Orientadora : Profª. Drª. Cristiane Hatsuko Baggio / Co-orientadora : Profª Drª Maria Fernanda de Paula Werner / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Farmacologia. Defesa: Curitiba, 30/09/2014 / Inclui referências / Resumo: A Camellia sinensis (L.) Kuntze é uma espécie de planta cujas folhas são utilizadas amplamente na obtenção de infusões popularmente conhecidas como "chás". Considerando-se que diversas propriedades terapêuticas desta planta têm sido demonstradas, e que há uma grande necessidade do desenvolvimento de medicamentos anti-ulcerosos mais efetivos, este estudo teve como objetivo avaliar a atividade gastroprotetora e cicatrizante gástrica do extrato hidroalcoólico de folhas do chá verde (EHCV) e chá preto (EHCP), e dos mecanismos de ação envolvidos. O tratamento intraperitoneal dos animais com o EHCV e o EHCP protegeu a mucosa gástrica contra lesões agudas induzidas por etanol e, quando administrados por via oral, reduziu as lesões induzidas por indometacina, com a participação de fatores citoprotetores como a glutationa reduzida (GSH) e muco gástrico. No modelo de úlcera crônica induzida por ácido acético, a administração oral de EHCV e EHCP foi capaz de reduzir a área da úlcera gástrica, através da diminuição do estresse oxidativo e de parâmetros inflamatórios, além da manutenção da barreira de muco e do GSH gástricos. É importante ressaltar que o EHCV foi mais eficaz que o EHCP, indicando que o processamento, ao qual são submetidas às folhas da planta, interferem na atividade biológica. Com o objetivo de identificar os possíveis compostos responsáveis pelas atividades gastroprotetora e cicatrizante gástrica, os extratos foram submetidos ao fracionamento com solventes de diferentes polaridades, como o clorofórmio, acetato de etila e butanol. As frações butanólica e acetato de etila de ambos os extratos apresentaram gastroproteção contra lesões induzidas por indometacina, e o composto majoritário da fração acetato de etila do EHCV (FAECV), a epigalocatequina-3-O-galato (EGCG), parece ser o responsável por este efeito. As frações acetato de etila de ambos os extratos também diminuíram a área da úlcera gástrica induzida por ácido acético, por mecanismos semelhantes aos apresentados pelos EHCV e EHCP. No entanto, a EGCG quando administrada isoladamente não foi capaz de promover o mesmo efeito. Além disso, os extratos EHCV e EHCP também aumentaram o trânsito intestinal, sendo o extrato de chá preto mais potente. Adicionalmente, os animais tratados com os extratos e com suas frações acetato de etila não demonstraram sinais de toxicidade durante o tratamento repetido por sete dias. Em conclusão, estes dados mostraram que EHCV e EHCP apresentam relevante atividade antiulcerogênica e os compostos presentes nas suas frações acetato de etila, em conjunto, poderiam ser os responsáveis pela ação sobre a mucosa gástrica. Palavras-chave: Camellia sinensis, chá verde, chá preto, gastroproteção, cicatrizante gástrico, motilidade. / Abstract: The Camellia sinensis (L.) Kuntze is a species of plant whose leaves are used extensively in getting infusions popularly known as "teas". Considering that several therapeutic properties of this plant have been demonstrated, and there is a great need to develop more effective anti-ulcer medications, this study aimed to evaluate the gastroprotective and gastric healing activity of the hydroalcoholic extract green tea leaves (EHCV) and black tea (EHCP), and their mechanisms of action. The intraperitoneal treatment with the EHCV and EHCP protected the gastric mucosa against acute lesions ethanol-induced and, when administered orally, reduced lesions indomethacin-induced, with the participation of cytoprotective factors such as reduced glutathione (GSH) and gastric mucus. In the chronic ulcer model induced by acetic acid, oral administration of EHCV and EHCP was able to reduce the area of gastric ulcers by reducing oxidative stress and inflammatory parameters, besides maintaining the gastric mucus barrier and GSH. Importantly, the EHCV was more effective than EHCP indicating that the processing that the leaves of the plant are exposed interfere in its biological activity. With the aim of identifying possible compounds responsible for the gastroprotective and gastric healing activities, the extracts were subjected to fractionation with solvents of different polarities, such as chloroform, ethyl acetate and butanol. The butanol and ethyl acetate fractions from both extracts presented gastroprotection against indomethacin-induced lesions, and the major compound of the ethyl acetate fraction of EHCV (FAECV), epigallocatechin-3-O-gallate (EGCG), seems to be responsible for this effect. The ethyl acetate fractions from both extracts also decreased the area of gastric ulcer induced by acetic acid through similar mechanisms presented by EHCV and EHCP. However, the EGCG when administered alone, was unable to promote the same effect. Furthermore, EHCV and EHCP extracts also increased intestinal transit, and the black tea extract was the most potent. Further, animals treated with the extracts and its fractions ethyl acetate did not shown signs of toxicity during the repeated treatment during seven days. In conclusion, these data show that EHCV and EHCP have relevant antiulcer activity and the compounds present in its ethyl acetate fractions, together, could be responsible for the action on the gastric mucosa. Keywords: Camellia sinensis, green tea, black tea, gastroprotection, gastric healing, motility.

O chá é uma das bebidas mais consumidas no mundo. Os chás provenientes da planta Camellia sinensis possuem altos teores de antioxidantes, o que significa que podem ter diversos efeitos benéficos na preservação da saúde. Durante séculos, a humanidade procura formas de conservar melhor e por mais tempo os alimentos que consomem. O processo de irradiação de alimentos é uma técnica amplamente utilizada em todo o mundo e é indicada por diversos órgãos de saúde e sanitários de diversos países. A radiação interage com o material causando dois tipos de efeitos, o efeito direto e o efeito indireto. No efeito direto a radiação interage com a molécula de DNA, causando a quebra dessa molécula, inativando a célula. No efeito indireto, que representa 70% da interação, a radiação quebra a molécula de água presente no meio, em um processo chamado de radiólise, criando uma série de radicais livres que vão interagir com os componentes celulares, levando a morte da célula. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da radiação gama em dois tipos de chás da planta Camellia sinensis irradiados com diferentes valores de atividade de água. As amostras de chá verde e chá preto tiveram suas Aw ajustadas a três valores (Aw alta, Aw média e Aw baixa). As amostras foram irradiadas em fonte de 60Co nas doses de 0; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10,0 kGy. As análises utilizadas foram: microbiologia por semeadura de superfície, quantificação de fenólicos totais, análise da atividade antioxidante por ORAC e identificação e quantificação dos principais antioxidantes presente nessas bebidas. Foi possível constatar que quanto maior a quantidade de água livre presente no meio, menor foi a dose para realizar o controle microbiológico. O chá verde mostrou ser um pouco mais suscetível a irradiação com alta Aw do que o chá preto, pois houve variação da quantidade de fenólicos e flavonóides, diminuindo a quantidade desses compostos em algumas doses, mas também houve aumento da quantidade em outras doses. Entretanto em ambos os chás, essas mudanças podem ser consideradas insignificantes, uma vez que não houve diferença da atividade antioxidante em doses de até 10 kGy. A dose de 5,0 kGy foi a dose mínima que garantiu o controle microbiológico e não causou alterações nos parâmetros analisados. / Tea is the most consumed beverage in the world. Teas from Camellia sinensis plant have high levels of antioxidants, which mean that they may have several beneficial effects on health preservation. For centuries, mankind looks for ways to conserve better and for a longer time the food that they eat. The food irradiation process is a largely technique used worldwide, and is recommended by many health agencies and authorities of several countries. The radiation interacts with the material causing two kinds of effects, the direct and the indirect effect. In the direct effect the radiation interacts with the DNA molecule, breaking it, and then inactivates the cell. In the indirect effect, which represents 70% of the interaction, the radiation breaks the water molecule in a process denominated radiolysis, creating a number of free radicals that will interact with the cellular components, leading to the cell death. Therefore, the aim of this work is to study the effects of gamma radiation on two kinds of tea from Camellia sinensis plant irradiated with different water activities. The green tea and black tea samples had their Aw adjusted to three values (high Aw, medium Aw, and low Aw). The samples were irradiated in 60Co source at doses of 0, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 5.0, 7.5, and 10.0 kGy. The analyses used were: microbiology by plate count, total phenolic compounds quantification, antioxidant activity by ORAC assay, and identification and quantification of main antioxidants in these beverages. It was noted that the greater the quantity of free water present in the medium, the lower was the dose to achieve microbiological control. The green tea showed to be a little more susceptible to irradiation by high Aw once there was more variation in the amount of flavonoids and phenolics than the black tea, decreasing the amount of these compounds in some doses, but increasing the amount in other ones. However in both teas, these changes can be considered insignificant, since there was no difference in antioxidant activity at doses up to 10 kGy. The dose of 5.0 kGy was the minimum dose that secured the microbiological control and had no changes on the parameters analyzed.

O chá é uma das bebidas mais consumidas no mundo. Os chás provenientes da planta Camellia sinensis possuem altos teores de antioxidantes, o que significa que podem ter diversos efeitos benéficos na preservação da saúde. Durante séculos, a humanidade procura formas de conservar melhor e por mais tempo os alimentos que consomem. O processo de irradiação de alimentos é uma técnica amplamente utilizada em todo o mundo e é indicada por diversos órgãos de saúde e sanitários de diversos países. A radiação interage com o material causando dois tipos de efeitos, o efeito direto e o efeito indireto. No efeito direto a radiação interage com a molécula de DNA, causando a quebra dessa molécula, inativando a célula. No efeito indireto, que representa 70% da interação, a radiação quebra a molécula de água presente no meio, em um processo chamado de radiólise, criando uma série de radicais livres que vão interagir com os componentes celulares, levando a morte da célula. Portanto, o objetivo deste trabalho foi estudar os efeitos da radiação gama em dois tipos de chás da planta Camellia sinensis irradiados com diferentes valores de atividade de água. As amostras de chá verde e chá preto tiveram suas Aw ajustadas a três valores (Aw alta, Aw média e Aw baixa). As amostras foram irradiadas em fonte de 60Co nas doses de 0; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10,0 kGy. As análises utilizadas foram: microbiologia por semeadura de superfície, quantificação de fenólicos totais, análise da atividade antioxidante por ORAC e identificação e quantificação dos principais antioxidantes presente nessas bebidas. Foi possível constatar que quanto maior a quantidade de água livre presente no meio, menor foi a dose para realizar o controle microbiológico. O chá verde mostrou ser um pouco mais suscetível a irradiação com alta Aw do que o chá preto, pois houve variação da quantidade de fenólicos e flavonóides, diminuindo a quantidade desses compostos em algumas doses, mas também houve aumento da quantidade em outras doses. Entretanto em ambos os chás, essas mudanças podem ser consideradas insignificantes, uma vez que não houve diferença da atividade antioxidante em doses de até 10 kGy. A dose de 5,0 kGy foi a dose mínima que garantiu o controle microbiológico e não causou alterações nos parâmetros analisados. / Tea is the most consumed beverage in the world. Teas from Camellia sinensis plant have high levels of antioxidants, which mean that they may have several beneficial effects on health preservation. For centuries, mankind looks for ways to conserve better and for a longer time the food that they eat. The food irradiation process is a largely technique used worldwide, and is recommended by many health agencies and authorities of several countries. The radiation interacts with the material causing two kinds of effects, the direct and the indirect effect. In the direct effect the radiation interacts with the DNA molecule, breaking it, and then inactivates the cell. In the indirect effect, which represents 70% of the interaction, the radiation breaks the water molecule in a process denominated radiolysis, creating a number of free radicals that will interact with the cellular components, leading to the cell death. Therefore, the aim of this work is to study the effects of gamma radiation on two kinds of tea from Camellia sinensis plant irradiated with different water activities. The green tea and black tea samples had their Aw adjusted to three values (high Aw, medium Aw, and low Aw). The samples were irradiated in 60Co source at doses of 0, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 5.0, 7.5, and 10.0 kGy. The analyses used were: microbiology by plate count, total phenolic compounds quantification, antioxidant activity by ORAC assay, and identification and quantification of main antioxidants in these beverages. It was noted that the greater the quantity of free water present in the medium, the lower was the dose to achieve microbiological control. The green tea showed to be a little more susceptible to irradiation by high Aw once there was more variation in the amount of flavonoids and phenolics than the black tea, decreasing the amount of these compounds in some doses, but increasing the amount in other ones. However in both teas, these changes can be considered insignificant, since there was no difference in antioxidant activity at doses up to 10 kGy. The dose of 5.0 kGy was the minimum dose that secured the microbiological control and had no changes on the parameters analyzed.

O presente estudo avaliou in situ a influência de fatores da dieta associado ao uso de clorexidina na cor e na rugosidade superficial de diferentes resinas compostas (Z250® - 3M-ESPE e Filtek Supreme® - 3M-ESPE). Foram confeccionados 112 corpos-de-prova (6,0x2,0mm) que foram polidos com disco abrasivos Super Snap® (Shofu). O estudo foi constituído por duas fases de 5 dias cada, com um período de washout de 9 dias entre elas. Os corpos-de-prova de cada um dos materiais foram divididos entre 14 voluntários e montados em dispositivo palatino, na região dos pré-molares e molares superiores e instalados nos participantes para a realização dos bochechos e da ingestão do chá em cada uma das fases do experimento. De acordo com sorteio aleatório, metade dos voluntários utilizou, na primeira fase do experimento, solução de gluconato de clorexidina 0,12% (S1) e a outra metade dos voluntários realizou os bochechos com uma solução placebo (S2), de mesma composição da solução original, porém sem adição de gluconato de clorexidina 0,12%. Os bochechos foram realizados 2 vezes ao dia, por 1 minuto, durante 5 dias. Todos os voluntários, após o bochecho com gluconato de clorexidina 0,12% ou placebo ingeriram 200 mL de chá em ambas as fases. Na segunda fase do experimento, os corpos-de-prova foram substituídos por outros e os voluntários foram cruzados quanto à solução, de modo que todos usaram ambas às soluções. As leituras de cor, obtidas através de um colorímetro, e a rugosidade superficial, obtida por meio de um rugosímetro, foram realizadas imediatamente antes da fixação do espécime no aparelho intra-bucal e após 24 horas do término do período experimental. Os dados foram submetidos ao teste ANOVA e Tukey (p≤0,05). Os resultados mostraram que: a) a solução S1obteve maiores médias de alteração de cor (ΔE*) que S2 enquanto que para os outros fatores e interações não houve diferença estatisticamente significante para esta variável; b) todos os fatores e respectivas interações, exceto a interação Solução x Material, sofreram variação de luminosidade (L*) significante estatisticamente; c) todos os fatores e respectivas interações, exceto a interação Material x Tempo, sofreram variação do parâmetro a* significantes estatisticamente; d) o fator Solução quando analisado isoladamente e a interação Tempo x Solução não obtiveram resultados estatisticamente diferentes para o parâmetro b* e; e) para a rugosidade superficial (Ra) apenas o fator Tempo foi estatisticamente significante. Conclui-se que: houve uma maior alteração de cor da resina composta quando se utiliza soluções a base de Clorexidina 0,12%; as resinas estudadas não influenciaram no comportamento da cor quando associado à Clorexidina 0,12% e chá preto; para os parâmetros L* a* e b* os fatores Solução, Material e Tempo tiveram efeito significante, exceto o fator Solução para o parâmetro b*; a utilização de Clorexidina durante 5 dias não influenciou na rugosidade superficial dos materiais estudados e; o tempo teve influencia sobre o aumento da rugosidade superficial. / This in situ study evaluated the influence of dietary factors in association with chlorhexidine on the color change (ΔE*) of two composites resins (Z250® - 3M-ESPE and Filtek Supreme® - 3M-ESPE). 112 discs (6.0x2.0mm) were fabricated and polished with Super Snap® discs (Shofu). The specimens were divided among 14 volunteers, and fitted onto intraoral devices and placed in the maxillary premolar and molar positions. Palatal intra-oral acrylic resin appliances were made for each volunteers in the experiment. In each appliance, two specimen of each materials was randomly fixed. This study was composed of two phases of 5 days each, with a washout period of 9 days between them. In the first phase, half of the volunteers chosen by random draw, used a 0.12% chlorhexidine solution (S1) and the other half used a placebo solution (S2). The mouthwashes were performed 2 times a day, for 1 min. each, for 5 days. In the second phase of the experiment, the specimens were replaced by others and the volunteers were crossed on the outcome. In both phases, after mouthwashes with S1 or S2, all volunteers ingested 200 mL of black tea for 10 minutes. The color change of all specimens before and after of the experimental period was measured by a colorimeter and the data were analyzed by two-way analysis of variance (ANOVA) and Tukey´s test (&alpha=.05). Subsequently, the surface roughness (Ra) of the specimens was evaluated using a profilometer, and the data were compared by two-way ANOVA followed by a Tukey multiple comparations test (α=.05). According to ANOVA: a) the S1 solution had the highest means of color change (ΔE*) that S2, while for the others factors and interactions no have statistically significant difference for this variable; b) all the factors and their interactions had significant statistically changes in lightness (L*), except for the Solution x Material interaction; c) all the factores and their interactions had significant statistically changes in parameter a*, except for the Material x Time interaction; d) the solution factor and Time x Solution interaction no had statistica different for the parameter b* and; e) for surface roughness (Ra) only the time factor was statistically significant. It was concluded that: there was an increase in color change of composite resin when using Chlorhexidine 0.12%; the resin did not influence on the color when associated with Chlorhexidine 0.12% and black tea; for parameters L * a * b * Solution, Material and Time factors had significant effect, except for the Solution factor for the parameter b *; the use of chlorhexidine for 5 days did not influence the surface roughness of the materials studied; and the time had a significant influence on increased surface roughness.

O presente estudo avaliou in situ a influência de fatores da dieta associado ao uso de clorexidina na cor e na rugosidade superficial de diferentes resinas compostas (Z250® - 3M-ESPE e Filtek Supreme® - 3M-ESPE). Foram confeccionados 112 corpos-de-prova (6,0x2,0mm) que foram polidos com disco abrasivos Super Snap® (Shofu). O estudo foi constituído por duas fases de 5 dias cada, com um período de washout de 9 dias entre elas. Os corpos-de-prova de cada um dos materiais foram divididos entre 14 voluntários e montados em dispositivo palatino, na região dos pré-molares e molares superiores e instalados nos participantes para a realização dos bochechos e da ingestão do chá em cada uma das fases do experimento. De acordo com sorteio aleatório, metade dos voluntários utilizou, na primeira fase do experimento, solução de gluconato de clorexidina 0,12% (S1) e a outra metade dos voluntários realizou os bochechos com uma solução placebo (S2), de mesma composição da solução original, porém sem adição de gluconato de clorexidina 0,12%. Os bochechos foram realizados 2 vezes ao dia, por 1 minuto, durante 5 dias. Todos os voluntários, após o bochecho com gluconato de clorexidina 0,12% ou placebo ingeriram 200 mL de chá em ambas as fases. Na segunda fase do experimento, os corpos-de-prova foram substituídos por outros e os voluntários foram cruzados quanto à solução, de modo que todos usaram ambas às soluções. As leituras de cor, obtidas através de um colorímetro, e a rugosidade superficial, obtida por meio de um rugosímetro, foram realizadas imediatamente antes da fixação do espécime no aparelho intra-bucal e após 24 horas do término do período experimental. Os dados foram submetidos ao teste ANOVA e Tukey (p≤0,05). Os resultados mostraram que: a) a solução S1obteve maiores médias de alteração de cor (ΔE*) que S2 enquanto que para os outros fatores e interações não houve diferença estatisticamente significante para esta variável; b) todos os fatores e respectivas interações, exceto a interação Solução x Material, sofreram variação de luminosidade (L*) significante estatisticamente; c) todos os fatores e respectivas interações, exceto a interação Material x Tempo, sofreram variação do parâmetro a* significantes estatisticamente; d) o fator Solução quando analisado isoladamente e a interação Tempo x Solução não obtiveram resultados estatisticamente diferentes para o parâmetro b* e; e) para a rugosidade superficial (Ra) apenas o fator Tempo foi estatisticamente significante. Conclui-se que: houve uma maior alteração de cor da resina composta quando se utiliza soluções a base de Clorexidina 0,12%; as resinas estudadas não influenciaram no comportamento da cor quando associado à Clorexidina 0,12% e chá preto; para os parâmetros L* a* e b* os fatores Solução, Material e Tempo tiveram efeito significante, exceto o fator Solução para o parâmetro b*; a utilização de Clorexidina durante 5 dias não influenciou na rugosidade superficial dos materiais estudados e; o tempo teve influencia sobre o aumento da rugosidade superficial. / This in situ study evaluated the influence of dietary factors in association with chlorhexidine on the color change (ΔE*) of two composites resins (Z250® - 3M-ESPE and Filtek Supreme® - 3M-ESPE). 112 discs (6.0x2.0mm) were fabricated and polished with Super Snap® discs (Shofu). The specimens were divided among 14 volunteers, and fitted onto intraoral devices and placed in the maxillary premolar and molar positions. Palatal intra-oral acrylic resin appliances were made for each volunteers in the experiment. In each appliance, two specimen of each materials was randomly fixed. This study was composed of two phases of 5 days each, with a washout period of 9 days between them. In the first phase, half of the volunteers chosen by random draw, used a 0.12% chlorhexidine solution (S1) and the other half used a placebo solution (S2). The mouthwashes were performed 2 times a day, for 1 min. each, for 5 days. In the second phase of the experiment, the specimens were replaced by others and the volunteers were crossed on the outcome. In both phases, after mouthwashes with S1 or S2, all volunteers ingested 200 mL of black tea for 10 minutes. The color change of all specimens before and after of the experimental period was measured by a colorimeter and the data were analyzed by two-way analysis of variance (ANOVA) and Tukey´s test (&alpha=.05). Subsequently, the surface roughness (Ra) of the specimens was evaluated using a profilometer, and the data were compared by two-way ANOVA followed by a Tukey multiple comparations test (α=.05). According to ANOVA: a) the S1 solution had the highest means of color change (ΔE*) that S2, while for the others factors and interactions no have statistically significant difference for this variable; b) all the factors and their interactions had significant statistically changes in lightness (L*), except for the Solution x Material interaction; c) all the factores and their interactions had significant statistically changes in parameter a*, except for the Material x Time interaction; d) the solution factor and Time x Solution interaction no had statistica different for the parameter b* and; e) for surface roughness (Ra) only the time factor was statistically significant. It was concluded that: there was an increase in color change of composite resin when using Chlorhexidine 0.12%; the resin did not influence on the color when associated with Chlorhexidine 0.12% and black tea; for parameters L * a * b * Solution, Material and Time factors had significant effect, except for the Solution factor for the parameter b *; the use of chlorhexidine for 5 days did not influence the surface roughness of the materials studied; and the time had a significant influence on increased surface roughness.