Submitted by Maykon Nascimento (maykon.albani@hotmail.com) on 2016-04-27T18:29:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Marcio Sergio Vargas.pdf: 889666 bytes, checksum: 09fb7c3fc4a682e771f2cff4f5cd1d02 (MD5) / Approved for entry into archive by Patricia Barros (patricia.barros@ufes.br) on 2016-06-06T12:53:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Marcio Sergio Vargas.pdf: 889666 bytes, checksum: 09fb7c3fc4a682e771f2cff4f5cd1d02 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T12:53:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertacao Marcio Sergio Vargas.pdf: 889666 bytes, checksum: 09fb7c3fc4a682e771f2cff4f5cd1d02 (MD5) / Objetivou-se neste trabalho comparar a eficiência da indução da luteólise em diferentes momentos após a coleta de embriões, e avaliar a regressão morfológica e funcional em animais superovulados e não superovulados. No primeiro estudo, foi avaliado o momento de aplicação do luteolítico (dia da coleta dos embriões – D7 ou três dias após – D10). Vacas da raça Holandesa (N=40) foram superovuladas pela aplicação de 400 UI de FSH (Pluset®) em doses decrescentes e, após a coleta dos embriões, distribuídas aleatoriamente em dois grupos, que receberam uma aplicação IM de 0,5mg de análogo de PGF2α (Ciosin®) no D7 ou no D10, respectivamente. A luteólise foi monitorada pela concentração plasmática de progesterona analisada por radioimunoensaio em fase sólida, e os valores obtidos comparados por análise de variância. Nas vacas tratadas no D10, ocorreu redução da concentração de progesterona (P<0,05). No grupo tratado no D7, uma parcela dos animais não apresentou redução na concentração plasmática de progesterona a valores abaixo de 1ng/mL (P<0,05). No experimento 2 foi avaliada a luteólise morfológica e funcional em doadoras superovuladas. Vacas da raça Holandesa (N=03) e da raça Brahman (N=03) (Grupo Tratadas – GT) foram superovuladas pela aplicação de 400 UI de FSH (Pluset®) em doses decrescentes e, três dias após a coleta dos embriões (D10), receberam uma aplicação de 0,5mg de cloprostenol sódico (Ciosin®). Vacas mestiças (Grupo Controle – GC) (N=8) foram sincronizadas e receberam a aplicação de luteolítico no momento do ciclo semelhante (D10). A luteólise foi monitorada pela concentração plasmática de progesterona e LH e pelo acompanhamento ultrassonográfico da regressão luteal com aparelho de ultrassonografia (Áquila Vet®) equipado com probe de 8,0 MHz. Os valores de concentração de P4, LH, tamanho médio dos corpos lúteos e área luteal total foram avaliados por análise de variância e diferenças entre médias comparadas pelo teste de Tukey (P<0,05). A concentração de progesterona em ambos os grupos regrediu a valores abaixo de 1ng/mL (P<0,05). A concentração de LH apresentou elevação de seus valores séricos em ambos os grupos. O tamanho médio luteal e a área luteal total apresentaram redução em ambos os grupos. Conclui-se que: a indução da luteólise é mais eficiente com a aplicação de luteolítico no D10; o padrão de regressão morfológica e funcional na luteólise induzida em animais superovulados é semelhante a animais não superovulados; o maior volume de tecido luteal e as conseqüentes elevadas concentrações de progesterona podem retardar o restabelecimento do padrão de liberação de LH e manifestações de estro. / The objectives of this study were to compare the efficiency of luteolysis induction at different times after embryo flushing and to evaluate corpora lutea morphological and functional regression in superovulated and non-superovulated animals. In the first study, we evaluated the moment of luteolysis induction (day embryo flushing – D7 or three days later – 10). Holstein cows (N = 40) were superovulated with 400 IU of FSH (Pluset®) in decreasing doses, and after embryo flushing were randomly allocated into two groups which received 0.5 mg IM cloprostenol of PGF2α analogous (Ciosin®) on D7 or D10, respectively. The luteolysis was monitored by plasmatic progesterone, measured by solid phase radioimmunoassay, and the values were compared by analysis of variance. In cows treated at D10 was reduction in the concentration of Progesterone (P<0.05). In the group treated at D7, a portion of the animals shored no reduction in plasma concentration of progesterone to values below 1 ng/mL (P<0.05). In experiment 2 we assessed the morphological and functional luteolysis in superovulated donors. Holstein cows (n = 03) and Brahman (n = 03) (Treated Group - GT) were superovulated by application of 400 IU of FSH (Pluset®) in decreasing doses, and three days after collection of embryos (D10) received an application of 0.5 mg cloprostenol IM (Ciosin®). Crossbred cows (control group - CG) (N = 8) were synchronized and received the luteolytic agent at the same moment of the cycle (D10). The luteolysis was monitored in samples of plasma progesterone and LH, and ultrasound for monitoring of luteal regression with ultra-sonography equipment (Aquila Vet®) using a 8.0 MHz probe. The values obtained from progesterone and LH concentration, average size of CLs and total luteal area were evaluated by analysis of variance and differences between means compared by Tukey test (P<0.05). The concentration of progesterone in both groups decreased to values below 1ng/mL (P<0.05). LH concentrations showed elevated values in plasmatic concentration in both groups. The medium luteal size and luteal total area were reduced indicating morphological luteolysis. We conclude that: the induction of luteolysis is most effective when luteolytic application is performed on D10; the pattern of morphological and functional regression in induced luteolysis in superovulated animals is similar to animals non-superovulated; the higher volume of luteal tissue and the resulting high concentrations of P4 may delay the resumption of the pattern of LH release and expression of estrus.

A gonadotrofina coriônica equina (eCG) tem sido utilizada em programas de sincronização para inseminação artificial em tempo fixo e normalmente promove o aumento do volume do corpo lúteo e a da produção de progesterona. Além disso, esta mesma gonadotrofina pode ser utilizada para superovulação. Desse modo, hipóteses relativas aos mecanismos pelos quais gonadotrofinas exógenas alteram as funções celulares nos corpos lúteos resultantes foram formuladas. Para testar tais hipóteses, 18 vacas (Bos indicus) foram divididas em grupos: controle (n=5), estimulado (n=6) e superovulado (n=7) e a ovulação das mesmas foi sincronizada usando um protocolo já estabelecido com dispositivo de progesterona. Os animais estimulados receberam 400 UI de eCG no dia de remoção do dispositivo de progesterona e os animais superovulados 4 dias antes. No dia 7 após injeção de GnRh, os animais foram abatidos para a coleta de CLL e sangue. Análises de peso e volume de CL, concentração de progesterona (P4), bem como da expressão gênica e proteica de fatores angiogênicos e de proteínas esteroidogênicas foram realizadas. Além disso, o transcriptoma foi analisado por microarranjo. Foi observado que o volume do CL foi maior nos animais do grupo estimulado (1177,37 ± 167,07 mm3) e ainda maior nos do superovulado (1495,18 ± 137,01 mm3) quando comparados ao grupo controle (830,33 ± 234,99 mm3; p = 0,03). A concentração média de progesterona por CL nos animais do grupo estimulado foi maior que nos animais do grupo controle (5,95 ± 0,17 vs 3,69 ± 0,72 ng/ml; p = 0,03) e que nos superovulados (4,11 ± 0.73; p = 0,01). Além disso, os tratamentos com eCG aumentaram a expressão do FGFR2 e também da STAR nos animais estimulados e superovulados (p < 0,05). Quanto aos resultados do microarranjo, no total 242 transcritos foram aumentados e 111 foram diminuídos nos animais estimulados e 111 foram aumentados e 113 diminuídos nos animais superovulados em relação aos animais controle (~1,5 vezes, p 0.05). Entre os genes diferencialmente expressos, muitos estavam envolvidos na síntese de lipídios e na produção de progesterona, tais como: PPARG, HMGCR, STAR, receptores de prolactina e folistatina. Estes achados demonstraram que os tratamentos com eCG modularam a expressão gênica diferencialmente, dependendo do tratamento, e que nossos dados contribuem para entender as vias relacionadas ao aumento do volume do CL e da produção de progesterona observada após os tratamentos. Em um segundo experimento, foi realizado análises da influência do FSH na expressão de VEGF no cultivo de células da granulosa. Neste experimento foi possível observar que o FSH aumentou a expressão gênica e proteica do VEGF, colaborando com a ideia de que as gonadotrofinas têm propriedades angiogênicas. / Equine chorionic gonadotropin (eCG) has been widely used in synchronization protocol to artificial insemination program and usually promote corpus luteum (CL) volume increases and stimulates progesterone production. Furthermore the same gonadotropin can be used to superovulation protocols. Thus, hypotheses concerning the mechanisms by which exogenous gonadotropins alter cellular functions in resulting corpora lutea were formulated. To test that hypothesis, 18 (Bos indicus) cows were divided into control (n=5), stimulated (n=6) and superovulated groups (n=7). Ovulation was synchronized using a progesterone device-based protocol. Stimulated animals received 400 IU of eCG of device removal and superovulated animals received 2000 IU of eCG 4 days prior. Corpora lutea (CLL) and blood samples were collected seven days after GnRH administration. Analyses of CL weight and volume, progesterone (P4) concentration, as well as the gene and protein expression of angiogenic and steroidogenic proteins were performed. Furthermore, the transcriptome was evaluated by microarray. The CL volume was higher in superovulated (1495.18 ± 137.01) than in stimulated (1177.37 ± 167.07) cows and higher in stimulated than in the control (830.33 ± 234.99) cows, and the P4 concentration per CL was higher in stimulated (5.95 ± 0.17 ng/ml) animals than in the control (3.69 ± 0.72 ng/ml) and superovulated (4.11 ± 0.73 ng/ml; P = 0.01) animals. Overall, 242 transcripts were up-regulated and 111 transcripts were downregulated in stimulated cows (P 0.05) and 111 were up-regulated and 113 down-regulated in superovulated cows in relation to the control (1.5 fold, P 0.05). Among the differentially expressed genes, many were involved in lipid biosynthesis and progesterone production, as PPARG, HMGCR, STAR, prolactin receptors and follistatin. In conclusion, eCG modulates gene expression differently depending on the treatment. Our data contribute to the understanding of the pathways involved in increased CL volume and progesterone levels observed after eCG treatment. In a second experiment, analyzes were performed about the influence of FSH on the expression of VEGF in the culture of granulosa cells. In this experiment it was observed that FSH increases the expression of the VEGF gene and protein, these finding collaborate with the idea that gonadotrophins have angiogenic properties.

Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

Em programas de transferência de embriões, as perdas embrionárias após a inovulação têm sido relacionadas com uma capacidade reduzida do corpo lúteo (CL) em secretar progesterona (P4), uma vez que este hormônio prepara o endométrio para a implantação e a manutenção da prenhez. Assim, o objetivo deste trabalho foi estudar a eficácia da utilização de dispositivo intravaginal contendo progesterona (CIDR®) por 14 dias em receptoras de embrião, para a indução de folículos persistentes e formação de CLs maiores do que aqueles formados com a utilização de CIDR® por 8 dias. Duzentas e setenta e oito novilhas Bos taurus x Bos indicus foram divididas em 4 grupos. As receptoras do Grupo 1 (G1, n = 70) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 por via intramuscular (IM) no dia da colocação do CIDR® (D0), oito dias depois (D8), o dispositivo foi retirado e foi aplicado um análogo da prostaglandina F2 alfa (PGF2 alfa - 0,53 mg de Cloprostenol Sódico) IM pela manhã. No D9, foi aplicado 0,5 mg de BE IM e o D17 foi o dia da inovulação. Os animais do Grupo 2 (G2, n = 71) receberam 2,0 mg de BE + 50 mg de P4 no dia da colocação do CIDR® (D0), todavia, esses animais receberam 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no início do tratamento e outra 5 dias depois. Nestes animais, o CIDR® foi mantido por 14 dias; assim, no D15 foi aplicado 0,5 mg de BE e o dia da inovulação, foi o D23. No Grupo 3 (G3, n = 67), o tratamento foi semelhante ao do G2, no entanto a PGF2 alfa foi aplicada uma única vez, 5 dias após o início do tratamento. No Grupo 4 (G4, n = 70), o tratamento foi semelhante ao do G2, tendo os animais recebido 2 aplicações de PGF2 alfa, uma no dia da colocação do CIDR® e outra no dia da retirada. A avaliação ultrassonográfica dos ovários foi realizada um dia após a retirada do CIDR® e no dia da inovulação, quando foram colhidas amostras de sangue para dosagem de P4. O diâmetro médio do folículo dominante (FD) foi maior nos grupos G2, G3 e G4 quando comparado com o grupo G1. A área do CL, a concentração plasmática de P4 e a taxa de aproveitamento foram maiores nos grupos G2 e G3 que no grupo G1, enquanto o grupo G4 não diferiu estatisticamente dos demais. A taxa de concepção nos grupos G2 e G3 foi inferior àquela do grupo G1, mas não diferiu entre o grupo G4 e os demais. A taxa de prenhez não apresentou diferença estatística entre os grupos. Esses resultados sugerem que a utilização de CIDR® por tempo prolongado, quando associada à aplicação de PGF2 alfa no início do tratamento, é eficaz na formação de folículos persistentes, que resultam em CLs aumentados e com maior capacidade de secretar P4 . No entanto, ao contrário do esperado, a taxa de concepção foi reduzida nos grupos em que o tratamento visava a formação de folículos persistentes. / Embryo losses in cattle embryo transfer programs have been related to a corpus luteum (CL) inability to secrete progesterone (P4), necessary to endometrial preparation for embryo implantation and pregnancy maintenance. Thus the objective of this experiment was to evaluate the efficacy of a treatment with progesterone-releasing intravaginal devices (CIDR®) for a period of 14 days in order to induce the formation of a persistent follicle and a CL of larger diameter than the ones produced during the conventional 8 days CIDR® treatment. Two hundred seventy-eight cross-bred Bos taurus x Bos indicus heifers were randomly allocated in four groups. Heifers in Group 1 (G1, n = 70) received 2.0 mg estradiol benzoate (EB) + 50 mg of P4 at the moment of CIDR® insertion (D0), a 0.53 mg injection of cloprostenol (PGF2 alfa analogous) at the time of CIDR® removal (D8) and 0.5 mg EB on D9. On D17 animals received a frozen/thawed embryo by direct transfer. Heifers in Group 2 (G2, n = 71) received a CIDR® device combined with 2.0 mg of EB + 50 mg of P4 (D0). Animals of this group received 2 injections of PGF2 alfa, one on D0 and the other on D5. The CIDR® was removed on D14. A 0.5 mg injection of EB was administered on D15. The treatment in Group 3 (G3, n = 67) was similar to G2, except by the fact that a single injection of PGF2 alfa was administered on D5. Treatment performed on animals of Group 4 was similar to the one performed on G2. However, animals of this group received two injections of PGF2 alfa, one at the time of CIDR® insertion and the other at the moment of it?s removal. Ovarian ultrasonography was performed on the day after CIDR® removal and at the day of embryo transfer. Blood samples for P4 analysis were also collected on the day of embryo transfer. Mean diameter of the dominant follicle was larger in heifers in G2, G3 and G4 when compared to G1. The CL area, plasma progesterone concentrations and recipient selection rate was greater in G2 and G3 than in G1, but G4 was not different of the other groups. Conception rates were lower in G2 and G3 when compared to G1. No differences between groups were found regarding to the pregnancy rates. These results suggest that a CIDR® long-term treatment, when associated with PGF2 alfa in the beggining of the treatment is efficient to stimulate the formation of a persistent follicle, resulting in a larger CL which provides higher P4 concentration. However, the induction of a persistent follicle had a negative effect on the conception rates which was not expected.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-14Bitstream added on 2014-08-13T18:01:00Z : No. of bitstreams: 1 000748968.pdf: 2613774 bytes, checksum: 9251a495567da57c3e93a78c32f41924 (MD5) / Nos últimos anos a gonadotrofina coriônica humana (hCG), por sua ação biológica semelhante ao hormônio luteinizante (LH), tem sido estudada não apenas como indutor da ovulação, mas também como agente luteotrófico. A ultrassonografia (US) Doppler, quando utilizada para análise ovariana, permite a avaliação hemodinâmica folicular e luteal, fornecendo importantes informações funcionais destas estruturas. Os objetivos deste estudo foram descrever as alterações hemodinâmicas de folículos pré-ovulatórios e, caracterizar o desenvolvimento estrutural e funcional do corpo lúteo (CL) de éguas tratadas com distintas doses de hCG, em diferentes momentos do ciclo estral. No experimento 1, éguas receberam 750, 1500, 2500 UI hCG ou NaCl 0,9%, por via intravenosa, na detecção de folículo pré-ovulatório ≥35 mm. A perfusão vascular (PV) folicular foi avaliada, por meio da US Doppler, a cada hora durante 12 primeiras horas pós-tratamento, e posteriormente, a cada 6 horas até ovulação. No experimento 2, foram utilizadas 750, 1500, 2500 UI hCG, para induzir ovulação, no dia da ovulação (D0) ou dois dias pós-ovulação (D2). A área, volume, PV luteal e concentração plasmática de progesterona (P4), foram avaliadas diariamente entre D0 e D8. Não foi detectado efeito da dose, do tratamento e tempo para PV folicular. No experimento 2, para todas as variáveis, não observou-se efeito da dose e tratamento, no entanto, ao longo dos dias, houve diferença significativa, exceto para área e volume luteal. A hCG, para induzir ovulação, não alterou a PV folicular pós-tratamento. Quando utilizada para induzir a ovulação, no D0, ou D2, não influenciou o desenvolvimento estrutural e funcional luteal, independente da dose / In recent years the hCG, because of its biological LH-like action, has been studied not only to induce ovulation, but also as luteotrophic agent. Doppler ultrasonography is a technique that allows the hemodynamic evaluation of follicular and luteal tissue, in real time, providing important functional information about these structures. This study aimed to describe the hemodynamics changes of pre-ovulatory follicles and characterize the structural and functional development of the corpus luteum of mares treated with different doses of hCG, at different times of estrous cycle. In experiment 1, mares were treated with 750, 1500, 2500 IU of hCG or NaCl 0.9%, intravenously, on presence of pre-ovulatory follicle ≥35mm. Doppler US exams, to evaluate the follicle vascular perfusion, were done every hour during first 12 hours post-treatment. Thereafter, it was done every 6 hours until ovulation. In experiment 2, treatment was performed with 750, 1500 or 2500 IU of hCG to induce ovulation, on the day of ovulation or two days post-ovulation. The luteal area, volume and vascular perfusion, and plasma progesterone concentration were evaluated daily from D0 to D8. No effect of dose and time was detected for follicle vascular perfusion. In experiment 2, there was no effect of dose and moment of treatment for all end points. Throughout the day, all end points presented significant difference, except the luteal area and volume. The hCG-treatment, to induce ovulation, did not increase follicle vascular perfusion post-treatment. hCG administered on the presence of follicle ≥35 mm, on D0 or on D2, had no positive influence on structural and functional development of corpus luteum, independent of dose

Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Fabiana Ferreira de Souza / Banca: Ian Martin / Resumo: O objetivo do trabalho foi estudar os principais genes associados à produção, manutenção e regressão do corpo lúteo (CL) e correlacionar os achados com a produção de progesterona em vacas holandesas não lactantes. As vacas foram sincronizadas com o protocolo CIDR-SYNCH e distribuídas aleatoriamente em dois ambientes: termoneutro (n = 12) com temperatura 24°C e umidade 50%, estresse calórico (n = 12) com temperatura 38°C e umidade 70%. O dia zero (D0) foi definido como o dia da segunda aplicação de GnRH, em cada ambiente foram conformados tres tratamentos diferentes ao D7, para cada tratamento foram empregadas 4 vacas,: tratamento 1: 2 mL solução salina; tratamento 2: (25 mg) de Lutalyse® ; e tratamento 3: (12,5 mg) de Lutalyse®. O grau de estresse calórico foi determinado pelo índice de temperatura umidade. Concentrações plasmáticas de progesterona (P4) foram determinadas por quimioluminiscencia imediatamente antes e a cada 6 horas após do tratamento com PGF2α até 24 horas. Posteriormente, a coleta realizou-se a cada 12 horas até às 48 horas. A frequência respiratória, cardíaca e temperatura retal foram mensuradas a cada 12 horas durante 7 dias; a temperatura vaginal foi determinada durante 7 dias com leituras a cada 10 minutos. A frequência respiratória, temperatura retal e vaginal foram superiores no ambiente de estresse calórico em relação ao termoneutro (P < 0.05); a frequência cardíaca não diferiu entre os dois ambientes (P > 0.05). As concentrações de P4 não diferiram (P > 0,05) entre os ambientes e seus respetivos tratamentos. Porém, na avaliação individual dos ambientes observou-se que, as vacas que receberam tratamento com ½XPGF2α independente do ambiente apresentaram uma diminuição inicial de P4 até às 18 horas com recuperação em momentos subsequentes, evidenciando uma luteólise parcial. Correlação positiva (r=0,5) foi evidenciada entre o tamanho do corpo lúteo e produção de... / Abstract: The objective was to study the main genes associated with the production, maintenance and regression of the corpus luteum (CL) and correlate the findings with the production of progesterone in non-lactating Holstein cows, besides clarifying physiological mechanisms involved in the response to heat stress. The cows were synchronized with CIDR-SYNCH protocol and randomly distributed in two environments: thermoneutral (n = 12), temperature 24 ° C, humidity 50%; heat stress (n = 12), temperature 38 ° C, humidity 70%. The D0 was defined as the day of the second application of GnRH. In each environment three different treatments were performed and in D7, for each treatment 4 cows were used. Treatment 1: 2 ml saline; Treatment 2: 25 mg Lutalyse®; and Treatment 3: 12.5 mg Lutalyse®. The degree of heat stress was determined by the temperature and humidity index. Blood samples were obtained for determining plasma concentrations of progesterone (P4) by chemiluminescence immediately before and every 6 hours after treatment with PGF2α, until 24 hours. Subsequently, the collection was performed every 12 hours up to 48 hours. The respiratory rate, heart rate and rectal temperature were measured every 12 hours for 7 days; vaginal temperature was determined over 7 days with readings every 10 minutes. The respiratory rate, rectal and vaginal temperature were higher in heat stress environment when compared to thermoneutral (P <0.05). Heart rate did not differ between the two environments (P> 0.05). There was no difference (P> 0.05) in the concentration of P4 when the environments and their respective treatments were compared. However, when evaluating individually the environments, it was observed that the cows who received the treatment with ½XPGF2α in heat stress and thermoneutral environment showed an initial P4 decrease up to 18 hours with subsequent recovery, showing a partial luteolysis. This fact demonstrates that heat stress caused no ... / Mestre

Orientador:Flávia Lombardi Costa / Co-orientador:Cláudia Maria Bertan Membrive / Banca:Caliê Castilho / Banca:Ricardo da Fonseca / Resumo:Fêmeas bovinas leiteiras tratadas com somatotropina recombinante bovina (bST) apresentam maior taxa de concepção. Verificou-se que componentes maternais e embrionários são positivamente afetados pela bST favorecendo a concepção. Entretanto, poucas investigações foram realizadas em fêmeas de corte. Hipotetizou-se que vacas de corte tratadas com bST, no dia da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) ou sete dias após a IATF, apresentam maiores taxas de concepção e que a morfometria das glândulas endometriais e a proporção de células esteroidogênicas luteais são alteradas por tal tratamento. No presente estudo objetivou-se avaliar o efeito da aplicação de bST, na dose de 250 ou 500mg, no dia da IATF, na taxa de concepção aos 30 dias de gestação (Experimento 1); verificar os efeitos da aplicação de 500mg de bST, sete dias após a IATF, na taxa de concepção aos 30 dias de gestação (Experimento 2) e averiguar os efeitos da bST na proporção de células esteroidogênicas luteais e na morfometria das glândulas endometriais (Experimento 3). No Experimento 1, vacas Nelore (n=587) receberam um dispositivo intravaginal contendo progesterona (1g; DIB®) associado a uma injeção intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (2mg; Gonadiol®). Os dispositivos foram removidos oito dias após, quando as vacas foram tratadas com D-cloprostenol (0,530μg; Ciosin®) e gonadotrofina coriônica equina (300UI; Novormon®) e 24 horas após receberam benzoato de estradiol (1mg; Gonadiol®), via IM. Após 30 horas da última injeção (D0) as fêmeas foram submetidas à IATF e receberam 5ml de solução salina (Grupo Controle; n= 194) ou bST (Boostin) na dose de 250mg (Grupo bST 250; n=197) ou 500mg (Grupo bST 500; n=196), via subcutânea (SC). O diagnóstico de gestação foi realizado 30 dias após a IATF por ultrassonografia. No Experimento 2, vacas Nelore (n=243) receberam o... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract:cows treated with recombinant bovine somatotropin (bST) have higher conception rate. It was found that maternal and embryonic components are positively affected by the design favoring bST. However, few investigations have been done on beef cows. It was hypothesized that beef cows treated with bST, the day timed AI (TAI) or seven days after TAI, have higher conception rates and the morphology of the endometrial glands and the proportion of steroidogenic luteal cells are altered by such treatment. The present study aimed to evaluate the effect of bST at a dose of 250 or 500mg, the day of TAI, the conception rate at 30 days of gestation (Experiment 1); verify the effects of application of 500mg of bST, seven days after TAI, the conception rate at 30 days of gestation (Experiment 2) and investigate the effects of bST in the proportion of steroidogenic luteal cells and morphometry of the endometrial glands (Experiment 3). In Experiment 1, Nelore cows (n=587) received an intravaginal device containing progesterone (1g; DIB®) associated with an intramuscular (IM) injection of estradiol benzoate (2mg; Gonadiol®). The devices were removed after eight days, when cows were treated with D-cloprostenol (0.530 mg; Ciosin®) and equine chorionic gonadotropin (300UI; Novormon®) and after 24 hours received estradiol benzoate (1 mg; Gonadiol®), via IM. After 30 hours of the last injection (D0) females were inseminated and received 5ml of saline (Control Group; n=194) or somatotropin (Boostin®) at a dose of 250mg (Group bST 250; n=197) or 500mg (Group bST 500; n=196), subcutaneously (SC). Pregnancy diagnosis was performed 30 days after TAI by ultrasonography. In Experiment 2, Nelore cows (n=243) received the Experimento1 similar protocol and were inseminated on D0. In D7 received 5ml of saline (Control Group; n=124) or somatotropin (Boostin®) at a dose of 500mg (Group bST 500; n =119) subcutaneously...(Complete abastract click eletrononic acess below) / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Coorientador: Naiara Saraiva Zoccal / Banca: Fábio Morato Monteiro / Banca: José Octavio Jacomini / Banca: Maria Emilia Franco Oliveira / Banca: Gilson Hélio Toniollo / Resumo: A progesterona e seus análogos têm sido utilizados para diversas finalidades na reprodução animal. O objetivo deste estudo foi avaliar a influencia da progesterona injetável no número de oócitos recuperados, na qualidade oocitária e produção embrionária de novilhas Nelore pré-púberes. Foram utilizadas 31 fêmeas com idade entre 18 a 20 meses, não gestantes e não cíclicas. As doadoras de oócitos foram divididas em 3 grupos experimentais em delineamento crossover da seguinte maneira: Grupo P0 (n=11), os animais deste grupo receberam duas aplicações de solução placebo (1 mL), com intervalo de 7 dias iniciando 14 dias (D-14) antes da primeira aspiração (D-0); Grupo P7 (n=10): os animais receberam uma aplicação de solução placebo (1 mL) 14 dias (D-14) e uma de progesterona (P4) injetável (150mg) 7 dias (D-7) antes da aspiração; Grupo P14 (n=10), neste grupo os animais receberam duas aplicações de P4 injetável (150mg) com intervalo de 7 dias, a primeira 14 dias (D-14) e a segunda 7 (D-7) dias antes da aspiração. Realizaram-se um total de três aspirações foliculares em intervalos de 28 dias. Os animais que apresentaram CL durante o experimento foram alocados em um grupo separado para serem analisados e comparados com o grupo sem CL. Os oócitos recuperados foram selecionados e submetidos aos procedimentos da PIVE. Após a confirmação da homocedasticidade (BoxCox) e normalidade (teste de Cramér-von Mises) dos dados, realizou-se a análise de variância (ANOVA). O teste de Tukey foi utilizado para as comparações das médias das variáveis, para as correlações dos dados foi utilizado o teste de correlação de Pearson, e significantes quando p≤ 0,05. Não foram verificadas diferenças significativas (p>0,05) quanto ao número de oócitos recuperados (oócitos totais), oócitos viáveis (G I, II, III), entre os animais tratados (grupos P7 e P14) em relação aos animais que não receberam P4 (grupo P0). As... / Abstract: Progesterone has been used for various purposes in the animal reproduction. The objective of this study was to evaluate the influence of exogenous progesterone injection in the number of recovered oocyte, oocyte quality and embryo production of prepubertal Nelore heifers. We used 31 females (18 to 20 months) non pregnant and without corpus luteum (CL). Cows were divided in 3 groups in a cross-over design: Group I P0 (n=11), animals received two placebo solution applications (1 mL), 7-day interval and starting 14 days (D-14) before the first aspiration (D-0); Group II P7 (n=10) treated group, the animals received a placebo solution application (1 mL) 14 days (D-14) and injecting progesterone (P4; 150 mg) 7 days (D-7) before aspiration; Group III P14 (n = 10), animals received two injections of P4 (150mμg) with an interval of 7 days, the first 14 days (D-14) and the second 7 days (D-7) before aspiration. We conducted 3 aspiration with 28-day intervals. The animals with CL during the experiment were placed in a separate group to be analyzed and compared with the group without CL. The recovered oocytes were selected and submitted to the procedures of the in vitro embryo production (IVEP). After confirming the homocedasticity (BoxCox) and normality (Cramér-von Mises test) of the data, carried out the analysis of variance (ANOVA). Tukey's test was used to compare the means of the variables and the pearson correlation test was used for correlations of the data, considered significant when p ≤ 0.05. There were no significant differences (p> 0.05) in the number of oocytes retrieved (total oocytes), viable oocytes (GI, II, III), between the animals treated (P7 and P14 groups) and animals that did not receive P4 (P0 group). The animals showed an average of 14.98 ± 10.82 oocytes collected by aspiration session. The mean and standard deviation of rates (%) of viable oocytes and embryos produced did not differ (p> 0.05) between groups. The ... / Doutor

Orientador: Cezinande de Meira / Banca: João Carlos Pinheiro Ferreira / Banca: Thales Ricardo Rigo Barreiros / Resumo: Nos últimos anos a gonadotrofina coriônica humana (hCG), por sua ação biológica semelhante ao hormônio luteinizante (LH), tem sido estudada não apenas como indutor da ovulação, mas também como agente luteotrófico. A ultrassonografia (US) Doppler, quando utilizada para análise ovariana, permite a avaliação hemodinâmica folicular e luteal, fornecendo importantes informações funcionais destas estruturas. Os objetivos deste estudo foram descrever as alterações hemodinâmicas de folículos pré-ovulatórios e, caracterizar o desenvolvimento estrutural e funcional do corpo lúteo (CL) de éguas tratadas com distintas doses de hCG, em diferentes momentos do ciclo estral. No experimento 1, éguas receberam 750, 1500, 2500 UI hCG ou NaCl 0,9%, por via intravenosa, na detecção de folículo pré-ovulatório ≥35 mm. A perfusão vascular (PV) folicular foi avaliada, por meio da US Doppler, a cada hora durante 12 primeiras horas pós-tratamento, e posteriormente, a cada 6 horas até ovulação. No experimento 2, foram utilizadas 750, 1500, 2500 UI hCG, para induzir ovulação, no dia da ovulação (D0) ou dois dias pós-ovulação (D2). A área, volume, PV luteal e concentração plasmática de progesterona (P4), foram avaliadas diariamente entre D0 e D8. Não foi detectado efeito da dose, do tratamento e tempo para PV folicular. No experimento 2, para todas as variáveis, não observou-se efeito da dose e tratamento, no entanto, ao longo dos dias, houve diferença significativa, exceto para área e volume luteal. A hCG, para induzir ovulação, não alterou a PV folicular pós-tratamento. Quando utilizada para induzir a ovulação, no D0, ou D2, não influenciou o desenvolvimento estrutural e funcional luteal, independente da dose / Abstract: In recent years the hCG, because of its biological LH-like action, has been studied not only to induce ovulation, but also as luteotrophic agent. Doppler ultrasonography is a technique that allows the hemodynamic evaluation of follicular and luteal tissue, in real time, providing important functional information about these structures. This study aimed to describe the hemodynamics changes of pre-ovulatory follicles and characterize the structural and functional development of the corpus luteum of mares treated with different doses of hCG, at different times of estrous cycle. In experiment 1, mares were treated with 750, 1500, 2500 IU of hCG or NaCl 0.9%, intravenously, on presence of pre-ovulatory follicle ≥35mm. Doppler US exams, to evaluate the follicle vascular perfusion, were done every hour during first 12 hours post-treatment. Thereafter, it was done every 6 hours until ovulation. In experiment 2, treatment was performed with 750, 1500 or 2500 IU of hCG to induce ovulation, on the day of ovulation or two days post-ovulation. The luteal area, volume and vascular perfusion, and plasma progesterone concentration were evaluated daily from D0 to D8. No effect of dose and time was detected for follicle vascular perfusion. In experiment 2, there was no effect of dose and moment of treatment for all end points. Throughout the day, all end points presented significant difference, except the luteal area and volume. The hCG-treatment, to induce ovulation, did not increase follicle vascular perfusion post-treatment. hCG administered on the presence of follicle ≥35 mm, on D0 or on D2, had no positive influence on structural and functional development of corpus luteum, independent of dose / Mestre

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-20T14:39:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 967613 bytes, checksum: 406de5c8fde5ef9910c417499ef37ffc (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-20T14:39:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 967613 bytes, checksum: 406de5c8fde5ef9910c417499ef37ffc (MD5) Previous issue date: 2016-02-22 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O entendimento dos mecanismos que controlam a permeabilidade, a angiogênese e a apoptose do corpo lúteo das fêmeas suínas gestantes é essencial para a compreensão do papel fisiológico destes processos na produção de progesterona e consequentemente no desenvolvimento do concepto, nas taxas de mortalidade pré-natal e na prolificidade dos animais. Assim, objetivou-se com este estudo avaliar a expressão de genes relacionados à angiogênese e a apoptose do corpo lúteo de fêmeas suínas gestantes da raça local Piau e linhagem Comercial, em diferentes idades gestacionais, além de relacionar os dados moleculares aos dados fenotípicos de morfologia do corpo lúteo gestacional. Para a análise histológica, as amostras foram incluídas em resina plástica e coradas em Azul de Toluidina. Já para a análise molecular do corpo lúteo, a extração do RNA total foi realizada com Trizol® e a expressão gênica avaliada mediante a técnica de PCR quantitativa em tempo real (RT-qPCR). Foram observadas diferenças entre as idades gestacionais (P=0,0043) na avaliação morfológica do corpo lúteo, onde aos 90 dias o número médio de vasos/capilares sanguíneos foi maior do que aos sete dias de gestação pelo teste de Tukey (P<0,05). A interação entre grupo genético e idade gestacional foi significativa ao se analisar a expressão dos genes angiogênicos MMP9 (P=0,0463), VEGFA (P=0,0078) e ANGPT1 (P<0,0001). A interação entre grupo genético e idade gestacional também foi significativa ao se analisar a expressão de todos os genes apóptoticos trabalhados: BAX (P<0,0001), BCL-2 (P<0,0001) e CASP3(P=0,0330). Os genes angiogênicos HIF1α, MMP2, VEGFR-2 apresentaram maior expressão em fêmeas de linhagem Comercial em relação à Piau (P=0,0495, P=0,0210 e P=0,0304, respectivamente). Já os genes ANGPT2 (P=0,3260 e P=0,0511) e o receptor TEK (P=0,5273 e P=0,8827) não apresentaram diferenças de expressão entre grupos genéticos e idades gestacionais. A razão entre ANGPT2 e ANGPT1, que competem pelo mesmo receptor (TEK), apresentou variação entre as idades gestacionais tanto em fêmeas da raça Piau (P=0,0001) quanto em fêmeas de linhagem Comercial (P=0,0106). O padrão de expressão tanto de alguns genes angiogênicos quanto apoptóticos, foi influenciado pelas diferentes concentrações de progesterona sintetizada pelo corpo lúteo nos diferentes momentos gestacionais, e também pelos diferentes processos decorrentes do reconhecimento gestacional e desenvolvimento pré-natal dos conceptos. Diferenças entre grupos genéticos possivelmente foram verificadas como resultado da seleção de características voltadas a prolificidade das matrizes suínas de linhagens comerciais, que levaram às alterações na expressão gênica e consequentemente na morfologia do corpo lúteo. / Understanding the mechanisms which control the permeability, angiogenesis and corpus luteum apoptosis of pregnant sows are essential to comprehend the physiological role of these processes in progesterone production and consequently in conceptus development, embryonic and fetal mortality rates and prolificacy of the animals. The aim of this study was to evaluate the expression of genes related to angiogenesis and corpus luteum apoptosis of pregnant local breed Piau and Commercial line sows at different gestational ages, and associate the molecular data to phenotypic data of gestational corpus luteum morphology. For histological analysis, samples were embedded in plastic resin and stained with Toluidine Blue. As for the molecular analysis of the corpus luteum, total RNA extraction was performed using Trizol and gene expression measured by quantitative real time PCR (RT-qPCR). Diferences were observed in corpus luteum morphology between gestational ages (P=0.0043), which at 90-day average of vessels/blood capillaries was greater than the seventh day of pregnancy by Tukey test (P<0.05). The interaction between genetic group and gestational age was significant when analyzing the expression of MMP9 (P=0.0463), VEGFA (P=0.0078) and ANGPT1 (P<0.0001) genes. The interaction between these factors was also significant while analyzing the expression of all used apoptotic genes: BAX (P<0.0001), BCL-2 (P <0.0001) and CASP3 (P=0.0330). The angiogenic genes HIF1α, MMP2, VEGFR-2 showed higher expression in Commercial line than in local breeed Piau (P=0.0495, P=0.0210 and P=0.0304, respectively). On the other hand, ANGPT2 gene (P=0.3260 and P=0.0511) and the TEK receptor (P=0.5273 and P=0.8827) did not show differences in expression between the different genetic groups and gestational age. The ratio of ANGPT2 and ANGPT1, which compete for the same receptor TEK, showed significant variation between gestational ages for both genetic group Piau (P=0.0001) and Commercial (P=0.0106). The expression pattern of both angiogenic and apoptotic genes was affected by different concentrations of progesterone synthesized by the corpus luteum in different gestational periods, and also by different events in the gestational recognition and prenatal development of fetuses. Differences between genetic groups were found, possibly as a result of traits selection aimed to prolificacy of Commercial lines sows, which led to changes in the pattern of gene expression, hence in corpus luteum morphology.