In an effort to develop an optical-acoustical understanding of ultrasound contrast agent microbubble dynamics in a micro-environment that resembles blood vessels, this thesis presents experimental work on optical trapping and acoustical probing of ultrasound contrast agent microbubbles confined in regenerated cellulose capillaries. First, we showed by acoustical means that the pressure threshold of an individual microbubble shell rupture increases significantly when confined in regenerated cellulose capillaries. We report that the shell rupture threshold in regenerated cellulose capillaries increased by at least 0.3 MPa from 0.8 MPa for unconfined microbubbles. Second, we achieved optical trapping and manipulation of ultrasound contrast agent microbubbles confined in capillaries using Hermite-Gaussian laser beams. / Graduation date: 2012

Thesis (M.S.)--Mississippi State University. Computational Engineering Program. / Title from title screen. Includes bibliographical references.

Access to abstract permanently restricted to Ball State community only. / School of Physical Education, Sport, and Exercise Science

Thesis (Ph. D.)--University of Virginia, 2008. / Includes bibliographical references. Also available via the Internet as viewed 10 July 2008.

Thesis (Ph. D.)--University of Sydney, 2008. / Submitted in fulfilment of the requirements for the degree of Doctor of Philosophy to the Department of Clinical Ophthalmology and Eye Health, Faculty of Medicine. Title from title screen (viewed Apr. 8, 2009) Includes bibliography. Also available in print form.

Os objetivos dos experimentos foram primeiro testar a presença da dimetilformamida (DF) nas soluções crioprotetoras e segundo avaliar a viabilidade in vitro pós aquecimento de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em microcapilares manufaturados industrialmente. O primeiro experimento testou a capacidade de vitrificação das diferentes soluções de vitrificação, compostas pelas combinações de etileno glicol (EG) ou 1-2 propanediol (PROH) com as diferentes porcentagens de DF. No segundo experimento se testou a toxicidade de 3 soluções de equilíbrio: ES1 (PBSm + 10% PROH + 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+ 10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA), através da exposição dos embriões durante 3 períodos de tempo (1, 3 e 10 min). O cultivo in vitro após a exposição às soluções de equilíbrio foi realizado em meio de KSOM durante 72 h. Os resultados de re-expansão foram semelhantes entre as três soluções, quando os embriões foram expostos por 1 ou 3 min. Por outro lado, a exposição à ES3 por 10 min, revelou uma maior taxa de sobrevivência dos embriões, em relação às outras soluções testadas. No terceiro experimento, após expor-se os embriões às soluções de equilíbrio, ES1, ES2 e ES3 por 1 min, a vitrificação foi realizada utilizando-se as seguintes soluções: VS1 (PBSm + 20% PROH + 20% DF + 0.5% PVA); VS2 (PBSm + 20% EG + 20% DF+ 0.5%PVA) and VS3 (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA). Imediatamente após a exposição por 30 s às soluções de vitrificação os embriões foram envasados em micropipetas de vidro (GMPs) e mergulhados em nitrogênio líquido superresfriado. As GMPs foram aquecidas no ar durante 10 s e após os embriões foram expostos durante 5 min ao PBSm + 0,25 M sacarose a 37 °C, finalmente transferidos para gotas de meio KSOM e cultivados in vitro durante 72 horas. As taxas de re-expansão dos embriões após o cultivo in vitro foram as seguintes: ES1/VS1 = 12% (13/108); ES2/VS2 = 38% (46/111) e ES3/VS3 = 84% (89/105). A eclosão dos embriões observada após o cultivo in vitro foi de: ES1/VS1 = 3% (3/108); ES2/VS2 = 17% (19/111) e ES3/VS3 = 70% (73/105). As taxas de sobrevivência revelaram que a presença da dimetilformamida na solução crioprotetora reduz a viabilidade embrionária e que a associação de EG + PROH é eficiente na manutenção da viabilidade embrionária após a vitrificação. O segundo artigo descreve os experimentos de vitrificação, utilizando-se para o envase dos embriões um microcapilar de vidro (GMC), produzido industrialmente (Brand®). Blastocistos murinos após a coleta foram divididos em três grupos: Controle, embriões cultivados in vitro em KSOM por 72 horas; Grupo 1, vitrificados envasados em micropipetas de vidro (GMPs) esticadas manualmente; Grupo 2, vitrificados envasados nas GMCs (Brand® - 5 µL). O procedimento de vitrificação foi o seguinte: primeiro os embriões foram expostos à solução de equilíbrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min e após transferidos para a solução de vitrificação (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por 30 s, envasados nas GMPS ou GMCs e imediatamente mergulhados em nitrogênio superresfriado. As taxas de sobrevivência dos embriões após o aquecimento e cultivo in vitro, não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. O envase dos embriões nas GMCs proporcionou sobreviênvia embrionária similar à observada nos embriões envasados nas GMPs. / The aims of these experiments were first, determine the effect of dimethylformamide (DF) into cryoprotectant solutions and sencondly, evaluated the in vitro viability of blastocyst Mus domesticus domesticus vitrified into glass microcapillaries (Brand®). The first article described the efficiency of DF in association with ethylene glycol (EG) and 1-2 propanediol (PROH) on in vitro viability of vitrified mouse blastocysts. Initially, the differents cryoprotectant solutions were tested on its capacities to induce virification. In the second experiment to determine the cryoprotectant toxicity the embryos were exposed during 1, 3 and 10 min to three different equilibrium solutions ES1 (PBSm + 10% PROH+ 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA). After 72 hours of in vitro culture in KSOM medium, re-expansion and hatching rates showed no differences among the tested cryoprotectant solutions for 1 or 3 min exposition interval time. However, for the 10 min exposition interval time, ES3 was more effective to promote embryo survival than the others tested cryoprotectant solutions. In the third experiment, blastocysts were vitrified after been exposed to one of the equilibrium solutions (ES1, ES2 or ES3) during 1 min. After that the embryos were transferred to one of the vitrification solutions (VS1 = PBSm + 20% PROH + 20% DF+ 0.5% PVA; VS2 = PBSm + 20% EG+ 20% DF+ 0.5% PVA and VS3 = PBSm + 20% EG+ 20% PROH+ 0.5% PVA) during 30 s, loaded into glass micro pipettes (GMPs) to be plungged into super-cooled liquid nitrogen. The GMPs were thawed in air during 10 s, transferred into drops of PBSm + 0,25 M sucrose at 37 °C for 5 min, and finally transferred to KSOM medium for in vitro culture. After 72 hours the expansion and hatched rates were evaluated. Results demonstrated a significantly difference between the vitrification solutions, showing better hatching rates the embryos vitrified into the ES3/EV3 solution. Therefore, these data shows that the cryoprotectants solutions containning dimethylformamide have deleterious effects on the developmental competence of vitrified mouse blastocysts, and the highest expansion and hatching rates were obtained when the cryoprotectant solution containning an EG and PROH association. The purpose of the second study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into commercially available glass micro-capillaries (GMC - Brand® 5µL). In the early morning at day 4 of the pregnancy, collected blastocysts were divided in three groups: Control: embryos were in vitro culture during 72 hours into KSOM medium; Group 1, blastocyst vitrified into glass micropipettes (GMP); Group 2, blastocyst vitrified into GMC. The embryos were first exposed to the equilibrium solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0.5% PVA) for 1 min and then transferred into the vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. Blastocysts were loaded into GMP or GMC and plunged into super-cooled liquid nitrogen. Embryo warming was carried out by plunging the narrowest end of the capillaries into droplets of 0.25 M sucrose mantained at 37°C. After 5 min, embryos in vitro culture into KSOM medium for 72 hours. Blastocyst survival rates did not show significant differences between the groups. The tested manufacturated GMC (Brand®) showed the same efficiency as the GMP to load mouse blastocysts for vitrification.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A hipertensão arterial sistêmica (HAS) caracteriza-se pelo aumento crônico da resistência vascular periférica, determinado essencialmente na microcirculação, que resulta de alterações vasculares funcionais e estruturais. Além disso, a redução da densidade arteriolar e capilar (rarefação da microcirculação) contribui para a elevação da pressão arterial na HAS. Nesse contexto, sabe-se que a hiperatividade do sistema nervoso simpático central está envolvida na fisiopatologia das alterações tanto funcionais quanto estruturais da HAS. No presente trabalho, investigamos os efeitos do tratamento crônico (28 dias) com anti-hipertensivos de ação central sobre a rarefação capilar funcional e/ou estrutural na pele, músculo esquelético e miocárdio de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) adultos, modelo clássico de hipertensão arterial primária. Os ratos Wistar Kyoto (WKY) foram utilizados como controles normotensos. Foram utilizadas doses equipotentes de clonidina (0,1 mg/kg/dia), rilmenidina (1 mg/kg/dia) e moxonidina (10 mg/kg/dia), com relação ao efeito anti-hipertensivo. Também foram estudados os efeitos dos tratamentos sobre a massa ventricular esquerda. Para avaliação da densidade capilar funcional utilizamos microscopia por epi-iluminação e fluorescência e para avaliação da densidade capilar estrutural técnicas de marcação histoquímica dos capilares. Os resultados mostraram que houve aumento do número de capilares espontaneamente perfundidos (densidade funcional) na pele e no músculo esquelético de SHR tratados com todos os fármacos, com relação ao grupo SHR não tratado. Além disso, foi observada reversão da rarefação capilar estrutural no músculo esquelético de SHR com todas as drogas utilizadas. Por outro lado, não houve reversão da rarefação capilar estrutural no ventrículo esquerdo em nenhum grupo experimental. Finalmente, a hipertrofia do ventrículo esquerdo foi parcialmente revertida em SHR tratados com rilmenidina. Em conclusão, nossos resultados demonstraram que, além da redução da pressão arterial, a utilização de agentes anti-hipertensivos de ação central resulta na reversão de alterações microcirculatórias de ratos espontaneamente hipertensos e o uso de rilmenidina favorece a regressão da hipertrofia cardíaca. Os resultados também sugerem que a inibição da hiperatividade simpática central induz efeitos benéficos na microcirculação na hipertensão arterial. / Essential hypertension (EH) is characterized by chronic increases in peripheral vascular resistance, mainly resulting from functional and structural alterations of the microcirculation. Moreover, a reduction of arteriolar and capillary density (microvascular rarefaction) is involved in the increase of arterial pressure in EH. In addition, central sympathetic overactivity is involved in the pathophysiology of functional and structural alterations of the cardiovascular system in EH. In the present work, we investigated the effects of a long-term treatment (28 days) with centrally-acting antihypertensive drugs on functional and/or structural capillary rarefaction in the skin, skeletal muscle and heart of adult spontaneously hypertensive rats (SHR), a classical experimental model of EH. We also investigated the effects of the treatments on left ventricular mass in SHR. Wistar Kyoto rats were used as normotensive controls. We used equipotent anihypertensive doses of clonidine (0.1 mg/kg/day), rilmenidine (1 mg/kg/day) and moxonidine (10 mg/kg/day). Functional capillary density was evaluated using epi-illuminated fluorescence video-microscopy while structural capillary density was studied using a histochemical tracer of capillaries. Our results showed that there was an increase in the number of spontaneously perfused capillaries (functional density) in the skin and skeletal muscle of SHR in all treatment groups, when compared to the non-treated SHR group. Moreover, there was a reversion of structural capillary rarefaction in the skeletal muscle with all drug treatments. On the other hand, there was no reversion of structural capillary rarefaction of the left ventricle in any experimental group. Finally, left ventricular hypertrophy was partially reversed in the group of SHR treated with rilmenidine. In conclusion, our results showed that besides arterial pressure reduction, long-term treatment with centrally-acting antihypertensive drugs induces a reversal of microcirculatory alterations in SHR and rilmenidine favors the regression of left ventricular hypertrophy. The results also suggest that the modulation of central sympathetic overactivity induces beneficial effects on the microcirculation in the hypertensive disease.

Os objetivos dos experimentos foram primeiro testar a presença da dimetilformamida (DF) nas soluções crioprotetoras e segundo avaliar a viabilidade in vitro pós aquecimento de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em microcapilares manufaturados industrialmente. O primeiro experimento testou a capacidade de vitrificação das diferentes soluções de vitrificação, compostas pelas combinações de etileno glicol (EG) ou 1-2 propanediol (PROH) com as diferentes porcentagens de DF. No segundo experimento se testou a toxicidade de 3 soluções de equilíbrio: ES1 (PBSm + 10% PROH + 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+ 10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA), através da exposição dos embriões durante 3 períodos de tempo (1, 3 e 10 min). O cultivo in vitro após a exposição às soluções de equilíbrio foi realizado em meio de KSOM durante 72 h. Os resultados de re-expansão foram semelhantes entre as três soluções, quando os embriões foram expostos por 1 ou 3 min. Por outro lado, a exposição à ES3 por 10 min, revelou uma maior taxa de sobrevivência dos embriões, em relação às outras soluções testadas. No terceiro experimento, após expor-se os embriões às soluções de equilíbrio, ES1, ES2 e ES3 por 1 min, a vitrificação foi realizada utilizando-se as seguintes soluções: VS1 (PBSm + 20% PROH + 20% DF + 0.5% PVA); VS2 (PBSm + 20% EG + 20% DF+ 0.5%PVA) and VS3 (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA). Imediatamente após a exposição por 30 s às soluções de vitrificação os embriões foram envasados em micropipetas de vidro (GMPs) e mergulhados em nitrogênio líquido superresfriado. As GMPs foram aquecidas no ar durante 10 s e após os embriões foram expostos durante 5 min ao PBSm + 0,25 M sacarose a 37 °C, finalmente transferidos para gotas de meio KSOM e cultivados in vitro durante 72 horas. As taxas de re-expansão dos embriões após o cultivo in vitro foram as seguintes: ES1/VS1 = 12% (13/108); ES2/VS2 = 38% (46/111) e ES3/VS3 = 84% (89/105). A eclosão dos embriões observada após o cultivo in vitro foi de: ES1/VS1 = 3% (3/108); ES2/VS2 = 17% (19/111) e ES3/VS3 = 70% (73/105). As taxas de sobrevivência revelaram que a presença da dimetilformamida na solução crioprotetora reduz a viabilidade embrionária e que a associação de EG + PROH é eficiente na manutenção da viabilidade embrionária após a vitrificação. O segundo artigo descreve os experimentos de vitrificação, utilizando-se para o envase dos embriões um microcapilar de vidro (GMC), produzido industrialmente (Brand®). Blastocistos murinos após a coleta foram divididos em três grupos: Controle, embriões cultivados in vitro em KSOM por 72 horas; Grupo 1, vitrificados envasados em micropipetas de vidro (GMPs) esticadas manualmente; Grupo 2, vitrificados envasados nas GMCs (Brand® - 5 µL). O procedimento de vitrificação foi o seguinte: primeiro os embriões foram expostos à solução de equilíbrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min e após transferidos para a solução de vitrificação (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por 30 s, envasados nas GMPS ou GMCs e imediatamente mergulhados em nitrogênio superresfriado. As taxas de sobrevivência dos embriões após o aquecimento e cultivo in vitro, não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. O envase dos embriões nas GMCs proporcionou sobreviênvia embrionária similar à observada nos embriões envasados nas GMPs. / The aims of these experiments were first, determine the effect of dimethylformamide (DF) into cryoprotectant solutions and sencondly, evaluated the in vitro viability of blastocyst Mus domesticus domesticus vitrified into glass microcapillaries (Brand®). The first article described the efficiency of DF in association with ethylene glycol (EG) and 1-2 propanediol (PROH) on in vitro viability of vitrified mouse blastocysts. Initially, the differents cryoprotectant solutions were tested on its capacities to induce virification. In the second experiment to determine the cryoprotectant toxicity the embryos were exposed during 1, 3 and 10 min to three different equilibrium solutions ES1 (PBSm + 10% PROH+ 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA). After 72 hours of in vitro culture in KSOM medium, re-expansion and hatching rates showed no differences among the tested cryoprotectant solutions for 1 or 3 min exposition interval time. However, for the 10 min exposition interval time, ES3 was more effective to promote embryo survival than the others tested cryoprotectant solutions. In the third experiment, blastocysts were vitrified after been exposed to one of the equilibrium solutions (ES1, ES2 or ES3) during 1 min. After that the embryos were transferred to one of the vitrification solutions (VS1 = PBSm + 20% PROH + 20% DF+ 0.5% PVA; VS2 = PBSm + 20% EG+ 20% DF+ 0.5% PVA and VS3 = PBSm + 20% EG+ 20% PROH+ 0.5% PVA) during 30 s, loaded into glass micro pipettes (GMPs) to be plungged into super-cooled liquid nitrogen. The GMPs were thawed in air during 10 s, transferred into drops of PBSm + 0,25 M sucrose at 37 °C for 5 min, and finally transferred to KSOM medium for in vitro culture. After 72 hours the expansion and hatched rates were evaluated. Results demonstrated a significantly difference between the vitrification solutions, showing better hatching rates the embryos vitrified into the ES3/EV3 solution. Therefore, these data shows that the cryoprotectants solutions containning dimethylformamide have deleterious effects on the developmental competence of vitrified mouse blastocysts, and the highest expansion and hatching rates were obtained when the cryoprotectant solution containning an EG and PROH association. The purpose of the second study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into commercially available glass micro-capillaries (GMC - Brand® 5µL). In the early morning at day 4 of the pregnancy, collected blastocysts were divided in three groups: Control: embryos were in vitro culture during 72 hours into KSOM medium; Group 1, blastocyst vitrified into glass micropipettes (GMP); Group 2, blastocyst vitrified into GMC. The embryos were first exposed to the equilibrium solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0.5% PVA) for 1 min and then transferred into the vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. Blastocysts were loaded into GMP or GMC and plunged into super-cooled liquid nitrogen. Embryo warming was carried out by plunging the narrowest end of the capillaries into droplets of 0.25 M sucrose mantained at 37°C. After 5 min, embryos in vitro culture into KSOM medium for 72 hours. Blastocyst survival rates did not show significant differences between the groups. The tested manufacturated GMC (Brand®) showed the same efficiency as the GMP to load mouse blastocysts for vitrification.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A hipertensão arterial sistêmica (HAS) caracteriza-se pelo aumento crônico da resistência vascular periférica, determinado essencialmente na microcirculação, que resulta de alterações vasculares funcionais e estruturais. Além disso, a redução da densidade arteriolar e capilar (rarefação da microcirculação) contribui para a elevação da pressão arterial na HAS. Nesse contexto, sabe-se que a hiperatividade do sistema nervoso simpático central está envolvida na fisiopatologia das alterações tanto funcionais quanto estruturais da HAS. No presente trabalho, investigamos os efeitos do tratamento crônico (28 dias) com anti-hipertensivos de ação central sobre a rarefação capilar funcional e/ou estrutural na pele, músculo esquelético e miocárdio de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) adultos, modelo clássico de hipertensão arterial primária. Os ratos Wistar Kyoto (WKY) foram utilizados como controles normotensos. Foram utilizadas doses equipotentes de clonidina (0,1 mg/kg/dia), rilmenidina (1 mg/kg/dia) e moxonidina (10 mg/kg/dia), com relação ao efeito anti-hipertensivo. Também foram estudados os efeitos dos tratamentos sobre a massa ventricular esquerda. Para avaliação da densidade capilar funcional utilizamos microscopia por epi-iluminação e fluorescência e para avaliação da densidade capilar estrutural técnicas de marcação histoquímica dos capilares. Os resultados mostraram que houve aumento do número de capilares espontaneamente perfundidos (densidade funcional) na pele e no músculo esquelético de SHR tratados com todos os fármacos, com relação ao grupo SHR não tratado. Além disso, foi observada reversão da rarefação capilar estrutural no músculo esquelético de SHR com todas as drogas utilizadas. Por outro lado, não houve reversão da rarefação capilar estrutural no ventrículo esquerdo em nenhum grupo experimental. Finalmente, a hipertrofia do ventrículo esquerdo foi parcialmente revertida em SHR tratados com rilmenidina. Em conclusão, nossos resultados demonstraram que, além da redução da pressão arterial, a utilização de agentes anti-hipertensivos de ação central resulta na reversão de alterações microcirculatórias de ratos espontaneamente hipertensos e o uso de rilmenidina favorece a regressão da hipertrofia cardíaca. Os resultados também sugerem que a inibição da hiperatividade simpática central induz efeitos benéficos na microcirculação na hipertensão arterial. / Essential hypertension (EH) is characterized by chronic increases in peripheral vascular resistance, mainly resulting from functional and structural alterations of the microcirculation. Moreover, a reduction of arteriolar and capillary density (microvascular rarefaction) is involved in the increase of arterial pressure in EH. In addition, central sympathetic overactivity is involved in the pathophysiology of functional and structural alterations of the cardiovascular system in EH. In the present work, we investigated the effects of a long-term treatment (28 days) with centrally-acting antihypertensive drugs on functional and/or structural capillary rarefaction in the skin, skeletal muscle and heart of adult spontaneously hypertensive rats (SHR), a classical experimental model of EH. We also investigated the effects of the treatments on left ventricular mass in SHR. Wistar Kyoto rats were used as normotensive controls. We used equipotent anihypertensive doses of clonidine (0.1 mg/kg/day), rilmenidine (1 mg/kg/day) and moxonidine (10 mg/kg/day). Functional capillary density was evaluated using epi-illuminated fluorescence video-microscopy while structural capillary density was studied using a histochemical tracer of capillaries. Our results showed that there was an increase in the number of spontaneously perfused capillaries (functional density) in the skin and skeletal muscle of SHR in all treatment groups, when compared to the non-treated SHR group. Moreover, there was a reversion of structural capillary rarefaction in the skeletal muscle with all drug treatments. On the other hand, there was no reversion of structural capillary rarefaction of the left ventricle in any experimental group. Finally, left ventricular hypertrophy was partially reversed in the group of SHR treated with rilmenidine. In conclusion, our results showed that besides arterial pressure reduction, long-term treatment with centrally-acting antihypertensive drugs induces a reversal of microcirculatory alterations in SHR and rilmenidine favors the regression of left ventricular hypertrophy. The results also suggest that the modulation of central sympathetic overactivity induces beneficial effects on the microcirculation in the hypertensive disease.

Os objetivos dos experimentos foram primeiro testar a presença da dimetilformamida (DF) nas soluções crioprotetoras e segundo avaliar a viabilidade in vitro pós aquecimento de blastocistos Mus domesticus domesticus vitrificados em microcapilares manufaturados industrialmente. O primeiro experimento testou a capacidade de vitrificação das diferentes soluções de vitrificação, compostas pelas combinações de etileno glicol (EG) ou 1-2 propanediol (PROH) com as diferentes porcentagens de DF. No segundo experimento se testou a toxicidade de 3 soluções de equilíbrio: ES1 (PBSm + 10% PROH + 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+ 10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA), através da exposição dos embriões durante 3 períodos de tempo (1, 3 e 10 min). O cultivo in vitro após a exposição às soluções de equilíbrio foi realizado em meio de KSOM durante 72 h. Os resultados de re-expansão foram semelhantes entre as três soluções, quando os embriões foram expostos por 1 ou 3 min. Por outro lado, a exposição à ES3 por 10 min, revelou uma maior taxa de sobrevivência dos embriões, em relação às outras soluções testadas. No terceiro experimento, após expor-se os embriões às soluções de equilíbrio, ES1, ES2 e ES3 por 1 min, a vitrificação foi realizada utilizando-se as seguintes soluções: VS1 (PBSm + 20% PROH + 20% DF + 0.5% PVA); VS2 (PBSm + 20% EG + 20% DF+ 0.5%PVA) and VS3 (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA). Imediatamente após a exposição por 30 s às soluções de vitrificação os embriões foram envasados em micropipetas de vidro (GMPs) e mergulhados em nitrogênio líquido superresfriado. As GMPs foram aquecidas no ar durante 10 s e após os embriões foram expostos durante 5 min ao PBSm + 0,25 M sacarose a 37 °C, finalmente transferidos para gotas de meio KSOM e cultivados in vitro durante 72 horas. As taxas de re-expansão dos embriões após o cultivo in vitro foram as seguintes: ES1/VS1 = 12% (13/108); ES2/VS2 = 38% (46/111) e ES3/VS3 = 84% (89/105). A eclosão dos embriões observada após o cultivo in vitro foi de: ES1/VS1 = 3% (3/108); ES2/VS2 = 17% (19/111) e ES3/VS3 = 70% (73/105). As taxas de sobrevivência revelaram que a presença da dimetilformamida na solução crioprotetora reduz a viabilidade embrionária e que a associação de EG + PROH é eficiente na manutenção da viabilidade embrionária após a vitrificação. O segundo artigo descreve os experimentos de vitrificação, utilizando-se para o envase dos embriões um microcapilar de vidro (GMC), produzido industrialmente (Brand®). Blastocistos murinos após a coleta foram divididos em três grupos: Controle, embriões cultivados in vitro em KSOM por 72 horas; Grupo 1, vitrificados envasados em micropipetas de vidro (GMPs) esticadas manualmente; Grupo 2, vitrificados envasados nas GMCs (Brand® - 5 µL). O procedimento de vitrificação foi o seguinte: primeiro os embriões foram expostos à solução de equilíbrio (PBSm + 10% EG + 10% PROH and 0.5% PVA) por 1 min e após transferidos para a solução de vitrificação (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) por 30 s, envasados nas GMPS ou GMCs e imediatamente mergulhados em nitrogênio superresfriado. As taxas de sobrevivência dos embriões após o aquecimento e cultivo in vitro, não apresentaram diferenças significativas entre os grupos. O envase dos embriões nas GMCs proporcionou sobreviênvia embrionária similar à observada nos embriões envasados nas GMPs. / The aims of these experiments were first, determine the effect of dimethylformamide (DF) into cryoprotectant solutions and sencondly, evaluated the in vitro viability of blastocyst Mus domesticus domesticus vitrified into glass microcapillaries (Brand®). The first article described the efficiency of DF in association with ethylene glycol (EG) and 1-2 propanediol (PROH) on in vitro viability of vitrified mouse blastocysts. Initially, the differents cryoprotectant solutions were tested on its capacities to induce virification. In the second experiment to determine the cryoprotectant toxicity the embryos were exposed during 1, 3 and 10 min to three different equilibrium solutions ES1 (PBSm + 10% PROH+ 10% DF + 0.5% PVA), ES2 (PBSm+10% EG+ 10% DF + 0.5% PVA), ES3 (PBSm + 10% PROH + 10% EG + 0.5% PVA). After 72 hours of in vitro culture in KSOM medium, re-expansion and hatching rates showed no differences among the tested cryoprotectant solutions for 1 or 3 min exposition interval time. However, for the 10 min exposition interval time, ES3 was more effective to promote embryo survival than the others tested cryoprotectant solutions. In the third experiment, blastocysts were vitrified after been exposed to one of the equilibrium solutions (ES1, ES2 or ES3) during 1 min. After that the embryos were transferred to one of the vitrification solutions (VS1 = PBSm + 20% PROH + 20% DF+ 0.5% PVA; VS2 = PBSm + 20% EG+ 20% DF+ 0.5% PVA and VS3 = PBSm + 20% EG+ 20% PROH+ 0.5% PVA) during 30 s, loaded into glass micro pipettes (GMPs) to be plungged into super-cooled liquid nitrogen. The GMPs were thawed in air during 10 s, transferred into drops of PBSm + 0,25 M sucrose at 37 °C for 5 min, and finally transferred to KSOM medium for in vitro culture. After 72 hours the expansion and hatched rates were evaluated. Results demonstrated a significantly difference between the vitrification solutions, showing better hatching rates the embryos vitrified into the ES3/EV3 solution. Therefore, these data shows that the cryoprotectants solutions containning dimethylformamide have deleterious effects on the developmental competence of vitrified mouse blastocysts, and the highest expansion and hatching rates were obtained when the cryoprotectant solution containning an EG and PROH association. The purpose of the second study was to determine the in vitro expansion and hatching rates of vitrified mouse blastocysts loaded into commercially available glass micro-capillaries (GMC - Brand® 5µL). In the early morning at day 4 of the pregnancy, collected blastocysts were divided in three groups: Control: embryos were in vitro culture during 72 hours into KSOM medium; Group 1, blastocyst vitrified into glass micropipettes (GMP); Group 2, blastocyst vitrified into GMC. The embryos were first exposed to the equilibrium solution (PBSm + 10% EG + 10% PROH + 0.5% PVA) for 1 min and then transferred into the vitrification solution (PBSm + 20% EG + 20% PROH + 0.5% PVA) for 30 sec. Blastocysts were loaded into GMP or GMC and plunged into super-cooled liquid nitrogen. Embryo warming was carried out by plunging the narrowest end of the capillaries into droplets of 0.25 M sucrose mantained at 37°C. After 5 min, embryos in vitro culture into KSOM medium for 72 hours. Blastocyst survival rates did not show significant differences between the groups. The tested manufacturated GMC (Brand®) showed the same efficiency as the GMP to load mouse blastocysts for vitrification.