El presente trabajo es un estudio correlacional de tipo retrospectivo, de casos y controles, siendo 39 pacientes con cáncer colorrectal del tipo histológico mucinoso los que conforman el grupo de los casos y dos grupos de 117 pacientes cado uno, el primero de pacientes con cáncer colorrectal de otro tipo histológico y el segundo de pacientes con patología digestiva benigna, que conforman los controles; coleccionados entre los años 2002 y 2008 en el Hospital Nacional Edgardo Rebagliati Martins. Se determinó la asociación de los factores de riesgo como: la edad, el género, de riesgo el consumo de tabaco, el consumo de alcohol, la irradiación pélvica, la colecistectomía, el tipo de dieta, la obesidad, otros tipos de cáncer previos, la raza, algunas características clínicopatológicas tales como: la localización del tumor, el grado de diferenciación, el estadio de la enfermedad al momento del diagnóstico y la respuesta al tratamiento recibido; y el cáncer colorrrectal de tipo histológico mucinoso. Al analizar las varaibles mencionadoas se determino que la edad cada vez mayor es una factor de riesgo asociado con mayor probabilidad de cáncer no mucinoso, en tanto la variable obesidad es un factor asociado con mayor probabilidad al cáncer mucinoso. En cuanto a la localización del tumor existe asociación entre el cáncer colorrectal de tipo histológico mucinoso y la localización proximal del colon. El grado de diferenciación moderado y el estadio IIA se encontraron con más frecuencia en este estudio. La sobrevida para los tumores de tipo mucinoso es menor que para los otros tipos histológicos a pesar que la diferencia no llegue a ser significativa.

Objetivo: Determinar el valor diagnóstico de la colonoscopia virtual en la detección de pólipos colorrectales en el Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen. Diseño: Estudio observacional, descriptivo, retrospectivo y de corte transversal. Institución: Hospital Nacional Guillermo Almenara Irigoyen, Lima, Perú. Materiales: Historias Clínicas. Intervenciones:Estudio de historias clínicas de pacientes con una muestra poblacional, no probabilística de los cuales por no cumplir con los criterios de inclusión quedaron un total de 50 historias clínicas, de los cuales 29 son de sexo masculino y 21 de sexo femenino los cuales se encuentran dentro de un rango de edades, entre 50 - 80 años. La muestra se obtuvo revisando cada historia clínica los cuales cumplían los criterios de inclusión, estos presentaban un informe de Colonoscopia Virtual y Colonoscopia Convencional entre el periodo enero 2013-agosto del 2014. Principales medidas de resultados: Sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo de la colonoscopia virtual. Resultados: con los datos recabados, se calculó el valor diagnóstico de la colonoscopia virtual para la detección de pólipo colorrectal. La sensibilidad de la colonoscopia virtual es de 90,0%(IC95%,59,6%-98,2%) y una especificidad de 97,5%(IC 95%, 92,8%- 99.1%) con un valor predictivo positivo de 75,0%(IC 95%, 46,8% -91,1%) y un valor predictivo negativo de 99,1%(IC 95%, 95,3% - 99,8%) para el diagnóstico de pólipo colorrectal. Conclusiones: La colonoscopia virtual es un buen método para determinar si el paciente presenta o no pólipo colorrectal. Palabras claves: pólipo colorrectal, colonoscopia virtual y colonoscopia convencional. / --- Objective: To determine the diagnostic value of virtual colonoscopy in the detection of colorectal polyps at the National Hospital Guillermo Almenara Irigoyen. Design: Observational, descriptive, retrospective and cross-sectional study. Institution: National Hospital Guillermo Almenara Irigoyen, Lima, Peru. Materials: Medical Records. Interventions: study of medical records of patients with a sample population, which no probabilistic for not meeting the inclusion criteria were a total of 50 medical records, of which 29 were male and 21 female which within a range of ages, from 50– 80 years. The sample was obtained by reviewing medical records each of which met the inclusion criteria, they presented a report of the virtual colonoscopy and conventional colonoscopy between January 2013 - august 2014. Main outcome measures: Sensitivity, specificity, positive and negative predictive value of virtual colonoscopy. Results: With the data collected, the diagnostic value of virtual colonoscopy for evaluation of colorectal polyps was calculated. virtual colonoscopy sensitivity is 90,0% (95% CI 59,6% to 98.2%) and a specificity of 97,5% (95% CI 92,8% to 99,1%) with a positive predictive value of 75,0% (95% CI, 46,8% to 91.1%) and a negative predictive value of 99.1% (95% CI 95,3% to 99,8%) for the diagnosis of colorectal polyps. Conclusions: virtual colonoscopy is a good method to determine whether or not the patient has colorectal polyps. Keywords: colorectal polyps, virtual colonoscopy and conventional colonoscopy.

Introducción y objetivos: El cáncer colorrectal (CCR) constituye el tumor más frecuente en el mundo occidental. Así mismo, posee una historia natural conocida, con lesiones precursoras establecidas, y se disponen de procedimientos de cribado eficaces y costo-efectivos, siendo la colonoscopia de cribado el principal de ellos. Por todo ello, es fundamental conocer qué factores relacionados con la calidad de la colonoscopia o las lesiones halladas en la misma se asocian con un mayor riesgo de CCR metacrónico. Los objetivos de los artículos que componen la presente tesis doctoral son: en primer lugar, evaluar la eficacia de una preparación colónica con 1L de polietilenglicol (PEG) en pacientes con alto riesgo para limpieza colónica inadecuada; en segundo lugar, determinar la rentabilidad diagnóstica de la colonoscopia de revisión precoz en pacientes con limpieza colónica subóptima; en tercer lugar, establecer qué características de riesgo de los adenomas se asocian con un mayor riesgo de CCR o adenomas avanzados (AA) metacrónicos; y por último, describir las tasas y características del CCR post-colonoscopia (CCRPC), así como qué factores de la colonoscopia basal podrían relacionarse con su aparición. Métodos: En primer lugar, se realizó un estudio observacional retrospectivo mediante un análisis post-hoc de 2 ensayos clínicos aleatorizados (MORA y NOCT). Se describió la eficacia del régimen de limpieza con PEG 1L y se realizó un estudio comparativo de PEG 1L respecto a otros regímenes en pacientes con un riesgo máximo de limpieza inadecuada (varones obesos >60 años), tanto en tasas de limpieza adecuada como de detección de lesiones. La limpieza colónica se evaluó por endoscopistas y lectores centrales mediante la escala Harefield (HCS). El segundo artículo es un estudio observacional retrospectivo de pacientes con limpieza subóptima en la colonoscopia de cribado y una colonoscopia de revisión precoz en 1 año. La limpieza subóptima se definió como una puntuación en la escala de Boston (BBPS) de 1 en cualquier segmento. Se excluyeron pacientes con BBPS=0 o colonoscopia incompleta. Se describieron las tasas de detección de adenomas (TDA) y AA (TDAA) en la colonoscopia índice y de revisión, así como los cambios en las recomendaciones de vigilancia post-polipectomía. El tercer artículo es una revisión sistemática y metaanálisis de estudios de cohortes y ensayos clínicos que describieran la incidencia de AA o CCR en la vigilancia estratificados según las características de riesgo de los adenomas basales (tamaño, histología y multiplicidad). Se calcularon las incidencias por 1,000 personas-año (p-a) para cada característica de riesgo, así como los riesgos relativos (RR) y sus intervalos de confianza (IC) 95% usando un modelo de efectos aleatorios, en comparación con adenomas no avanzados (ANA) o colonoscopia normal. En el último estudio, observacional retrospectivo, se calcularon las tasas de CCR que aparecen hasta 10 años tras una colonoscopia (CCRPC) y se clasificaron según su explicación más plausible con la metodología de la World Endoscopy Organization (WEO). Finalmente se comparó la población con CCRPC con una cohorte control sin CCR apareada 1:4 por sexo, edad, fecha, indicación, endoscopista y centro de la colonoscopia basal. Resultados: En el primer estudio, se evidenciaron altas tasas de limpieza adecuada en 551 pacientes preparados con PEG 1L, entre el 87% y el 94%, incluso en pacientes añosos, obesos, o diabéticos. En el subgrupo de mayor riesgo para limpieza inadecuada, PEG 1L consiguió mayores tasas de limpieza adecuada respecto a otras preparaciones (73% vs 50%, p=0.033) según la valoración de los endoscopistas, sin diferencias según los lectores centrales. Así mismo, se evidenciaron unas mayores tasas de adenoma por paciente (p=0.041) y detección de >5 adenomas (p=0.047) con PEG 1L, sin diferencias en la TDA. En el segundo estudio, 259 pacientes presentaron limpieza subóptima en la colonoscopia de cribado y se realizaron la colonoscopia de revisión precoz, con una TDA de 38.7%, TDAA de 14.9%. La tasa de adenomas y AA perdidos fue 27.7%, y 17.6%, respectivamente. Tras la revisión, la recomendación de vigilancia cambió de 10 a 3 años en el 14.7% de los pacientes con recomendación previa a 10 años. Respecto al tercer estudio, se incluyeron 55 estudios y 936,540 pacientes, con un seguimiento medio de 5.4 años. La incidencia de CCR por 1000 p-a fue 2.6 (2.1–3.0) para adenomas >20 mm, 2.7 (2.2–3.2) para displasia de alto grado (DAG), 2.0 (1.8–2.3) para componente velloso, 0.8 (0.1-1.4) para >5 adenomas, 1.0 (0.7–1.2) para >3 adenomas. El riesgo de CCR metacrónico fue mayor para adenomas >20mmvs 10-19mm (RR, 2.08; IC 95% 1.20–3.61), DAG vs displasia de bajo grado (RR, 2.89; IC 95% 1.88–4.44), velloso vs tubular (RR, 1.75; IC 95% 1.33–2.31), sin diferencias significativas al comparar >3 adenomas vs 1-2 (RR, 1.24; IC 95%, 0.84–1.83), ni >5 vs 3-4 (RR, 0.79; 95%, 0.30–2.11). Tendencias similares se evidenciaron en el riesgo de AA metacrónico. Finalmente, en el cuarto estudio, se detectaron 107 CCRPC en 101,524 colonoscopias (0.1%), con tasas del 0.4%, 2.2%, 3.1% y 4.1% a 1, 3, 5 y 10 años, respectivamente. Según la WEO, 20.3% se clasificaron como resección incompleta, 5.4% como lesiones visualizadas no resecadas, 25.7% como lesiones no visualizadas en una colonoscopia previa inadecuada y 48.6% como lesiones no visualizadas en una colonoscopia previa adecuada. La preparación inadecuada [Odds Ratio (OR) 3.05, IC 95% 1.73-5.36] y resección fragmentada previa (OR 19.89, IC 95% 8.67-45.61) se asociaron de forma independiente con el desarrollo de CCRPC. Conclusiones: De los estudios que componen la presente tesis se puede concluir que la preparación con PEG 1L ofrece altas tasas de limpieza adecuada incluso en subgrupos con alto riesgo de limpieza inadecuada, mejorando la detección de lesiones; que los pacientes con limpieza subóptima en la colonoscopia de cribado presentan altas TDA y TDAA en la colonoscopia de revisión precoz, con importantes cambios en las recomendaciones de vigilancia post-polipectomía; que los pacientes con adenomas basales >20mm o con DAG tienen un riesgo elevado de CCR metacrónico, mientras que la multiplicidad no impacta en el riesgo de CCR a corto plazo; y que la mayoría de CCRPC se deben a lesiones no visualizadas en una colonoscopia previa adecuada, relacionándose estas lesiones con la limpieza inadecuada y la resección fragmentada.

Seminario de Título para optar al Título de Ingeniera en Biotecnología Molecular. / La enzima convertidora de endotelina-1 (ECE-1) es una metaloproteasa de membrana encargada de la conversión del péptido Endotelina-1 a su forma activa. Presenta cuatro isoformas, las cuales solo difieren en sus extremos citoplasmáticos N-terminales. Elevados niveles de expresión de ECE-1 han sido reportados en diferentes cánceres, siendo solo la isoforma ECE-1c asociada a características malignas en líneas celulares de cáncer de próstata y de colon. Resultados de nuestro grupo señalan que la fosforilación de ECE-1c en sus residuos Thr-9, Ser-18 y Ser-20, promueve la estabilidad al evitar su degradación proteasomal, aumentando además la capacidad invasiva de células de cáncer colorrectal DLD-1 de manera dependiente de la caseína kinasa-2 (CK2). Pese a que solo se comprobó la fosforilación de Ser-18 y Ser-20 por CK2, resultados obtenidos usando mutantes fosfo miméticas de estos dos residuos y una mutante súper estable de ECE-1c, hacen sospechar que el residuo Thr-9 estaría involucrado en el aumento de la estabilidad y sus efectos celulares. De esta manera, el objetivo general fue determinar el efecto de la fosforilación del residuo Thr-9 en la estabilidad proteica de ECE-1c y su participación en el potencial migratorio y tumorigénico de células de cáncer de colon DLD-1. Mediante ensayos de estabilidad proteica se determinó que la fosforilación en Thr-9 aumenta la estabilidad de ECE-1c incluso en presencia de un inhibidor de CK2. Además, se observó que la fosforilación en Thr-9 promueve la capacidad migratoria y tumorigénica de células DLD-1. Los resultados funcionales obtenidos en este trabajo constituyen el primer paso xiii en el estudio del mecanismo mediante el cual ECE-1c promueve proliferación, invasión y tumorigénesis en células de cáncer colorrectal DLD-1.

El cáncer colorrectal representa una de las patologías neoplásicas más frecuentes en nuestro medio. La afectación de los ganglios linfáticos es el factor pronóstico más importante de esta enfermedad. Alrededor de un 30 % de pacientes tratados quirúrgicamente con intención curativa y sin afectación ganglionar, presentarán recurrencia de su enfermedad. Las metástasis no detectadas en el estudio histopatológico convencional pueden ser la explicación de estos fallos terapéuticos. Los objetivos de esta tesis son:1. Identificar micrometástasis en ganglios linfáticos de pacientes con cáncer colorrectal sometidos a cirugía resectiva con intención curativa, mediante técnicas de inmunohistoquimia y RT-PCR, determinando la existencia de citokeratina 20 por ambas técnicas. 2. Evaluar el estadiaje de los pacientes con cada una de las técnicas, la convencional con tinción de hematoxilina eosina, y el obtenido mediante las técnicas de inmunohistoquimia y RT-PCR3. Determinar la implicación clínica del re-estadiaje con las nuevas técnicas, respecto al periodo libre de enfermedad y a la tasa de recurrencias de la misma durante el seguimiento a los cinco años. Se incluyeron 100 pacientes intervenidos de forma electiva por cáncer colorrectal en el Servicio de Cirugía General del Hospital Universitario Mútua de Terrassa, en Terrassa, Barcelona. Se excluyeron los pacientes intervenidos de urgencias, aquellos que presentaron metástasis a distancia en el momento del diagnóstico y a los que no se practicó cirugía con criterio oncológico. Se han incluido dos pacientes control (sin patología colónica maligna) para estudio específico de micrometástasis en ganglio linfático mediante inmunohistoquimia y RT-PCR.En el apartado de método se describe la técnica de linfadenectomía ultilizada así como el procesamiento del material linfático para la obtención del estadio ganglionar por las tres técnicas antes mencionadas. El tratamiento complementario de los pacientes se decidió en base al estadiaje fijado por el estudio histopatológico convencional con hematoxilina-Eosina. Se describe la batería de pruebas y programación de visitas efectuadas durante el control postoperatorio de los pacientes estudiados.La histopatología convencional, no clasificó correctamente el 37,5% de los pacientes que posteriormente fallecieron a causa de su enfermedad y el 50% de los pacientes que presentaron recidiva durante el seguimiento. La utilización de técnicas específicas para la identificación de micrometástasis puso de manifiesto la existencia de células neoplásicas en ganglios linfáticos clasificados como libres de enfermedad por la histopatología convencional. Mediante inmunohistoquimia se produjo un re-estadiaje del 13% de los pacientes. Por RT-PCR se alcanzó una re-estadificación del 41% de los pacientes.La determinación de micrometástasis mediante inmunohistoquimia no orientó en la identificación de pacientes a riesgo de sufrir recidiva de su enfermedad o muerte por cáncer colorrectal. Sin embargo, la detección de micrometástasis mediante RT-PCR fue positiva en el 88% (14 pacientes) de los pacientes que posteriormente desarrollaron una recidiva y en el 100% de los pacientes que presentaron muerte a causa de la evolución de su enfermedad.Según los resultados derivados de este estudio, se podría considerar la detección de micrometástasis por RT-PCR, una buena herramienta para la identificación de pacientes afectos de cáncer colorrectal en estadio II con factores de riesgo de mala evolución de su enfermedad. / Colorectal cancer is one of the most frequent malignant pathologies in our media. Lymph node involvement is the most important prognostic factor of this illness. Around 30 % of patients submitted to surgical procedures with curative intention and without lymph node involvement, will have recurrence of their neoplasm. Metastatic illness no detected in the former hystopathological study could be the explanation of these therapeutic mistakes.The objectives of this thesis are:1. To identify lymph node micrometastases in colorrectal cancers from patients submitted to oncologic resections with curative intention, by immunohistochemical and RT-PCR technique, determining cytokeratin 20 by both techniques2. To evaluate the new stage obtained by each technique, the conventional hematoxylin-eosin staining and the staging obtained with the specific techniques: immunohistochemestry and RT-PCR3. To determine if re-staging with specific techniques has clinical relevance in relation to free illness period and to relapse index during a follow up of five years. One hundred patients submitted to elective surgery for colorectal cancer were included. The study was developed in the Colorrectal Unit from General Surgery Department, Hospital Universitario Mútua Terrassa, in Terrassa, Barcelona. Patients with non-elective surgery, those with metastases at the moment of diagnostic and patients with a non-oncological resection (R0) were excluded. Two control patients (without malignant colorectal pathology) were included for specific study of micrometastases in lymph node by mean immunohistochemestry and RT-PCR. The methodology for lymphadenectomy is described as well as the hole process to get staging by the three techniques. Complementary treatment with chemotherapy was establish by hematoxylin-eosin hystopathological study. The follow up control during the study was describedHystopathological study didn't classify 37,5% of patients who lately will die because colorectal cancer progression during follow up and 50% of patients with recurrence o the illness.The use of specific techniques for micrometastases identification showed malignant cells in lymph nodes classify as free of illness by hematoxylin-eosin. Immunohistochemestry reclassified 13% of patients and RT-PCR 41% of patients.Micrometastases detection by immunohistochemestry didn't help top identify those patients with high risk of recurrence or who died because of colorrectal cancer. However, micrometastases detection by RT-PCR was positive in 88% (14 patients) of patients who will develop recurrence and in 100% of patients who will die because colorrectal cancer.The results of these study suggests that micrometastases detection by RT-PCR technique, could be in the future a promising method to identify patients with hystopathological stage II colorectal cancer with risk factors of poor prognosis.

Durante más de 40 años el 5-Fluorouracilo (5-FU), inhibidor de la Timidilato Sintasa (TS), ha sido la terapia estándar en el tratamiento del cáncer colorrectal (CCR). Uno de los principales obstáculos en el tratamiento es la resistencia a quimioterapia. Numerosos estudios demuestran que la resistencia a 5-FU es un evento multifactorial que incluye alteraciones en el transporte, el metabolismo, la diana terapéutica, el ciclo celular y los mecanismos de apoptosis. La sobreexpresión del gen TS correlaciona clínicamente con la resistencia a 5-FU. En el presente estudio se generaron dos líneas resistentes a 5-FU (HT29-5FUR y LoVo-5FUR) por exposición continuada a dosis creciente del fármaco. Dichas líneas presentaron un patrón del ciclo celular y tiempos de duplicación comparables a los de sus homólogas sensibles (HT29 y LoVo, respectivamente). Mostraron entre 5 y 3 veces más resistencia a 5-FU que sus correspondientes homólogas sensibles. No se hallaron diferencias en la sensibilidad de estas líneas al Oxaliplatino (OXA). En cambio, la línea LoVo-5FUR mostró un patrón de resistencia cruzada a Inhibidores de la Topoisomerasa I (TPT, C PT-11 y SN38). La adaptación de las líneas al 5-FU no alteró el estado de la p53 ni el fenotipo de errores de replicación (RER). El fenotipo de resistencia a 5-FU en estas líneas correlacionó con la sobreexpresión de TS (ARNm y proteína) aunque no se observó un proceso de amplificación génica. El análisis genómico comparativo (CGH) mostró la existencia de anormalidades genéticas (ganancias/pérdidas) en las líneas resistentes a 5-FU comparadas a sus respectivas homólogas sensibles que podrían estar potencialmente implicadas en la adquisición de la resistencia a 5-FU.El Oxaliplatino y los inhibidores de Topoisomerasa I (TPT y CPT-11) son agentes citotóxicos con actividad antitumoral en el CCR. En el presente estudio, también se evaluó la citotoxicidad de las asociaciones entre OXA y 5-FU o TPT en un panel de líneas celulares derivadas de tumores colorrectales sensibles (HT29, LoVo, DLD-1 y LS-513) y resistentes a 5-FU (HT29-5FUR y LoVo-5FUR). Asimismo se analizó la expresión de TS (ARNm y proteína) y Topoisomerasa I (Topo I; ARNm) tras la exposición a OXA como parámetros directamente relacionados con la sensibilidad al 5-FU e inhibidores de Topo I respectivamente, en las parejas sensibles/resistentes. Los esquemas secuenciales analizados fueron: OXA(4h)®5-FU(24h); 5-FU(24h)®OXA(4h); OXA(4h)®TPT(24h); TPT(24h)®OXA(4h) y OXA(4h)®5-FU (5 días a las dosis a las que se indujo la resistencia en las parejas sensible/resistente). Todas las combinaciones resultaron sinérgicas a dosis moderadas de ambos fármacos, únicamente la asociación 5-FU®OXA en la línea LoVo-5FUR resultó aditiva para cualquier fracción de inhibición. La sinergia fue además independiente del fenotipo de resistencia a 5-FU, del estado del sistema reparador del ADN y/o del estado de p53. La exposición previa a OXA en los esquemas OXA®5-FU y OXA®TPT permitió reducir las dosis de 5-FU y TPT en combinación en las líneas resistentes hasta niveles similares a los requeridos por las correspondientes líneas sensibles, revirtiendo el fenotipo de resistencia a 5-FU y permitiendo en el caso de la línea LoVo-5FUR sobrepasar el fenotipo de resistencia cruzada a Inhibidores de Topo I. La exposición a OXA, administrado como agente único provoca una caída de los niveles de TS (ARNm y proteína) en todas las líneas celulares analizadas. Durante la exposición a 5-FU se observó una sobreexpresión de los niveles de TS en todas las líneas celulares, aunque este incremento fue mucho menor en el esquema OXA®5-FU (entre 3 y 5 veces) comparado con el obtenido para la exposición a 5-FU como agente único. Estos resultados correlacionaron con la actividad sinérgica observada para la asociación OXA®5-FU. La exposición previa a OXA también indujo una disminución en los niveles de expresión de Topo I que correlacionó con la disminución en la dosis de TPT en la combinación OXA®TPT. Estos resultados también sugieren que la administración de los inhibidores de Topo I debe ser previa al OXA ya que los niveles disminuidos de Topo I es uno de los principales mecanismos de resistencia a este tipo de fármacos. Finalmente demostramos que la citotoxicidad observada en las asociaciones entre OXA y 5-FU no correlaciona con un incremento en los procesos apoptóticos. En conclusión, el presente estudio in vitro permite ampliar el conocimiento de las bases moleculares de la actividad de las asociaciones de 5-FU e inhibidores de Topo I y derivados platinados. La disminución en los niveles de TS tras la exposición a OXA en el esquema OXA/5-FU proporciona una nueva interpretación al sinergismo observado en esta asociación tanto en tumores sensibles como resistentes a 5-FU. Por otro lado, la combinación OXA/Inhibidores de Topo I representa una alternativa para el tratamiento del CCR avanzado. / Over more than 40 years, 5-Fluorouracil-based chemotherapy has been the standard treatment of colorectal cancer (CRC). Chemotherapy resistance is an important cause of cancer treatment failure. 5-Fluorouracil (5-FU) inhibits Thymidylate Synthase (TS) enzyme. Overexpression of Thymidylate Synthase (TS) has been correlated to 5-FU-resistance Several studies have also indicated that 5-FU resistance may be due to a multiple genetic pathways which includes transport mechanisms, metabolism, molecular mechanism, cell cycle kinetics and protection from apoptosis. At the present work, two 5-FU-resistant cell lines (HT29-5FUR and LoVo-5FUR) were established from sensitive parental cell lines (HT29 and LoVo, respectively) by stepwise with increasing concentrations of 5-FU. Cell cycle distributions and doubling times were barely equivalent in both, sensitive and 5-FU-resistant cell lines. 5FU-resistant cell lines exhibit about a 5-fold and 3-fold increase in resistance to the drug as compared to parental cell lines. No differences in sensitivity towards Oxaliplatin were found between sensitive/5-FU-resistant cells. Interestingly, LoVo-5FUR cell line show a cross-resistance pattern to Topoisomerase I inhibitors (TPT, CPT-11 and SN38). 5-FU adaptation does not alter p53 status or RER phenotype in these cell lines. Cellular resistance to 5-FU correlated with an increase in TS gene expression (ARNm and protein), although no gene amplification was observed. Comparative genomic hybridisation (CGH) analysis revealed several genetic abnormalities (gains/loss) in 5-FU-resistant cells as compared to corresponding parental cell lines that could be potentially related with 5-FU resistance phenotype. Oxaliplatin (OXA) and DNA Topoisomerase I inhibitors (TPT, CPT-11) are cytotoxic agents with proven clinical antitumor activity in CRC. At the present work, we also studied the cellular pharmacology of OXA in combination with 5-FU or TPT in a panel of sensitive (HT29, LoVo, DLD-1 and LS-513) and 5-FU-resistant human colon cancer cells (HT29-5FUR and LoVo-5FUR). Moreover, we evaluated TS (mRNA and protein) and Topoisomerase I (Topo I; mRNA) expression after OXA exposure as parameters directly related to sensitivity to 5-FU and Topo I inhibitors respectively, in sensitive/resistant cell lines. Sequential combination schedules used were: OXA(4h)®5-FU(24h); 5-FU(24h)®OXA(4h); OXA(4h)®TPT(24h); TPT(24h)®OXA(4h) and OXA(4h)®5-FU(5-days exposure at the 5FU dose used for the induction of 5FU-resistance phenotype). All sequential associations were synergistic at moderate doses of both drugs in all cell lines tested, only 5-FU®OXA combination was additive in LoVo-5FUR cells to all inhibition fraction. The synergism found was independent from 5-FU-resistant phenotype, mismatch repair system or p53 status. Previous exposure to OXA in OXA®5-FU and OXA®TPT schedules reduced doses of 5FU and TPT given in combination at the resistant cell lines until levels similar to that obtained in corresponding sensitive cell lines suggesting the role of Oxaliplatin in the overcoming of 5-FU resistance phenotype and in the abrogation of the cross-resistance pattern to Topo I inhibitors showed by LoVo-5FUR cells. The exposure to OXA as single agent induced a significant decrease in TS levels (mRNA and protein) in all cell lines. We have also observed that sequential administration of OXA/5-FU induced a significant decrease in TS mRNA expression (between 3 and 5-fold) as compared to exposure to 5-FU as a single agent in both, sensitive and 5FU-resistant cell lines. These results correlated with the synergistic activity observed in sequential OXA/5-FU administration schedule. Previous exposure to OXA also induced a down-regulation of Topo I gene expression that correlates with the decrease of TPT doses in OXA®TPT combination schedule. These results also suggest that Topo I inhibitors should to be administered previous to OXA, as diminished Topo I levels is one of the most important cause of resistance to these agents. Finally, we demonstrated that despite the high level of cytotoxicity found in the associations between OXA and 5-FU, no increases in apoptosis were observed. In conclusion, our in vitro findings contribute to a better knowledge of the combination of 5-FU or Topo I inhibitors and platinum derivatives, contributing to a rationale for the optimal clinical development of the association between these agents. Down-regulation of TS due to OXA exposure in OXA/5-FU schedules promote a new interpretation of the synergistic activity observed in sensitive and 5-FU-refractory tumours. By other hand, combination of OXA/Topoisomerase I inhibitors represent an alternative for the treatment of advanced colorectal cancer.

La Estadificación Laparoscópica de los tumores previa a su tratamiento quirúrgico con el abdomen abierto, sólo debería usarse en aquellos casos en que sus resultados cambien el curso del tratamiento a realizar a los pacientes, y por lo tanto su pronóstico. Como en la mayoría de los portadores de Cáncer Colorrectal (CCR) la conducta terapéutica indicada es resecar el tumor primitivo en cualquier estadio en que se encuentre, y para extirparlo es necesario hacer una laparotomía, durante la cual se puede realizar la exploración con el abdomen abierto, el uso de la Estadificación Laparoscópica preoperatoria fue juzgada “a priori”como innecesaria.

Resveratrol (RESV), um polifenol presente em diversos compostos naturais, incluindo o vinho, tem sido associado a um efeito quimiopreventivo em diversos tipos de câncer, inclusive no câncer colorretal (CCR). Esse efeito benéfico observado em diversos estudos vem sendo atribuído, sobretudo, à sua ação anti-oxidante; muito embora o RESV também esteja envolvido em diversos outros mecanismos celulares, incluindo a apoptose. Não obstante, uma análise mais acurada sobre a potencial ação antineoplásica do RESV na promoção do CCR ainda se faz necessária. O CCR é um dos tipos de câncer mais frequentes no mundo ocidental, cuja incidência vem aumentando nos países em desenvolvimento e apesar dos esforços dos cientistas e do surgimento de novas drogas, esse tipo de câncer ainda possui altas taxas de morbidade e mortalidade. O presente estudo avaliou a potencial ação anti-neoplásica do RESV, puro e associado ao etanol (EtOH), na carcinogênese do câncer de cólon induzido por Nmetil-N\'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) em ratos através da análise de estresse oxidativo com malondialdeído (MDA) e imunoexpressão de Caspase-3 (Casp-3), gamma-H2AX (H2AX), iPCNA (PCNA) e Caveolina-1 (CAV-1). O experimento foi realizado com 48 ratos wistar, os quais foram submetidos à indução da carcinogênese (0.5 ml de solução de MNNG (5 mg/ml) e tratados com placebo, RESV (1mg/kg/dia) e RESV (1mg/kg/dia) associado com EtOH (0,377g/kg/dia). Os ratos foram subdivididos em 6 grupos: controle (G1), MNNG (G2), RESV (G3), RESV+MNNG (G4), RESV + EtOH (G5) e RESV + EtOH + MNNG (G6). Como resultado, o RESV diminuiu a produção de MDA em todos os grupos tratados, evidenciando seu efeito antioxidante sistêmico. RESV aumentou o número de corpúsculos apoptóticos e da apoptose nas criptas displásicas, levando ao aparecimento de espaços criptais acelulares (ECA) e, consequentemente, a uma redução estatisticamente significativa no número de criptas displásicas nos grupos tratados. Através da diminuição da expressão de H2AX, PCNA e CAV1, observamos que o RESV apresentou um efeito protetor no desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas na carcinogênese induzida por MNNG. Atribuímos esse efeito à sua ação pró-apoptótica que demonstrou ser um mecanismo efetivo na carcinogênese colônica em ratos, diminuindo o número de criptas displásicas e levando a formação de ECA\'s, um fenômeno ainda não descrito na literatura. Diferente da hipótese inicial, o EtOH mitigou os efeitos pró-apoptóticos do RESV, sem, contudo, diminuir sua ação antioxidante. Assim, concluímos que a ação anti-neoplásica e quimiopreventiva do RESV é efetiva na fase de promoção da carcinogênese colônica induzida por MNNG e que a associação entre RESV + EtOh, a mesma encontrada nos vinhos, não demonstrou ser tão efetiva quanto ao RESV isolado / Resveratrol (RESV), a polyphenol present in several natural compounds, including wine, has been associated with a chemopreventive effect in different types of cancer, including colorectal cancer (CRC). This beneficial effect observed in several studies has been attributed especially due to its anti-oxidant action; more than that, RESV also is involved in several other cellular mechanisms, including apoptosis. Despite of it, a more accurate analysis of a potential anti-neoplastic action of RESV in the promotion phase of CRC is still ongoing. CRC is one of the most frequent types of cancer in the Western world, with incidence increasing in developing countries and despite the efforts of scientists and the development of new drugs, this type of cancer still has high rates of morbidity and mortality. The present study evaluated a potential anti-neoplastic action of RESV, pure and associated with ethanol, on the carcinogenesis of colorectal cancer induced by Nmethyl-N\'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) in rats through the analysis of oxidative stress with malondialdehyde (MDA) and immunoexpression of Caspase-3 (Casp-3), gamma-H2AX (H2AX), iPCNA (PCNA) and Caveolina-1 (CAV-1). Our experiments were performed with 48 wistar rats, which were subjected to carcinogenesis (0.5 ml of MNNG solution (5 mg / ml) and treated with placebo, RESV (1 mg / kg / day) and RESV (1 mg / kg / (G1), RESV + EtOH (G5), RESV + MNNG (G4), RESV + EtOH (G5) and RESV + EtOH + MNNG (G6). As a result, RESV decreases the production of MDA in all treated groups, evidencing its systemic antioxidant effect. RESV increased the number of apoptotic corpuscles and apoptosis in dysplastic crypts, leading to the appearance of acellular cryptic spaces (ACE) and, consequently, to a statistically significant reduction in the number of dysplastic crypts in the treated groups. By decreasing expression of H2AX, PCNA and CAV1, we observed that RESV had a protective effect on the development of pre-neoplastic lesions in MNNG-induced carcinogenesis. We attributed this effect to its pro-apoptotic action, which has been shown to be an effective mechanism in colonic carcinogenesis in rats, decreasing the number of dysplastic crypts and leading to the formation of ACE\'s, a phenomenon not yet described in the literature. Unlike the initial hypothesis, EtOH mitigated the pro-apoptotic effects of RESV, but did not diminish its antioxidant action. Thus, we conclude that the anti-neoplastic and chemopreventive action of RESV is effective in the promotion phase of MNNG-induced colonic carcinogenesis and that the association between RESV + EtOh, the same as that found in wines, has not been shown to be as effective as isolated RESV.

Resveratrol (RESV), um polifenol presente em diversos compostos naturais, incluindo o vinho, tem sido associado a um efeito quimiopreventivo em diversos tipos de câncer, inclusive no câncer colorretal (CCR). Esse efeito benéfico observado em diversos estudos vem sendo atribuído, sobretudo, à sua ação anti-oxidante; muito embora o RESV também esteja envolvido em diversos outros mecanismos celulares, incluindo a apoptose. Não obstante, uma análise mais acurada sobre a potencial ação antineoplásica do RESV na promoção do CCR ainda se faz necessária. O CCR é um dos tipos de câncer mais frequentes no mundo ocidental, cuja incidência vem aumentando nos países em desenvolvimento e apesar dos esforços dos cientistas e do surgimento de novas drogas, esse tipo de câncer ainda possui altas taxas de morbidade e mortalidade. O presente estudo avaliou a potencial ação anti-neoplásica do RESV, puro e associado ao etanol (EtOH), na carcinogênese do câncer de cólon induzido por Nmetil-N\'-nitro-N-nitrosoguanidina (MNNG) em ratos através da análise de estresse oxidativo com malondialdeído (MDA) e imunoexpressão de Caspase-3 (Casp-3), gamma-H2AX (H2AX), iPCNA (PCNA) e Caveolina-1 (CAV-1). O experimento foi realizado com 48 ratos wistar, os quais foram submetidos à indução da carcinogênese (0.5 ml de solução de MNNG (5 mg/ml) e tratados com placebo, RESV (1mg/kg/dia) e RESV (1mg/kg/dia) associado com EtOH (0,377g/kg/dia). Os ratos foram subdivididos em 6 grupos: controle (G1), MNNG (G2), RESV (G3), RESV+MNNG (G4), RESV + EtOH (G5) e RESV + EtOH + MNNG (G6). Como resultado, o RESV diminuiu a produção de MDA em todos os grupos tratados, evidenciando seu efeito antioxidante sistêmico. RESV aumentou o número de corpúsculos apoptóticos e da apoptose nas criptas displásicas, levando ao aparecimento de espaços criptais acelulares (ECA) e, consequentemente, a uma redução estatisticamente significativa no número de criptas displásicas nos grupos tratados. Através da diminuição da expressão de H2AX, PCNA e CAV1, observamos que o RESV apresentou um efeito protetor no desenvolvimento de lesões pré-neoplásicas na carcinogênese induzida por MNNG. Atribuímos esse efeito à sua ação pró-apoptótica que demonstrou ser um mecanismo efetivo na carcinogênese colônica em ratos, diminuindo o número de criptas displásicas e levando a formação de ECA\'s, um fenômeno ainda não descrito na literatura. Diferente da hipótese inicial, o EtOH mitigou os efeitos pró-apoptóticos do RESV, sem, contudo, diminuir sua ação antioxidante. Assim, concluímos que a ação anti-neoplásica e quimiopreventiva do RESV é efetiva na fase de promoção da carcinogênese colônica induzida por MNNG e que a associação entre RESV + EtOh, a mesma encontrada nos vinhos, não demonstrou ser tão efetiva quanto ao RESV isolado / Resveratrol (RESV), a polyphenol present in several natural compounds, including wine, has been associated with a chemopreventive effect in different types of cancer, including colorectal cancer (CRC). This beneficial effect observed in several studies has been attributed especially due to its anti-oxidant action; more than that, RESV also is involved in several other cellular mechanisms, including apoptosis. Despite of it, a more accurate analysis of a potential anti-neoplastic action of RESV in the promotion phase of CRC is still ongoing. CRC is one of the most frequent types of cancer in the Western world, with incidence increasing in developing countries and despite the efforts of scientists and the development of new drugs, this type of cancer still has high rates of morbidity and mortality. The present study evaluated a potential anti-neoplastic action of RESV, pure and associated with ethanol, on the carcinogenesis of colorectal cancer induced by Nmethyl-N\'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) in rats through the analysis of oxidative stress with malondialdehyde (MDA) and immunoexpression of Caspase-3 (Casp-3), gamma-H2AX (H2AX), iPCNA (PCNA) and Caveolina-1 (CAV-1). Our experiments were performed with 48 wistar rats, which were subjected to carcinogenesis (0.5 ml of MNNG solution (5 mg / ml) and treated with placebo, RESV (1 mg / kg / day) and RESV (1 mg / kg / (G1), RESV + EtOH (G5), RESV + MNNG (G4), RESV + EtOH (G5) and RESV + EtOH + MNNG (G6). As a result, RESV decreases the production of MDA in all treated groups, evidencing its systemic antioxidant effect. RESV increased the number of apoptotic corpuscles and apoptosis in dysplastic crypts, leading to the appearance of acellular cryptic spaces (ACE) and, consequently, to a statistically significant reduction in the number of dysplastic crypts in the treated groups. By decreasing expression of H2AX, PCNA and CAV1, we observed that RESV had a protective effect on the development of pre-neoplastic lesions in MNNG-induced carcinogenesis. We attributed this effect to its pro-apoptotic action, which has been shown to be an effective mechanism in colonic carcinogenesis in rats, decreasing the number of dysplastic crypts and leading to the formation of ACE\'s, a phenomenon not yet described in the literature. Unlike the initial hypothesis, EtOH mitigated the pro-apoptotic effects of RESV, but did not diminish its antioxidant action. Thus, we conclude that the anti-neoplastic and chemopreventive action of RESV is effective in the promotion phase of MNNG-induced colonic carcinogenesis and that the association between RESV + EtOh, the same as that found in wines, has not been shown to be as effective as isolated RESV.

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