Würzburg, Univ., Diss., 2005.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:38Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-28Bitstream added on 2014-06-13T18:35:07Z : No. of bitstreams: 1 alves_f_me_arafo.pdf: 1240558 bytes, checksum: 9e6bcc073e00b4586c16678cef950d5e (MD5) / Este estudo avaliou os efeitos da Terapia Fotodinâmica (PDT), mediada pelo Photodithazine® (PDZ) e luz LED, sobre Candida albicans resistente a fluconazol em um modelo de candidose oral induzida. Para isso, camundongos fêmeas de 6 semanas foram imunussuprimidos e inoculados com C. albicans (107 células/mL). Em seguida, aplicou-se 100 mg/L de PDZ (diluído em salina ou hidrogel) na cavidade bucal por 20 min e o dorso lingual foi iluminado (37,5 J/cm² dose de luz). Animais adicionais foram tratados somente com LED ou PDZ. O grupo controle positivo não recebeu nenhum tratamento e, adicionalmente, animais saudáveis receberam tratamento com PDT (n=5). Em seguida, foi feita a recuperação do micro-organismo da língua dos animais. O número de colônias viáveis foi quantificado e os valores de UFC/mL foram determinados. Os animais foram sacrificados e as línguas foram removidas cirurgicamente para análise histológica. Duas colônias de cada animal foram isoladas da placa de cultura para avaliação dos fatores de virulência: adesão e formação de biofilme em superfície abiótica, formas filamentares de crescimento e produção de exoenzimas. Os dados foram analizados por ANOVA (P < 0,05). Os resultados demonstraram que a PDT resultou em redução significativa de C. albicans resistente a fluconazol (1,91 e 1,96 log10) em relação ao grupo controle positivo. Somente a aplicação da luz ou PDZ não reduziu a viabilidade celular. A PDT não ocasionou efeitos adversos no tecido lingual dos animais e reduziu apenas a produção de fosfolipase. A PDT foi efetiva na inativação da C. albicans resistente a fluconazol, sem causar efeitos adversos no tecido lingual. / This study evaluated the effects of Photodynamic Therapy (PDT), mediated by Photodithazine® (PDZ) and LED light, on fluconazole-resistant Candida albicans in a murine model of oral candidosis. For this, six-week-old female mice were immunosuppressed and inoculated with C. albicans (107 células/mL). Then, 100 mg/L of PDZ (diluted in saline or hydrogel) was applied on the oral cavity for 20 min and the dorsum of the tongue was illuminated (37.5 J/cm2 of fluence). The use of PDZ or light only was also investigated. Additionally, healthy animals received treatment with PDT. Positive control animals did not receive any treatment and negative control animals were not inoculated (n=5). After treatment the dorsum of the tongue was swabbed to recover C. albicans. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined. The animals were killed and the tongues were surgically removed for histological analysis. Two yeast colony of each group were isolated from the culture plate for the evaluation of virulence factors: adhesion and biofilm formation in abiotic surface, filamentous forms of growth and production of exoenzymes. Data were analyzed by ANOVA (P < 0.05). PDT resulted in a significant reduction of fluconazole-resistant C. albicans (1.91 e 1.96 log10). The application of PDZ or LED only did not reduce the cell viability. PDT did not cause adverse effects in the local mucosa and it was able to reduce only phospholipase production. PDT was effective in the inactivation of fluconazole-resistant C. albicans without harming the tongue tissue.

ALVES, A. M. C. V. Mecanismo da atividade antifúngica do fator de necrose tumoral (TNF) frente ao biofilme de Candida albicans. 2017. 109 f. Tese (Doutorado em Microbiologia Médica) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2017. / Submitted by Carolinda Oliveira (ppgmm@ufc.br) on 2017-08-08T12:00:12Z No. of bitstreams: 1 2017_tese_amcvalves.pdf: 19833367 bytes, checksum: 500dbfc823adc7ee044a02d49c562ea6 (MD5) / Approved for entry into archive by Erika Fernandes (erikaleitefernandes@gmail.com) on 2017-08-08T13:27:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_tese_amcvalves.pdf: 19833367 bytes, checksum: 500dbfc823adc7ee044a02d49c562ea6 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-08T13:27:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_tese_amcvalves.pdf: 19833367 bytes, checksum: 500dbfc823adc7ee044a02d49c562ea6 (MD5) Previous issue date: 2017-07-11 / Candida albicans is a polymorphic fungus and has as main virulence factor the biofilm formation,particularly, in prosthetic materials and host surfaces of immunosuppressed patients, causing life-threatening infections. Tumor necrosis factor (TNF) is a pleiotropic cytokine that has several functions in the defense mechanisms of the host, among which promote inflammation and, consequently, inhibit the growth of microorganisms. In protozoa, TNF can affect the growth of these through their lectin domains that are spatially distinct from TNF receptors. To our knowledge, a direct TNF effect on yeasts, which lack TNF receptors, has never been reported. Thus, the present study aims to demonstrate that TNF affects the in vitro growth of Candida albicans through a mechanism independent of the TNF receptor. For this, four strains biofilm producerCandida albicans(two strong producer and two weak producer) were cultured in the presence or absence of TNF solutions. Susceptibility to TNF was evaluated using the broth microdilution method. Biofilms were grown on 96-well microtitre plates and evaluated using XTT (2,3-Bis-(2-Methoxy-4-Nitro-5-Sulfophenyl)- 2H-Tetrazolium-5-Carboxanilide) assay, optical, confocal and scanning and transmission electron microscopy.Biochemical biofilm characteristics such as protein quantification and hydrophobicity index (HI) were also evaluated.Thus,it was observed thatTNF did not alter Candida albicans planktonic growth. However, TNF dose-dependently inhibited growing but not established biofilm development, virtually halting yeast filamentation. Preincubation with the TNF antibody adalimumab but not with the immunoglobulin G coupled TNF soluble receptor etanercept blocked TNF activity. Preincubation with the carbohydrate N,N’-diacetylchitobiose, a major component of the yeast cell wall, that binds to TNF lectin domain, abrogated TNF effect against Candida albicans growing biofilm. In conclusion, this is the first demonstration of a receptor independent TNF and no mammalian cells activity, on other words, direct effect against C. albicans biofilm growth. Blockade of TNF effect by N,N’-diacetylchitobiose suggests that it is mediated via the lectin domain of the cytokine. / A Candida albicans é um fungo polimórfico que exprime como principal fator de virulência a formação de biofilmes, especialmente, em implantes médicos na superfícies de pacientes imunossuprimidos, causando infecções potencialmente fatais. O fator de necrose tumoral (TNF) é uma citocina pleitrópicaque denota diversas funções nos mecanismos de defesa do hospedeiro, dentre os quais promover a inflamação e, consequentemente, inibir o crescimento de microrganismos. Em protozoários, o TNF pode afetar o crescimento destes por meio dos seus domínios semelhante à lectina, espacialmente distintos dos receptores de TNF. No conhecimento que se tem, não há relatos de um efeito TNF direto em leveduras, que não possuem receptores de TNF. Assim, este trabalho objetivou demonstrar que o TNF afeta o crescimento in vitro de Candida albicanspor meio de um mecanismo independente do receptor de TNF. Para tal, quatro cepas de Candida albicans produtoras de biofilme (duas fortes e duas fracas formadoras) foram cultivadas na presença ou ausência de soluções de TNF. A susceptibilidade ao TNF foi avaliada utilizando o método de microdiluição em caldo. Os biofilmes foram cultivados em placas de 96 poços e avaliados empregando ensaio de redução de sal de XTT (2,3-Bis- (2-Metoxi-4-Nitro-5-Sulfofenil) -2H-Tetrazolium-5-Carboxanilida), microscopia óptica de campo claro, microscopia confocal e microscopia eletrônica de varredura e de transmissão. Também foram avaliada características bioquímicas do biofilme, como quantificação de proteína e o índice de hidrofobicidade (IH). Assim, foi observado que o TNF não alterou o crescimento planctônico de Candida albicans. O TNF inibiu, contudo, de maneira dose-dependente, a formação de biofilme,por intermédio da modulação da transição de hifa-filamento. A pré-incubação com o anticorpo contra TNF, adalimumab, mas não com o receptor solúvel de TNF acoplado a imunoglobulina G, etanercept,causou um bloqueioda atividade do TNF. A pré-incubação com o carboidrato N, N'-Diacetilquitobiose, um dos principais componentes da parede celular da Candida albicans, que se liga ao domínio semelhante à lectina do TNF, bloqueou o efeito do TNF contra o crescimento de biofilme de Candida albicans.Em conclusão, esse é o primeiro trabalho que demosntra um efeito direto do TNFcontra a formação do biofilme de Candida albicans, ou seja, sem a participação de seus receptores clássicos ou células mamíferas. O bloqueio do efeito do TNF pela N, N'-diacetilquitobiose sugere que este efeito é mediado por meio de um domínio lectina da citocina.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:51:00Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-12-12Bitstream added on 2014-08-13T17:59:40Z : No. of bitstreams: 1 000776115.pdf: 505427 bytes, checksum: f0bd3aff54fc0a3a94372e461d90f65c (MD5) / Com o crescente aumento de cepas de Candida spp. resistentes a antifúngicos, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a Terapia Fotodinâmica (TFD), sobre fatores de virulência desse gênero. A produção das enzimas hidrolíticas aspartil-proteinase (SAP), lipase (LIP) e fosfolipase (PL) é considerado um importante fator de virulência de C. albicans. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 pelas leveduras. Foram utilizadas cepas clínicas de Candida albicans (n=9) que foram isoladas de pacientes portadores do vírus HIV e a cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção de enzimas hidrolíticas (SAP5, LIP9 e PLB2) nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se o ensaio de PCR em tempo real. Para a terapia fotodinâmica foi utilizado laser de gálio-alumínio-arseneto de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) como fonte de luz e o corante azul de metileno a 300 μM, como fotossensibilizador. Foram avaliados quatro grupos experimentais, para cada cepa: a) F+L+: sensibilização com azul de metileno e irradiação com laser; b) F+L-: somente tratamento com azul de metileno; c) F-L+: somente irradiação com laser e d) F-L-: grupo controle, sem sensibilização com azul de metileno e ausência de luz. Os resultados obtidos foram analisados pelo Software do equipamento de real-time. A TFD diminuiu a expressão dos genes em 60% das amostras para o gene SAP5 e em 50% das amostras diminuiu a expressão de LIP9 e PLB2. Pode-se concluir que a TFD teve um efeito sobre os genes SAP5, LIP9 e PLB2 de C. albicans, considerados fatores de virulência / With the increasing number of strains of Candida ssp. resistant to antifungal agents, becomes important and necessary the accomplishment of researches that evaluate the effects of new therapeutic methods, like Photodynamic therapy (PDT) in virulence factors of that gender, as the production of the hydrolytic enzymes aspartyl-proteinase (SAP), lipase (LIP) and phospholipase (PL). Thus, the objective of this study was to verify the effects of the photodynamic therapy on biofilms of Candida albicans, evaluating their effects on the expression of the genes SAP5, LIP9 and PLB2 for the yeast. Clinical strains of Candida albicans (n=9) isolated from patients bearers of the virus HIV and a pattern strain ATCC 18804 were used. The quantification of gene expression was related to the production of hydrolytic enzymes (SAP5, LIP9 and PLB2) in clinical samples and the reference strain using the PCR assay in real time. For photodynamic therapy were used laser-aluminum-gallium arsenide low power (red visible, 660 nm) as light source and the methylene blue to 300 μM, as a photosensitizer. We were assessed four experimental groups for each strain: a) F+L+: sensitization with methylene blue and laser irradiation; b) F+L-: only treatment with methylene blue; c) F-L+: only laser irradiation and d) F-L-: control group, without sensitization with methylene blue and light absence. The results were analyzed by the software of the real-time equipment. The PDT decreased gene expression in 60% of samples for gene SAP5 and 50% of the samples decreased expression of LIP9 and PLB2. It can be concluded that PDT had an effect on the genes SAP5, LIP9 and PLB2 of C. albicans

Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Aguinaldo Silva Garcez Segundo / Resumo: Com o crescente aumento de cepas de Candida spp. resistentes a antifúngicos, torna-se importante e necessário a realização de pesquisas que avaliem os efeitos de novos métodos terapêuticos, como a Terapia Fotodinâmica (TFD), sobre fatores de virulência desse gênero. A produção das enzimas hidrolíticas aspartil-proteinase (SAP), lipase (LIP) e fosfolipase (PL) é considerado um importante fator de virulência de C. albicans. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar os efeitos da terapia fotodinâmica sobre biofilmes de Candida albicans, avaliando seus efeitos sobre a expressão dos genes SAP5, LIP9 e PLB2 pelas leveduras. Foram utilizadas cepas clínicas de Candida albicans (n=9) que foram isoladas de pacientes portadores do vírus HIV e a cepa padrão ATCC 18804. A quantificação da expressão dos genes foi relacionada à produção de enzimas hidrolíticas (SAP5, LIP9 e PLB2) nas amostras clínicas e na cepa de referência utilizando-se o ensaio de PCR em tempo real. Para a terapia fotodinâmica foi utilizado laser de gálio-alumínio-arseneto de baixa potência (vermelho visível, 660 nm) como fonte de luz e o corante azul de metileno a 300 μM, como fotossensibilizador. Foram avaliados quatro grupos experimentais, para cada cepa: a) F+L+: sensibilização com azul de metileno e irradiação com laser; b) F+L-: somente tratamento com azul de metileno; c) F-L+: somente irradiação com laser e d) F-L-: grupo controle, sem sensibilização com azul de metileno e ausência de luz. Os resultados obtidos foram analisados pelo Software do equipamento de real-time. A TFD diminuiu a expressão dos genes em 60% das amostras para o gene SAP5 e em 50% das amostras diminuiu a expressão de LIP9 e PLB2. Pode-se concluir que a TFD teve um efeito sobre os genes SAP5, LIP9 e PLB2 de C. albicans, considerados fatores de virulência / Abstract: With the increasing number of strains of Candida ssp. resistant to antifungal agents, becomes important and necessary the accomplishment of researches that evaluate the effects of new therapeutic methods, like Photodynamic therapy (PDT) in virulence factors of that gender, as the production of the hydrolytic enzymes aspartyl-proteinase (SAP), lipase (LIP) and phospholipase (PL). Thus, the objective of this study was to verify the effects of the photodynamic therapy on biofilms of Candida albicans, evaluating their effects on the expression of the genes SAP5, LIP9 and PLB2 for the yeast. Clinical strains of Candida albicans (n=9) isolated from patients bearers of the virus HIV and a pattern strain ATCC 18804 were used. The quantification of gene expression was related to the production of hydrolytic enzymes (SAP5, LIP9 and PLB2) in clinical samples and the reference strain using the PCR assay in real time. For photodynamic therapy were used laser-aluminum-gallium arsenide low power (red visible, 660 nm) as light source and the methylene blue to 300 μM, as a photosensitizer. We were assessed four experimental groups for each strain: a) F+L+: sensitization with methylene blue and laser irradiation; b) F+L-: only treatment with methylene blue; c) F-L+: only laser irradiation and d) F-L-: control group, without sensitization with methylene blue and light absence. The results were analyzed by the software of the real-time equipment. The PDT decreased gene expression in 60% of samples for gene SAP5 and 50% of the samples decreased expression of LIP9 and PLB2. It can be concluded that PDT had an effect on the genes SAP5, LIP9 and PLB2 of C. albicans / Mestre

Orientador: Ana Claúdia Pavarina / Banca: Gilberto Ubida Leite Braga / Banca: Ewerton Garcia de Oliveira Mima / Resumo: Este estudo avaliou os efeitos da Terapia Fotodinâmica (PDT), mediada pelo Photodithazine® (PDZ) e luz LED, sobre Candida albicans resistente a fluconazol em um modelo de candidose oral induzida. Para isso, camundongos fêmeas de 6 semanas foram imunussuprimidos e inoculados com C. albicans (107 células/mL). Em seguida, aplicou-se 100 mg/L de PDZ (diluído em salina ou hidrogel) na cavidade bucal por 20 min e o dorso lingual foi iluminado (37,5 J/cm² dose de luz). Animais adicionais foram tratados somente com LED ou PDZ. O grupo controle positivo não recebeu nenhum tratamento e, adicionalmente, animais saudáveis receberam tratamento com PDT (n=5). Em seguida, foi feita a recuperação do micro-organismo da língua dos animais. O número de colônias viáveis foi quantificado e os valores de UFC/mL foram determinados. Os animais foram sacrificados e as línguas foram removidas cirurgicamente para análise histológica. Duas colônias de cada animal foram isoladas da placa de cultura para avaliação dos fatores de virulência: adesão e formação de biofilme em superfície abiótica, formas filamentares de crescimento e produção de exoenzimas. Os dados foram analizados por ANOVA (P < 0,05). Os resultados demonstraram que a PDT resultou em redução significativa de C. albicans resistente a fluconazol (1,91 e 1,96 log10) em relação ao grupo controle positivo. Somente a aplicação da luz ou PDZ não reduziu a viabilidade celular. A PDT não ocasionou efeitos adversos no tecido lingual dos animais e reduziu apenas a produção de fosfolipase. A PDT foi efetiva na inativação da C. albicans resistente a fluconazol, sem causar efeitos adversos no tecido lingual. / Abstract: This study evaluated the effects of Photodynamic Therapy (PDT), mediated by Photodithazine® (PDZ) and LED light, on fluconazole-resistant Candida albicans in a murine model of oral candidosis. For this, six-week-old female mice were immunosuppressed and inoculated with C. albicans (107 células/mL). Then, 100 mg/L of PDZ (diluted in saline or hydrogel) was applied on the oral cavity for 20 min and the dorsum of the tongue was illuminated (37.5 J/cm2 of fluence). The use of PDZ or light only was also investigated. Additionally, healthy animals received treatment with PDT. Positive control animals did not receive any treatment and negative control animals were not inoculated (n=5). After treatment the dorsum of the tongue was swabbed to recover C. albicans. The yeast colony counts were quantified and the number of CFU/mL was determined. The animals were killed and the tongues were surgically removed for histological analysis. Two yeast colony of each group were isolated from the culture plate for the evaluation of virulence factors: adhesion and biofilm formation in abiotic surface, filamentous forms of growth and production of exoenzymes. Data were analyzed by ANOVA (P < 0.05). PDT resulted in a significant reduction of fluconazole-resistant C. albicans (1.91 e 1.96 log10). The application of PDZ or LED only did not reduce the cell viability. PDT did not cause adverse effects in the local mucosa and it was able to reduce only phospholipase production. PDT was effective in the inactivation of fluconazole-resistant C. albicans without harming the tongue tissue. / Mestre

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su tesis en el Portal de Tesis Electrónicas / INTRODUCCION. La rehabilitación de pacientes desdentados es vital para recuperar las funciones alteradas por la pérdida de las piezas dentarias. Existen distintos métodos de rehabilitación, siendo el más común la prótesis removible debido principalmente a razones económicas. El uso de estos aparatos produce una serie de alteraciones en la cavidad bucal, entre estas se encuentra la estomatitis asociada a levaduras del género Candida. El microorganismo que se ha detectado con mayor frecuencia en este tipo de lesiones es Candida albicans, por lo que se considera fundamental para el desarrollo de esta patología. Se ha visto que para que esta infección se produzca se debe colonizar en un primer momento la prótesis removible, este sería el primer paso para la generar la infección de la mucosa oral. El tratamiento de este tipo de lesiones puede resultar difícil, particularmente en pacientes con condiciones predisponentes. Por esta razón se deben promover acciones preventivas que eviten que esta se produzca. Actualmente se ha descubierto que nanopartículas metálicas poseen un fuerte efecto antimicrobiano, por lo que se están utilizando actualmente en el área médica con el objetivo de prevenir infecciones. Los metales más utilizados con este fin son el cobre y la plata. En el presente estudio se utilizaron nanopartículas de cobre (CuNPs) para fabricar un nuevo material en base a acrílico para determinar la capacidad de estas CuNPs de inhibir el crecimiento de C. albicans, una levadura comensal de la microbiota oral, analizando el fenómeno en la superficie de los compósitos como en el medio de cultivo en el cual se sumergieron las muestras. METODOS. Se fabricaron muestras de acrílico cargadas con distintas concentraciones de CuNPs. La caracterización de estas se realizó mediante espectroscopía VIS-UV y espectrometría de energía dispersiva. Las muestras de acrílico se sumergieron en caldos de cultivo en los que se sembraron colonias de Candida albicans para evaluar si se detectaba alguna actividad antimicrobiana en relación al control. Se realizó un recuento de unidades formadoras de colonia (UFC) a partir de diluciones del sobrenadante y del eluido desde de la superficie de las muestras. RESULTADOS. No se apreciaron diferencias significativas al comparar el crecimiento de microorganismos en el medio de cultivo. Sin embargo a partir de los eluídos se pudo ver una disminución considerable en el número de UFC obtenidas desde las muestras cargadas con CuNPs y las muestras control. Este efecto fue directamente proporcional a la cantidad de CuNPs presentes en la resina. La actividad antimicrobiana se mantiene con el paso de los días. CONCLUSIONES. Las resinas acrílicas cargadas con CuNPs poseen una marcada actividad antimicrobiana frente a Candida albicans cuando esta entra en contacto con su superficie. Este efecto es directamente proporcional a la cantidad de CuNPs presentes en su composición y es sostenido en el tiempo. Las propiedades presentadas por este material sugieren que podría ser utilizado para la fabricación de prótesis removible con el objetivo de disminuir la incidencia de Candidiasis oral.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Diabetes mellitus tipo 2 (DM2) es una enfermedad crónica altamente prevalente que debe ser cuidadosamente controlada para evitar complicaciones asociadas a su descompensación, que se establece cuando los afectados presentan valores de Hemoglobina glicosilada (HbA1c) mayores a 7%. Este fenómeno se asocia con alteraciones salivales, como la acidificación del pH, lo que podría afectar el crecimiento y diferenciación de levaduras del género Candida con la consecuente aparición de manifestaciones clínicas asociadas (candidiasis). Es importante determinar número y especies de levaduras presentes en saliva de pacientes diabéticos para mejorar el enfoque terapéutico. Materiales y Métodos: Se recogieron muestras de saliva no estimulada de 52 pacientes con DM2 pertenecientes a la Asociación de diabéticos de Chile, a las que se les midió pH salival y se cultivaron en placas de Agar Sabouraud, realizando el recuento de colonias en UFC/ml. Posteriormente se identificaron las especies en forma presuntiva en CHROMAgar Candida confirmándose mediante PCR con partidores específicos para Candida sp. a 2 ó 4 representantes de cada especie presuntiva. En el caso de las especies no identificadas, se utilizó la galería API ID 32C ® para su determinación. Se utilizó el test de Spearman para correlacionar las variables HbA1c, pH salival y cantidad de UFC/ml y la prueba de Chi cuadrado para comparar valores entre pacientes compensados y no compensados. Se consideraron estadísticamente significativos valores de p < 0,05. Resultados: El 50 % de los pacientes estaban descompensados. El pH salival promedio fue de 7,54 (S=0,46). El 75% de los pacientes fueron portadores de levaduras, de cuyo total, el 66% fue Candida albicans, el 44% Candida no Candida albicans, el 0,05% Rhodotorula. El 0,35% no fue identificado. En pacientes con DM2 descompensada, se observó asociación inversa entre valores de HbA1c y pH i 7 salival. A mayor acidificación salival se observó mayor diversidad, cantidad de levaduras del género Candida y mayor recuento de Candida glabrata. Conclusión: La descompensación metabólica en pacientes con DM2 puede resultar en acidificación del pH salival afectando la cuantificación y la diversidad de levaduras presentes en boca lo que debiese ser considerado al momento de establecer un enfoque terapéutico. / Adscrito a Proyecto FIOUCH 13-002

Orientador: Jose Francisco Hofling / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-03T21:49:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boriollo_MarceloFabianoGomes_D.pdf: 1293850 bytes, checksum: fbd35ae34bfd68ba5bf4a633b5b46de7 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: O interesse em adquirir um melhor entendimento sobre a patogênese, epidemiologia, genética e evolução, das infecções causadas por C. albicans, tem conduzido ao desenvolvimento de inúmeras pesquisas, as quais empregaram sistemas fingerprinting, tais como Eletroforese de Enzima Multiloco (MLEE), Cariotipagem Eletroforética (EK), DNA Polimórfico Amplificado ao Acaso (RAPD) e Polimorfismo no Comprimento do Fragmento de Restrição (RFLP) com e sem hibridação. A efetividade destes sistemas tem sido examinada em diferentes níveis de discriminação. Uma estratégia de validação tem sido delineada, a qual compara dois ou mais métodos não relacionados. Para C. albicans, esta estratégia tem validado o emprego de MLEE, RAPD e Ca3 fingerprinting. Entretanto, seus diferentes padrões fingerprinting gerados poderiam ser registrados em programas de base de dados e submetidos a uma comparação com os parâmetros dos hospedeiros (i.e., idade, sexo, peso, características médicas, condições predisponentes, artigos protéticos, localização geográfica, fatores socioeconômicos, associação com outros indivíduos,...) e as características do patógeno (i.e., padrões de assimilação de açúcares, antigenicidade, secreção de proteinases, padrões de susceptibilidade as drogas, formação de hifa, switching fenotípico,...). Estes procedimentos permitiriam a comparação atual e retrospectiva de uma seleção de linhagens clínicas e epidemiologicamente importantes, as quais poderiam apresentar uma ou várias características do hospedeiro ou patógeno. Adicionalmente, a somatória deste crescente número de informações poderia contribuir ainda mais para o entendimento (i) da dinâmica dos organismos infecciosos em populações humanas, (ii) do complexo relacionamento entre comensalismo e infecção, (iii) dos mecanismos genéticos e evolucionários, ou ainda, (iv) identificar a origem de uma infecção e (v) monitorar a emergência de linhagens resistentes a diversos fatores / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Streptococcus sanguinis (S. sanguinis) es un colonizador primario de la biopelícula dental asociada a salud. Esta bacteria produce peróxido de hidrógeno (H2O2), un sub-producto del crecimiento y que es bacteriostático para otros streptococci orales, como Streptococcus mutans (S. mutans), quien, bajo condiciones determinadas de pH y disponibilidad de carbohidratos fermentables, se relaciona con el inicio y progresión de la caries dental. En este contexto, actualmente se propone una relación sinérgica entre S. mutans y Candida albicans (C. albicans), levadura comensal de la cavidad oral capaz de causar diversas patologías en humanos. El efecto de S. sanguinis, mediante la producción de (H²O²), en C. albicans no ha sido completamente estudiado. Según lo mencionado anteriormente, el objetivo de este estudio es determinar preliminarmente si existe modulación del crecimiento de C. albicans, en co-cultivo con S. sanguinis. Material y Métodos: Se utilizó S. sanguinis SK36, S. mutans ATCC 25175, C. albicans ATCC 90029 y un aislado clínico de C. albicans (P1-1) (proveniente de un niño con caries activas). Se realizaron ensayos de competencia en medio líquido y sólido de S. sanguinis o S. mutans con C. albicans (cepa de referencia o aislado clínico), se determinó pH y células viables para cada pareja en co-cultivo líquido. Inhibición del crecimiento en medio sólido fue evaluada según presencia de halo inhibitorio próximo a alguno de los microorganismos. Ensayos fueron incubados en microaerofilia a 37 ºC durante 48 h con agitación. Además, se realizó un test de concentración inhibitoria mínima (CIM) de (H²O²) para ambas cepas de C. albicans y también se determinó la cantidad de (H²O²) producida por S. sanguinis, de acuerdo a una curva estándar previamente diseñada. Los datos fueron analizados de manera descriptiva, comparando medianas entre distintos grupos y dentro de un mismo grupo. Resultados: En medio sólido, C. albicans produjo halo inhibitorio sobre S. sanguinis. En medio líquido, S. sanguinis y C. albicans (ATCC y P1-1) aumentaron su crecimiento en co-cultivo, respecto de su crecimiento aislado. Además, generaron siempre una alcalinización del medio, respecto al pH inicial. A 0,1 mM de (H²O²) la sobrevivencia de ambas cepas de C. albicans se redujo en un 70%, definiendo esta concentración como la CIM. La cantidad estimada de (H²O²) producida por S. sanguinis fue de 0,059 µM en todas las etapas de crecimiento. Conclusiones: De acuerdo a los resultados obtenidos y a las limitaciones del estudio, se puede concluir que S. sanguinis no inhibe el crecimiento de C. albicans. Asimismo, ambos podrían contribuir en mantener el pH del microambiente en niveles compatibles con salud oral. El co-cultivo de C. albicans con S. mutans podría beneficiar el crecimiento de la bacteria, en desmedro de la levadura. No obstante, cuando la levadura proviene de una biopelícula cariogénica, su relación con la bacteria podría tornarse más sinérgica. Entonces, el rol de C. albicans dentro del proceso de caries podría depender de la condición que presenta el microambiente, previo a la presencia de la levadura. El (H²O²) podría influir negativamente en el crecimiento de C. albicans, sin embargo, este efecto estaría supeditado a su concentración en el medio. / Adscrito a Proyecto U-inicia Difarp 40/13, VID, U. de Chile.