Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-04-08T12:31:21Z No. of bitstreams: 2 Cópia de Dissertação Thalita Figueiredo Biblioteca.pdf: 4234370 bytes, checksum: 91f801b58acf8761422a7b1d6bb4814b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-08T12:31:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Cópia de Dissertação Thalita Figueiredo Biblioteca.pdf: 4234370 bytes, checksum: 91f801b58acf8761422a7b1d6bb4814b (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2012 / CAPES; PROPESQ / Os genes HLA (Antígenos Leucocitários Humanos) estão localizados no MHC (Complexo Principal de Histocompatibilidade Humano). O MHC localiza-se no braço curto do cromossomo 6 (6p21.3), uma das regiões com os maiores níveis de polimorfismo do genoma e alta concentração gênica. Muitos dos polimorfismos encontrados nos genes HLA estão associados à rejeição de transplantes clínicos, suscetibilidade à doenças infecciosas, doenças auto-imunes e predisposição a um amplo espectro de doenças crônicas não infecciosas. O objetivo deste estudo foi predizer e validar SNPs presentes nas regiões codificantes dos genes HLA classe I, utilizando o banco de dados de ESTs humano. O CLCbio Workbench Combined® versão 5.7.1 foi inicialmente utilizado para construção do banco de dados de ESTs e recuperação dos arquivos de RNAm respectivamente a partir do Golden path of University of California Santa Cruz (UCSC) e National Center for Biotechnology Information (NCBI). Na etapa seguinte foram realizados múltiplos alinhamentos com auxílio do CUBO versão 1.0.6, hardware com função de acelerar o processamento. O algoritmo utilizado foi o Smith-Waterman. Um número inicial de 18.029 ESTs foram alinhados com os RNAm dos genes HLA, sendo 3.287 ESTs selecionados após aplicação de parâmetros de estringência utilizados para minimizar erros de alinhamentos. A anotação dos SNPs encontrados nos ESTs selecionados revelou várias classes de variações: 94 transversões, 100 transições, 10 deleções e 17 inserções, totalizando 221 SNPs. Destes SNPs, 101 já estavam descritos no banco de dados do MHC (NCBI) e 120 são potenciais novos polimorfismos que podem indicar novos alelos. Alguns destes SNPs foram encontrados em mais de 200 diferentes ESTs. A maioria das variações foram encontradas nos exons 2 e 3 que codificam as estruturas moleculares alfa1 e alfa2 do receptor membranar, sítio de ligação dos peptídeos antigênicos. Estas estruturas são fundamentais para numerosas funções imunes. A validação virtual confirmou que algumas das variações identificadas foram previamente anotadas e confirmadas em amostras de DNA, demonstrando que este método utilizando ferramentas de Bioinformática é uma maneira viável para detectar variações genéticas em dados gerados em larga escala.

Embora muito estudados, os efeitos da extração dos quatro primeiros pré-molares sobre as alturas faciais ainda causam certa controvérsia. Devido à variação de resultados encontrados na literatura e pelo fato de todos os estudos terem sido realizados em leucodermas, propusemonos a analisar cefalometricamente as alterações das alturas faciais anterior e posterior em pacientes nipo-brasileiros com más oclusões de Classe I e II, 1a divisão de Angle tratados ortodonticamente. A amostra consistiu de quatro grupos: Grupo I – 15 jovens com Classe I tratados com extração dos quatro primeiros pré-molares; Grupo II – 15 jovens com Classe I tratados sem extrações; Grupo III – 14 jovens com Classe II, 1a divisão tratados com extração dos quatro primeiros pré-molares; Grupo IV– 15 jovens com Classe II, 1a divisão tratados sem extrações. Todos foram tratados com a técnica do Arco de Canto Simplificada por um período médio de 2,49 anos. A idade média inicial foi de 12,14 anos e a final de 14,64 anos. A análise dos resultados revelou que a extração de pré-molares não diminui a dimensão vertical em pacientes nipo-brasileiros com padrão de crescimento equilibrado, uma vez que as alterações nas alturas faciais anterior e posterior foram similares nos quatro grupos estudados, apresentando aumento de ambas ao final do tratamento ortodôntico. As alterações dos ângulos FMA e SN.GoGn não foram estatisticamente significantes e, quanto ao Índice de Horn e à proporção AFP/AFA, verificou-se aumento nos Grupos I e III. Observou-se dimorfismo apenas nas medidas dentoalveolares DMSPTV e DMI-PTV, no Grupo I, e nas medidas CMI-PM, PFH e AFP, no Grupo III, em que o gênero masculino apresentou valores maiores que o feminino. / The objective of this retrospective longitudinal cephalometric investigation was to study the influence of extraction and nonextraction orthodontic treatment on the facial height japanese children and grandchildren with Class I and Class II, Division 1 malocclusions. The sample included 59 mesocephalic subjects distributed in to 4 groups: group I- Class I treated with first bicuspid extractions (9 males and 6 females); group II- Class I treated without extraction (8 males and 7 females); group III- Class II, Division 1 treated with first bicuspid extractions (7 males and 7 females); group IVClass II, Division 1 treated without extraction (7 males and 8 females). The initial mean age was 12.14 years and all groups were treated with the Edgewise simplified technique, during a mean period of 2.49 years. The resulted changes were compared by the ANOVA. There were no statistically significant differences (p 0,05) in the first bicuspid extractions orthodontic treatment when compared to the nonextraction treatment in both Class I and Class II, Division 1. The t test showed that extraction treatment in Class I and II (groups I and III) is associated with a significant increase in the Horn index and PFH/AFH ratio. In addition, FMA and SN.GoGn did not change statistically. No sexual dimorphism was encountered for the anterior and posterior facial height changes, except for some dentoalveolar measurements (U6-PTV and L6-PTV) in Group I, where males achieved higher values than females. In group III, greater changes in L6-MP, PFH and S-Go were also demonstrated by male patients.

Embora muito estudados, os efeitos da extração dos quatro primeiros pré-molares sobre as alturas faciais ainda causam certa controvérsia. Devido à variação de resultados encontrados na literatura e pelo fato de todos os estudos terem sido realizados em leucodermas, propusemonos a analisar cefalometricamente as alterações das alturas faciais anterior e posterior em pacientes nipo-brasileiros com más oclusões de Classe I e II, 1a divisão de Angle tratados ortodonticamente. A amostra consistiu de quatro grupos: Grupo I – 15 jovens com Classe I tratados com extração dos quatro primeiros pré-molares; Grupo II – 15 jovens com Classe I tratados sem extrações; Grupo III – 14 jovens com Classe II, 1a divisão tratados com extração dos quatro primeiros pré-molares; Grupo IV– 15 jovens com Classe II, 1a divisão tratados sem extrações. Todos foram tratados com a técnica do Arco de Canto Simplificada por um período médio de 2,49 anos. A idade média inicial foi de 12,14 anos e a final de 14,64 anos. A análise dos resultados revelou que a extração de pré-molares não diminui a dimensão vertical em pacientes nipo-brasileiros com padrão de crescimento equilibrado, uma vez que as alterações nas alturas faciais anterior e posterior foram similares nos quatro grupos estudados, apresentando aumento de ambas ao final do tratamento ortodôntico. As alterações dos ângulos FMA e SN.GoGn não foram estatisticamente significantes e, quanto ao Índice de Horn e à proporção AFP/AFA, verificou-se aumento nos Grupos I e III. Observou-se dimorfismo apenas nas medidas dentoalveolares DMSPTV e DMI-PTV, no Grupo I, e nas medidas CMI-PM, PFH e AFP, no Grupo III, em que o gênero masculino apresentou valores maiores que o feminino. / The objective of this retrospective longitudinal cephalometric investigation was to study the influence of extraction and nonextraction orthodontic treatment on the facial height japanese children and grandchildren with Class I and Class II, Division 1 malocclusions. The sample included 59 mesocephalic subjects distributed in to 4 groups: group I- Class I treated with first bicuspid extractions (9 males and 6 females); group II- Class I treated without extraction (8 males and 7 females); group III- Class II, Division 1 treated with first bicuspid extractions (7 males and 7 females); group IVClass II, Division 1 treated without extraction (7 males and 8 females). The initial mean age was 12.14 years and all groups were treated with the Edgewise simplified technique, during a mean period of 2.49 years. The resulted changes were compared by the ANOVA. There were no statistically significant differences (p 0,05) in the first bicuspid extractions orthodontic treatment when compared to the nonextraction treatment in both Class I and Class II, Division 1. The t test showed that extraction treatment in Class I and II (groups I and III) is associated with a significant increase in the Horn index and PFH/AFH ratio. In addition, FMA and SN.GoGn did not change statistically. No sexual dimorphism was encountered for the anterior and posterior facial height changes, except for some dentoalveolar measurements (U6-PTV and L6-PTV) in Group I, where males achieved higher values than females. In group III, greater changes in L6-MP, PFH and S-Go were also demonstrated by male patients.

L'adénocarcinome pancréatique est un des cancers les plus létaux, avec une survie à 5 ans après diagnostic de seulement 5%. L'absence de traitement curatif et les nombreux échecs des thérapies ciblées mettent en avant l'urgence d'identifier une stratégie thérapeutique efficace. L'atteinte de cet objectif doit passer par l'identification de biomarqueurs diagnostic et pronostic, l'identification de nouvelles cibles thérapeutiques et la connaissance des mécanismes de résistance induits par les thérapies ciblées. La voie PI3K/Akt/mTOR, une des voies les plus altérées dans les cancers, est suractivée dans les cancers du pancréas et corrélée à un mauvais pronostic. Chez les Vertébrés, la famille des phosphoinositide-3-kinases (PI3K) de classe I est constituée des isoformes p110a, p110ß, p110d et p110?. Bien qu'elles réalisent toutes la même réaction biochimique (phosphorylation du PIP2 en PIP3, second messager lipidique), chaque isoforme de PI3K possède des rôles physiologiques spécifiques. Les inhibiteurs globaux de PI3Ks actuellement testés en phase I/II dans les cancers solides avancés présentent un bénéfice thérapeutique limité à des doses maximales tolérées. Les inhibiteurs des isoformes de PI3K sont actuellement les agents les plus prometteurs car ils offrent les avantages d'être, à de faibles doses, plus efficaces, plus puissants dans l'inhibition d'une PI3K et donc moins toxiques que les inhibiteurs pan-PI3K. Les objectifs de cette thèse sont de déterminer les rôles isoforme-spécifiques des PI3K et l'intérêt thérapeutique de cibler une ou plusieurs isoformes dans la pancréatite et l'adénocarcinome pancréatique, par l'identification de voies isoforme-spécifiques et l'étude des réponses adaptatives induites par le ciblage d'une ou de toutes les isoformes de PI3K. Dans un premier temps, mon travail a permis de mettre en évidence, valider et compléter des résultats obtenus dans l'équipe, visant à démontrer l'importance de la signalisation PI3K/Akt dans ces deux processus physiopathologiques : la pancréatite chronique et l'initiation de la carcinogenèse pancréatique. Plus précisément, l'hyperactivation de la voie PI3K/Akt observée dans des échantillons humains et murins atteints de pancréatique chronique est corrélée avec l'enrichissement d'une signature transcriptomique d'activation de l'isoforme p110a. Par ailleurs, l'inactivation génétique et pharmacologique de p110a lors d'une inflammation chronique pancréatique ou en présence de Kras oncogénique empêche l'apparition de métaplasies acino-canalaires, structures associées à l'initiation de la carcinogenèse pancréatique. L'élaboration d'un protocole de transdifférenciation acino-canalaire in vitro m'a permis de valider que seule l'isoforme p110a est nécessaire à cette étape d'initiation de la carcinogenèse pancréatique en régulant les petites GTPases Rho, essentielles au remodelage du cytosquelette d'actine. Dans un deuxième temps, grâce à une analyse quantitative du phosphoprotéome d'une lignée cancéreuse pancréatique traitée ou non à différents temps par un inhibiteur pan- ou isoforme-sélectif, j'ai démontré pour la première fois l'existence de cibles, de réseaux de signalisation et de réponses adaptatives régulés par chaque isoforme de PI3K. Pour conclure, l'ensemble des résultats démontrent le rationnel de l'utilisation combinatoire d'inhibiteurs isoforme-spécifiques de PI3K chez les patients atteints de cancer du pancréas pour une meilleure réponse clinique. / Pancreatic ductal adenocarcinoma is one of the most lethal cancers, with a 5 year-survival rate below 5%. Lack of curative treatment and failure of targeted therapies urge the need to identify novel efficient therapeutic strategy. Achievement of this goal will be obtained through the identification of diagnosis and prognosis biomarkers, identification of novel therapeutic targets and the knowledge of resistance mechanisms induced by these targeted therapies. PI3K/Akt/mTOR signalling, one of the most altered in cancers, is overactivated in pancreatic cancer and correlated with poor prognosis. In the Vertebrates, the family of class I phosphoinoitide-3-kinase (PI3K) includes four isoforms: p110a, p110ß, p110d and p110?. Although they all perform the same biochemical reaction (phosphorylation of PIP2 in PIP3, a membrane lipid messenger), each isoform were demonstrated to have specific physiological roles. Global PI3K inhibitors are currently being tested in phase I/II clinical trials in advanced solid cancers, but show at maximal doses tolerated a limited therapeutic benefit. Isoform-selective PI3K inhibitors are currently the most promising agents because, at low doses, they are more efficient to inhibit one PI3K isoform, and thus, less toxic than pan-PI3K inhibitors. The objectives of this thesis are to determine isoform-specific PI3K roles and the therapeutic interest to target one or more isoforms in pancreatitis and PDAC, by the identification of isoform-specific pathways and the study of adaptive responses induced by targeting of one or all isoforms of PI3K. In a first part, my work has highlighted, validated and completed results obtained in the team, to demonstrate the significance of PI3K/Akt signalling in two physiological processes: chronic pancreatitis and initiation of pancreatic carcinogenesis. Precisely, the overactivation of PI3K/Akt pathway measured on human and murine chronic pancreatitis samples is correlated with a specific p110a activation gene expression signature. Moreover, genetic and pharmacologic inactivation of p110a during pancreatic chronic inflammation or cancerogenesis (by oncogenic Kras) prevents the formation of acino-ductal metaplasia, structures at the origin of pancreatic carcinogenesis initiation. Development of in vitro acino-ductal transdifferentiation protocol allowed me to demonstrate that only p110a is necessary at this initial step of pancreatic carcinogenesis by the regulation of Rho small GTPases, further regulating actin remodelling. In the second part, by a phosphoproteomic-based approach, I quantified PI3K downstream phosphorylation-regulated targets in a pancreatic cancer cell line treated or not by a pan- or selective PI3K inhibitor at different times. I demonstrated for the first time existence of targets, signalling pathways and adaptive responses regulated by each PI3K isoform. To conclude, all these results demonstrate the rational of combinatorial use of isoform-specific PI3K inhibitors in patients with pancreatic cancer for better clinical response.

O objetivo deste estudo retrospectivo foi comparar os resultados oclusais o tempo e a eficiencia do tratamento da ma oclusao de Classe I, realizado com e sem extracoes de pre-molares. Para tanto foi selecionada a partir das documentacoes do arquivo da Disciplina de Ortodontia da Faculdade de Odontologia de Bauru, uma amostra composta pelas documentacoes de 111 pacientes com ma oclussao de Classe I, e em seguida dividida em dois grupos que apresentaram as seguintes caracteristicas: Grupo 1, constituido por 65 pacientes (24 masculino e 41 feminino) com idade inicial media de 13,82 anos (minima de 10,69 e maxima de 22,04 anos), que foram tratados com extracoes de quatro pre-molares. Grupo 2, constituido por 46 pacientes, (16 masculino e 30 feminino) com idade inicial media de 14,01 anos (minima de 11,04 e maxima de 21,54 anos) tratados sem extracoes de pre-molares. Ambos os grupos foram tratados com aparelho fixo, utilizando a mecanica edgewise simplificada. As avaliacoes oclusais foram realizadas em modelos de gesso dos pacientes nas fases inicial e final utilizando o indice PAR. A avaliacao da compatibilidade no inicio do tratamento foi realizada por meio do teste do Qui- Quadrado e o teste t. As comparacoes entre os resultados oclusais, tempo e eficiencia do tratamento foram realizadas tambem por meio do test t e foi realizada a analise de regressao linear multipla para avaliacao das variaveis que poderiam estar relacionadas com o tempo de tratamento. Os resultados demonstraram que os grupos obtiveram resultados e alteracoes oclusais semelhantes, nao entanto, o tempo de tratamento foi menor e a eficiencia maior no grupo 2. Na analise de regressao linear multipla o modelo estatistico explicou 15% da variacao no tempo de tratamento, sendo que o protocolo de tratamento com extracoes foi a unica variável estatisticamente significante, a qual mostrou uma relacao direta com o tempo de tratamento. Pode-se concluir que, o tratamento com extracoes de pre-molares prove resultados oclusais e porcentagem de alteracoes oclusais semelhantes num maior tempo de tratamento, demonstrando por tanto um menor grau de eficiencia quando comparado ao tratamento realizado sem extracoes. / The objective of this retrospective study was to compare the occlusal outcomes, duration and efficiency of the treatment of Class I malocclusions carried out with and without premolar extractions. Accordingly, initial and final clinical charts and models of patients treated with fixed edgewise appliances were selected from the files of the Orthodontic Department at Bauru Dental School. Complete records of 111 patients were obtained and then divided into two groups: Group 1 consisted of 65 patients (24 male, 41 female), at an initial mean age of 13.82 years (range, 10.69 to 22.04 years) treated with four premolar extractions. Group 2 consisted of 46 patients (16 male; 30 female), at an initial mean age of 14.01 years (range, 11.04 to 21.54 years) treated without extractions. Initial and final occlusal evaluations were accomplished in study models of the patients using the peer assessment rating (PAR) index. Compatibility was evaluated with Chi-Square and t tests. The occlusal outcome, treatment duration and efficiency of the groups were also compared with t test and the variables that may be related to the duration of treatment were evaluated using the multiple linear regression analyses. Results showed that both groups had similar final occlusal outcomes and PAR reduction, however, Group 2 showed a significantly smaller treatment time and greater treatment efficiency index than group 1. In the regression analysis, the 9 selected variables explained 15% of the variance in treatment time and the extraction treatment protocol was the only statistically significant variable which was positively associated with treatment time. It can be concluded that premolar extractions influence significantly in treatment duration of Class I malocclusions and the use of this protocol provides the same occlusal outcome and occlusal improvement in a greater time and consequently less efficiency degree than non-extraction protocol.

Introduction: The frequency of first premolar extractions in Orthodontics has remarkably decreased in the last 40 years. Objective: The aim of this study was to compare the dentoskeletal initial features of patients treated with four first premolar extractions in the 1970s and in the new millennium. Materials and Methods: Group 1 was composed by 30 subjects with Class I malocclusion (mean age of 12.8 years, 10 males, 20 females) treated in the 1970s with four first premolar extraction and comprehensive orthodontic treatment. Group 2 comprised 30 subjects with Class I malocclusion (mean age of 13.4 years, 13 males, 17 females) treated in the new millennium similarly to Group 1. Initial dental models and lateral cephalograms were digitized and measured using OrthoAnalyzerTM 3D software and Dolphin Imaging 11.0 software, respectively. Initial dentoskeletal features were analyzed and compared. Intergroup comparison was performed using independent t tests (p<0.05). Results: Group 2 showed an increased maxillary and mandibular protrusion, a greater maxillary and mandibular body lengths and an increased incisor protrusion in comparison to Group 1. Group 2 also showed a greater lower anterior facial height and a greater vertical development of molars and maxillary incisors. Conclusion: Patients with Class I malocclusion treated with four first premolar extraction in the new millennium present an increased degree of maxillomandibular, dental and labial protrusion, an increased lower anterior facial height, an acute nasolabial angle and similar anterior dental crowding compared to patients treated similarly in the 1970s decade. Severe bimaxillary skeletal and dental protrusion determined first premolars extractions in the new millennium. / Introdução: A frequência de extração de quatro primeiros pré-molares tem diminuído significativamente nos últimos 40 anos. Objetivo: O objetivo desse estudo foi comparar as características dentoesqueléticas iniciais de pacientes tratados com extração de quatro primeiros pré-molares na década de 70 e o novo milênio. Materiais e Métodos: O Grupo 1 estava composto por 30 pacientes com maloclusão de Classe I (idade média de 12.8 anos, 10 homens, 20 mulheres) tratados na década de 1970 com extração de quatro primeiros pré-molares e ortodontia fixa. O Grupo 2 estava composto por 30 pacientes com maloclusão de Classe I (idade média de 13.4 anos, 13 homens, 17 mulheres) tratados no novo milênio similar ao Grupo 1. Modelos e telerradiografias iniciais foram digitalizadas e medidas utilizando o OrthoAnalyzerTM 3D software e Dolphin Imaging 11.0 software, respectivamente. As características dentoesqueléticas inicias foram analisadas e comparadas. A comparação intergrupo foi realizada utilizando o teste t independente (p<0.05). Resultados: O Grupo 2 mostrou maior protrusão maxilar e mandibular, maior tamanho efetivo da maxila e da mandíbula e uma maior protrusão dos incisivos em relação ao grupo 1. O Grupo 2 também mostrou maior altura facial anteroinferior e maior desenvolvimento vertical dos molares e incisivos superiores. Conclusão: Em pacientes com maloclusão de Classe I é a severidade da briprotrusão inicial que determina a necessidade de realizar extração de primeiros pré-molares no novo milênio.

O objetivo deste trabalho foi buscar genes MHC classe I em bovinos expressos durante o desenvolvimento embrionário e gestação que apresentassem similaridade ao gene Ped murino. Para tanto, embriões de PIV e placentas de fetos produzidos por monta natural ou clonados tiveram seu RNA extraído. A partir do RNA extraído foi realizada a produção de cDNA para tentar o isolamento de fragmentos com similaridade ao gene descrito em murinos. Uma vez isolados, os fragmentos foram purificados ou clonados em plasmídeo. As amostras foram seqüenciadas e as seqüências obtidas foram avaliadas, editadas e comparadas a outras seqüências pelo programa BLAST. A expressão de proteína MHC-Ib foi verificada em embriões (D7) e nas amostras de placenta utilizando anticorpo monoclonal de camundongo anti-Qa-2 marcado com FITC. A seqüência consenso obtida produziu alinhamentos significantes com os genes do complexo Bola que faz parte do MHC classe I bovino. O alinhamento entre a seqüência consenso e as seqüências de Q7 (Ped) e HLA-G publicados anteriormente demonstrou poucas variações de nucleotídeos entre as seqüências. As amplificações de cDNA de embriões que atingiram o quarto ciclo celular em até 48 hpi (R8) e em 48-90 hpi (L8) e de embriões que atingiram o estádio de blastocisto expandido em 7 dias de cultivo (RR) e em 9 dias de cultivo (RL) mostraram que o fragmento cuja seqüência apresenta alta similaridade ao gene Ped, está presente em embriões RR e RL, mas não em embriões no estádio de 8 células. Em placentas, o resultado da PCR mostrou a amplificação de oito fragmentos em diferentes fases da gestação. O sequenciamento dos fragmentos gerou nove seqüências consenso similares ao gene Ped e também a seqüências obtidas a partir de embriões bovinos. O alinhamento das seqüências mostrou a existência de duas isoformas contendo edição alternativa no exon 2 ou no exon 3. O resultado indicou a existência de polimorfismo ou mais de um gene com alta similaridade ao gene Q7 sendo transcritos durante o período gestacional. A expressão de proteína MHC-Ib foi verificada na membrana de células do trofoblasto e da MCI de embriões e na porção materno fetal de placentas, com uma maior expressão na porção fetal. Placentas oriundas de fetos clonados apresentam maior fluorescência comparada àquelas oriundas de monta natural. Este trabalho identificou, em embriões bovinos, um possível gene homólogo ao Ped murino e a expressão de proteína semelhante àquela codificada por este gene e conclui que existem vários transcritos com similaridade ao gene Q7 sendo expressos na região materno-fetal da placenta, durante a gestação em bovinos, assim como nos embriões / The aim of the present work was to identify bovine MHC class I genes similar to the murine Ped gene expressing during embryonic development and pregnancy. Bovine in vitro produced embryos and placentas obtained from natural mating or cloning-derived fetuses had their RNA extracted. cDNA was synthesized to isolate fragments showing similarity with the gene described in mice. Once isolated the fragments were purified or cloned into plasmids. The samples were sequenced and obtained sequences edited and compared to other sequences by means of the BLAST software. The expression of MHC-Ib protein was evaluated in embryos (D7) and in placentas using a FITC conjugated mouse monoclonal antibody anti-Qa-2. The consensus sequence amplified from blastocyst cDNA produced significant alignments with genes of the Bola complex, which is part of the bovine MHC class I. The alignment between the consensus sequence and the previously published Q7 and HLA-G sequences demonstrated little nucleotide variations among the sequences. The cDNA amplifications of embryos at the fourth cellular cicle in 48hpi (F8); 48-90hpi (S8) and embryos that reached blastocyst expanded stage in 7 days (FF); in 9 days (FS) showed that the Ped candidate gene is present in FF and FS but not in 8-cell embryos. In placentas, the PCR resulted in amplification of eight fragments at different pregnancy stages. Sequencing of the fragments generated nine consensus sequences, similar to the Ped gene and also to sequences obtained from bovine embryos. The alignment of the sequences showed the existence of two isoforms containing an alternative splicing on exon 2 or 3. This result indicates the existence of polymorphisms or that more than one gene with high similarity to the Q7 gene are transcribed during pregnancy. Expression of MHC-Ib protein was verified in trophoblast membrane and embryos inner cell mass cells and in the maternal-fetal portion in placentas, with a greater expression in the fetal portion. Cloned fetuses placentas presented grater fluorescence compared to natural mated. Overall this work identified in bovine embryos a possible gene homologous to the murine Ped and the expression of protein similar to that coded by this gene and concluded that there are many transcripts similar to the Q7 gene being expressed in the maternal-fetal region of the placenta during pregnancy in bovine and such as in embryos

O objetivo deste estudo foi comparar a cronologia de erupção dos dentes permanentes e os estágios de calcificação dos segundos molares nas másoclusões de Classe I e Classe II de Angle e avaliar a existência de correlação entre esses estágios de calcificação e as grandezas cefalométricas SNA, SNB, ANB, Co-A e Co-Gn. Para avaliar a cronologia de erupção dos dentes permanentes (com exceção dos terceiros molares), foram utilizados 527 pares de modelos de gesso de jovens na faixa etária dos 5 aos 13 anos de idade que foram divididos em dois grupos. O grupo 1 ficou constituído por modelos de gesso que apresentassem uma relação molar de Classe I de Angle, e o grupo 2, por aqueles que apresentassem uma relação molar de Classe II de Angle. A idade média de erupção dos dentes permanentes foi determinada pelo método de Karber. A comparação entre os grupos foi realizada por meio do teste t independente. Para avaliar os estágios de calcificação dos segundos molares e a existência de correlação com as grandezas cefalométricas SNA, SNB, ANB, Co-A e Co-Gn, foram utilizadas 60 radiografias panorâmicas e 60 telerradiografias em norma lateral dos mesmos jovens, obtidas aos 8 anos de idade. Estas radiografias também foram divididas em dois grupos. O grupo 1 ficou constituído por radiografias de jovens com relação molar de Classe I de Angle e o grupo 2 por radiografias de jovens com relação molar de Classe II de , Angle. Os estágios de calcificação dos segundos molares foram determinados pelo método de NOLLA. A comparação entre os grupos foi realizada por meio do teste não paramétrico de Mann-Whitney. Os resultados mostraram que, de uma maneira geral, os indivíduos com relação molar de Classe I de Angle apresentam idades de erupção dos dentes permanentes mais precoces que os indivíduos com relação molar de Classe II de Angle, e esta diferença foi estatisticamente significante para todos os segundos molares, além dos dentes 15, 23, 34 e 45. Não houve diferença estatisticamente significante entre os estágios de calcificação dos segundos molares nos grupos considerados e não houve correlação entre as variáveis cefalométricas estudadas e os estágios de calcificação em nenhum dos grupos. / The objective of this study was to compare the chronology of eruption of permanent teeth and the stages of calcification of the second molars in Angle Class I and Class II malocclusions, as well as to investigate if there is any correlation between these stages of calcification and the cephalometric measurements SNA, SNB, ANB, Co-A, Co-Gn. For evaluation of the chronology of eruption of permanent teeth (except for the third molars), 527 pairs of dental casts of young subjects aged 5 to 13 years old were employed, which were divided in two groups. Group 1 comprised dental casts presenting Angle Class I molar relationship, whereas Group 2 included those displaying an Angle Class II molar relationship. The mean age of eruption of the permanent teeth was determined by means of the Karber’s method. Comparison between groups was evaluated by the independent t test. For evaluation of the stages of calcification of the second molars and presence of correlation with the cephalometric measurements SNA, SNB, ANB, Co-A, Co-Gn, 60 panoramic radiographs and 60 lateral cephalograms of the same subjects were used, which had been obtained at 8 years old. These radiographs were also divided in two groups. Group 1 comprised radiographs of young individuals presenting Class I molar relationship, and Group 2 involved subjects with Class II molar relationship. The stages of calcification of the second molars were determined as suggested by Nolla. Comparison between groups was accomplished through the nonparametric Mann-Whitney’s test. The results demonstrated that, in general, individuals presenting Class I molar relationship presented earlier mean ages of eruption of the permanent teeth when compared to those subjects with Class II molar relationship. This difference was statistically significant for all second molars, as well as for the teeth 15, 23, 34 and 45. No statistically significant differences could be found between the stages of calcification of the second molars in the evaluated groups; moreover, there was no correlation between the cephalometric measurements analyzed and the stages of calcification for either group.

Este trabalho realizou uma comparação entre alguns dos principais códigos de transporte que empregam a abordagem estocástica de Monte Carlo para aplicação em cálculos dosimétricos em Medicina Nuclear. Foram analisados com detalhes os diversos modelos físicos e numéricos utilizados pelo código MCNP5 em relação códigos como Penelope e EGS. A identificação de suas potencialidades e limitações para solução de problemas microdosimétricos foram destacados. A metodologia condensada usada pelo MCNP resultou em valores para energia depositada normalmente menores, evidenciando uma conhecida característica do método das historias condensadas: o fato de subestimar tanto o número de colisões ao longo da trajetória do elétron quanto do número de partículas secundárias criadas. O uso de códigos de transporte como Penelope e MCNP em escalas micrométricas recebeu especial atenção neste trabalho. Códigos classe I e II foram estudados e seus principais recursos foram explorados visando o transporte de elétrons, que são de especial importância em dosimetria. Espera-se que a avaliação das metodologias disponíveis, aqui abordadas contribua para um maior entendimento do comportamento de tais códigos principalmente para esta classe de problemas, comuns em microdosimetria. / This study made a comparison between some of the major transport codes that employ the Monte Carlo stochastic approach in dosimetric calculations in nuclear medicine. We analyzed in detail the various physical and numerical models used by MCNP5 code in relation with codes like EGS and Penelope. The identification of its potential and limitations for solving microdosimetry problems were highlighted. The condensed history methodology used by MCNP resulted in lower values for energy deposition calculation. This showed a known feature of the condensed stories: its underestimates both the number of collisions along the trajectory of the electron and the number of secondary particles created. The use of transport codes like MCNP and Penelope for micrometer scales received special attention in this work. Class I and class II codes were studied and their main resources were exploited in order to transport electrons, which have particular importance in dosimetry. It is expected that the evaluation of available methodologies mentioned here contribute to a better understanding of the behavior of these codes, especially for this class of problems, common in microdosimetry.

O objetivo deste trabalho foi buscar genes MHC classe I em bovinos expressos durante o desenvolvimento embrionário e gestação que apresentassem similaridade ao gene Ped murino. Para tanto, embriões de PIV e placentas de fetos produzidos por monta natural ou clonados tiveram seu RNA extraído. A partir do RNA extraído foi realizada a produção de cDNA para tentar o isolamento de fragmentos com similaridade ao gene descrito em murinos. Uma vez isolados, os fragmentos foram purificados ou clonados em plasmídeo. As amostras foram seqüenciadas e as seqüências obtidas foram avaliadas, editadas e comparadas a outras seqüências pelo programa BLAST. A expressão de proteína MHC-Ib foi verificada em embriões (D7) e nas amostras de placenta utilizando anticorpo monoclonal de camundongo anti-Qa-2 marcado com FITC. A seqüência consenso obtida produziu alinhamentos significantes com os genes do complexo Bola que faz parte do MHC classe I bovino. O alinhamento entre a seqüência consenso e as seqüências de Q7 (Ped) e HLA-G publicados anteriormente demonstrou poucas variações de nucleotídeos entre as seqüências. As amplificações de cDNA de embriões que atingiram o quarto ciclo celular em até 48 hpi (R8) e em 48-90 hpi (L8) e de embriões que atingiram o estádio de blastocisto expandido em 7 dias de cultivo (RR) e em 9 dias de cultivo (RL) mostraram que o fragmento cuja seqüência apresenta alta similaridade ao gene Ped, está presente em embriões RR e RL, mas não em embriões no estádio de 8 células. Em placentas, o resultado da PCR mostrou a amplificação de oito fragmentos em diferentes fases da gestação. O sequenciamento dos fragmentos gerou nove seqüências consenso similares ao gene Ped e também a seqüências obtidas a partir de embriões bovinos. O alinhamento das seqüências mostrou a existência de duas isoformas contendo edição alternativa no exon 2 ou no exon 3. O resultado indicou a existência de polimorfismo ou mais de um gene com alta similaridade ao gene Q7 sendo transcritos durante o período gestacional. A expressão de proteína MHC-Ib foi verificada na membrana de células do trofoblasto e da MCI de embriões e na porção materno fetal de placentas, com uma maior expressão na porção fetal. Placentas oriundas de fetos clonados apresentam maior fluorescência comparada àquelas oriundas de monta natural. Este trabalho identificou, em embriões bovinos, um possível gene homólogo ao Ped murino e a expressão de proteína semelhante àquela codificada por este gene e conclui que existem vários transcritos com similaridade ao gene Q7 sendo expressos na região materno-fetal da placenta, durante a gestação em bovinos, assim como nos embriões / The aim of the present work was to identify bovine MHC class I genes similar to the murine Ped gene expressing during embryonic development and pregnancy. Bovine in vitro produced embryos and placentas obtained from natural mating or cloning-derived fetuses had their RNA extracted. cDNA was synthesized to isolate fragments showing similarity with the gene described in mice. Once isolated the fragments were purified or cloned into plasmids. The samples were sequenced and obtained sequences edited and compared to other sequences by means of the BLAST software. The expression of MHC-Ib protein was evaluated in embryos (D7) and in placentas using a FITC conjugated mouse monoclonal antibody anti-Qa-2. The consensus sequence amplified from blastocyst cDNA produced significant alignments with genes of the Bola complex, which is part of the bovine MHC class I. The alignment between the consensus sequence and the previously published Q7 and HLA-G sequences demonstrated little nucleotide variations among the sequences. The cDNA amplifications of embryos at the fourth cellular cicle in 48hpi (F8); 48-90hpi (S8) and embryos that reached blastocyst expanded stage in 7 days (FF); in 9 days (FS) showed that the Ped candidate gene is present in FF and FS but not in 8-cell embryos. In placentas, the PCR resulted in amplification of eight fragments at different pregnancy stages. Sequencing of the fragments generated nine consensus sequences, similar to the Ped gene and also to sequences obtained from bovine embryos. The alignment of the sequences showed the existence of two isoforms containing an alternative splicing on exon 2 or 3. This result indicates the existence of polymorphisms or that more than one gene with high similarity to the Q7 gene are transcribed during pregnancy. Expression of MHC-Ib protein was verified in trophoblast membrane and embryos inner cell mass cells and in the maternal-fetal portion in placentas, with a greater expression in the fetal portion. Cloned fetuses placentas presented grater fluorescence compared to natural mated. Overall this work identified in bovine embryos a possible gene homologous to the murine Ped and the expression of protein similar to that coded by this gene and concluded that there are many transcripts similar to the Q7 gene being expressed in the maternal-fetal region of the placenta during pregnancy in bovine and such as in embryos