Diversos estudos em modelo animal indicam claramente que a transferência materna de IgG alérgeno-específica previne a resposta alérgica na prole. A presença de alérgeno no leite também mostrou proteger a prole por induzir tolerância oral. Neste estudo, analisamos em humanos a transferência materna de alérgenos dos ácaros Der p e Blo t e anticorpos específicos durante a gestação e amamentação em uma coorte de 91 amostras pareadas de soro materno, colostro e cordão umbilical. Demonstramos que tanto o Der p 1 como Blo t 5 podem estar presentes em amostras de colostro e cordão umbilical e identificamos a atopia materna como fator crítico para o aumento de IgG específica nestes compartimentos. No cordão umbilical, a maior diferença entre mães atópicas e não atópicas foi para a IgG4. A concentração de Der p 1 e Blo t 5 não apresentou correlação com o estado atópico materno ou concentração de anticorpos específicos. No colostro, apenas para o alérgeno Der p 1 a concentração foi maior em mães atópicas e apresentou correlação com os níveis de anticorpos IgG específicos. / Experimental data in rodents indicate that maternal allergen-specific IgG prevents allergic sensitization in the progeny. Airborne allergens in maternal milk also protects breastfeed mice by oral tolerance induction. In this study, we assessed in humans whether Der p and Blo t allergens and specific antibodies were transferred during pregnancy and breastfeeding in a cohort of 91 paired samples of maternal blood, colostrums and umbilical cord blood. Our study indicates that Der p 1 and Blo t 5 can be found in both, cord blood and colostrums, and identifies maternal atopy as a critical factor for increased levels of allergen-specific IgG in these compartments. In the cord blood the biggest difference between atopic and non atopic mothers was observed for IgG4. Der p 1 and Blo t 5 concentrations were not correlated with maternal atopic status nor specific-antibodies levels. In colostrums, only the concentration of Der p 1 was higher in atopic mothers and correlated with colostrums specific-IgG levels.

Esse projeto tem como objetivo estabelecer técnicas de cultivo, isolamento, expansão e quantificação de células mesenquimais e hematopoéticas de sangue de cordão umbilical (SCU) de cães de raças variadas para aplicação em terapias celulares. Atualmente, vários tipos de células-tronco têm sido estudados devido a sua capacidade de diferenciação em diversos tecidos (HERZOG et al., 2003). O isolamento, quantificação e expansão dessas células permitem que a terapia celular seja utilizada na tentativa de tratamento em patologias (BARKER et al., 2003). Entre as fontes de células-tronco adultas (medula óssea, sangue periférico, tecido subcutâneo) mais precisamente as células progenitoras mesenquimais está o sangue de cordão umbilical. Sua principal função é o transporte de nutrientes e preencher as crescentes demandas de oxigênio da mãe para o feto (ALMEIDA et al., 2000). Neste estudo foi utilizado o sangue do cordão umbilical de cães ao nascimento, de 11 cadelas gestantes pesando entre 15 e 35 Kg. As células mesenquimais foram isoladas através da separação por gradiente de densidade com o reagente FICOLL, posteriormente o sangue foi diluído em PBS e centrifugado. O pellet contendo células foi retirado e essas então acondicionadas em meio DMEM contendo 10% de soro fetal bovino e antibiótico, homogeneizadas e contadas através da câmara de Newbauer. As células foram então plaqueadas de acordo com o ensaio que seriam submetidas. Através do ensaio de CFU-F pudemos observar uma população de células aderentes isoladas da porção mononuclear do sangue de cordão umbilical que apresentou-se altamente heterogênea. Foram identificados, pelo menos, quatro tipos morfológicos distintos: células epitelióides grandes e pequenas; células de aspecto fusiforme; e células de aspecto estrelado e quando em confluência, as células apresentaram padrão de crescimento similar ao de miofibroblastos, normalmente observado em culturas de músculo liso e de estroma da medula óssea hematopoética. Na maioria das análises as colônias se apresentaram em número desejável, havendo uma variação de baixo a alto. Esse ensaio apresentou grande eficácia no isolamento, quantificação e caracterização morfológica das células mesenquimais obtidas a partir do sangue de cordão umbilical canino. / This project has as objective established cultivation techniques, isolation, expansion and quantification of mesenchymal cells from umbilical cord blood (UCB) of dogs of varied breeds for application in cellular therapies. Nowadays, several cell-trunk types have been studied due to his/her differentiation capacity in several woven (HERZOG et al., 2003). The isolation, quantification and expansion of those cells allow the cellular therapy to be used in the treatment attempt in pathologies (BARKER et al., 2003). Among the adult cell-trunk sources (bone marrow, peripheral blood, subcutaneous tissue) more precisely the progenitors mesenchymal cells are the umbilical cord blood. Her main function is the transport of nutrients and to fill out the crescents demands of the mother\'s oxygen for the fetus (ALMEIDA et al., 2000). In this study, the blood was used from the umbilical cord of dogs to the birth, of 11 pregnant female dogs weighing between 15 and 35 Kg, the mesenchymal cells were isolated through the separation for density gradient with the reagent FICOLL, later the blood was diluted in PBS and centrifuged according to protocol, the pellet containing cells was removed and those then conditioned in half DMEM containing 10% of bovine fetal serum and antibiotic, homogenized and counted through the camera of Newbauer. They were plated then in agreement with the rehearsal that they would be submitted. Through the rehearsal of CFU-F (Colony Forming Unit - Fibroblast) we could observe a population of isolated adherent cells of the mononuclear population of the umbilical cord blood that came highly heterogeneous. They were identified, at least, four different morphologies: big and small epithelial cells; aspect fusiforme; and cells of starry aspect and when in confluence, the cells presented pattern of similar growth to the of miofibroblastos, usually observed in cultures of flat muscle and of stromal of the hematopoietic bone marrow. In most of the analyses the colonies came in desirable number, having a variation of low the high. That rehearsal presented great effectiveness in the isolation, quantification and morphologic characterization of the mesenchymal cells obtained starting from the umbilical cord blood of canine.

Estudos envolvendo a utilização do sangue de cordão umbilical foram intensificados na última década, devido ao grande potencial que estas possuem nas pesquisas de transplantes e ontogenia celular. A investigação dos métodos para a purificação e caracterização dessas células em diferentes animais pode aumentar a utilização destes como modelos experimentais para uma variedade de propostas científicas e terapêuticas. Para desenvolver a caracterização das células de sangue de cordão umbilical foram utilizadas 20 amostras oriundas de fetos de com idades compatíveis ao segundo e terceiro terço de gestação. Estas amostras foram processadas de duas formas distintas. A primeira forma visou às células presentes na camada leucocitária total, a segunda visou as células com densidade menor que 1077 separadas pelo Ficoll Paque. Os “pellets" resultantes foram processados para posterior observação por microscopia eletrônica de transmissão. Foram constatadas a presença de células granulares (basófilos, eosinófilos e neutrófilos) e agranulares (células bláticas, precursores eosinofílicos e linfócitos) em diferentes estágios de maturação em ambos os grupos e também células com características morfológicas compatíveis a apoptose. / Studies involving the use of umbilical cord blood were intensified in the last decade, due to its huge potential for transplant research and the ontogeny of leucocytes cells. The investigation of the methods to purify and characterize these cells in different animals are a base for experimental models for a variety of scientific and therapeutic proposals. To develop the characterization of the umbilical cord cells, twenty samples of fetal were collected. The fetal were in the second and third thirds of the gestation. These samples were processed in two distinct forms. The first form, studied the cells in the buffet coat. The second, studied the cells with density less than, 1,077 separated by the Ficoll Paque. The resulting pellets were processed for later observation by electronic microscopy transmission. The presence of granular and non granular cells were detected in different maturation stages in both groups and also morphological compatible cells with apoptosis.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-15Bitstream added on 2014-08-13T18:00:30Z : No. of bitstreams: 1 000758631_20141230.pdf: 57514 bytes, checksum: 99bd69df8cf22105bae780c96122659b (MD5) Bitstreams deleted on 2015-01-05T11:00:47Z: 000758631_20141230.pdf,Bitstream added on 2015-01-05T11:01:46Z : No. of bitstreams: 1 000758631.pdf: 910156 bytes, checksum: 925087047ed2f39bbadbcd075a976c4a (MD5) / Estudos com células-tronco mesenquimais (CTMs) estão em crescente avanço, baseando-se em evidências das suas propriedades imunomodulatórias, anti-inflamatórias e de regeneração dos tecidos. Porém, ainda não há consenso sobre qual a melhor fonte de obtenção das CTMs de equinos. O objetivo deste estudo foi avaliar o cultivo, a caracterização imunofenotípica e o potencial de diferenciação de CTMs provenientes da medula óssea (CTM-MO), tecido adiposo (CTM-TA) e cordão umbilical (CTM-CU) de equinos, a fim de se definir qual é a melhor fonte para compor um banco de células visando a terapia alogênica. As CTM-MO, CTM-TA e CTM-CU foram cultivadas in vitro e avaliadas quanto aos marcadores CD105, CD44, CD34, CD90 e MHC-II através da citometria de fluxo, e o MHC-II também pelo método de imunocitoquímica, Adicionalmente, as CTMs foram avaliadas in vitro quanto ao potencial de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica. A coleta e cultivo das CTM-MO, CTM-TA e CTM-CU se mostraram viáveis, e foram capazes de se diferenciar em linhagem osteogênica, adipogênica e condrogênica. As CTMs revelaram elevada expressão dos marcadores CD105, CD44 e CD90 e baixa ou ausência de expressão dos marcadores MHC-II e CD34. O MHC-II não foi expressado pela técnica de imunocitoquímica em nenhuma das CTMs estudadas. A MO, TA e CU são fontes viáveis para obtenção de CTMs de equinos, sendo confirmada as características imunofenotípicas e de multipotencialidade. No entanto, as CTM-MO e CTM-TA apresentaram melhor caracterização imunofenotípica, in vitro, quando comparadas com as CTM-CU / Studies with mesenchymal stem cells (MSCs) are increasing due to their immunomodulatory and anti-inflammatory properties, and tissue regeneration. However, there is still no agreement about the best source of equine MSCs. The aim of this study was to evaluate cell culture, immunophenotypic characterization and potential of differentiation of equine MSCs from bone marrow (BM-MSC), adipose tissue (AT-MSC) and umbilical cord (UC-MSC), in order to define which is the best source for a cell bank aiming allogeneic therapy. The BM-MSC, AT-MSC and UC-MSC were cultured in vitro and assessed for CD105, CD44, CD34, CD90 and MHC-II markers by flow cytometry, and MHC-II also by immunocytochemistry. Additionally, MSCs were evaluated in vitro for osteogenic, adipogenic and chondrogenic potential. The harvest procedure and cell culture of BM-MSC, AT-MSC and UC-MSC were feasible and the MSCs were able to differentiate into osteogenic, adipogenic and chondrogenic lineages. MSCs showed high expression for CD105, CD44 and CD90 and low or negative expression for CD34 and MHC-II. The MHC-II was not expressed by immunocytochemistry technique in any of the MSCs studied. The BM, AT and UC are feasible sources for harvesting equine MSCs, and their immunophenotypic and multipotentiality characteristics were confirmed. However, BM-MSC and AT-MSC showed better in vitro immunophenotypic characterization when compared to UC-MSC

Orientador: Fernanda da Cruz Landim / Coorientador: Leandro Maia / Banca: Betânia Souza Monteiro / Banca: Bruna de Vita / Resumo: Células tronco mesenquimais (CTMs) possuem potencial terapêutico regulando a inflamação, prevenindo a formação de feridas e regenerando tecidos. Por sua propriedade imunomoduladora, tem sido estudadas no transplante alogênico. As CTMs derivadas de anexos fetais são destaque por serem de fácil obtenção, de tecidos geralmente descartados e com grande possibilidade de formação de bancos. O presente trabalho objetiva avaliara resposta inflamatória in vivo do músculo glúteo médio à inoculação alogênica de CTMs derivadas de cordão umbilical equino. As CTMs foram cultivadas e caracterizadas por meio de imunofenotipagem e diferenciação em linhagens mesodermais e então, criopreservadas. Após descongelação e expansão as CTMs foram transplantadas no dia 0 no músculo glúteo médio direito e esquerdo, em duas regiões diferentes, em seis éguas hígidas. Como controle foram realizadas injeções de Solução Balanceada de Hank's caudalmente às regiões onde foram transplantadas as CTMs. As biópsias musculares forma realizadas 30 dias antes do transplante de CTMs, bem como dois dias depois do transplante e 7 dias após o transplante. Todos os transplantes e biópsias foram precedidos pelo exame ultrassonográfico além de colheita de sangue para os parâmetros hematológicos. As CTMs foram bem caracterizadas, apresentaram alta clonicidade e não provocaram alteração nos parâmetros hematológicos. O exame ultrassonográfico revelou aspecto sugestivo de reação inflamatória 48 horas após os transplantes em ambos os grupos, controle e tratadoNa avaliação histológica não foram encontradas diferenças entre os grupos tratado e controle em nenhum dos momentos estudados. Uma discreta diferença no parâmetro de infiltrado neutrofílico foi encontrada entre D30 e D2 apenas no grupo tratado (P<0,05), entretanto não houveram diferenças em D7. Desta forma, podemos concluir a terapia celular não incitou resposta... / Abstract: Mesenchymal stem cells (MSCs) have therapeutic potential regulating inflammation, preventing the formation of wounds and regenerating tissues. MSCs derived from fetal membranes are highlighted because they are easy to obtain, from tissues usually discarded and with great possibility of bank formation. This study evaluated the in vivo inflammatory response of the gluteus medius muscle to the inoculation of allogeneic MSCs derived from equine umbilical cord. MSCs were cultured and characterized by immunophenotyping and differentiation into mesodermal lineages, and next cryopreserved. After thawing and expansion of MSCs transplantation was performed on day 0 in the right and left middle gluteal muscle at two different regions in six healthy mares. Likewise, for the control group, an injection of Hank's-Balanced Solution was performed caudally to the regions where MSCs were transplanted. Muscle biopsies were performed 30 days before the transplantation of MSCs, 2 days and 7 days after transplantation. All biopsies and transplants were preceded by ultrasonographic examination, and blood samples retrieval for hematological parameters. The biopsies were be analyzed by histological techniques. The MSCs were well characterized, and possessed high clonogenicity causing no changes in the hematological parameters evaluated. Ultrasound examination was suggestive of inflammation 48 hours after transplantation in both groups, control (C) and treated (T). Histological evaluation found no differences between C and T groups in any of the time points studied. A discrete temporal inflammation were found between D30 and D2 (P <0.05) only in the T group, however no differences were found in D7. Thus, we conclude that the cellular therapy did not incited systemic inflammatory response to recipients, demonstrating, for the first time, that the allogeneic use of MSCs from equine umbilical cord are safety for use in horse ... / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:03:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000443353-Texto+Completo-0.pdf: 1896369 bytes, checksum: 19ecf303e539b93de8c9bda585ba0ebd (MD5) Previous issue date: 2012 / Objective: To estimate RANTES levels at maternal plasma, umbilical cord blood plasma and placenta in preeclampsia syndrome and normal pregnancy.Methods: A cross-sectional study was conducted to estimate RANTES levels in maternal plasma, placenta and cord blood plasma in preeclampsia syndrome (n=33) compared to a control group of women with normal pregnancy (n=36) attended at São Lucas Hospital/PUCRS, Porto Alegre, RS Brazil. Concentrations of RANTES were measured using a human RANTES ELISA assay.Results: Women with preeclampsia syndrome showed significantly higher RANTES levels in plasma and placenta in comparison to women with normal pregnancy (P<0. 01). The cord blood plasma of infants born from women with preeclampsia syndrome had a significantly decreased RANTES levels compared to infants born from a normal pregnancy (P<0. 01). The concentration of placental RANTES was positively correlated with RANTES in the maternal plasma (Pearson´s correlation r= 0. 697; p<0. 001), and negatively with the cord blood plasma (r= -0. 818; p<0. 001). A strong negative correlation was also demonstrated between maternal plasma and cord blood plasma RANTES (r= -0. 751, p<0. 001).Conclusion: This study shows a distinct inflammatory response between mother and new born in preeclampsia syndrome and normal pregnancy. In preeclampsia syndrome maternal plasma and placenta displayed increased pro-inflammatory RANTES cytokine concentration, however a reduced levels were detected in the umbilical cord plasma from women with preeclampsia syndrome, suggesting a fetal antiflammatory response. / Objetivo: O objetivo deste trabalho foi estimar os níveis de RANTES na placenta e nos plasmas materno e do cordão umbilical na síndrome de pré-eclâmpsia e gestação normal.Métodos: Estudo transversal e observacional estimou os níveis de RANTES na placenta e nos plasmas materno e do cordão umbilical na síndrome de pré-eclâmpsia (n=33) comparando com um grupo controle de gestantes normais (n=36) atendidas no Hospital São Lucas/PUCRS, Porto Alegre, RS, Brasil. As concentrações de RANTES foram verificadas através do método de enzima imuno ensaio (ELISA) específico para humanos.Resultados: Mulheres com síndrome de pré-eclâmpsia apresentaram níveis significativamente maiores de RANTES no plasma e placenta quando comparadas a gestantes normais (P<0,01). O plasma do cordão umbilical de recém-nascidos de gestantes com pré-eclâmpsia mostraram níveis de RANTES significativamente menores que o plasma do cordão umbilical de recém-nascidos de gestantes normais (P<0,01). A concentração de RANTES placentário correlacionou-se positivamente com a concentração de RANTES no plasma materno (r= 0,697; P<0,001) e negativamente com o plasma do cordão umbilical (r= - 0,818; P< 0,001). Forte correlação negativa na concentração de RANTES foi demonstrada entre plasma materno e plasma do cordão umbilical (r= - 0,751; P<0,001).Conclusão: Este estudo mostra uma resposta inflamatória distinta entre a mãe e o recém-nascido em ambas as condições, gestação normal e síndrome de pré-eclâmpsia. A placenta e o plasma materno demonstraram uma concentração da citocina inflamatória RANTES aumentada na síndrome de pré-eclâmpsia, entretanto, no plasma do cordão umbilical dos recém-nascidos dessas gestantes estava reduzida, sugerindo uma resposta fetal anti-inflamatória.

Tese (doutorado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2008 / Bibliografia: f. 101-129 / Introdução: A terapia celular para o tratamento de doenças cardíacas é um método terapêutico novo que pode levar a recuperação da função do miocárdio. Porém a fonte de células e o tipo celular com propriedades adequadas de regeneração do tecido cardíaco e / Introduction: Cell therapy for heart diseases treatment is a novel method that can lead to recovery of myocardium function. The best cell source and type for cardiac tissue regeneration, however, are not yet defined. Mesenchymal stem cells (MSCs) present

Tese (doutarado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2012 / Bibliografia: f. 136-162 / Introdução: Tendo em vista que as doenças cardiovasculares constituem uma importante causa de morbi-mortalidade, se faz necessário o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas na tentativa de diminuir o imenso impacto social e econômico. Neste sent / Introduction: Given that cardiovascular disease constitutes an important cause of morbidity and mortality, it is necessary to develop new therapeutic strategies in an attempt to reduce the immense social and economic impact. Cell therapy has shown promisi

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2009 / Bibliografia: f.48-54 / Introdução: A busca de uma fonte renovável e de fácil obtenção de células com capacidade de produção e secreção de insulina de modo regulado, para reposição das células ß perdidas no Diabetes Melito tipo 1 (DM1), é um tema de enorme interesse e uma altern / Introduction: The search for a renewable source of cells with insulin-producing capacity to replace ß cells destroyed by the autoimmune process in Type 1 Diabetes Mellitus, is a very interesting subject and a promising therapeutic alternative for this dis

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-05-21. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:29:11Z : No. of bitstreams: 1 000851315.pdf: 1476331 bytes, checksum: eba120cc7ab9336605a5035f69abf08e (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Células tronco mesenquimais (CTMs) possuem potencial terapêutico regulando a inflamação, prevenindo a formação de feridas e regenerando tecidos. Por sua propriedade imunomoduladora, tem sido estudadas no transplante alogênico. As CTMs derivadas de anexos fetais são destaque por serem de fácil obtenção, de tecidos geralmente descartados e com grande possibilidade de formação de bancos. O presente trabalho objetiva avaliara resposta inflamatória in vivo do músculo glúteo médio à inoculação alogênica de CTMs derivadas de cordão umbilical equino. As CTMs foram cultivadas e caracterizadas por meio de imunofenotipagem e diferenciação em linhagens mesodermais e então, criopreservadas. Após descongelação e expansão as CTMs foram transplantadas no dia 0 no músculo glúteo médio direito e esquerdo, em duas regiões diferentes, em seis éguas hígidas. Como controle foram realizadas injeções de Solução Balanceada de Hank's caudalmente às regiões onde foram transplantadas as CTMs. As biópsias musculares forma realizadas 30 dias antes do transplante de CTMs, bem como dois dias depois do transplante e 7 dias após o transplante. Todos os transplantes e biópsias foram precedidos pelo exame ultrassonográfico além de colheita de sangue para os parâmetros hematológicos. As CTMs foram bem caracterizadas, apresentaram alta clonicidade e não provocaram alteração nos parâmetros hematológicos. O exame ultrassonográfico revelou aspecto sugestivo de reação inflamatória 48 horas após os transplantes em ambos os grupos, controle e tratadoNa avaliação histológica não foram encontradas diferenças entre os grupos tratado e controle em nenhum dos momentos estudados. Uma discreta diferença no parâmetro de infiltrado neutrofílico foi encontrada entre D30 e D2 apenas no grupo tratado (P<0,05), entretanto não houveram diferenças em D7. Desta forma, podemos concluir a terapia celular não incitou resposta... / Mesenchymal stem cells (MSCs) have therapeutic potential regulating inflammation, preventing the formation of wounds and regenerating tissues. MSCs derived from fetal membranes are highlighted because they are easy to obtain, from tissues usually discarded and with great possibility of bank formation. This study evaluated the in vivo inflammatory response of the gluteus medius muscle to the inoculation of allogeneic MSCs derived from equine umbilical cord. MSCs were cultured and characterized by immunophenotyping and differentiation into mesodermal lineages, and next cryopreserved. After thawing and expansion of MSCs transplantation was performed on day 0 in the right and left middle gluteal muscle at two different regions in six healthy mares. Likewise, for the control group, an injection of Hank's-Balanced Solution was performed caudally to the regions where MSCs were transplanted. Muscle biopsies were performed 30 days before the transplantation of MSCs, 2 days and 7 days after transplantation. All biopsies and transplants were preceded by ultrasonographic examination, and blood samples retrieval for hematological parameters. The biopsies were be analyzed by histological techniques. The MSCs were well characterized, and possessed high clonogenicity causing no changes in the hematological parameters evaluated. Ultrasound examination was suggestive of inflammation 48 hours after transplantation in both groups, control (C) and treated (T). Histological evaluation found no differences between C and T groups in any of the time points studied. A discrete temporal inflammation were found between D30 and D2 (P <0.05) only in the T group, however no differences were found in D7. Thus, we conclude that the cellular therapy did not incited systemic inflammatory response to recipients, demonstrating, for the first time, that the allogeneic use of MSCs from equine umbilical cord are safety for use in horse ... / FAPESP: 2013/01383-0