A seqüência de nucleotídeos codificante do peptídeo derivado da hidrólise da canatoxina (jaburetox-2Ec), foi clonada e expressa nos sistema pET101/E. coli BL 21. Neste trabalho, estudamos a estabilidade dos plasmídeos da série pET contendo a seqüência codificante do jaburetox-2Ec no sistema de expressão E. coli BL 21 (Mulinari, 2004), e as condições para aumentar produção do peptídeo recombinante, avaliando a velocidade de transferência de oxigênio, o controle do pH, e a utilização da lactose como indutor em substituição ao IPTG. O cultivo da bactéria recombinante em incubadora orbital contendo 10 g/l de lactose como indutor produziu 1,26 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total após oito horas de cultivo. A estabilidade do plasmídeo e a expressão do peptídeo recombinante foram estudadas em biorreatores. A expressão do jaburetox-2Ec foi fortemente afetada pelo pH da cultura, com a diminuição de mais de 50 % da concentração desse peptídeo quando ocorre acidificação do meio de cultura. Da mesma forma, o aumento da aeração e agitação tem efeito negativo sobre a produção do peptídeo, diminuindo em sete vezes a produção do jaburetox-2Ec Apesar do aumento da biomassa devido ao cultivo da E. coli recombinante em meio mínimo, contendo como fonte de carbono a glicose, isto não representou aumento da concentração do peptídeo recombinante. Contudo, sob a melhor condição de cultivo em biorreator estudada (pH controlado e menor transferência de oxigênio), obteve-se uma produção de 7,14 μg de jaburetox-2Ec/mg de proteína total, representando em torno de 2 % da proteína total da célula. Em todas as bateladas, após atingir a máxima expressão do peptídeo, essa concentração diminui provavelmente devido à atividade das proteases da célula causando a degradação do peptídeo recombinante. A carga metabólica imposta à célula devido à expressão do jaburetox-2Ec, é uma das possíveis causas da instabilidade do plasmídeo observada em todas as bateladas.

As células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) são as células reprogramadas com fatores de transcrição, como Oct-4, Sox-2, Klf-4 e c-MYC (OSKM). As iPSCs são geralmente obtidas pela expressão ectópica de vetores retrovirais e lentivirais contendo os fatores transcricionais OSKM. No entanto, a utilização de sistemas de expressão virais pode levar a mutagênese de inserção e geração de células tumorais. Assim, é preferível que a reprogramação celular ocorra temporariamente por meio de fatores OSKM fusionados com sequências de peptideos para a transdução de proteínas. Neste sentido, os genes sintéticos codificadores de transdução de péptidos fusionados ao N ou C-terminal de OSKM pode ser obtido por ferramentas da bioinformática específicos e sintetizados utilizando técnicas químicas avançadas. Esses genes sintéticos podem ser aplicados para a síntese de proteínas utilizando tanto técnicas in vivo quanto in vitro. Assim, o objetivo deste trabalho foi gerar fatores OSKM fusionados a transportana (TP10) usando genes sintéticos e sistema de transcrição e de tradução in vivo. Além disso, três genes sintéticos adicionais também foram obtidos para expressão de Oct-4 contendo TP10 fusionado na região N-terminal (N-OCT4-TP10), C-terminal (C-OCT4-TP10), e sem TP10 (Oct-4). A expressão ectópica dos três genes sintéticos para Oct-4 foram testadas in vivo em duas diferentes linhagens comerciais de E. coli que expressam a enzima de T7 RNA polimerase. Os dados de Western blot indicaram que todos os genes sintéticos de Oct-4 foram capazes de produzir proteínas recombinantes. No entanto, a expressão mais elevada foi obtida com a construção N-OCT4-TP10. Além disso, as proteínas do fator de transcrição Oct-4 obtitdas foram avaliadas quanto a sua capacidade de ligação a sua respectiva seqüência-alvo de DNA sendo avaliada por meio dos extratos brutos das proteínas de E. coli contendo ou não Oct-4 proteínas ectópica. Os dados do ensaio de ligação demonstraram que todas as sequências de Oct-4 foram capazes de se ligar às suas sequências de reconhecimento. Em conclusão, as proteínas Oct-4 funcionais fusionadas com o peptideo o transdutor pode ser obtido a partir de genes sintéticos, permitindo potencialmente elaborar protocolos de reprogramação virais livres. / Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are reprogrammed cells with a transcription factors such as Oct-4, Sox-2, Klf-4, and c-MYC (OSKM). iPSCs are generally obtained by ectopic expression of retroviral and lentiviral vectors containing tOSKM. However, the use of viral expression systems can lead to insertional mutagenesis and generation of tumor cells. Thus, it is preferable to temporarily reprogram cell by means of OSKM factors fused to peptides sequences for protein transduction. In this sense, synthetic genes coding to transduction peptides fused to the N- or C-termini of OSKM can be designed by specific bioinformatics tools and synthesized using advanced chemical techniques. Those synthetic genes can be applied for protein synthesis using both in vivo and in vitro techniques. Thus, the objective of this work was to generate OSKM factors fused to transportan (TP10) using synthetic genes and in vivo transcription and translation systems. Moreover, three additional synthetic genes also were obtained for Oct-4 expression containing TP10 fused to: (i) N-terminus (N-OCT4-TP10), e, (ii) C-terminus (C-OCT4-TP10), and (iii) without TP10 (Oct-4). Ectopic expression of the three synthetic genes for Oct-4 was tested in vivo in two different commercial strains of E. coli expressing the enzyme T7 RNA polymerase. Western blot data indicated that the all Oct-4 synthetic genes were able to produce the recombinant protein. However, highest expression was obtained with the construction N-OCT4-TP10. Furthermore, the binding capacity of Oct-4 fusion proteins in these respective target DNA sequences was assessed by the evaluation of E. coli protein extracts containing or not ectopic Oct-4 fusion proteins. Data from binding assay demonstrated that all Oct-4 sequences are able to bind to its recognition sequences. In conclusion, functional Oct-4 proteins fused to transducer peptides can be obtained from synthetic genes, allowing to potentially design viral-free reprogramming protocols.

Orientadores: Wanderley Dias da Silveira, Marcelo Palma Sircili / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-17T16:00:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Maturana_VictorGoncalves_M.pdf: 5059455 bytes, checksum: b3305e2d1e0d658292aa1e194e68fb8f (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Escherichia coli patogênica para aves (APEC) causa diferentes tipos de infecções sistêmicas extraintestinais nestes hospedeiros, coletivamente denominadas colibaciloses, causando grandes prejuízos econômicos à indústria aviária. Essas doenças incluem, dentre outras, septicemia, onfalite, celulite e síndrome da cabeça inchada. Entretanto, não há até o momento wna descrição de genes ou características que permitam classificar as linhagens aviárias em patótipos responsáveis por causar doenças específicas em seus hospedeiros, a semelhança do que ocorre para linhagens de E. co/i patogênicas para seres humanos. O objetivo deste estudo foi caracterizar linhagens de Escherichia coli de origem aviána representantes de 4 grupos, sendo um grupo de linhagens comensais (AFEC - stgla em inglês para "Avian Fecal Escherichia co/i") e três grupos de linhagens patogêmcas, causadoras de três sindromes diferentes em seus hospedeiros (septicemia, síndrome da cabeça inchada e onfalite). Para o trabalho, as características biológicas estudadas foram: adesão em células eucarióticas, formação de biofilme, produção de molécula sinalizadora de quorum sensing, presença de genes de ilhas de patogenicidade, dose de letalidade (LD50), grupo filogenético e presença de genes de virulência. A comparação entre as diferentes linhagens com base nestes traços genotípicos e fenotípicos, por meio de diferentes ferramentas de estatística multivariada além de redes complexas, permitiu inferir a estrutura populacional do grupo estudado. Os resultados indicam que APEC não constitui um grupo homogêneo, mas um conjunto estruturado de diferentes subgrupos, cada um associado a uma síndrome infecciosa específica causada no hospedeiro, possivelmente definindo diferentes patótipos ou subpatótipos dentro de linhagens APEC. Assim, sugerimos a existência de um subpatótipo associado à onfalite, com características de letal idade semelhantes as de linhagens AFEC, mas com um padrão de adesão diferente, que pode ser atribuído a uma especialização do grupo relacionada a colonização de um nicho particular, o saco da gema do ovo. E um subpatótipo associado à síndrome da cabeça inchada, igualmente adaptado à patogenicidade, mas com características mais "agressivas" evidenciadas pelos altos índices de letalidade, grande número de genes de virulência e altos índices de adesão. Linhagens associadas à septicemia, contudo, não constituem um grupo coeso, sugerindo tratar-se de uma miscelânea de linhagens que podem pertencer a diferentes subpatótipos e que em última instância geram a síndrome sistêmica (septicemia), devido à evolução do quadro clínico e/ou às condições imunológicas do hospedeiro. Este trabalho é pioneiro em demonstrar a existência de subpatótipos dentro de linhagens APEC, relacionando diferentes síndromes infecciosas com grupos específicos de linhagens as quais possuem características fenotípicas e genotípicas particulares. Tais resultados abrem novas possibilidades no estudo de genes responsáveis pelos diferentes processos de patogênese em APEC, bem como no desenvolvimento de vacinas. Talvez seja importante considerar estes subgrupos no desenvolvimento de vacinas, com o intuito de produzir vacinas com proteção cruzada, o que ainda não foi atingido com sucesso para linhagens APEC. / Abstract: Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) cause different types of systemic extraintestinal infections in poultry, which are collectively termed colibacillosis, imposing significant economic casses for the avian industry Among these diseases are septicaemia, omphalitis, cellulites and swollen head syndrome. However, to the date, there is no description of genes or characteristics which allow us to classify avian strains in pathotypes responsible for causing specific diseases in their hosts, as there are for human pathogenic E. co/i strains. In this study we aimed to characterize avian pathogenic E. co/i strains representing 4 groups, one of commensal strains (AFEC - Avian Fecal Escherichia co/i) and 3 groups of pathogenic strains responsible for causing 3 different syndromes in their hosts (septicaemia, omphalitis and swollen head syndrome). The biological characteristics studied were: adhesion to eukaryotic cells, biofilm formation, capacity of synthesizing quorum sensing s1gnaling molecule, presence of pathogenicity island, pathogenicity levels according to lethal dose (50%) assay, phylogenetic group and presence of virulence genes. The comparison between strains based on these genotypic and phenotypic traits, by different multivariate statistics tools and complex network, allowed us to infer. the population structure of the studied group. The results indicate that APEC do not constitute a unique homogeneous group, but a structured set of different subgroups, each one associated to a specific infectious syndrome inflicted to the host, possibly defining pathotypes or subpathotypes within APEC strains. Thus, we suggest the existence of a subpathotype associated to omphalitis, with lethality characteristics similar to AFEC strains, but with a different adhesion pattem, which may be due to a specialization related to the colonization of a particular niche, the egg's yolk sac. Anda subpathotype associated to the swollen head syndrome, equally adapted to pathogenicity, but with more "aggressive" characteristics demonstrated by the high lethality and adhesion levels. Septicaemic strains, however, do not constitute a cohesive group, which suggests a constellation of strains associated to different subpathotypes and capable of, eventually, cause a systemic syndrome (sepsis), due to the clinical evolution of the illness ami/or host immunological conditions. This work is pioneer in demonstrating the existence of subpathotypes within APEC strains, relating different infectious syndromes to specific groups of strains possessing particular genotypic and phenotypic characteristics. These results offer new possibilities in studying the genes responsible for different pathogenesis processes within APEC and for the vaccine developing. It may be important to consider these subgroups in the process of vaccine developing, in the efforts for obtain cross protection, which had not yet being accomplished successfully concerning APEC strains. / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestre em Genética e Biologia Molecular

orientador: Domingos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-22T16:22:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pancetti_AlessandraRoque_M.pdf: 4244205 bytes, checksum: 53fdcd93d28647a26b93f7db9190a2f2 (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: Neste trabalho foram pesquisadas as melhores condições de cultivo e estocagem da amostra de Escherichia coli 86-6136 para a produção da Toxina Citoletal Distensora (CLDT), assim como o melhor método de extração e purificação para a caracterização parcial da toxina. Após o que, foi realizada a produção de anticorpos neutralizantes policlonais em coelhos albinos e a análise dos efeitos citopáticos e citotóxicos da CLDT em cultura de células. O melhor meio para cultivo da amostra 86-6136 encontrado foi o "Evans Toxin Medium", pois com este meio foi verificada a produção de CLDT em ensaios de atividade citotóxica em cultura de células, com efeito semelhante ao descrito em literatura. Os estudos de obtenção da toxina demonstraram que o método mais vantajoso para a extração era a ultrasonicação do sedimento bacteriano, pois dispendia menos tempo e havia boa recuperação da atividade citotóxica, quando comparado com os outros métodos empregados, além de existir ganho no rendimento de mais de 4 vezes em atividade específica e 2 vezes em citotoxicidade, quando comparado ao sobrenadante inicial. Após a extração, o material foi submetido a diversos processos cromatográficos (Deae-Sepharose Fast-Flow; CM-Sepharose Fast-Flow; Phenil Sepharose; Sepharose CL6B; Sepharose CL4B; Superdex 200). A cromatografia que teve mais relevância para melhorar o grau de pureza da amostra foi em Sepharose CL6B. A amostra, quando submetida a cromatografia nesta resina, mostrou padrão de eluição com 3 picos, sendo que a atividade biológica estava concentrada no primeiro pico. Em eletroforese com SDS-P AGE, o material contendo atividade biológica apresentou 3 bandas, com os pesos moleculares estimados em 38,8; 37,3 e 22,4 kDa. Não foram obtidos resultados em ensaios eletroforéticos em P AGE convencional. Os ensaios cromatográficos em Sepharose CL6B resultaram em aumento de 100 vezes na citotoxicidade da amostra, e 237 vezes em atividade relativa. Os ensaios em cromatografia líquida de alta performance (HPLC) em coluna Mono-Q não permitiram a recuperação da atividade citotóxica da toxina CLDT, e por isso foram abandonados. A atividade da toxina CLDT pôde ser observada em cultura de células Vero, HeLa e CHO. Apenas nas células CHO tanto o efeito citopático quanto o citotóxico foram observados. Em ensaios em células Vero e HeLa, o efeito de distensão celular não é evidente, e em células Vero, a viabilidade celular, ao final das 120 hrs de ensaio, é bem maior em relação às outras duas linhagens. A produção de anticorpo policlonal em coelhos albinos pôde ser verificada em teste de imunodifusão radial dupla, e sua capacidade neutralizante foi observada em ensaios de soroneutralização em cultura de células CHO. Os antissoros obtidos apresentaram atividade neutralizante do efeito citotóxico da toxina CLDT no título até 1/1024 / Abstract: In this work, the best conditions of culture and stock methods of EscherichiQ coli 86-6136 strain for the production of citolethal distending toxin (CLDT), as well as its partial characterization, were studied. The production of polyclonal antibodies in rabbits and the study of citophatic and citotoxic effects of CLDT in culture cells was determined. The best growth medium found for CLDT production was Casaminoacid- Yeast Extract CA YE), as determined by biological activity assays in culture cells. The best method for CLDT extraction was sonic disruption of the bacterial cells. Higher yield of citotoxic activity was reached when compared to other methods, in addition to 4-fold increased specific activity and 2-fold citotoxicity, compared to the initial culture supernatant. After bacterial cells disruption, the supernatant was cromatographed on several columns (Deae-Sepharose Fast-Flow; CM-Sepharose Fast-Flow; Phenil-Sepharose; Sepharose CL6B; Sepharose CL4B; Superdex 200). The best method for increasingpurity was Sepharose CL6B. The material was separated in three peaks spectrophotometrically detected (absorbance 280 nm) among these the first one displayed biological activity. On SDS-PAGE, this material exhibited three bands whose M.W. were 38.8, 37.3 and 22.4 kDa. After cromatography on Sepharose CL6B, the material displayed increased citotoxicity and relative activity of 100 and 237-fold, respectively. High-performance liquid chromatography (HPLC) on Mono-Q column resulted in unrecoverable biological activity. The CLDT biological activity could be observed in Vero, ReLa and CRO cultured cells. Only in CRO, both citophatic and citotoxic effects could be observed. In Vero and HeLa cells the cellular progressive distention could not be observed and in Vero cells cellular viability was higher than in the other cells after 120 hr. Production of polyclonal antibodies was verified in Ouchterlony test and its neutralization capability was determined in seraneutralization tests in CHO cells. The sera obtained was shown to neutralize citotoxic activity of CLDT up to the 1/1024 dilution / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Tomomasa Yano / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T11:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DellaColleta_HeloisaHelenaMithie_M.pdf: 7792651 bytes, checksum: ff84cc76671c0361c593dd32f633470a (MD5) Previous issue date: 1997 / Resumo: o Fator Necrosante Citotóxico do tipo 2 (CNF 2) foi obtido através do rompimento celular bacteriano por ultra-som. Após a extração, purificou-se o CNF 2 por precipitação com sulfato de amônia, cromatografia em resina de troca aniônica Q­ Sepharose Fast Flow e em resina de gel filtração molecular Superdex 200. A atividade específica do CNF 2 purificado foi de 2.925 e o grau de pureza do material aumentou em tomo de 8.000 vezes. Ensaios de caracterização sorológica foram realizados com antissoros de coelho e camundongo. Os antissoros produzido_ contra CNF 2 foram capazes de inibir o efeito citotóxico de CNF 1 e CNF 2, sendo. que o título neutralizante foi maior contra o seu homólogo. Os antissoros, porém, não inibiram as atividades biológicas de VT 1, VT 2 e L T I. Em ensaios de imunodifusão radial, os antissoros reconheceram tanto CNF 1 como CNF 2, apresentando identidade parcial entre eles. Quando o antissoro foi absorvido com extrato sonicado de CNF 1, este passou a não mais reconhecer CNF 1. Nos ensaios de ELIS_ "wersten-blot" e "dot-ELISA" os antissoros não se mostraram específicos, reconhecendo além de CNF 2, CNF 1, VT 1, VT 2 e L T I. Foram realizados ensaios de caracterização do efeito biológico de CNF 2, que revelaram que esta toxina foi capaz de causar necrose em pele de coelho e em pata de camundongo. O efeito de multinucleação celular foi observado em células Vero e em células HeLa, sendo que em células Vero este efeito foi mais claramente observado; nas células HeLa foi possível observar aumento de células multinuc1eadas, que já eram observadas nos controles. Foi possível observar também, que a toxina leva ao acúmulo de RNA nos núcleos e à formação de grandes vacúolos ao redor do núcleo. Em ensaios de marcação dos componentes do citoesqueleto, foi possível verificar que, após 8 horas de tratamento com CNF 2, as células apresentam alterações dos filamentos de actina, com formação de fibras de estresse. Esse efeito aumenta conforme o teste é prolongado. Quanto aos microtúbulos, não foram observadas alterações claras. Parece ocorrer apenas uma adaptação destes filamentos à presença de mais de um núcleo. o estudo epidemiológico revelou que havia produção de CNF em 19,05% das amostras isoladas de fezes de bezerros e que, das amostras produtoras de CNF, 30,77% produziram também et.-hemolisina / Mestrado / Microbiologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Mauro Faber de Freitas Leitão / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-27T02:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Manhani_MariaRaquel_M.pdf: 18520155 bytes, checksum: 830e7262a88a35f98894c3dc5dffee65 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: A etapa inicial deste trabalho consistiu na avaliação da resistência de uma cepa de Escherichia colí 0157:H7 e da microbiota contaminante de queijo Minas frescaI a antibióticos utilizados para conferir seletividade a meios de isolamento dessa bactéria. Observou-se que E colí 0157:H7 mostrou sensibilidade a concentrações de novobiocina superiores a 30 mg/L, sendo desaconselhável o uso de 100 mg/L, conforme preconizado em alguns meios de isolamento. Como o microrganismo mostrou-se menos tolerante à combinação de três antibióticos (cefixima a 0,05 mg/L, cefsuloqina a 10 mg/L e vancomicina a 8 mg/L) do que a microbiota contaminante do queijo frescal, tornou-se questionável a indicação do uso desses antibióticos para conferir seletividade aos meios de isolamento da bactéria. Em outra etapa foram avaliados os meios seletivos MacConkey sorbitol modificado, HC de acordo com 8zabo et aI. (1986), Rainbow 0157, EMB modificado e 8039 modificado, suplementados ou não com cefixima (0,05 mg/L) e telurito de potássio (2,5 mg/L), na contagem de Ecolí 0157:H7, inoculada experimentalmente em amostras de queijo Minas frescal e de leite, submetidas ou não a tratamento térmico. Os resultados revelaram a inadequação de todos esses meios nas contagens de amostras apresentando elevada contaminação (sem tratamento térmico). Nas amostras com contaminação baixa (tratadas termicamente), os meios HC e 8039 modificado, ambos suplementados, revelaram desempenho superior na análise de queijo (95,9 e 95,0 % de recuperação, respectivamente). Na análise de leite, o HC foi o mais eficiente, levando a 85,3% de recuperação. A técnica do Número Mais Provável revelou-se deficiente e pouco prática na contagem de E colí 0157:H7 em amostras de queijo, não representando, portanto, uma alternativa recomendável. Na avaliação qualitativa de Ecolí 0157:H7 foram avaliados os enriquecimentos em caldo BPW + 3 antibióticos, segundo Blanco et aI. (1996), em meio mEC+n segundo Okrend & Rose (1989), em meio mT8B segundo Padhye & Ooyle (1991), além do método proposto pelo FOA (1998) e o método imunoenzimático TECRA@. Na análise de amostras de queijo Minas frescal inoculadas experimentalmente, nenhum dos sistemas revelou desempenho altamente satisfatório. No entanto, entre as metodologias clássicas testadas, a do FDA mostrou-se superior, enquanto o método TECRA@foi aquele que, comparativamente, possibilitou a maior porcentagem de isolamentos e menor índice de resultados falso-negativos. Na análise de 60 amostras de queijo Minas frescal, submetidas ou não a inspeção federal, nenhuma delas revelou a presença de E. coli 0157:H7. Os resultados obtidos indicaram a necessidade de se aperfeiç.oar a metodologia para a pesquisa deste patógeno em alimentos, principalmente naqueles cuja microbiota contaminante apresenta-se em números elevados / Abstract: In a first experiment, it was evaluated the tolerance of Escheríchía colí 0157:H7 and natural contaminants found in Minas frescaI cheese to antibiotics used in selective culture media. It was noticed that E. colí 0157:H7 exhibited low tolerance to novobiocin concentrations above 30 mg/L, although the use of 100 mg/L is indicated in some isolation media. The microorganism was less tolerant to antibiotic combination (cefixime at 0,05 mg/L, cefsulodin at 1O mg/L and vancomincin at 8 mg/L) when compared to the natural contaminant cheese microflora what could be a drawback concerning the use of these agents in selective culture media. In a second experiment, the selective media MacConkey sorbitol (modified), HC according to Szabo (1990), Rainbow 0157, modified EMB and modified S039, supplemented or not with cefixime (0,05 mg/L) and potassium telurite (2,5 mg/L) were evaluated for E. colí 0157:H7 counting, with the bacterium inoculated in Minas frescal cheese and milk samples, both submitted or not to thermal treatment. Ali the tested media were inadequate when used for bacterial counts in the samples with high natural contamination (without thermal treatment). However, when the cheese samples with lower contamination were analyzed, the media HC and modified S039, both supplemented, showed superior performance (95,9 and 95,0% recovery, respectively). In milk analysis, HC medium was the most efficient (85,3% recovery). The Most Probable Number technique showed an inadequate performance for E. colí 0157:H7 counts. For the qualitative evaluation of E. coli 0157:H7 it was evaluated BPW+3 antibiotics broth according to Blanco et a/. (1996), mEC+n (Okrend & Rose, 1989), mTSB (Padhye & Ooyle, 1991), FOA proposed method (1998) and the immunoenzimatic method TECRA@.None of the tested methods showed superior performance for E. calí 0157:H7 recovery in inoculated cheese samples in the presence of the natural microflora. However the FDA method was the most efficient among the classical ones, while the TECRA@ assay was the best concerning E. calí 0157:H7 recovery and no false negative results. The results suggest the need for improvment in the methodology for E. calí / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Orientador : Domingos da Silva Leite / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-28T21:10:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penatti_MarioPauloAmante_M.pdf: 2606360 bytes, checksum: d5aff3af7c7d005e94ec179b684a471b (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Orientador : Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-01T20:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Campos_TatianaAmabilede_M.pdf: 4297447 bytes, checksum: c078f5098bf0b5358810269be795f8b0 (MD5) Previous issue date: 2002 / Mestrado

Orientador : Antonio Fernando Pestana de Castro / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-02T14:05:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Penteado_AdrianadeSousa_D.pdf: 4795467 bytes, checksum: 364853d1fabfe642be1badec07bbada3 (MD5) Previous issue date: 2002 / Doutorado

Orientadora: Laura Maria Mariscal Ottoboni / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-03T16:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Orsi_RenatoHohl_M.pdf: 4854669 bytes, checksum: 67d18ea04dea6cb272654a5aefb0afc0 (MD5) Previous issue date: 2003 / Mestrado