The accurate detection and quantification of human diabetic somatic polyneuropathy (DSPN) are important to define at risk patients, anticipate deterioration, and assess new therapies. Current methods lack sensitivity, require expert assessment and have major shortcomings when employed to define therapeutic efficacy. In recent years, in vivo corneal confocal microscopy (IVCCM) has shown potential as a surrogate endpoint for DSPN.This study aims to investigate fundamental aspects of IVCCM such as repeatability and optimal scanning methodology and establish changes in corneal nerve morphology in relation to the severity of DSPN and regeneration in response to normalisation of hyperglycaemia. Furthermore, it aims to provide a novel fully automated image analysis algorithm for the quantification of corneal nerve morphology and establish the diagnostic ability of CCM.IVCCM shows high repeatability which is enhanced with more experienced observers. Central corneal innervation is comparable to adjacent peripheral innervation in mild diabetic neuropathy but the central cornea may be more sensitive to change. Corneal nerve loss is symmetrical and progressive with increasing neuropathic severity and corneal nerves show significant regenerative capacity following rapid normalisation of glycaemic control after simultaneous pancreas and kidney transplantation. The novel image analysis algorithm strongly correlates with human expert annotation and therefore represents a rapid, objective and repeatable means of assessing corneal nerve morphology. Automated image quantification may replace human manual assessment with high diagnostic validity for DSPN.

Orientador: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Resumo: Cimento experimental à base de silicato de cálcio foi desenvolvido demonstrando potencial bioativo e ação antimicrobiana. O presente estudo visa avaliar escoamento e penetrabilidade dentinária de cimento experimental à base de SC (CE) em comparação aos cimentos TotalFill BC Sealer (TFBC), NeoMTA Plus (NMTAP) e AH Plus (AHP). O escoamento foi avaliado segundo norma ISO 6876/2012 (em mm) e análise adicional em área (em mm2). Canais radiculares de 40 dentes humanos unirradiculados extraídos (n = 10) foram preparados até instrumento de Níquel-Titânio ProDesign Logic 40.05 e obturados com os cimentos: CE, TFBC, NMTAP e AHP. A técnica de condensação lateral ativa foi realizada com os cimentos manipulados com acréscimo de fluoresceína a 0,1% para análise da penetração em dentina por microscópio confocal de varredura a laser (MCVL). As micrografias foram mensuradas quanto à área de penetrabilidade (em µm2) e extensão linear (em µm). Os dados foram analisados por meio dos testes estatísticos de ANOVA e Tukey com 5% de significância. Os resultados do teste de escoamento mostraram que houve diferenças significantes entre todos os cimentos (p < 0,05). TFBC mostrou maior valor, seguido por AHP; e NMTAP o menor valor. O CE mostrou maiores valores de escoamento quando comparado com o NMTAP (p < 0,05). No que se refere à área de penetrabilidade dentinária, os cimentos CE, TFBC e NMTAP foram similares nos terços cervical, médio e apical (p > 0,05). No terço cervical, CE e TFBC apresentaram ma... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Rotavirus (RV) is a viral pathogen that causes severe, watery diarrhea and vomiting in the young of humans and other animals. RV infections result in over 200,000 pediatric deaths around the world each year, especially in developing nations. Within the infected host cell, RV forms inclusion bodies, called viroplasms, where many stages of viral replication occur. The RV polymerase, known as VP1, must localize to viroplasms during infection where it replicates the virus' RNA genome. The work described in this dissertation focused on identifying region(s) of VP1 essential for its viroplasmic localization and its function as a polymerase. We found that a single amino acid change in a region of the polymerase called the N-terminal domain negatively impacted its capacity to localize to viroplasms during infection as well as its enzymatic activity in a test tube. Follow up studies using VP1 proteins from divergent strains and a mutant containing only the N-terminal domain of VP1 provided more insight into polymerase localization determinants. In total, our work suggests that the VP1 N-terminal domain plays an important role in localizing the polymerase to viroplasms via interactions with other viral proteins and supporting its function as a polymerase. / Ph. D.

Confocal microscopes utilize point illumination and pinhole detection to reject out-of-focus light. Because of the point illumination and detection pinhole, confocal microscopes typically utilize point scanning for imaging, which limits the overall acquisition speed. Due to the excellent optical sectioning capabilities of confocal microscopes, they are excellent tools for the study of three-dimensional objects at the microscopic scale. Fluorescence confocal microscopy is especially useful in biomedical imaging due to its high sensitivity and specificity. However, all designs for confocal microscopes must balance tradeoffs between the numerical aperture (NA), field of view (FOV), acquisition speed, and cost during the design process. In this dissertation, two different designs for an array confocal microscope are proposed to significantly increase the acquisition speed of confocal microscopes. An array confocal microscope scans an array of beams in the object plane to parallelize the confocal microscope to significantly reduce the acquisition time. If N beams are used in the array confocal microscope, the acquisition time is reduced by a factor of N. The first design scans an array of miniature objectives over the object plane to overcome the trade-off between FOV and NA. The array of objectives is laterally translated and each objective scans a small portion of the total FOV. Therefore, the number of objectives used in the array limits the FOV, and the FOV is increased without sacrificing NA. The second design utilizes a single objective with a high NA, large FOV, and large working distance designed specifically for whole brain imaging. This array confocal microscope is designed to speed up the acquisition time required for whole brain imaging. Utilizing an objective with a large FOV and scanning using multiple beams in the array significantly reduces the time required to image large three-dimensional volumes. Both array confocal microscope designs use beam-splitting gratings to efficiently split one laser beam into a number of equal energy outgoing beams, so this dissertation explores design methods and analyses of beam-splitting gratings to fabrication errors. In this dissertation, an optimization method to design single layer beam-splitting gratings with reduced sensitivity to fabrication errors is proposed. Beam-spitting gratings are typically only designed for a single wavelength, so achromatic beam-splitting grating doublets are also analyzed for possible use in array confocal microscopes with multiple excitation wavelengths. An analysis of the lateral shift between grating layers in the achromatic grating doublet proves grating profiles with constant first spatial derivatives are significantly less sensitive than continuous phase profiles. These achromatic grating doublets have designed performance at two wavelengths, but the diffraction angles at the two wavelengths differ. To overcome that limitation, scale-invariant achromatic gratings are designed, which not only provide designed performance at two wavelengths, but also equal diffraction angles at two wavelengths.

Le séchage des matériaux de construction et des sols a une grande importance sur leurs propriétés finales et est un enjeu critique du point de vue économique et énergétique. Ces matériaux contiennent des grains de toutes tailles (incluant une fraction colloïdale) et de l'eau. Nous étudions les phénomènes physiques essentiels à l'origine de ces propriétés de séchage à partir d'une séparation d'échelle plus nette que dans les matériaux réels entre les tailles caractéristiques de l'échantillon, des pores et des éléments dans le fluide interstitiel. Des milieux poreux 3D sont observés à l'aide de l'IRM et de la tomographie au rayon X, et des milieux poreux modèles à l'aide d'une caméra et d'un microscope confocal. Trois catégories de fluides interstitiels saturant initialement la structure poreuse ont été étudiées : un liquide pur, des suspensions de particules rigides et des suspensions de particules molles. Le séchage d'un liquide pur met en évidence un régime d'évaporation où le taux de séchage est constant. L'eau s'écoule par pompage capillaire pour approvisionner en eau la surface libre où l'évaporation a lieu. Comme l'évaporation est localisée à la surface libre, des simulations par éléments finis mettent en évidence la sensibilité du taux de séchage à la configuration locale de l'interface eau/air. Les suspensions de particules ralentissent toujours la cinétique de séchage en comparaison de l'eau seule. A faible fraction volumique, les particules migrent vers la surface lors du séchage d'un milieu poreux et ralentissent la cinétique de séchage en formant une zone compactée. Les particules molles peuvent se comprimer et augmenter ainsi le nombre de particules par unité de volume ce qui influence la longueur de diffusion de la vapeur d'eau. A fraction volumique élevée, la viscosité du fluide empêche l'écoulement ainsi les cinétiques de séchage sont très lentes et les particules ne se déplacent pas / Drying of building materials and soils plays a major role in their final properties and is a main economics and environmental issue. In this thesis, we study the drying of complex porous media to better understand the impact of particles in the interstitial fluid. With a clear scale separation between the sample, pores and particles sizes, we observe water and particles distributions by camera, MRI, X-ray tomography and confocal microscope. We show that the fluid evolution and the drying kinetics are coupled. We study three kinds of fluids: pure liquid, hard and soft particles suspensions. The drying rate of pure water remains constant and generally persists until the majority of water is evaporated. The fluid flows through the porous network, due to capillary depression, to provide water to the free surface where evaporation occurs. We show, by Finite Elements Method, that the drying rate is very sensitive to the shape of the air/water interface. Particles suspensions always slow down the drying kinetics compare to pure water. At low volume fraction, particles migrate towards the surface and drying rate is linked to the increases of the compacted area. Soft particles can compress, thus the compacted area may shrink and influences drying rate. At high volume fraction, viscous dissipation is high and limit the fluid flow therefore particles do not migrate and the drying kinetics is slow

O propósito deste trabalho foi avaliar a interação de matriz óssea bovina inorgânica, (Gen-ox®) como material de enxerto e implantes de titânio em mandíbula de coelhos. A amostra constituiu-se de 32 coelhos da raça Botucatu de aproximadamente 4kg. Os incisivos inferiores destes animais foram extraídos e foi realizada um defeito de aproximadamente 4mm de diâmetro. Um dos lados foi mantido apenas com coágulo (grupo controle) e o outro lado (grupo experimental) recebeu o enxerto do material proposto. Após 60 dias foram instalados implantes bilateralmente na região do defeito. Os animais foram eutanaziados imediatamente após a instalação dos implantes e após 1, 2 e 6 meses (n=6) para o grupo microscópico a após 2 e 6 meses para o grupo do teste biomecânico (n=4). A análise constituiu de medidas da distância da crista óssea alveolar à plataforma do implante, da densidade radiográfica em valores de pixel ma região do alvéolo, de teste biomecânico de torque de remoção e microscópico através de medidas de contato osso-implante (BIC) (em µm e %) e área de osso (em µm2 e %). Os resultados demonstraram que não houve diferenças significantes nem durante o tempo e nem entre os grupos na analise de distancia entre crista óssea alveolar e plataforma do implante. Na medida de densidade óssea, não houve variação significante ao longo do tempo, mas houve diferença estatisticamente significante entre os grupos, sendo maior no grupo experimental. Para o teste biomecânico também não houve variação significante do torque de remoção ao longo do tempo e nem houve diferença significante entre os grupos. Na análise de contato osso implante (BIC) não houve variação significante ao longo do tempo, mas houve diferença estatisticamente significante entre os grupos, sendo maior no grupo experimental e houve interação entre tempos e grupos. E com relação a medida de área de osso não houve diferenças significantes nem durante o tempo e nem entre os grupos controle e experimental nos períodos analisados. Os resultados sugerem que o material foi bem aceito na região e teve comportamento semelhante ao coágulo em contato com a superfície do implante. / The aim of this study was to evaluate the interaction of an inorganic bovine bone matrix (Gen-ox®) as bone graft and titanium implants in rabbits mandible. Thirty-two Botucatu rabbits weighting about 4kg were used on this experiment. The mandible incisives were extracted and a defect of 4 mm of diameter was performed. One socket and defect was filled with experimental material. The opposite site was left to heal naturally and served as control. After 60 days, the implants were installed on the defect region. The animals were killed immediately after the implant installation and after 1, 2 and 6 months. Vertical bone height, bone density, biomechanical test, bone implant contact (BIC) and bone area near to implant threads were evaluated. The results showed that there was no significant differences on the distance between the alveolar bone crest to the implant platform (vertical bone height) along the time, neither between groups. On the bone density (pixel value) there was no significant difference along the time, but there was significant difference between groups, being the experimental group higher. For the biomechanical test there was no significant difference along the time, neither between groups. There was no significant differences on the bone implant contact (BIC) measures along the time, but there was significant difference between groups, being the experimental groups higher and there was interaction between time and groups. On bone area evaluation, there was no significant difference along the time, neither between the groups during the analyzed time. The graft behavior observed by the authors was similar to that of the control group, suggesting high acceptance of the material as graft option associated to titanium implants.

Avaliou-se presença de espaços vazios, presença de fendas na interface cimento/dentina, o perímetro de penetração do cimento obturador nos canais e nos istmos.e a ação antimicrobiana intra-dentinária do cimento endodôntico (AH Plus) quando submetido ou não a agitação ultrassônica no momento da obturação. Para a avaliação do preenchimento de istmos foram utilizadas 30 raízes mesiais de primeiros molares inferiores, as quais foram divididas em 2 grupos (n=15). A instrumentação foi realizada com o sistema reciprocante Reciproc (R25) e finalizado com instrumento rotatório Mtwo (35.04). Em seguida, o cimento AH Plus foi espatulado com Rodamina B e foi inserido nos canais com espiral de Lentulo no35; o cimento do grupo 1 foi submetido a agitação ultrassônica enquanto o do grupo 2 não foi agitado, sendo que todos os canais foram obturados por meio da técnica do cone único e armazenados em estufa a 37oC durante 7 dias. As raízes foram seccionadas transversalmente a 2, 4 e 6 mm do ápice radicular para análise em esteromicroscópio e microscopia confocal a laser. Para a avaliação da ação antimicrobiana foram utilizados 30 incisivos de bovinos, os quais foram seccionados em cilindros de 6 mm de espessura. Os canais tiveram seu diâmetro padronizado com uma lima tipo K no 80 e então contaminados com Enterococcus faecalis (ATCC 29212) por 4 dias. Após esse período os espécimes foram divididas em 3 grupos (n=30). No grupo 1 o cimento foi agitado com o ultrassom e obturados com a técnica de cone único; no grupo 2 o cimento não foi agitado e o grupo 3 foi o grupo controle. As raízes foram seccionadas longitudinalmente no sentido vestíbulopalatino e coradas com corante LIVE/DEAD para avaliar a viabilidade bacteriana em microscopia confocal a laser. Para análise da agitação ultrassônica do cimento obturador no preenchimento de canais e istmos, foi utilizado o teste não paramétrico de Mann-Whitney (p <0.05) e para a análise da ação antimicrobiana intradentinária, foi utilizado o teste não paramétrico Kruskal-Waliis e o Teste Dunn (p <0.05). Os resultados indicaram que a agitação ultrassônica do cimento AH Plus favoreceu o preenchimento de istmos e a penetração intratubular. A agitação ultrassônica do cimento AH Plus reduziu significantemente a viabilidade bacteriana. Conclui-se que a agitação ultrassônica do cimento AH Plus favoreceu maior penetração intratubular, menor presença de fendas, menos espaços vazios e maior ação antimicrobiana. / In this study it was assessed the presence voids, gaps in the sealer/dentin interface, the intratubular sealer penetration in canals and isthmuses and intratubular antimicrobial effect of the AH Plus sealer when ultrasonic activation was performed during obturation. 30 mesial roots of mandibular first molars were selected and divided into 2 groups (n=15). Root canal instrumentation was performed with the reciprocating system Reciproc (R25) and finished with the Mtwo (35.04) rotary instrument. Then the AH Plus sealer was mixed with Rhodamine B and was inserted into the root canals with a Lentulo spiral #35. In group 1 the ultrasonic activation of the sealer was performed while in group 2 was not activated. Then, the root canal filling was performed using the single cone technique. After 7 days of storage the roots were sectioned at 2, 4 and 6 mm from the apex and analyzed in the stereomicroscope and by confocal laser scanner microscopy. To the antimicrobial test 30 bovine incisors cut into cylinders with 6 mm in thickness were used. The root canals diameter was standardized with a K file # 80 and then contaminated with Enterococcus faecalis (ATCC 29212) for 4 days. After this period the samples were divided into 3 groups (n = 30). In group 1 the ultrasonic activation of the sealer was perfomed and filled with single cone technique; in group 2 the sealer was not ultrasonic activated and in group 3 the canals were not obturated (control group). The roots were sectioned in the buccal-palatal direction and stained with LIVE / DEAD stain to assess the bacterial viability by confocal laser microscopy. For analysis of ultrasonic activation of the sealer on the filling quality of the canals and isthmuses, a non-parametric Mann-Whitney test (p <0.05) was used. For the analysis of the intradentin antimicrobial action, a Kruskal-Waliis nonparametric and Dunn\'s test was used (p <0.05). The results showed that the ultrasonic agitation of the AH Plus sealer favored the isthmus filling and the intratubular penetration. Also, the ultrasonic activation of AH Plus sealer reduced bacterial viability. It was concluded that the ultrasonic agitation of the sealer favored higher intratubular penetration, lower presence of gaps and voids and higher antimicrobial activity.

O objetivo deste estudo foi avaliar, in vitro, o efeito das soluções irrigadoras quitosana a 0,2%; hipoclorito de sódio a 1% e EDTA a 17% na superfície dentinária e na interface de união da dentina/material obturador resinoso. Sessenta fragmentos de dentina, obtidos de 10 caninos superiores humanos, com 4 mm2 de área foram distribuídos em quatro grupos (n=15) de acordo com o tratamento: G1 NaOCl + EDTA + NaOCl, G2 NaOCl + Quitosana + NaOCl, G3 Quitosana + Quitosana + Quitosana, G4 Quitosana + EDTA + Quitosana. As amostras foram imersas por 6 minutos na primeira solução irrigadora (Tempo 1), 3 minutos na segunda (Tempo 2) e 1 minuto na terceira (Tempo 3), simulando o tratamento endodôntico. Foi analisada a composição orgânica e inorgânica das amostras por meio da Espectroscopia Infravermelha por Transformada de Fourier (FTIR) após cada etapa de irrigação. Para segunda fase, 24 caninos superiores humanos, divididos em 4 grupos (n=6), tiveram suas coroas cortadas e as raízes instrumentadas mecanicamente com instrumentos K3 até o instrumento 60.04, irrigadaos com NaOCl a 1% e Quitosana a 0,2% durante o preparo e EDTA a 17% e Quitosana a 0,2% como irrigação final. As amostras foram cortados longitudinalmente para análise do número e do perímetro dos túbulos expostos nos diferentes tempos e a rugosidade da superfície antes (baseline) e após cada fase do tratamento, além da penetração do cimento endodôntico, e avaliação da interface material obturador/dentina, após a obturação (Tempo 3), por meio de microscopia confocal a laser. Os dados foram analisados pela ANOVA e pós-teste de Tukey (p<0,05). Por meio do FTIR, constatou-se que o G4 apresentou maiores valores de matéria orgânica quando comparado aos outros grupos (p<0,05), e foram observados maiores valores para o T3 quando comparado ao T0. Quanto aos valores de matéria inorgânica, o G1 apresentou valores superiores (p<0,05) aos G2 e G3. Não houve diferença quando comparado os tempos para o conteúdo inorgânico (p>0,05). O terço apical apresentou maior valores de conteúdo inorgânico quando comparado aos demais (p<0,05). Por meio do confocal, observou-se que apenas o G3 apresentou maiores valores de perímetro dos túbulos com diferença em relação ao G1,(p<0,05), que o T2 apresentou valores semelhantes ao T1 (p>0,05), e não houve diferença entre os terços radiculares. Na análise da contagem dos túbulos dentinários, observa-se que o G4 apresentou maiores valores, semelhantes ao G3 (p>0,05). O T2 apresentou os maiores valores e o T0 os menores (p<0,05), e o terço cervical apresentou maiores valores em relação aos demais (p<0,05). Na análise da rugosidade, não houve diferença entre os grupos, e nem entre os terços radiculares (p>0,05), sendo que o T0 apresentou maiores valores, com diferença em relação ao T1 e T2 (p<0,05). Na análise da interface material obturador/dentina, não houve diferença entre os grupos, e o terço apical apresentou menor extensão de tags formados (p<0,05). A Quitosana como solução irrigadora produziu efeitos favoráveis na dentina radicular sem afetar a interação do substrato com o cimento endodôntico. / The aim of this study was to evaluate, in vitro, the influence of irrigation solutions, used during instrumentation of root canals - chitosan at 0.2%; 1% sodium hypochlorite and 17% EDTA - on dentin, by means of Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) and laser confocal microscopy. Sixty dentin fragments, obtained from 10 human canines, with 4 mm2 area were distributed in four groups (n = 15) according to the treatment: G1 NaOCl + EDTA + NaOCl, G2 NaOCl + Chitosan + NaOCl, G3 Chitosan + Chitosan + Chitosan, G4 Chitosan + EDTA + Chitosan. The samples were immersed for 6 minutes in the first irrigation solution (Time 1), 3 minutes in the second (Time 2) and 1 minute in the third (Time 3), simulating the endodontic treatment. The organic and inorganic composition of the samples were analyzed by Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) after each irrigation step. In a second phase, 24 teeth were divided into 4 groups (n = 6), cut longitudinally to analyze the number and perimeter of the exposed tubules at different times, the surface roughness before and after each treatment phase. The penetration of the endodontic sealer, and evaluation of the dentin interface, after the obturation (Time 3), by laser confocal microscopy. Data were analyzed by ANOVA and Tukey post hoc test (p<0.05). Using FTIR, G4 presented higher values of organic content when compared to the others groups (p <0.05), and higher values were observed for T3 when compared to T0. There was no difference when comparing the times for the inorganic content (p> 0.05). The apical third had higher values of inorganic content when compared to the others (p <0.05). With the aid of the confocal analysis, it was observed that only G3 presented higher values of tubule perimeter with difference in relation to the G1, (p <0.05), that T2 presented values similar to T1 (p> 0.05), And there was no difference between the root thirds. In the analysis of the dentinal tubule count, it was observed that G4 presented higher values, similar to G3 (p> 0.05). The T2 presented the highest values and T0 the lowest (p <0.05), and the cervical third had higher values compared with the others (p <0.05). Regarding the analysis of roughness, there was no difference between the groups, nor between the root thirds (p> 0.05), and the T0 presenting higher values compared with T1 and T2 (p <0.05). In the analysis of the dentin interface, there was no difference between the groups, and the apical third had a smaller extension of the formed tags (p <0.05). Chitosan produced less chemical changes in root dentin when compared to the other solutions.

A rodamina B e outros marcadores fluorescentes vêm sendo empregados na avaliação morfológica da interface de adesão com o auxílio de microscopia confocal de varredura a laser. Acrescentando-se rodamina B a sistemas adesivos, é possível observar as características de espessura da camada de adesivo, micromorfologia da camada híbrida, extensão e quantidade de tags, bem como diagnosticar defeitos ou alterações na interface de adesão. A literatura revela, entretanto, uma falta de precedentes sobre as quantidades de marcadores nos componentes resinosos. Além disso, ainda não se avaliou o efeito da concentração de rodamina B sobre a qualidade da análise da interface de adesão, bem como sobre o comportamento fotofísico dos marcadores nos sistemas adesivos. Este estudo foi realizado com o propósito de sistematizar um método de adição de rodamina B a sistemas adesivos, incluindo-se estratégias para a determinação de concentrações mínimas de rodamina nos componentes resinosos, porém, ainda viáveis para a realização da análise morfológica da interface de adesão através de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, os sistemas adesivos não simplificados e considerados padrão-ouro em suas categorias Adper&#x2122; Scotchbond&#x2122; Multi-Purpose (convencional de três passos) e Clearfil&#x2122; SE Bond (auto-condicionante de dois passos) foram modificados com rodamina B em cinco diferentes concentrações: C1 (0,5 mg/mL), C2 (0,10 mg/mL), C3 (0,02 mg/mL), C4 (0,004 mg/mL) e C5 (0,0008mg/mL) e o comportamento fluorescente da rodamina nos adesivos foi avaliado tanto no âmbito espectroscópico (espectroscopia de fotoluminescência), como no âmbito microscópico (microscopia confocal de varredura a laser). Para a modificação dos adesivos, utilizou-se uma técnica precisa de proporcionamento na qual o marcador fluorescente foi incorporado às resinas fluidas a partir de soluções de rodamina B em etanol. Os espectros de fluorescência mostraram diferenças nos máximos das bandas de emissão e de excitação, de acordo com as concentrações de rodamina B em cada material dispersante. A análise microscópica dos espécimes em dentina confirmou que é possível utilizar sistemas adesivos contendo rodamina B em concentrações muitas vezes menores do que as mencionadas na literatura. Ambos os sistemas avaliados puderam ser visualizados, microscopicamente, quando marcados com rodamina B nas três concentrações pré-selecionadas para a avaliação da interface de adesão: C2 (0,10 mg/mL), C3 (0,02 mg/mL) e C4 (0,004 mg/mL), sendo que C3 forneceu os melhores resultados em relação ao contraste e à saturação nas fotomicrografias. Concluiu-se que o comportamento fotofísico da rodamina B é influenciado tanto pela concentração, como pelo sistema adesivo no qual o marcador está dissolvido. A concentração de rodamina B também interfere na qualidade da análise morfológica da interface de adesão, sendo que o excesso do marcador pode dificultar a distinção de detalhes micromorfológicos. / Rhodamine B and other fluorescent markers have been used for the assessment of the bonding interface via confocal laser scanning microscopy. By adding rhodamine into adhesive systems, it is possible to study morphological characteristics of the hybrid layer, the extent and amount of resin tags and the adhesive layer thickness, as well as detecting potential defects or alterations at bonding interface. Meantime the literature reveals lack of standards among the quantities of fluorescent markers in resin-based polymers. The effects of rhodamine B concentration on the quality of the microscopic analysis, as well as on the photophysics of labeled adhesive systems were not assessed up to now. This study aimed to systematize methodologies for adding rhodamine B into adhesive systems, including suitable strategies for determining the minimum serviceable rhodamine concentrations to perform the morphological analysis of the bonding interface. Two non-simplified adhesive system considered gold standard categories Adper&#x2122; Scotchbond&#x2122; Multi-Purpose (3 steps conventional) and Clearfil&#x2122; SE Bond (2 steps self-etching) were modified with rhodamine B at five concentrations: C1 (0.5 mg/ml), C2 (0.10 mg/ml), C3 (0.02 mg/ml), C4 (0.004 mg/ml) and C5 (0.0008 mg/ml ) and the fluorescent behavior of the labeled resins was assessed both by photoluminescence spectroscopy and by confocal laser microscopy The preparation of the labeled resins was proceed by means of a precise proportioning technique in which the fluorescent marker was incorporated into the bonding agents from solutions of rhodamine B in ethanol. The fluorescence spectra showed differences in the intensity and wavelength fluorescence according to the rhodamine B concentration. Microscopic analysis of the dentin specimens confirmed adhesive systems can be modified with rhodamine B at far lower concentrations than those mentioned in the literature. Both evaluated systems were microscopically visualized while labeled with Rhodamine B at three pre-selected concentrations: C2 (0.10 mg/mL), C3 (0.02 mg/ml) and C4 (0.004 mg/ml), and C3 offered the best outcome with respect to contrast and saturation in photomicrographs. It was concluded that the photophysical behavior of rhodamine B depends on both the concentration and labeled adhesive system. The rhodamine B concentration also interferes with the quality of morphological analysis of the bonding interface, and the excess of the fluorescent marker may jeopardize the discrimination of morphological details.

Neste estudo avaliou-se o efeito in vitro de 4 compostos isolados de espécies vegetais, as amidas piplartina e piperina, a lignana grandisina e o alcaloide epiisopiloturina; 1 composto isolado da pele de anfíbio, o peptídeo antimicrobiano dermaseptina 01; e de 6 extratos etanólicos obtidos de vegetais, Piper tuberculatum, P. crassinervium, P. diospyrifolium, P. fuligineum, P. gaudichaudianum e Pothomorphe umbellata em adultos (machos e fêmeas com 49 dias) e esquistossômulos (recém-transformados, 1, 3, 5 e 7 dias) de Schistosoma mansoni linhagem BH. O estudo avaliou: 1) a viabilidade de vermes adultos; 2) a capacidade reprodutiva, avaliada pelo acasalamento e oviposição; 3) o efeito no tegumento em parasitas adultos; 4) a viabilidade e o efeito no tegumento em esquistossômulos; 5) a citotoxicidade de compostos e extratos em células de mamífero (célula Vero). Além disso, com microscopia confocal, neste estudo é proposto um novo modelo experimental que avalia, quantitativamente, o efeito de esquistossomicidas no tegumento dos esquistossomos. / In this study, the in vitro effect of 4 compounds isolated from plant species, amides piplartine and piperine, the lignin grandisin and alkaloid epiisopiloturine; 1 compound isolated from amphibian skin, the antimicrobial peptide dermaseptin 01; and 6 ethanolic extracts of plants, Piper tuberculatum, P. crassinervium, P. diospyrifolium, P. fuligineum, P. gaudichaudianum and Pothomorphe umbellata was evaluated in adults worm pairs (49-day-old) and schistosomula (newly-transformed, 1-, 3-, 5-, and 7-day-old) of Schistosoma mansoni BH strain. The effect of compounds and extracts against schistosomes was examined regarding: 1) adult worms survival, 2) the reproductive fitness as assessed by mating and oviposition; 3) alterations on adult worms tegumental surface; 4) viability and morphological alterations on schistosomula; 5) the cytotoxicity of compounds and extracts in mammalian cells (Vero cells) In addition, this study shows a new experimental model to evaluate quantitatively the effect of schistosomicidal drugs on the tegument of the schistosomes.