Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Due to a raise in forest ecosystem alterations, either by anthropic or natural action, there has been a need for knowledge and conservation of Brazilian forest genetic resources, since environment preservation has a great social and economical interest. Eugenia involucrata DC. (Cerejeira-do-mato), a Brazilian forest fruit species which has been used in projects for the recovery of degraded areas and legal and permanent reservation areas can as well be an alternative income for family agriculture, through the use of its non-timber products. However, besides this species having recalcitrant seeds, which lose viability fast, there is a lack of scientific and technological information that subsidize its sustainable use. Because of this, the present paper aimed at selecting efficient methods of calogenesis induction from leaf explants, addressing indirect somatic embryogenesis and, simultaneously, the improvement of this species in vitro cultivation techniques. In regard to calogenesis in vitro, microbial contamination and callus induction on leaf discs of Eugenia involucrata were assessed and selected, about phenolic oxidation: the combinations of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and Thidiazuron (TDZ) concentrations, the same way, the embryogenic potential of the calluses formed was assessed, through a histochemical test; sucrose concentrations; the combinations of sucrose and TDZ concentrations; and, also, the reduction of sucrose and 2,4-D and TDZ phytoregulators concentrations. All of them added to MS nutrient medium. As main results, the following stand out: the phenolic oxidation was higher in the presence of 2,4-D, and the combination of 2,4-D and TDZ was not significant in callus formation, only cytokinin, however the presence of auxin in the nutrient medium is essential for calogenesis. The same way, the calluses presented embryogenic potential with a friable aspect and nodular structures; TDZ has influenced the microbial contamination, once in its presence there is a smaller occurrence of bacterial colonies and fungal mycelia. Sucrose and TDZ, when applied in isolation, influenced the formation and quality of the calluses, however, the interaction between them was not significant. The decrease of sucrose and phytoregulators 2,4-D and TDZ did not affect the tested variables. The best combinations of 2,4-D and TDZ for calogenesis on leaf discs of Eugenia involucrata are 5 and 5 μM and 5 and 10 μM, respectively. The most indicated concentration of TDZ is 5 μM, for it being the concentration with which the calluses have an improved quality and, simultaneously, contributes for cost reduction. The most efficient sucrose concentrations for calogenesis are 30 or 90 gL-¹, being that the calluses quality is superior in the bigger one. The calogenic formation on leaf discs of Eugenia involucrata aiming at an indirect somatic embryogenesis is possible. / Em decorrência do aumento nas alterações dos ecossistemas florestais, por ação natural ou antrópica, tem havido uma demanda por conhecimento e conservação de recursos genéticos florestais do Brasil, haja vista que é de grande interesse social e econômico a preservação do ambiente. A Eugenia involucrata DC. (Cerejeira-do-mato) por ser uma espécie frutífera florestal, nativa do Brasil, que vem sendo utilizada em projetos de recuperação de áreas degradadas, em áreas de reserva legal e de preservação permanente, pode servir, também, como uma alternativa de renda para a agricultura familiar, por meio da utilização de seus produtos não madeireiros. Entretanto, além dessa espécie possuir sementes recalcitrantes, que perdem a viabilidade com rapidez, há carência de informações científicas e tecnológicas que subsidiem a sua utilização sustentável. Em virtude disso, o presente trabalho objetivou selecionar métodos eficientes de indução à calogênese a partir de explantes foliares, visando à embriogênese somática indireta, e, simultaneamente, o aperfeiçoamento de técnicas de cultivo in vitro dessa espécie. No que diz respeito à calogênese in vitro, foram avaliadas e selecionadas, sobre a oxidação fenólica, a contaminação microbiana e a indução de calos em discos foliares de Eugenia involucrata: as combinações de concentrações de ácido 2,4- diclorofenoxiacético (2,4-D) e Thidiazuron (TDZ), bem como foi avaliado o potencial embriogênico, por meio de teste histoquímico, dos calos formados; as concentrações de sacarose; as combinações de concentrações de sacarose e TDZ; e, ainda, a diminuição de concentrações de sacarose e dos fitorreguladores 2,4-D e TDZ. Todos adicionados ao meio nutritivo MS. Como principais resultados destacam-se: a oxidação fenólica foi maior na presença do 2,4-D, e a combinação de 2,4-D e TDZ não foi significativa na formação de calos, somente a citocinina, entretanto a presença da auxina no meio nutritivo é essencial para a calogênese. Igualmente, os calos apresentaram potencial embriogênico com aspecto friável e estruturas nodulares; o TDZ influenciou a contaminação microbiana, já que na sua presença há menor incidência de colônias bacterianas e micélios fúngicos. A sacarose e o TDZ, quando empregados isoladamente, influenciaram a formação e a qualidade dos calos, entretanto, a interação entre eles não foi significativa. A diminuição da sacarose e dos fitorreguladores 2,4-D e TDZ não afetaram as variáveis testadas. As melhores combinações de 2,4-D e TDZ para a calogênese em discos foliares de Eugenia involucrata são 5 e 5 μM ou 5 e 10 μM respectivamente. A concentração de TDZ mais indicada é de 5 μM, por ser a concentração em que os calos têm a qualidade incrementada, e, simultaneamente, contribui para a redução de custos. As concentrações de sacarose mais eficientes para a calogênese são 30 ou 90 gL-1, sendo que na maior, a qualidade dos calos é superior. É possível a formação calogênica em discos foliares de Eugenia involucrata visando à embriogênese somática indireta.

Made available in DSpace on 2016-04-28T14:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Regina Paula Willemen Pereira 1.pdf: 774444 bytes, checksum: 99a882606ae06eb557016e70b285c10d (MD5) Previous issue date: 2009-05-28 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior / The main objective of this research was to work out models for the study of the lignification. Eucalyptus grandis seedlings were produced in vitro, and the stem segments explants were used to obtain friable callus. For such, the auxins tested were TDZ, 2,4-D, NAA and IAA. The treatments with 50,0 ?M 2,4-D; 3,0 ?M TDZ and in the absence of growth regulator didn't present callus formation. After 210 days, it was chosen a callus formed in the culture medium added with 2,5 ?M of TDZ. The selected callus was maintained in the same treatment, however, in liquid medium and under agitation for 60 days at 25 ?C in the darkness, to induce cellular wall and extracellular lignin formation. After this period, the cells suspensions were treated in the following order: MS medium supplemented with sucrose, 2,4-D + kinetin, coumaric acid and without extra supplement. The cells were maintained in these treatments for 30 days. It was used a completely randomized design with four replications. Each plot consisted of an Erlenmeyer with 125 ml of cells suspension culture. For cellular wall lignin extraction and determination, it was used the method of lignin thyoglicolate. The concentration of cellular wall and extracellular lignins were evaluated by UR. For data normality verification it was used the Lilliefors test. The results were statistically analyzed by variance analysis and by Tukey test at 5% level of significance. The highest lignin concentration in the cellular wall (371.4200 ppm) was verified in the treatment EG1pc 0,0584 ?M of sucrose. Extracellular lignins were also analyzed with Wiesner reagent, H NMR and 13C NMR. The highest concentration (134.3167 ppm) of extracellular lignins was verified in the treatment EG3e of 100?M coumaric acid). However, with the results obtained in H NMR and ??CNMR analysis, it was not possible to characterize the polymerization of pure extracellular lignin. A very useful tool for lignification study is the dehydrogenized polymerization (DHP) in vitro. DHPs were produce in cells suspension filtered medium (substrate) at different treatments. For each treatment, it was added H2O2, peroxidase or H2O2 + peroxidase. The DHPs production was done in MS culture medium (without the prior cultivation of cells) as a substrate. It was added to MS medium three different solutions (coniferyl or sinapyl alcohol, peroxidase and the H2O2) by dripping. The products of DHP and the filtered were analyzed by IR and H NMR. The DHPs produced in medium MS without the previous growth of the cells, were analyzed by H NMR and ??CNMR. The IR spectra didn t present any sign in the zone of 1500 cm-1. H NMR also showed no formation of DHPs. Nevertheless, in the, cells suspensions both in H NMR and in ??CNMR analysis presented signs of DHPs, except the DHP1c (MS + 0,0584 ?M sucrose). H NMR presented: 3.86; 6.92; and 4.71 ppm and the ??CNMR: 134,26; 88,21; 65,17; 55,90; and 20,75 ppm. / O objetivo principal desse trabalho foi a elabora??o de modelos para o estudo da lignifica??o. Mudas de Eucalyptus grandis, obtidas a partir da germina??o de sementes in vitro, foram desenvolvidas visando ? obten??o de explantes de segmentos caulinares. Para tal, foram testadas as auxinas TDZ, 2,4-D, ANA e AIA. N?o foi constatada a forma??o de calos nos tratamentos contendo 50,0 ?M de 2,4-D; 3,0 ?M de TDZ e na aus?ncia de regulador de crescimento. Ap?s 210 dias, foi selecionado um calo formado no tratamento contendo 2,5 ?M de TDZ. Este calo foi cultivado no mesmo tratamento, por?m, em meio l?quido e sob agita??o por 60 dias a 25 ?C no escuro, para indu??o da forma??o de lignina da parede celular e ligninas extracelulares. Ap?s este per?odo, as c?lulas em suspens?o foram submetidas aos seguintes tratamentos: meio MS suplementado com sacarose, 2,4-D + cinetina, ?cido p-cum?rico e sem suplemento extra. As c?lulas permaneceram nestes tratamentos por 30 dias. O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, com 4 repeti??es, sendo a parcela experimental constitu?da por um Erlenmeyer contendo 125 ml de cultura de c?lulas em suspens?o. Para extra??o e determina??o da lignina da parede celular, foi utilizada a t?cnica baseada na lignina tioglicolato. A concentra??o de lignina da parede das c?lulas e das ligninas extracelulares foi avaliada em UV. Para verificar a normalidade dos dados foi usado o teste Lilliefors. Os dados foram submetidos ? an?lise de vari?ncia e as m?dias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. A maior concentra??o de lignina na parede celular (371.4200 ppm) foi verificada no tratamento EG1pc 0,0584 ?M de sacarose. Ligninas extracelulares tamb?m foram analisadas com o reagente Wiesner, RMN H e RMN13C. A maior concentra??o (134.3167 ppm) de ligninas extracelulares foi constatada no tratamento EG3e (100?M ?cido p-cum?rico). Por?m, os resultados de RMN H e RMN13C, n?o permitiram caracterizar a polimeriza??o de lignina extracelular pura. No estudo da lignifica??o utilizou-se a t?cnica de polimeriza??o desidrogenativa (DHP) in vitro. DHPs foram elaborados em meios obtidos a partir de filtrados das culturas de c?lulas em suspens?o em diferentes tratamentos. Para cada tratamento, foi adicionado H2O2, peroxidase ou H2O2 + peroxidase. A produ??o de DHPs foi efetuada em meio MS (sem o pr?vio cultivo de c?lulas) como substrato no qual tr?s solu??es (?lcool conifer?lico ou sinap?lico, peroxidase e o H2O2) foram adicionadas por gotejamento. Os produtos das DHPs, juntamente com os filtrados, foram analisados por IV e RMN H. Nos tratamentos realizados em meio MS sem o pr?vio cultivo de c?lulas em suspens?o, os DHPs produzidos foram analisados por RMN H e RMN13C. Os espectros de IV n?o apresentaram sinal na regi?o de 1500 cm-1, bem como as an?lises em RMN H mostraram que n?o houve forma??o de DHPs. Por?m, nas suspens?es celulares tanto em RMN H quanto RMN13C apresentaram sinais de DHP, exceto no tratamento com DHP1c (MS + 0,0584 ?M sacarose). As an?lises em RMN H apresentaram: 3.86; 6.92 e 4.71 ppm e de RMN13C: 134,26; 88,21; 65,17; 55,90 e 20,75 ppm.

Submitted by (ana.araujo@ufrpe.br) on 2017-02-20T18:31:01Z No. of bitstreams: 1 Marina Medeiros de Araujo Silva.pdf: 1111837 bytes, checksum: fa89f364f5e0242c84916270c538f88a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-20T18:31:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marina Medeiros de Araujo Silva.pdf: 1111837 bytes, checksum: fa89f364f5e0242c84916270c538f88a (MD5) Previous issue date: 2010-02-09 / The somatic embryogenesis is a technique of in vitro culture applied in clonal propagation of plants and regeneration of genetically transformed cells, in addition to supporting basic studies related to morphological, molecular and biochemical events that happen during the embryogenic process. The initial stages of this morphogenic pathway are characterized by the induction of genes related to stress, which leads to the hypothesis that somatic embryogenesis is an extreme response to stress in plant cells cultivated in vitro. In this work, were induced embryogenic pathways direct and indirect in the RB 872552 variety of sugarcane and analyzed the activity of enzymes from antioxidant system in order to assess the correlation between somatic embryogenesis and regulation of oxidative stress. For the direct pathway (ESD), were applied four treatments (TS, TD, TG e TA) based on protocols previously described for sugarcane. These protocols differed as to the composition of the medium and incubation condition (dark or light period of 16 hours) in a completely randomized design with 10 replications per treatment. For the indirect pathway (ESI), were used by eight different treatments combinations of four concentrations of 2,4-D (2,4-dichlorophenoxyacetic acid) and two Fe-EDTA, in a factorial 4x2 and 20 replicates per treatment. Were calculated the indices of embryo formation (IFE) and callus (IFC) and evaluated the activity of catalase, peroxidase and polyphenoloxidase. Somatic embryos were visualized only in the treatment of ESD plus 2,4-D and BAP (6-benzylaminopurine), and treatment of ESI with 8 mg.L-1 2,4-D. The conversion of somatic embryos into plants was performed in culture medium without added phytoregulators. The activity of antioxidant enzymes was obtained by reading of a spectrophotometer, from the extract obtained from embryogenic and non-embryogenic tissues treatment of ESD. The polyphenoloxidase and catalase activity increased in non-embryogenic tissue, whereas peroxidase was less active in these tissues when compared to embryogenic. It was found that the induction of somatic embryogenesis in the variety studied is related to oxidative stress and that these antioxidant enzymes may become important as biochemical markers of this process. / A embriogênese somática é uma técnica de cultivo in vitro aplicada na propagação clonal de plantas e na regeneração de células transformadas geneticamente, além de auxiliar estudos básicos relacionados aos eventos morfológicos, moleculares e bioquímicos que ocorrem durante o processo embriogênico. As fases iniciais dessa via morfogênica são caracterizadas pela indução de genes relacionados ao estresse, o que leva à hipótese de que a embriogênese somática é uma resposta extrema ao estresse de células de plantas cultivadas in vitro. Neste trabalho, foram induzidas as vias embriogênicas direta e indireta na variedade RB 872552 de cana-de-açúcar e analisada a atividade de enzimas do sistema antioxidante, a fim de avaliar a correlação entre a embriogênese somática e a regulação do estresse oxidativo. Para a via direta (ESD), foram aplicados quatro tratamentos (TS, TD, TG e TA) baseados em protocolos já descritos para cana-de-açúcar. Esses protocolos diferiam quanto à composição do meio e condição de incubação (escuro ou fotoperíodo de 16 horas), em delineamento inteiramente casualizado, com 10 repetições por tratamento. Para a via indireta (ESI), foram utilizados oito tratamentos diferenciados pelas combinações de quatro concentrações de 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) e duas de Fe-EDTA, em esquema fatorial 4x2 e 20 repetições por tratamento. Foram calculados os índices de formação de embriões (IFE) e de calo (IFC) e avaliada a atividade da catalase, peroxidase e polifenoloxidase. Embriões somáticos foram visualizados apenas nos tratamentos de ESD acrescidos de 2,4-D e BAP (6-benzilaminopurina), e no tratamento de ESI com 8 mg.L-1 de 2,4-D. A conversão de embriões somáticos em plantas foi realizada em meio de cultura sem adição de fitoreguladores. A atividade das enzimas antioxidantes foi obtida através de leitura feita em espectrofotômetro, a partir do extrato obtido de tecidos embriogênicos e não embriogênicos dos tratamentos de ESD. A atividade da polifenoloxidase e da catalase aumentou em tecidos não embriogênicos, enquanto que a peroxidase foi menos ativa nesses tecidos quando comparada aos embriogênicos. Evidenciou-se que a indução da embriogênese somática na variedade estudada está relacionada ao estresse oxidativo e que estas enzimas antioxidantes podem exercer papel relevante como marcadores bioquímicos deste processo.

Submitted by Leticia Schettini (leticia@ufrrj.br) on 2016-09-20T12:51:17Z No. of bitstreams: 1 2009 - Maria Beatriz de Oliveira Monteiro.pdf: 6872732 bytes, checksum: c5bedd487727835e97ae3e6b493349b3 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-20T12:51:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Maria Beatriz de Oliveira Monteiro.pdf: 6872732 bytes, checksum: c5bedd487727835e97ae3e6b493349b3 (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior-CAPES / In spite of the technological progresses, the understanding of the lignin structural formation is still matter of scientific investigations. This research aimed to utilize Eucalyptus urophylla S.T. Blake callus for lignin production. This callus were obtained from stems segments explants grown in culture medium added with a combination of the cytokine TDZ and the auxins acid indole-3-acetic (IAA), acid ?-naphthaleneacetic (NAA) and acid 2,4-dichlorophenoxyacetic (2,4-D). This growth regulators were utilized either alone or mixtured. For cell suspension production it was utilized callus obtained in medium culture added with 20?M IAA + 3?M TDZ, after 30 days of growth in vitro. Once the cells suspension was obtained, the lignin production was induced by four elicitors: jasmonic acid (JA), NAA, sucrose and control (without elicitor). It was used a completely randomized design with four replications. Each plot consisted of an Erlenmeyer with 125 ml of cells suspension culture. The Wiesner test confirmed the lignin presence in all treatments. In 3 of the 4 replicatons it was performed another evaluation to the production of DHPs (polymers by oxidative dehydrogenation) utilizing suspension filtrate added with H2O2, H2O2 + peroxidase and peroxidase. These new treatments were analyzed through polilignols production utilizing infrared (IR) and nuclear magnetic resonance of the hydrogen (NMR H). The suspension filtrate analysis of the 4th replication through ultraviolet (UV), IR, NMR 13C and NMR H evidenced the production of extra cellular lignin. Of this, the largest content was obtained in presence of sucrose as elicitor, followed by ANA and AJ. The cells in suspension increased the cellular wall lignin content in all treatments in relation to the control and the largest values were with the medium containing sucrose. DHPs were also analyzed utilizing as mattress the MS medium added of the same elicitors tested in the cellular suspension phase. For this, it was utilized as precursors the following alcohols: coniferyl or sinapyl, H2O2 and peroxidase; amd the analyses were done in RMN H and RMN 13C. The results showed DHPs synthesis of both coniferyl alcohol (DHP1c, DHP2c and DHP4c) and sinapyl alcohol (DHP2s). Nevertheless, It was not synthesized DHP in the treatment containing sucrose when the precursor was the coniferyl alcohol. On the other hand, when the sinapyl alcohol was the precursor, DHPs were only synthesized in the presence of ANA as elicitor. It was concluded that sucrose is an appropriate elicitor for the lignin production in cells suspension both at cellular and extra cellular level. However, this result was not observed in relation to DHP production. NAA auxin had a better functionality in the DHP2c and DHP2s formation. These results may be considered a progress in the lignification studies with the use of E. urophylla cell suspension. Once all these questions were answered and solved, it will be possible to develop E.urophylla suitable plants with better quality forest products and able to cause smaller environmental impact in the industrial processes. / Apesar dos avan?os tecnol?gicos, a compreens?o da forma??o estrutural da lignina ainda ? alvo de in?meras investiga??es cient?ficas. Esta pesquisa foi realizada com calos de Eucalyptus urophylla S.T. Blake para a produ??o de lignina. Os calos foram obtidos a partir de explantes de segmentos caulinares desenvolvidos em meios de cultura acrescidos de uma combina??o da citocinina TDZ e das auxinas ?cidos: 3-indolac?tico (AIA), ?-naftalenoac?tico (ANA) e diclorofenoxiac?tico (2,4-D), nas formas isoladas e conjugadas. Para a produ??o de c?lulas em suspens?o foram utilizados os calos formados no tratamento contendo 20?M de AIA + 3?M de TDZ, ap?s 30 dias de cultivo in vitro. Obtidas as c?lulas em suspens?o, a produ??o de lignina foi induzida empregando-se quatro elicitores: ?cido jasm?nico (AJ), ANA, sacarose e testemunha (sem o emprego de elicitores). O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, 4 repeti??es e um Erlenmeyer contendo 125 ml de cultura de c?lulas em suspens?o. O teste de Wiesner confirmou a presen?a de lignina, em todos os tratamentos testados. Em 3 das 4 repeti??es foram realizados subtratamentos para a produ??o de DHPs (pol?meros por desidrogena??o oxidativa) a partir do filtrado da suspens?o com H2O2, H2O2 + peroxidase e peroxidase. A an?lise desses subtratamentos foi realizada pela detec??o da produ??o de polilign?is atrav?s de raios infravermelho (IV) e resson?ncia magn?tica nuclear do hidrog?nio (RMN H). O filtrado da suspens?o da repeti??o 4 foi analisado por ultravioleta (UV), IV, RMN 13C e RMN H, sendo constatada a presen?a de lignina extracelular, com o maior teor sendo observado na presen?a do elicitor sacarose, seguido do ANA e AJ. As c?lulas em suspens?o apresentaram aumento no teor de lignina na parede celular em todos os tratamentos em rela??o ? testemunha e os maiores valores foram com o meio contendo sacarose. Foram analisadas tamb?m as DHPs tendo como colch?o o meio de cultura MS acrescido dos mesmos elicitores testados na fase de suspens?o celular. Para isto foram utilizados como precursores os ?lcoois conifer?lico ou sinap?lico, H2O2 e peroxidase, com a lignina analisada em RMN H e RMN 13C. Os resultados mostraram que houve s?ntese de DHPs do ?lcool conifer?lico (DHP1c, DHP2c e DHP4c) e do ?lcool sinap?lico (DHP2s). Porem quando se utilizou como precursor o ?lcool conifer?lico n?o foram sintetizadas DHPs no tratamento contendo sacarose como elicitor. E, quando foi utilizado como precursor o ?lcool sinap?lico, somente foram formadas DHPs na presen?a do elicitor ANA. Concluiu-se, ent?o, que a sacarose apresentou-se como um elicitor adequado para a produ??o de lignina nas c?lulas em suspens?o, tanto em n?vel celular quanto extracelular. Entretanto, isto n?o foi observado em rela??o ? produ??o de DHP. A auxina ANA teve funcionalidade maior na forma??o de DHP2c e DHP2s. Estes resultados devem ser considerados como um avan?o nos estudos de lignifica??o com a utiliza??o de c?lulas em suspens?o de E. urophylla. Quando esses questionamentos forem identificados e solucionados ser? poss?vel o desenvolvimento de novos indiv?duos desta esp?cie que conduzam ? produ??o de produtos florestais de melhor qualidade, com menor impacto ambiental nos processos industriais.

Submitted by Jorge Silva (jorgelmsilva@ufrrj.br) on 2017-09-12T17:27:40Z No. of bitstreams: 1 2009 - Maria Beatriz de Oliveira Monteiro.pdf: 6859044 bytes, checksum: 68c2b98ad22b807fdd1e5779b401a4aa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-09-12T17:27:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009 - Maria Beatriz de Oliveira Monteiro.pdf: 6859044 bytes, checksum: 68c2b98ad22b807fdd1e5779b401a4aa (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / CAPES / In spite of the technological progresses, the understanding of the lignin structural formation is still matter of scientific investigations. This research aimed to utilize Eucalyptus urophylla S.T. Blake callus for lignin production. This callus were obtained from stems segments explants grown in culture medium added with a combination of the cytokine TDZ and the auxins acid indole-3-acetic (IAA), acid ?-naphthaleneacetic (NAA) and acid 2,4-dichlorophenoxyacetic (2,4-D). This growth regulators were utilized either alone or mixtured. For cell suspension production it was utilized callus obtained in medium culture added with 20?M IAA + 3?M TDZ, after 30 days of growth in vitro. Once the cells suspension was obtained, the lignin production was induced by four elicitors: jasmonic acid (JA), NAA, sucrose and control (without elicitor). It was used a completely randomized design with four replications. Each plot consisted of an Erlenmeyer with 125 ml of cells suspension culture. The Wiesner test confirmed the lignin presence in all treatments. In 3 of the 4 replicatons it was performed another evaluation to the production of DHPs (polymers by oxidative dehydrogenation) utilizing suspension filtrate added with H2O2, H2O2 + peroxidase and peroxidase. These new treatments were analyzed through polilignols production utilizing infrared (IR) and nuclear magnetic resonance of the hydrogen (NMR H). The suspension filtrate analysis of the 4th replication through ultraviolet (UV), IR, NMR 13C and NMR H evidenced the production of extra cellular lignin. Of this, the largest content was obtained in presence of sucrose as elicitor, followed by ANA and AJ. The cells in suspension increased the cellular wall lignin content in all treatments in relation to the control and the largest values were with the medium containing sucrose. DHPs were also analyzed utilizing as mattress the MS medium added of the same elicitors tested in the cellular suspension phase. For this, it was utilized as precursors the following alcohols: coniferyl or sinapyl, H2O2 and peroxidase; amd the analyses were done in RMN H and RMN 13C. The results showed DHPs synthesis of both coniferyl alcohol (DHP1c, DHP2c and DHP4c) and sinapyl alcohol (DHP2s). Nevertheless, It was not synthesized DHP in the treatment containing sucrose when the precursor was the coniferyl alcohol. On the other hand, when the sinapyl alcohol was the precursor, DHPs were only synthesized in the presence of ANA as elicitor. It was concluded that sucrose is an appropriate elicitor for the lignin production in cells suspension both at cellular and extra cellular level. However, this result was not observed in relation to DHP production. NAA auxin had a better functionality in the DHP2c and DHP2s formation. These results may be considered a progress in the lignification studies with the use of E. urophylla cell suspension. Once all these questions were answered and solved, it will be possible to develop E.urophylla suitable plants with better quality forest products and able to cause smaller environmental impact in the industrial processes. / Apesar dos avan?os tecnol?gicos, a compreens?o da forma??o estrutural da lignina ainda ? alvo de in?meras investiga??es cient?ficas. Esta pesquisa foi realizada com calos de Eucalyptus urophylla S.T. Blake para a produ??o de lignina. Os calos foram obtidos a partir de explantes de segmentos caulinares desenvolvidos em meios de cultura acrescidos de uma combina??o da citocinina TDZ e das auxinas ?cidos: 3-indolac?tico (AIA), ?-naftalenoac?tico (ANA) e diclorofenoxiac?tico (2,4-D), nas formas isoladas e conjugadas. Para a produ??o de c?lulas em suspens?o foram utilizados os calos formados no tratamento contendo 20?M de AIA + 3?M de TDZ, ap?s 30 dias de cultivo in vitro. Obtidas as c?lulas em suspens?o, a produ??o de lignina foi induzida empregando-se quatro elicitores: ?cido jasm?nico (AJ), ANA, sacarose e testemunha (sem o emprego de elicitores). O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, 4 repeti??es e um Erlenmeyer contendo 125 ml de cultura de c?lulas em suspens?o. O teste de Wiesner confirmou a presen?a de lignina, em todos os tratamentos testados. Em 3 das 4 repeti??es foram realizados subtratamentos para a produ??o de DHPs (pol?meros por desidrogena??o oxidativa) a partir do filtrado da suspens?o com H2O2, H2O2 + peroxidase e peroxidase. A an?lise desses subtratamentos foi realizada pela detec??o da produ??o de polilign?is atrav?s de raios infravermelho (IV) e resson?ncia magn?tica nuclear do hidrog?nio (RMN H). O filtrado da suspens?o da repeti??o 4 foi analisado por ultravioleta (UV), IV, RMN 13C e RMN H, sendo constatada a presen?a de lignina extracelular, com o maior teor sendo observado na presen?a do elicitor sacarose, seguido do ANA e AJ. As c?lulas em suspens?o apresentaram aumento no teor de lignina na parede celular em todos os tratamentos em rela??o ? testemunha e os maiores valores foram com o meio contendo sacarose. Foram analisadas tamb?m as DHPs tendo como colch?o o meio de cultura MS acrescido dos mesmos elicitores testados na fase de suspens?o celular. Para isto foram utilizados como precursores os ?lcoois conifer?lico ou sinap?lico, H2O2 e peroxidase, com a lignina analisada em RMN H e RMN 13C. Os resultados mostraram que houve s?ntese de DHPs do ?lcool conifer?lico (DHP1c, DHP2c e DHP4c) e do ?lcool sinap?lico (DHP2s). Porem quando se utilizou como precursor o ?lcool conifer?lico n?o foram sintetizadas DHPs no tratamento contendo sacarose como elicitor. E, quando foi utilizado como precursor o ?lcool sinap?lico, somente foram formadas DHPs na presen?a do elicitor ANA. Concluiu-se, ent?o, que a sacarose apresentou-se como um elicitor adequado para a produ??o de lignina nas c?lulas em suspens?o, tanto em n?vel celular quanto extracelular. Entretanto, isto n?o foi observado em rela??o ? produ??o de DHP. A auxina ANA teve funcionalidade maior na forma??o de DHP2c e DHP2s. Estes resultados devem ser considerados como um avan?o nos estudos de lignifica??o com a utiliza??o de c?lulas em suspens?o de E. urophylla. Quando esses questionamentos forem identificados e solucionados ser? poss?vel o desenvolvimento de novos indiv?duos desta esp?cie que conduzam ? produ??o de produtos florestais de melhor qualidade, com menor impacto ambiental nos processos industriais.

Patchouli is an aromatic species of Asian origin that has been cultivated in various parts of the world for the extraction of essential oil of its leaves. The essential oil is used by the perfume, cosmetic and food industries. Patchouli is an economically important species need to have its genetic material preserved. In this context, the aim of this study was to develop protocols for micropropagation and in vitro conservation of three accessions of patchouli. For the experiments of micropropagation MS medium supplemented with different concentrations of kinetin and IAA or NAA were tested. For the acclimatization assays different mixtures of coconut coir and vermiculite supplemented with NPK fertilizer and limestone were tested. For callus induction, different doses of 2,4-D were combined with BAP and kinetin. For the in vitro conservation assays different growth temperatures, osmotic regulators and/or inhibitors of growth were tested. The different accessions showed shoot regeneration via direct organogenesis. Accession POG002 can be propagated using 0.5 mg.L-1 kinetin and 0.1 mg.L-1 NAA, accession POG014 using 2.0 mg L-1 kinetin and 0.1 mg.L-1 NAA, and accession POG021 using 1.0 mg.L-1 kinetin and 0.5 mg.L-1 IAA. The acclimatization of accessions POG002, POG014 and POG021 can be performed with the substrate coconut coir + NPK (3-12-6) fertilizer (12 g.L-1) + limestone (1 g.L-1). The larger sizes of calluses were obtained using: 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L-1 BAP, 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP and 0.110 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L-1 BAP for accession POG014; 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.113 mg.L -1 BAP, 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP for POG021; and 0.022 mg.L-1 2,4-D and 0.225 mg.L-1 BAP for POG002. The conservation of accession POG002 can be realized using 0.5 mg.L-1 abscisic acid for three months at 18°C; accession POG014 can be conservated for three months using 0.5 mg.L-1 of abscisic acid at 18°C; and POG021 can be maintained for six months using sucrose 10 g.L-1 and sorbitol 5 g.L-1 at 25°C. / O patchouli é uma espécie aromática de origem asiática que tem sido cultivada em diversas partes do mundo para extração de óleo essencial de suas folhas. Este óleo essencial é empregado nas indústrias de perfumes, cosmética e alimentícia. Por se tratar de uma espécie de importância econômica local e mundial o patchouli necessita ter seu material genético preservado. Neste contexto, o objetivo geral deste trabalho foi desenvolver protocolos de micropropagação e conservação in vitro de três acessos de patchouli. Para os experimentos de micropropagação foi testado meio MS suplementado com diferentes concentrações de cinetina e as auxinas AIA ou ANA. Nos ensaios de aclimatização testou-se diferentes misturas de pó de coco e vermiculita suplementado com adubo NPK formulado e calcário. Para indução de calos, doses distintas de 2,4-D foram combinadas com as citocininas BAP e cinetina. Nos ensaios de conservação in vitro testou-se diferentes temperaturas de cultivo, reguladores osmóticos e/ou inibidores de crescimento. Os diferentes acessos apresentaram regeneração de brotos via organogênese direta. O acesso POG002 pode ser propagado na presença de 0,5 mg.L-1 de cinetina e 0,1 mg.L-1 de ANA; o acesso POG014 com 2,0 mg.L-1 de cinetina e 0,1 mg.L-1 de ANA; e o acesso POG021 com o emprego de 1,0 mg.L-1 de cinetina e 0,5 mg.L-1 de AIA. A aclimatização dos acessos POG002, POG014 e POG021 pode ser realizada com o substrato pó de coco + NPK (3-12-6) (12 g.L-1) + calcário (1 g.L-1). Os maiores tamanhos de calos foram obtidos nos seguintes meios: 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP, 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP, e 0,110 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP para o acesso POG014; 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,113 mg.L-1 de BAP, 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP para o POG021; e 0,022 mg.L-1 de 2,4-D e 0,225 mg.L-1 de BAP para o POG002. A conservação do acesso POG002 pode ser realizada com 0,5 mg.L-1 ácido abscísico por três meses a 18°C; o acesso POG014 pode ser conservado por três meses empregando 0,5 mg.L-1 de ácido abscísico a 18°C; e o acesso POG021 pode ser mantido por seis meses com uso de sacarose 10 g.L-1 e sorbitol 5 g.L-1 a 25°C.

Submitted by Verena Pereira (verenagoncalves@uefs.br) on 2018-07-03T23:23:34Z No. of bitstreams: 1 TESE 2018 - Doutorado RGV_UEFS - Carla Maria de Jesus Silva.pdf: 1687907 bytes, checksum: 3e9fe14e189c00f951079ca2a71e3c66 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-03T23:23:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TESE 2018 - Doutorado RGV_UEFS - Carla Maria de Jesus Silva.pdf: 1687907 bytes, checksum: 3e9fe14e189c00f951079ca2a71e3c66 (MD5) Previous issue date: 2018-03-29 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The watermelon (Citrullus lanatus) is a very important vegetable for a region of Northeast Brazil due to its adaptation as the natural conditions and the good characteristics of the fruit that are obtained. The aims of the current study are to assess watermelon genotype responses to calluses in anthers by using growth and temperature regulators, and to induce polyploidy through colchicine use (at different concentrations), exposure time, mechanical scarification and application methods. Anthers of Smile and Sugar Baby lines were inoculated in MS medium at different concentrations of 2.4-D or of BAP with 2.4-D, in combination with the pre-treatment (low temperature). Crimson Sweet cultivar seedlings were treated with different colchicine concentrations at two different times, with and without scarification, in order to induce polyploidy. Line LDRO was subjected to different colchicine concentrations at two different times and application methods: a) direct in the seed method (with, and without, scarification) (DSM, WE and WOE), b) Radicle emission method (ERM), c) Hypocotyl and root insertion point method (HRIM), d) At the apex of the seedling method (ASM) and e) Inverted hypocotyl method (IHM). Crimson Sweet flower buds were subjected to colchicine, at two different times, in order to induce polyploidy. Results have shown that 2.4-D often induced callus formation in both lines, but BAP/2.4-D interaction and pre-treatment did not increase the induction frequency. Crimson Sweet showed higher induction rate at 0.2% colchicine for 48h, WE. Line LDRO presented plants with tetraploid cells at 0.2% colchicine for 24 and 48h. The method 0.2% DSM, WE and WOE also generated plants with tetraploid cells. The diameter of treated pollen grains in flower buds have increased; the higher rate of non-reduced gametes induction was 16.07% and flower bud diameter (1.5mm) was estimated as adequate for induction / A melancia (Citrullus lanatus) ? uma hortali?a muito importante para a regi?o Nordeste do Brasil por sua adapta??o as condi??es clim?ticas e pelas boas caracter?sticas de fruto que se obt?m. Os objetivos desse trabalho foram avaliar as respostas de gen?tipos de melancia quanto ? indu??o de calos em anteras utilizando reguladores de crescimento e temperatura; e induzir a poliploidia mediante o uso da colchicina em diferentes concentra??es, tempos de exposi??o, escarifica??o mec?nica e m?todos de aplica??o. Anteras das linhagens de Smile e Sugar Baby foram inoculadas em meio MS sob diferentes concentra??es de 2,4-D ou BAP com 2,4-D, associado ao pr?-tratamento (baixa temperatura). Para indu??o de poliploidia, sementes da cultivar Crimson Sweet foram tratadas com diferentes concentra??es de colchicina, em dois tempos, com e sem escarifica??o. Para a linhagem LDRO, utilizaram-se diferentes concentra??es de colchicina em dois tempos e m?todos de aplica??o: a) M?todo direto na semente (com escarifica??o e sem escarifica??o) (MDS, CE e SE), b) M?todo da semente com emiss?o da rad?cula (MER), c) M?todo no ponto de inser??o do hipoc?tilo e raiz (MIHR), d) M?todo no ?pice da pl?ntula (MAP) e e) M?todo do hipoc?tilo invertido (MHI). Na indu??o de poliploidia em bot?es florais de Crimson Sweet utilizou-se colchicina em dois tempos. Os resultados mostraram que o 2,4-D induziu a maior frequ?ncia de calos nas duas linhagens, a intera??o BAP com 2,4-D e o pr?-tratamento, n?o aumentaram a frequ?ncia de indu??o. Para Crimson Sweet, o maior percentual de indu??o foi obtido com colchicina a 0,2% por 48 h, SE. Para LDRO, observou-se uma frequ?ncia de plantas com c?lulas tetraploides com colchicina a 0,2% por 24 h e 48 h. Nos m?todos 0,2% MDS CE e MHI observou-se tamb?m plantas com c?lulas tetraploides. Em bot?es florais, o di?metro dos gr?os de p?len tratados aumentou; o maior percentual de indu??o de gametas n?o reduzidos foi de 16,07% e; o di?metro em torno de 1,5 mm do bot?o floral foi estimado como adequado para indu??o