O emprego da cultura de tecidos, órgãos ou plantas In vitro tem sido largamente utilizado como técnica de micropropagação com finalidade de estudar os vários fatores envolvidos no crescimento e desenvolvimento vegetal. O objetivo do presente trabalho foi estudar as condições fisiológicas relacionadas a diferentes respostas organogenéticas de natureza vegetativa e reprodutiva em plantas de Dendrobium Second Love (Orchidaceae) cultivadas in vitro. Foi possível analisar através da técnica de micropropagação de incubação de tais plantas no escuro as variações no potencial organogenético de seus segmentos caulinares apical e subapical em formar explantes para a regeneração de novas plantas in vitro e as decorrente variações morfológicas das plantas assim regeneradas. A referida técnica foi também empregada com a incubação dessas plantas no claro para gerar material suficiente ao estudo do envolvimento do TDZ, Z, ZR, iP, iPR na indução de seu brotamento e de sua floração. Foi possível assim a análise das variações tanto dos teores endógenos de açúcares solúveis quanto de etileno decorrentes da aplicação dessas citocininas, bem como aferir a influência da duração do tratamento e da idade da planta. Os resultados mostraram que a idade de incubação das plantas no escuro e no claro é importante não apenas para gerar novas plantas como também para induzir o seu brotamento e o florescimento. Sucessivas etapas de padronização evidenciaram que a causa principal da variação no potencial organogenético dos explantes utilizados derivou da região de origem da planta estiolada, bem como da idade do próprio tecido, sendo que um menor tempo de incubação no escuro levou a um aumento na porcentagem de regeneração das plantas, da mesma forma que um menor período de escuro tornou as plantas mais homogêneas em relação ao tamanho. Dentre as condições estudadas, todas as citocininas induziram brotamento, porém em relação ao florescimento apenas o TDZ mostrou-se eficaz. Pôde-se ainda verificar que um período de exposição de 10 dias no TDZ induziu as plantas à floração. Os níveis de açúcares solúveis dos brotos submetidos aos tratamentos com Z, ZR, iP, iPR e TDZ mostrou-se mais elevado naqueles tratados com TDZ sugerindo uma maior utilização de açúcares nas plantas induzidas a floração. Em relação ao acúmulo de etileno dentro dos frascos verificou-se, por fim, que as plantas tratadas com TDZ induziram maior acúmulo de etileno em relação às plantas controle. / In vitro tissues, organs or plants culture has been widely used as a micropropagation technique aiming to study a number of factors involved in vegetable growth and development. In the present study, we evaluated the physiological conditions related to different vegetative or reproductive organogenetic responses in in vitro Dendrobium Second Love (Orchidaceae) plants. We evaluated the organogenetic potential of the shoot segments in inducing explants for the regeneration of new in vitro plants and their morphological changes. This technique was also micropropagated with light incubation of the plants in order to provide enough material for the study of the participation of TDZ, Z, ZR, iP, iPR in the induction of their budding and its flowering. Thus, it was possible to analyze the endogenous levels of soluble sugars, ethylene concentration, following the application of these cytokinins, as well as evaluated the effect of treatment duration and the plant age. The results showed that the plant incubation age is not only important to generate new plants, but also to induce its budding and flowering, irrespective of the dark/light condition. Successives tests showed that the main reason for changes in the organogenetic potential of the explants was due to the etiolated plant region, as well the tissue age. In this sense, lower dark incubation length led to an increase in the percentage of plants regeneration, and to more homogeneous plant sizes. Among the studied conditions, all cytokinins induced budding, however concerning flowering only TDZ was effective. It was also verified that a 10-day exposure to TDZ can induce plants to flowering. The level of soluble sugars in the buds submitted to the treatment with Z, ZR, iP, iPR and TDZ was higher in the ones treated with TDZ, suggesting a higher sugar use in the plants induced flowering. Regarding the ethylene accumulation in the flasks, it was observed that plants treated with TDZ induced higher ethylene accumulation when compared to control plants.

O emprego da cultura de tecidos, órgãos ou plantas In vitro tem sido largamente utilizado como técnica de micropropagação com finalidade de estudar os vários fatores envolvidos no crescimento e desenvolvimento vegetal. O objetivo do presente trabalho foi estudar as condições fisiológicas relacionadas a diferentes respostas organogenéticas de natureza vegetativa e reprodutiva em plantas de Dendrobium Second Love (Orchidaceae) cultivadas in vitro. Foi possível analisar através da técnica de micropropagação de incubação de tais plantas no escuro as variações no potencial organogenético de seus segmentos caulinares apical e subapical em formar explantes para a regeneração de novas plantas in vitro e as decorrente variações morfológicas das plantas assim regeneradas. A referida técnica foi também empregada com a incubação dessas plantas no claro para gerar material suficiente ao estudo do envolvimento do TDZ, Z, ZR, iP, iPR na indução de seu brotamento e de sua floração. Foi possível assim a análise das variações tanto dos teores endógenos de açúcares solúveis quanto de etileno decorrentes da aplicação dessas citocininas, bem como aferir a influência da duração do tratamento e da idade da planta. Os resultados mostraram que a idade de incubação das plantas no escuro e no claro é importante não apenas para gerar novas plantas como também para induzir o seu brotamento e o florescimento. Sucessivas etapas de padronização evidenciaram que a causa principal da variação no potencial organogenético dos explantes utilizados derivou da região de origem da planta estiolada, bem como da idade do próprio tecido, sendo que um menor tempo de incubação no escuro levou a um aumento na porcentagem de regeneração das plantas, da mesma forma que um menor período de escuro tornou as plantas mais homogêneas em relação ao tamanho. Dentre as condições estudadas, todas as citocininas induziram brotamento, porém em relação ao florescimento apenas o TDZ mostrou-se eficaz. Pôde-se ainda verificar que um período de exposição de 10 dias no TDZ induziu as plantas à floração. Os níveis de açúcares solúveis dos brotos submetidos aos tratamentos com Z, ZR, iP, iPR e TDZ mostrou-se mais elevado naqueles tratados com TDZ sugerindo uma maior utilização de açúcares nas plantas induzidas a floração. Em relação ao acúmulo de etileno dentro dos frascos verificou-se, por fim, que as plantas tratadas com TDZ induziram maior acúmulo de etileno em relação às plantas controle. / In vitro tissues, organs or plants culture has been widely used as a micropropagation technique aiming to study a number of factors involved in vegetable growth and development. In the present study, we evaluated the physiological conditions related to different vegetative or reproductive organogenetic responses in in vitro Dendrobium Second Love (Orchidaceae) plants. We evaluated the organogenetic potential of the shoot segments in inducing explants for the regeneration of new in vitro plants and their morphological changes. This technique was also micropropagated with light incubation of the plants in order to provide enough material for the study of the participation of TDZ, Z, ZR, iP, iPR in the induction of their budding and its flowering. Thus, it was possible to analyze the endogenous levels of soluble sugars, ethylene concentration, following the application of these cytokinins, as well as evaluated the effect of treatment duration and the plant age. The results showed that the plant incubation age is not only important to generate new plants, but also to induce its budding and flowering, irrespective of the dark/light condition. Successives tests showed that the main reason for changes in the organogenetic potential of the explants was due to the etiolated plant region, as well the tissue age. In this sense, lower dark incubation length led to an increase in the percentage of plants regeneration, and to more homogeneous plant sizes. Among the studied conditions, all cytokinins induced budding, however concerning flowering only TDZ was effective. It was also verified that a 10-day exposure to TDZ can induce plants to flowering. The level of soluble sugars in the buds submitted to the treatment with Z, ZR, iP, iPR and TDZ was higher in the ones treated with TDZ, suggesting a higher sugar use in the plants induced flowering. Regarding the ethylene accumulation in the flasks, it was observed that plants treated with TDZ induced higher ethylene accumulation when compared to control plants.

O gênero Passiflora é um excelente modelo para estudos de transição de fase, pois há diferenças morfológicas evidentes entre as plantas nas fases juvenil, adulta vegetativa e adulta reprodutiva. Há relatos de que quando se introduzem ápices de plantas adultas de Passiflora edulis, quer estejam na fase vegetativa ou reprodutiva, em condições de cultivo in vitro, observa-se a regressão à fase juvenil. O objetivo geral deste trabalho foi caracterizar as modificações morfológicas envolvidas na reversão à juvenilidade de ápices caulinares adultos de P. edulis quando cultivados em meio de cultura sem adição de reguladores de crescimento além de avaliar o efeito de reguladores de crescimento no intuito de evitar a reversão à juvenilidade no cultivo in vitro de P. edulis. O trabalho foi desenvolvido a partir da combinação da técnica da micropropagação in vitro e microscopia eletrônica de varredura, sendo dividido em três experimentos: o cultivo in vitro de ápices caulinares em meio MSM sem reguladores de crescimento e análise de amostras em microscópio eletrônico de varredura, cultivo in vitro de ápices caulinares em meio MSM com reguladores de crescimento e cultivo in vitro de ápices caulinares em meio MSM adicionados com BAP na concentração de 10?M com análises de amostras em microscópio estereoscópico. Através de micrografias eletrônicas e imagens estereoscópicas, foi possível caracterizar as fases do desenvolvimento de P. edulis, demonstrando os caracteres morfológicos assim como a manutenção das estruturas cultivadas in vitro. Não foi possível observar o rejuvenescimento in vitro quando ápices caulinares foram cultivados em meio ½ MS ou MSM sem adição de reguladores de crescimento. O rejuvenescimento de ápices caulinares adultos de P. edulis foi obtido a partir do cultivo em meio MSM com adição de 10?M de BAP. Entretanto, o rejuvenescimento foi parcial, pois nem todas as características foram revertidas. A formação de folhas lanceoladas in vitro e o desenvolvimento de brotos adventícios in vitro caracterizaram a reversão à juvenilidade em P. edulis. O meio MSM suplementado com 10 ?M de BAP foi favorável ao desenvolvimento de gemas axilares, além de facilitar a indução do rejuvenescimento dos ápices caulinares. Logo, a reversão à juvenilidade foi alcançada sob as condições in vitro adotadas / The genus Passiflora is an excellent model for phase transition studies because there are obvious morphological differences between plants in the juvenile, adult vegetative and adult reproductive phases. It has been reported that when introducing shoot tips of adult plants of Passiflora edulis, whether in the vegetative or reproductive phase, under in vitro culture conditions, regression to the juvenile phase is observed. The general objective of this work was to characterize the morphological changes involved in the reversion to juvenility of adult shoot tips of P. edulis when grown in culture medium without addition of growth regulators in addition to evaluating the effect of growth regulators in order to avoid reversion to juvenility in the in vitro cultivation of P. edulis. The work was developed from the combination of in vitro micropropagation and scanning electron microscopy, and was divided in three experiments: in vitro culture of shoot tips in MSM medium without growth regulators and analysis of samples in scanning electron microscope; in vitro culture of shoot tips in MSM medium with growth regulators and in vitro culture of shoot tips in MSM medium added with BAP at the concentration of 10?M and analysis of samples under a stereoscopic microscope. Through electronic micrographs and stereoscopic images, it was possible characterize the phases of the development of P. edulis, demonstrating the morphological traits as well as the maintenance of the structures cultivated in vitro. In vitro rejuvenation could not be observed when shoot tips were grown in ½ MS or MSM medium without addition of growth regulators. The rejuvenation of P. edulis adult shoot tips was obtained from the cultivation in MSM medium with the addition of 10?M BA. However, the rejuvenation was partial, since not all the characteristics were reversed. The formation of in vitro lanceolated leaves and the development of in vitro adventitious shoots characterized the reversion to juvenility in P. edulis. The MSM medium supplemented with 10?M BA was favorable to the development of axillary buds, in addition to facilitating the induction of the rejuvenation of the shoot tips. Therefore, the reversion to juvenility was achieved under the in vitro conditions adopted

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:37:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-09-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Citronella of Java (Cymbopogon winterianus Jowitt) is an aromatical plant with large usage in the manufacture of mosquito repellents because it contains essential oil rich in citronelal. The application of tissue culture on a large scale in medicinal plants production has increased significantly, since the conventional methods of propagation limit the potential use of some plants. Due that, one citronella of Java protocol was established with the objective of getting an alternative technique for the propagation of that culture. Four experiments ware conducted to evaluate the asepsis time, the explant type, the effect of vegetal regulators on the "in vitro" propagation of citronella of Java, as well as the micro-propagated seedling acclimatization. The gotten results had disclosed that the use of sodium hypochlorite (0.5%) during 30 minutes promoted a satisfactory asepsis index. The shoot tips explants type showed greater potential for the ?in vitro? development. It was verified that the use of benzilaminapurine (BAP) cytokynin is indispensable to succeed in the citronella of Java "in vitro" establishment, being able to be used in the concentration of 2.0 mg L-1. However, the use of indolbutyric acid (IBA) in the different tested concentrations did not present any results that justify its use, neither in the citronella of Java multiplication nor in the root establishment. The root establishment was evidenced when micro-propagated seedlings had been inoculated only in MS culture medium. It was verified that the check (without vegetal regulator) had a direct organogenesis, while such event was not verified in the other treatments. In the micro-propagated seedling acclimatization it was verified that the use of the floating method, it was essential for the seedlings survival, resulting in high survival index / A citronela de Java (Cymbopogon winterianus Jowitt) é uma planta aromática muito utilizada na fabricação de repelentes contra mosquitos por conter óleo essencial rico em citronelal. A utilização da cultura de tecidos, como forma de propagação de plantas medicinais tem aumentado significativamente, pois os métodos convencionais de propagação limitam o potencial de uso de algumas plantas. Sendo assim, um protocolo regenerativo para a citronela de Java foi estabelecido com o objetivo de se obter uma técnica alternativa para a propagação dessa cultura. Para isso foram realizados quatro experimentos envolvendo a avaliação do tempo de assepsia, do tipo de explante, do efeito de reguladores vegetais na propagação in vitro da citronela de Java, bem como a aclimatação das plântulas micropropagadas. Os resultados obtidos revelaram que a utilização do hipoclorito de sódio (0,5%) por 30 minutos promoveu índice satisfatório de assepsia. Os explantes com maior potencial ao desenvolvimento in vitro foram os ápices caulinares. Verificou-se que o emprego da citocinina benzilaminopurina (BAP) é indispensável para o sucesso do estabelecimento in vitro da citronela de Java, podendo ser utilizado na concentração de 2,0 mg L-1. No entanto, a utilização do ácido indolbutírico (IBA) nas diferentes concentrações testadas não apresentou resultados que justifique seu emprego, tanto na multiplicação quanto no enraizamento das plântulas de citronela de Java. O enraizamento foi evidenciado quando as plântulas micropropagadas foram inoculadas somente em meio de cultura MS. Foi constatado que na testemunha (sem regulador vegetal) houve uma organogênese direta, não sendo verificada nos demais tratamentos. Na aclimatação das plântulas micropropagadas verificou-se que a utilização do método floating , foi fundamental para a sobrevivência das plântulas, tendo sido observado alto índice de sobrevivência

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The potato (Solanum tuberosum L.), Solanaceae, ranked fourth in quantity food production, exceeded only by wheat, rice and corn. The potato crop is propagated vegetative form, which requires high quality plant for income maintenance in the field. However, culture is susceptible to diseases, mainly viruses so it is necessary to use techniques such as culture of shoot tips for cleaning and subsequent clonal propagation in a system that maintains the quality of plant propagation material such as hydroponics. However, it is known that tissue culture induced genetic variability in micropropagated material. Changes collectively termed somaclonal variation. As a result, strategies are needed to control and monitor this phenomenon in potato cultivars due to the possibility of loss of genetic traits for which have been improved. Given the above, this study aimed to evaluate the in vitro behavior of ramets, evaluate characteristics of the tubers produced hydroponically, evaluate the phenotypic stability of ramets from tissue culture through 26 minimum description of potato compare the phenotypic stability of ramets of each cultivar according to the degree of differentiation of the explants that originated ramets, indicating potential minimum descriptors to monitor the phenotypic stability, to analyze the variability over the subcultures of the growing season and the field through microsatellite markers from potato cultivar Asterix and Atlantic. The results showed that ramets both of Asterix as Atlantic differ on in vitro behavior for the variables. There is variability in characteristics of tuber-seed in the ramets of potato cultivars Atlantic and Asterix, from the cultivation of basic generation zero (G0) in a closed hydroponic system. Ramets of Asterix have a different behavior of ramets Atlantic in relation to minimum descriptors. There is great variability and intraclonal divergence in relation to the phenotypic varieties in minimum descriptors in ramets of Asterix and Atlantic. The degree of differentiation of explants that form these ramets has no effect on the phenotypic stability of Asterix and Atlantic. Growth habit and pigmentation of the main stem descriptors can be useful in monitoring the genetic purity of Asterix. Growth habit, vegetative and Tuber shape have potential use in monitoring the intraclonal variability in Atlantic. The potato cultivars Asterix and Atlantic show high variability in intraclonal microsatellite markers. The pattern of instability in molecular phenotypes is different among potato cultivars Asterix and Atlantic. Ramets regenerated from shoot tip derived and indirect organogenesis are also unstable. The subculture time, alone, seems to have no effect on the incidence of somaclonal variation in potato cultivar Asterix and Atlantic. / A batata (Solanum tuberosum L.) ocupa o quarto lugar em nível mundial em produção, sendo superada apenas pelo trigo, arroz e milho. A cultura da batata é propagada de forma vegetativa e, devido à suscetibilidade a doenças, é imprescindível o emprego da cultura de ápices caulinares para efetuar limpeza clonal e, na sequência, da micropropagação das partes aéreas para a obtenção de mudas livres de patógenos para satisfazer a demanda dos agricultores. Entretanto, a cultura de tecidos pode induzir variabilidade genética no material micropropagado, a qual é denominada variação somaclonal. Face ao exposto, o objetivo geral do presente estudo consistiu na análise da variação somaclonal nas cultivares de batata Asterix e Atlantic, com o intuito de contribuir para uma melhor compreensão e, também, para o desenvolvimento de estratégias direcionadas ao controle e monitoramento desse fenômeno, e, simultaneamente, para a obtenção de variantes de utilidade para programas de melhoramento genético. Com esta finalidade, as diferentes etapas do sistema de produção de batata-semente foram avaliadas por descritores morfológicos, morfoagronômicos e marcadores microssatélites. Os resultados revelaram que os rametes de Asterix e Atlantic apresentam extensiva variabilidade intraclonal, observando-se padrões diferenciados nas duas cultivares em resposta às fontes de variação estudadas. Há variabilidade intraclonal na estabilidade fenotípica in vitro e em características de tubérculo-semente nos rametes das cultivares de batata Atlantic e Asterix, provenientes do cultivo de plantas básicas da geração inicial (G0) em sistema hidropônico. Plantas e tubérculos de primeira geração clonal apresentam grande variabilidade intraclonal e divergência em relação ao padrão fenotípico das cultivares nos descritores mínimos nos rametes de Asterix e Atlantic. O grau de diferenciação dos explantes que originam os rametes não tem efeito na estabilidade fenotípica de Asterix e Atlantic. Os rametes das duas cultivares apresentam elevada variabilidade genética intraclonal em marcadores microssatélites. O padrão de instabilidade nos fenótipos moleculares é diferenciado em Asterix e Atlantic. Rametes regenerados a partir de ápices caulinares e derivados de organogênese indireta são igualmente instáveis em nível molecular. O tempo de subcultivo pode ser usado como ferramenta de controle da variação somaclonal nas cultivares de batata Asterix e Atlantic, pela análise dos fenótipos moleculares.