução de calos embriogênicos em espécies de helicônia, foram realizados dois experimentos, onde o primeiro constou de três ensaios. O primeiro ensaio consistiu de combinações de AIA (ácido 3-indolilacético) (0; 1; 1,5; 2 e 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) (0; 3; 4; e 5 mg.L-1) e o segundo ensaio combinou o BAP (6- benzilaminopurina) (0; 1; 1,5; 2; 2,5 mg.L-1) com 2,4-D (0; 3; 4; e 5 mg.L-1), utilizando em ambos secções de ovários de H. chartacea Lane ex Barreiros cv. Sexy Pink. O terceiro ensaio foi estabelecido a partir de combinações entre três níveis de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e cinco níveis de 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1), utilizando como explante, secções de ovários das cultivares Sexy Pink e Sexy Scarlet da espécie H. chartacea. No segundo experimento foi utilizado como explante, embriões zigóticos de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two em combinações de AIA (0; 1 e 2 mg.L-1) e 2,4-D (0; 5; 10; 15 e 20 mg.L-1). As avaliações em ambos experimentos foram realizadas aos 30, 60 e 90 dias após a inoculação, considerando o aspecto dos calos e a presença de nódulos, através de observações visuais com o auxílio de estereomicroscópio, além de análises citoquímica, histológica e de microscopia eletrônica de varredura. No experimento 1 o índice de formação de calos nos explantes tratados com AIA+2,4-D (Ensaio I), foi superior àquele observado com as combinações de BAP+2,4-D (Ensaio II), ao final dos 90 dias de cultivo, onde observou-se a presença de células pró-embriogênicas. No terceiro ensaio a cultivar Sexy Pink apresentou um maior índice de formação de calos do que a cultivar Sexy Scarlet , mas, esses calos não apresentaram a formação de embriões somáticos ao final dos 90 dias de cultivo. No segundo experimento, a formação de pró-embriões somáticos ocorreu apenas nos embriões zigóticos provenientes de frutos maduros de H. bihai (L.) L. cv. Lobster Claw Two cultivados na ausência de reguladores de crescimento. Objetivando avaliar o processo de micropropagação a partir do cultivo de embriões zigóticos, foi realizada inicialmente uma análise da estrutura interna do embrião proveniente de frutos imaturos e maduros. Para isto, foram incluídos em parafina e seccionados em micrótomo. Os embriões provenientes de frutos imaturos e maduros foram inoculados em meio MS (Murashige e Skoog) com diferentes concentrações de sais (MS completo e ½ MS), de GA3 (ácido giberélico) (0; 2,5 e 5,0 mg.L-1), além de sacarose ou glicose (30 g.L-1), para avaliar a conversão do embrião em planta. As avaliações considerando o desenvolvimento da parte aérea e o número de raízes foram realizadas aos 15, 30 e 60 dias após a inoculação, com base em observações visuais e parâmetros quantitativos. Em seguida, as plantas obtidas foram repicadas e transferidas para meio MS (MS completo ou ½ MS), acrescido de 0 ou 2,5 mg.L-1 BAP com o objetivo de avaliar a multiplicação aos 30 e 45 dias após a inoculação. Para avaliar a variabilidade genética das plantas provenientes de embriões zigóticos, utilizou-se sistemas isoenzimáticos (PO, EST, ACP, GOT, ADH e MDH). Avaliando a estrutura interna dos embriões, observou-se que os embriões maduros apresentam tecidos em estádios de diferenciação mais avançados do que os embriões imaturos, como já era esperado. Na fase de conversão dos embriões em plantas, observou-se que 85% dos embriões provenientes de frutos maduros converteram-se em plantas normais em meio MS reduzido à metade da concentração dos sais, utilizando a sacarose como fonte de carboidrato, enquanto que os embriões cultivados em meios com glicose, apenas 41% converteram-se em plantas. Na fase de multiplicação, as plantas cultivadas em meio MS com 50% da concentração dos sais acrescido de 2,5 mg.L-1 de BAP, apresentaram maior número de gemas aos 45 dias de cultivo. Quanto a análise isoenzimática foi observado algumas alterações nos padrões isoenzimáticos no que se refere a intensidade de coloração e a migração de algumas bandas. Esses comportamentos podem estar associados respectivamente, a diferença de idade entre a planta matriz e as plantas obtidas in vitro e/ou alguma variação no fenótipo eletroforético das plantas provenientes do cultivo in vitro de embrião zigótico.

Made available in DSpace on 2016-12-23T14:37:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Stefanie Cristina Oliveira.pdf: 1100238 bytes, checksum: e4200efbe53a66bdaa4fc82fbfac51ed (MD5) Previous issue date: 2012-07-27 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O uso de bioenergia tem sido apontado como uma estratégia para diminuição da utilização de combustíveis fósseis. Fundamentado nesse fato, muitos países, incluindo o Brasil, aumentaram os esforços para financiar pesquisas com espécies vegetais produtoras de biocombustíveis. Dentre essas espécies, Jatropha curcas L. destaca-se pelo alto potencial para produção de óleo. Visando à propagação clonal e massal de acessos elite de J. curcas, técnicas de cultura de tecidos têm sido aplicadas. Entretanto, diferentes autores frisaram a necessidade de ampliação de estudos envolvendo ferramentas da cultura de tecidos vegetais, dentre elas a poliploidização in vitro. A indução de poliploides in vitro é uma importante ferramenta no melhoramento genético de plantas, por possibilitar a obtenção de maior variabilidade de materiais com possíveis incrementos de características agronômicas desejáveis. Nesse sentindo, um dos objetivos deste trabalho foi estabelecer um protocolo de indução in vitro de plântulas poliploides da variedade / Gonçalo/ (2C = 0.85 pg, 2n = 2x = 22 cromossomos). Os resultados de citometria de fluxo evidenciaram que tetraploides e mixoploides foram obtidos a partir de ápices caulinares tratados com diferentes concentrações de colchicina e tempos de exposição. Fundamentado em três parâmetros (número de plântulas sobreviventes, tetraploides e mixoploides), o tratamento envolvendo 0,5 mM de colchicina a um pulso de 96 horas foi considerado o mais adequado. Com base nesse resultado, um segundo experimento de poliploidização foi realizado somente com a dosagem de 0,5 mM com pulsos de 96, 120, 144 e 168 horas. Os resultados confirmaram que a concentração de 0,5 mM por 96 horas é ideal para indução de tetraploides de J. curcas / Gonçalo/ . Plântulas mixoploides também foram encontradas nos tratamentos com0,5 mM de colchicina aos pulsos de 96, 120 e 144 horas. Visto a relevância da propagação clonal e massal de acessos elite de J. curcas, inclusive das plântulas poliploides obtidas no primeiro estudo, o presente trabalho também teve como objetivo induzir a calogênese in vitro a partir de explantes foliares. Os resultados mostraram que a combinação ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D)/cinetina (KN) promoveu maior número de explantes com calos friáveis quando comparado à combinação ácido indol-3-butírico (AIB)/KN. Dessa forma, o procedimento envolvendo a combinação auxina/citocinina é fundamental para gerar calos friáveis, os quais representam a base para estabelecimento de um sistema embriogênico in vitro de acessos elite. Pela primeira vez, um sistema de cultura de tecidos foi adaptado para indução, propagação e recuperação de tetraploides e mixoploides de J. curcas / Gonçalo/ . Além disso, os dados gerados contribuem para criação e ampliação de bancos de germoplasma in vitro da espécie / The use of bioenergy has been suggested as a strategy for reducing the utilization of fossil fuels. Thereafter, many countries, including Brazil, have increased efforts to fund the research of plant species for biofuel production. Among these species, Jatropha curcas L. stands out mainly due to its high potential for oil production. Thus, tissue culture techniques have been applied aiming at the mass and clonal propagation of J. curcas elite lines. However, different authors have emphasized the necessity of expanding studies that involve plant tissue culture tools such as in vitro polyploidization. In this sense, the present study sought to establish a protocol for in vitro induction of polyploid seedlings from shoot tips of the variety Gonzalo (2C = 0.85 pg, 2n = 2x = 22 chromosomes). Flow cytometry revealed mixoploids and tetraploids obtained from shoot tips treated with different colchicine concentrations and exposure times. Based on three criteria (survival rate of the explants, and numbers of tetraploid and mixoploid plantlets), the treatment with 0.5 mM colchicine in a 96 hour pulse was statistically considered the most appropriate. Based on these data, a second polyploidization experiment was carried out, using a dosage of 0.5 mM colchicine in pulses of 96, 120, 144 and 168 hours. The results confirmed that the concentration of 0.5 mM for 96 hours was the ideal treatment for J. curcas Gonçalo tetraploid induction. Mixoploid seedlings were also detected in the treatments with 0.5 mM colchicine in pulses of 96, 120 and 144 hours. Considering the relevance of mass and clonal multiplication of elite J. curcas accessions, and the polyploid seedlings obtained in the first investigation, this study further aimed to establish in vitro callogenesis from leaf explants. The results showed that the combination of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and kinetin (Kn) provided greater number of explants with friable calli in relation to the combination indol-3-butyric acid (IBA) and Kn. Thus, 2,4-D/Kn was the treatment of choice to generate friable calli, which are essential for somatic embryogenesis. Ultimately, a tissue culture system was adapted for induction, propagation and recovery of in vitro tetraploids from the J. curcas variety Gonçalo, as well as other inbred lines. Besides providing a new protocol for polyploidy generation, this study also contributed to the germplasm of J. curcas and the achievement of genetic variability through obtainment of tetraploid and mixoploid seedlings

O crescimento de plantas, órgãos, tecidos e células in vitro depende do desenvolvimento de meios de cultura otimizados para a perfeita interação de componentes essenciais como fitorreguladores, fonte de carbono e nutrientes minerais. Os fatores que limitam o crescimento de órgãos ou tecido in vitro são similares a aqueles que limitam o crescimento in vivo. Com o objetivo de testar a influência do estado nutricional de plantas matrizes de cenoura Daucus carota Link em potássio na morfogênese in vitro, plantas obtidas de sementes germinadas em substrato e cultivadas em vasos com areia em condições de casa de vegetação, foram submetidas a tratamentos com soluções nutritivas contendo variáveis níveis de potássio. Decorridos 30 e 60 dias de tratamento, explantes dessas plantas (internódios) foram coletados, desinfetados e inoculados em meio de cultura sólido de MS contendo também diferentes concentrações de potássio e acrescido de 0,1mg.L -1 da auxina 2,4-D buscando indução de calogênese na ausência de luz. Diferenciação celular via embriogênese somática foi conseguida em ausência de auxina em condições de fotoperíodo de 16/8 horas (claro/escuro). A avaliação da calogênese foi feita aos 60 dias após a inoculação, com base na massa de matéria fresca e seca dos calos formados por explante. A avaliação da diferenciação celular (número de plantas/explante) e taxa de diferenciação celular (número de plantas/g de matéria seca de calos) foi realizada após 30 dias de cultivo em condições de luz. A indução de calogênese e crescimento celular nos explantes de matrizes tratadas foi influenciada pelo tratamento pelos níveis de K + na solução nutritiva e pela duração dos tratamentos. Explantes de matrizes tratadas com alta concentração de K + resultaram em indução e crescimento de calos em matéria fresca e seca inversamente proporcional à concentração de K + no meio de cultura tanto para tratamento por 30 dias como para 60 dias. Tratamentos de curta duração (30 dias) com altos níveis de K + nas soluções nutritivas e baixos níveis de K + no meio de cultura influenciaram negativamente a regeneração de plantas (nº plantas/explante) nos calos dos explantes das matrizes tratadas. No entanto, taxas mais altas de diferenciação celular (nº plantas/g de matéria seca de calos) ocorreram nos calos de explantes de matrizes tratadas por 30 dias com solução nutritiva contendo maiores níveis de potássio e inoculados em meio de cultura contendo concentrações iguais ou maiores de que a do meio MS. / The growth of plants, organs, tissues and cells in vitro culture depends on the development of optimized culture medium for the perfect interaction among essential components such as phytoregulators, carbon source and minerals nutrients. The factors limiting the growth of organs or tissues in vitro conditions are similar to those limiting growth in vivo conditions. The objective of this work was aimed at studying the influence of the potassium nutritional status of matrixes plants of carrot Daucus carota Link on the in vitro morphogenesis. Matrixes plants were obtained from seeds germinated in organic substratum and cultivated in plastic pots containing washed sand in greenhouse conditions. The matrixes plants were then submitted to treatments with nutrients solutions containing variable potassium levels. After 30 and 60 days treatment, explants (internodes) were collected, disinfested and inoculated in solid culture medium of Murashige and Skoog (MS) containing different potassium concentrations and supplemented with 0,1mg.L -1 of 2,4-D for callogenesis induction in dark conditions. Cell differentiation by somatic embryogenesis was pursued by culturing the calli in auxina-free same culture medium in growth room under photoperiod of 16/8 hours (light/dark). The evaluation of the callogenesis induction and cell growth was carried out 60 days after explants inoculation, based on the mass of fresh and dry matter accumulation on each explant. The evaluation of cell differentiation (plant formed/explant) and of cell differentiation rate (number of plants formed/g of dry matter of callus) was carried after 30 days of culturing under light conditions. Callogenesis induction and cell growth on the explants of treated matrixes plants were affected by the potassium treatment levels in the nutrient solution and by the duration of the treatments. Explants from treated plants with the higher K + concentrations showed callus induction and growth inversely proportional to the concentration of K + in the culture medium for both (30 and 60 days) treatment duration. However the callogenesis accumulated after 60 days treatment was twice as much as that of 30 days treatments. Short time treatments duration (30 days) with higher levels of K + in the nutrient solutions and low concentrations of K + in the culture medium influenced the cell differentiation negatively (nº plants/explant) in the callus of the explants from treated plants. Cells from calli induced on explants from matrixes plants for 30 days were more morphogenic than the cells in the 60 days treatment where high callogenesis was observed. Also better cell differentiation rate was observed on calli induced on explants from treated matrixes plants with nutrient solutions containing the highest potassium levels and inoculated on MS culture medium containing highest potassium concentrations.

O crescimento de plantas, órgãos, tecidos e células in vitro depende do desenvolvimento de meios de cultura otimizados para a perfeita interação de componentes essenciais como fitorreguladores, fonte de carbono e nutrientes minerais. Os fatores que limitam o crescimento de órgãos ou tecido in vitro são similares a aqueles que limitam o crescimento in vivo. Com o objetivo de testar a influência do estado nutricional de plantas matrizes de cenoura Daucus carota Link em potássio na morfogênese in vitro, plantas obtidas de sementes germinadas em substrato e cultivadas em vasos com areia em condições de casa de vegetação, foram submetidas a tratamentos com soluções nutritivas contendo variáveis níveis de potássio. Decorridos 30 e 60 dias de tratamento, explantes dessas plantas (internódios) foram coletados, desinfetados e inoculados em meio de cultura sólido de MS contendo também diferentes concentrações de potássio e acrescido de 0,1mg.L -1 da auxina 2,4-D buscando indução de calogênese na ausência de luz. Diferenciação celular via embriogênese somática foi conseguida em ausência de auxina em condições de fotoperíodo de 16/8 horas (claro/escuro). A avaliação da calogênese foi feita aos 60 dias após a inoculação, com base na massa de matéria fresca e seca dos calos formados por explante. A avaliação da diferenciação celular (número de plantas/explante) e taxa de diferenciação celular (número de plantas/g de matéria seca de calos) foi realizada após 30 dias de cultivo em condições de luz. A indução de calogênese e crescimento celular nos explantes de matrizes tratadas foi influenciada pelo tratamento pelos níveis de K + na solução nutritiva e pela duração dos tratamentos. Explantes de matrizes tratadas com alta concentração de K + resultaram em indução e crescimento de calos em matéria fresca e seca inversamente proporcional à concentração de K + no meio de cultura tanto para tratamento por 30 dias como para 60 dias. Tratamentos de curta duração (30 dias) com altos níveis de K + nas soluções nutritivas e baixos níveis de K + no meio de cultura influenciaram negativamente a regeneração de plantas (nº plantas/explante) nos calos dos explantes das matrizes tratadas. No entanto, taxas mais altas de diferenciação celular (nº plantas/g de matéria seca de calos) ocorreram nos calos de explantes de matrizes tratadas por 30 dias com solução nutritiva contendo maiores níveis de potássio e inoculados em meio de cultura contendo concentrações iguais ou maiores de que a do meio MS. / The growth of plants, organs, tissues and cells in vitro culture depends on the development of optimized culture medium for the perfect interaction among essential components such as phytoregulators, carbon source and minerals nutrients. The factors limiting the growth of organs or tissues in vitro conditions are similar to those limiting growth in vivo conditions. The objective of this work was aimed at studying the influence of the potassium nutritional status of matrixes plants of carrot Daucus carota Link on the in vitro morphogenesis. Matrixes plants were obtained from seeds germinated in organic substratum and cultivated in plastic pots containing washed sand in greenhouse conditions. The matrixes plants were then submitted to treatments with nutrients solutions containing variable potassium levels. After 30 and 60 days treatment, explants (internodes) were collected, disinfested and inoculated in solid culture medium of Murashige and Skoog (MS) containing different potassium concentrations and supplemented with 0,1mg.L -1 of 2,4-D for callogenesis induction in dark conditions. Cell differentiation by somatic embryogenesis was pursued by culturing the calli in auxina-free same culture medium in growth room under photoperiod of 16/8 hours (light/dark). The evaluation of the callogenesis induction and cell growth was carried out 60 days after explants inoculation, based on the mass of fresh and dry matter accumulation on each explant. The evaluation of cell differentiation (plant formed/explant) and of cell differentiation rate (number of plants formed/g of dry matter of callus) was carried after 30 days of culturing under light conditions. Callogenesis induction and cell growth on the explants of treated matrixes plants were affected by the potassium treatment levels in the nutrient solution and by the duration of the treatments. Explants from treated plants with the higher K + concentrations showed callus induction and growth inversely proportional to the concentration of K + in the culture medium for both (30 and 60 days) treatment duration. However the callogenesis accumulated after 60 days treatment was twice as much as that of 30 days treatments. Short time treatments duration (30 days) with higher levels of K + in the nutrient solutions and low concentrations of K + in the culture medium influenced the cell differentiation negatively (nº plants/explant) in the callus of the explants from treated plants. Cells from calli induced on explants from matrixes plants for 30 days were more morphogenic than the cells in the 60 days treatment where high callogenesis was observed. Also better cell differentiation rate was observed on calli induced on explants from treated matrixes plants with nutrient solutions containing the highest potassium levels and inoculated on MS culture medium containing highest potassium concentrations.

Submitted by Ricardo Cedraz Duque Moliterno (ricardo.moliterno@uefs.br) on 2016-07-19T23:28:56Z No. of bitstreams: 1 DISSERTA??O ANDRESSA PRISCILA PIANC? S. LIMA.pdf: 1903052 bytes, checksum: 3d8a27256e27d81bbdd1cf3ad9eee48f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-19T23:28:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTA??O ANDRESSA PRISCILA PIANC? S. LIMA.pdf: 1903052 bytes, checksum: 3d8a27256e27d81bbdd1cf3ad9eee48f (MD5) Previous issue date: 2016-03-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Chapada Diamantina ? BA presents endemic especies with ornamental potential among which is Orthophytum mucugense, which occurs in the municipality Mucug?. This species is a target of extractivism and it is considered vulnerable, rendering studies of propagation and conservation of the species necessary. Therefore, the objective of this study was to establish protocols of micropropagation and in vitro conservation of O. mucugense. To that end, morphogenetic responses were evaluated in three types of explants, stem, root and leaf under the effect of different concentrations of the plant growth regulators NAA, 2,4-D and BAP. Sprouts formation in stem explants by direct organogenesis, in basal leaf explants by indirect organogenesis and callus formation in basal root and leaf explants were obtained. The rooting of the shoots was carried out with 1 coal g.L-1 activated for 30 days, and microplants acclimatized in a greenhouse with direct exposure to the environment. These results evince that tissue culture is a viable tool for in vitro propagation of O. mucugense. In in vitro conservation the effect of the medium salts reduction, of osmotic agents and of the retardant ancymidol in the minimum growth of the plants were tested; after 300 days of cultivation, analysis of the plant growth, of the chlorophyll content and of the regenerative capacity were carried out. On the basis of these assessments, the ancymidol, in the concentrations used, is not efficient in minimal growth induction, and the reduction of MS salts to ?3, with the combination of 45 g.L-1 of sucrose with 7.8 g.L-1 of mannitol is indicated for in vitro conservation of O. mucugense. / A Chapada Diamantina ? BA apresenta esp?cies end?micas com potencial ornamental dentre as quais est? a Orthophytum mucugense, que ocorre no munic?pio de Mucug?. Esta esp?cie ? alvo de extrativismo e considerada como vulner?vel, sendo necess?rios estudos de propaga??o e conserva??o da mesma. Portanto, objetivou-se neste trabalho estabelecer protocolos de micropropaga??o e conserva??o in vitro de O. mucugense. Para isto foram avaliadas as respostas morfog?nicas em tr?s tipos de explantes, caulinar, radicular e foliar, sob efeito de diferentes concentra??es dos reguladores vegetais ANA, 2,4-D e BAP. Foram obtidas forma??o de brotos em explante caulinar por organog?nese direta, em explante foliar basal por organog?nese indireta e forma??o de calo em explante foliar basal e radicular. O enraizamento dos brotos foi realizado com 1 g.L-1 de carv?o ativado por 30 dias, e as microplantas aclimatizadas em casa de vegeta??o com exposi??o direta ao ambiente. Estes dados demonstram que a cultura de tecidos ? uma ferramenta vi?vel para a propaga??o in vitro de O. mucugense. Na conserva??o in vitro foram testados o efeito da redu??o de sais do meio, de agentes osm?ticos e do retardante ancymidol no crescimento m?nimo das plantas; ap?s 300 dias de cultivo foram realizadas an?lises de crescimento das mesmas, do teor de clorofila e da capacidade regenerativa. Com base nestas avalia??es o ancymidol, nas concentra??es utilizadas, n?o ? eficiente na indu??o do crescimento m?nimo, e a redu??o de sais MS para ?3 com a combina??o de 45 g.L-1 de sacarose com 7,8 g.L-1 de manitol ? indicada para conserva??o in vitro de O. mucugense.

Le travail présenté porte sur le développement d’une nouvelle technologie innovante, nommée PAT Friday®, visant à produire des protéines recombinantes au sein des sécrétions extracellulaires de plantes carnivores génétiquement modifiées. Deux objectifs ont été fixés : Réaliser la preuve de concept de la technologie sur le modèle expérimental Drosera rotundifolia, en transformant la plante avec des gènes marqueurs et humains afin de mettre en évidence la présence des protéines recombinantes dans la glu ; et développer, après évaluation, la technologie sur un modèle potentiellement industrialisable, Nepenthes alata. Les résultats ont indiqué la présence des deux protéines marqueurs GFP et GUS dans les tissus et dans la glu de Drosera rotundifolia transformées. Les plantes ont également été transformées génétiquement avec les gènes humains de l’interféron gamma et du facteur intrinsèque. Les protéines recombinantes humaines ont été mises en évidence au sein des tissus végétaux. Le potentiel industriel du modèle Nepenthes alata a ensuite été étudié : 10 à 15 kg de protéines totales par hectare et par an peuvent être produits, grâce notamment à des récoltes successives non destructrices, et la possibilité de contrôler l’activité des protéases digestives naturelles. L’élaboration d’un protocole de régénération de la plante a été entreprise par embryogénèse somatique et organogénèse indirecte, en vue de sa transformation génétique. La technologie PAT Friday®, avec des étapes simplifiées d’extraction et de purification des protéines d’intérêt produites dans le liquide digestif, offre de nouvelles perspectives dans le domaine des protéines thérapeutiques produites à partir de plantes / The present work focuses on the development of a new innovating technology, called PAT Friday®, aiming at producing recombinant proteins into the extra-foliar fluid of modified carnivorous plants. Two objectives were assigned to this work : 1- to realize a proof of concept of the technology on the experimental model Drosera rotundifolia, transformed with marker and human genes, to confirm the occurence of the recombinant proteins into glu ; and 2 - to evaluate and develop, the technology on the model Nepenthes alata, more adapted to industrial scaling-up. The results indicate the presence of two marker proteins GUS and GFP inside the tissues and into the glu of modified Drosera rotundifolia plants. The same plant species has also been transformed with human gamma interferon and intrinsic factor genes. The corresponding human recombinant proteins have been detected into the plant tissues. Potential industrial scaling-up has been studied with the species Nepenthes alata. The results show a potential productivity of 10 to 15 kg of total proteins per hectare per year, thanks to non-destructive repeated harvests, and possibility to efficiently control the natural proteinase activity. The elaboration of a regeneration protocol has been undertaken through indirect organogenesis and somatic embryogenesis, with a view to transform genetically this plant. PAT Friday® technology, with simplified extraction and purification methods of the proteins of interest targeted into the liquid secretions, opens new perspectives in the field of therapeutical proteins produced in plants

L'étude phytochimique d'Armeria maritima et d'Helichrysum stoechas a permis d'isoler pour la première fois 31 molécules dans le genre Armeria dont 4 nouveaux flavonols diglycosylés, ainsi que le développement d'une stratégie de déréplication pour l'étude d'H. stoechas. Dans les deux espèces, nous avons relevé une richesse en polyphénols, qui pourraient être extraits par des techniques respectueuses de l'environnement comme la SFE. En parallèle, ces deux halophytes ont montré un fort potentiel biologique avec des extraits et des molécules dotés d'activités anti-oxydante, anti-collagénase, anti-inflammatoire ou encore cicatrisante. De plus, nous avons initié pour la première fois des suspensions cellulaires d'A. maritima et identifié des éliciteurs comme le méthyl jasmonate permettant d’augmenter dans les cellules d'H. stoechas la teneur en acide 3,5-dicaféoylquinique, un bio-marqueur de l'activité anti-inflammatoire. La production de molécules bioactives dans des cultures végétales in vitro pourrait par la suite être transposée à plus grande échelle, afin d’amplifier le potentiel de valorisation de ces deux halophytes en dermo-cosmétique. / The phytochemical study of Armeria maritima and Helichrysum stoechas led to the isolation of 31 molecules never reported before in the genus Armeria, 4 of which being new flavonol diglycosides, and to the development of a dereplication strategy for the study of H. stoechas. In both species, an abundance of polyphenols was observed, which could be extracted with eco-friendly methods like SFE. Both halophytes showed a strong biological potential as their extracts and molecules demonstrated antioxidant, anti-collagenase, anti-inflammatory and wound healing activities. Moreover, we initiated for the first time cell suspensions of A. maritima, and identified elicitors, such as methyl-jasmonate, which led to H. stoechas cell suspensions with an increased content in 3,5-dicaffeoylquinic acid, a bio-marker of anti-inflammatory activity. The production of bioactive molecules in "plant cell factories" could be scaled-up to enhance the valorization potential of both halophytes in dermocosmetics.