Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-24T03:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348189.pdf: 2235355 bytes, checksum: e914772a77d51ccb3221f93c0fc57e5c (MD5) Previous issue date: 2017 / A presente pesquisa propôs-se a explorar funcionalidades do autoamostrador, integrando estratégias para preparação de curvas de calibração em sua seringa com um método combinado ao emprego da padronização interna por injeção do próprio analito, outer plug internal standard (OPIS), segregando-o da amostra por injeções múltiplas, multiple injection in a single experimental run (MISER). Com este último alcançou-se maior confiabilidade na análise quantitativa, ao ampliar a repetitividade entre dias em análises ESI-MS/MS no modo positivo, na determinação de metformina em 16 amostras de plasma de tilápias-do-nilo. Com o volume de injeção de 2,0 ?L foram preparadas soluções de diferentes níveis de concentração a partir de solvente puro, solução padrão de metformina e extrato das amostras, obtidos após precipitação protéica com acetonitrila (0,1% ácido fórmico, v/v) para que, por fim, fosse possível reproduzir a calibração por fortificação de extrato de matriz isenta. Este procedimento foi realizado sem a interferência do operador, com pouco volume de amostra, de maneira a minimizar o uso da matriz, com ciclos de injeção de aproximadamente 25 s cada. Para a separação optou-se pela modalidade de cromatografia líquida de interação hidrofílica (HILIC), a qual pode ser cumprida utilizando uma coluna cromatográfica (4,6 mm x 150 mm; 5 ?m; 40°C) de fase estacionária composta por ciclofrutano-6 nativo, quimicamente ligado à sílica (FRULIC-N). A eluição do analito foi conduzida a 0,5 mL min-1 com fase móvel gradiente composta por acetonitrila/água (70:30,, v/v), ambos contendo 10 mmol L-1 de formiato de amônio, e pH da solução aquosa mantido em 3,2. O método foi validado e, apresentou boa compatibilidade com o modelo linear (R2 = 0,999) na faixa de concentração avaliada (20 ? 140 ng mL-1). O limite de detecção foi de 0,8 ng mL-1 e o limite de quantificação 2,1 ng mL-1. As precisões instrumental, intra-ensaio e inter-ensaio, expressas pelo coeficiente de variação para a área do pico, apresentaram valores melhores que 3,28%. Do ensaio de recuperação foram obtidas concordâncias de 94,2% - 99,8%. E o método proposto propiciou o dispêndio de 3,7 vezes menos tempo e solventes quando comparado ao método de injeção convencional para um mesmo número de amostras.<br> / Abstract : The aim of the present study was to explore the functions of autosampler, integrating strategies for the preparation of calibration curves in the autosampler?s syringe with a method that uses the analyte itself as internal standard, called outer plug internal standard (OPIS), segregating it from the sample by multiple injections in a single experimental run (MISER). With this procedure greater reliability was achieved in a quantitative analysis, by increasing the repeatability between days in positive-mode ESI-MS/MS analyzes applied in the determination of metformin in 16 plasma samples from Nile tilapia. At the injection volume of 2.0 ?L, solutions of different concentration levels were prepared from mixing pure solvent, standard solution of metformin and extract of the samples, obtained after protein precipitation with acetonitrile (0.1% formic acid, v/v), than finally, it was possible to reproduce the calibration by addition in the free matrix extract. This procedure was performed without interference from the operator, with a small sample volume, in order to minimize the use of the matrix, with injection cycles of approximately 25 s each. For the separation, the hydrophilic interaction liquid chromatography (HILIC) method was chosen, which can be accomplished using a stationary phase chromatographic column (4.6 mm x 150 mm, 5 ?m; 40 ° C) composed of native cyclofructan-6, chemically bounded to silica (FRULIC-N). Analyte elution was conducted at 0.5 mL min-1 with a gradient phase mobile composed of acetonitrile/water (70:30, v/v), both containing 10 mmol L-1 of ammonium formate, and pH of aqueous solution fixed at 3.2. The method was validated and presented good compatibility with the linear model (R2 = 0.999) in the evaluated concentration range (20 - 140 ng mL-1). The limit of detection and quantitation was 0.8 ng mL-1 and 2.1 ng mL-1, respectively. The instrumental, intra-assay and inter-assay precision, expressed by the relative standard deviation for the peak area, presented values better than 3.28%. From the recovery assay concordances of 94.2% - 99.8% were obtained. And the proposed method allowed the waste of 3.7 times less analysis time and solvents when compared to the conventional injection method for the same number of samples.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:05:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340397.pdf: 9850449 bytes, checksum: 4dafb564ed33f3ae822834cac643c276 (MD5) Previous issue date: 2016 / O principal objetivo desta tese foi explorar a técnica de HPLC naresolução de separações que compreendem dois desafios ainda hoje enfrentadospela Química Analítica: as separações enantioméricas e a separação decompostos altamente polares por cromatografia líquida, com resoluçãoadequada e eficiência máxima. No Capítulo 1 será apresentado odesenvolvimento de métodos individuais para a separação enantiomérica docitalopram (CIT) e 28 novos análogos sintéticos. O desenvolvimento dasmetodologias para a separação destes racematos, utilizando HPLC em escalaanalítica, foi realizado utilizando-se 9 fases estacionárias quirais (baseadas emciclodextrinas e glicopeptideos macrocíclicos) em modos de fase reversa, polarorgânicoe/ou polar-iônico. Vinte e cinco do total de misturas foram separadascom resolução (Rs) de até 2,9 e enantiosseletividade de até 1,33. Um total de 18separações completas (Rs = 1,5) e 7 separações parciais (0,6 = Rs = 1,5) foramobtidas. A coluna baseada em vancomicina operada em modo polar-iônicoresultou no maior número e na melhor qualidade das separações. As discussõesforam fundamentadas na natureza química dos analitos, das fases estacionárias,bem como dos modos cromatográficos empregados. No Capítulo 2 seráapresentado o desenvolvimento de uma nova coluna cromatográfica a base deciclofrutano-6 nativo (CF6) ligado à partículas de sílica superficialmenteporosas (SPPs) para aplicação em cromatografia líquida de interação hidrofílica(HILIC). As SPPs compreendem o Estado da Arte em materiais de suporte parafases estacionárias utilizadas em HPLC para obtenção de análises rápidas eeficientes. Outras duas colunas cromatográficas similares foram preparadas compartículas de sílica totalmente porosas (FPPs) com diâmetros de 3 µm e 5 µm(FRULIC-N). A presença de um núcleo sólido no interior destas partículasproporcionou análises extremamente rápidas e eficientes quando comparadas àsobtidas pelas FPPs. O processo de síntese das fases estacionárias foi idêntico, ea caracterização das mesmas foi realizada por análise de CHN, a qual permitiu aobtenção do grau de substituição absoluto e relativo, sendo 0,86 µmol m-2 e12,8% (m/m), respectivamente, para a fase estacionária a base de SPPs. Dentreos parâmetros cromatográficos avaliados, incluiu os parâmetros de vanDeemter, eficiência de pico, tempo de análise e seletividade. A avaliação dedesempenho no modo HILIC demonstrou que a coluna proposta forneceuseparações até 85% mais rápidas e eficiências até 3,7 vezes superiores às demaiscolunas. As colunas foram também avaliadas sob condições de fase normal.Observou-se que, em HILIC, o processo de transferência de massa éinfluenciado pela camada de água adsorvida na superfície da fase estacionária e,portanto, as vantagens das SPPs sob velocidades de fluxo elevadas, forampronunciadas em modo fase normal. No entanto, a coluna a base de CF6 ligadoa SPPs mostrou nítidas vantagens em termos de eficiência e tempo de análiseem ambos os modos cromatográficos avaliados.<br> / Abstract: The main goal of this thesis was to explore the HPLC technique forthe separation of compounds, comprising two big challenges still faced by the Analytical Chemistry: the enantiomeric separations and the separation of highly polar compounds by liquid chromatography, with suitable resolution and extreme efficiency. In Chapter 1, the development of methods for the separationof the chiral drug Citalopram (CIT) and its twenty eight novel syntheticanalogues is presented. The development of the methodologies for the separation of each racemate, using HPLC on analytical scale, was performed using nine chiral stationary phases (cyclodextrin and macrocyclic antibiotics based) on reversed phase, polar-organic and/or polar-ionic mode. Twenty five of the total racemic mixtures were separated with resolution (Rs) up to 2,9 and enantiosselectivity (a) up to 1,33. A total of 18 baseline separations (Rs = 1,5)and 7 partial separations (0,6 = Rs = 1,5) were achieved. Vancomycin based columns carried on polar ionic mode provided the greatest number the bestquality of separations. All discussion were justified by the chemical nature of the analytes, stationary phases, as well as by the employed chromatographicmodes. In Chapter 2, the development of a novel chromatographic column usingnative cyclofructan chemically bonded to superficially porous silica particles(SPPs) for the application in hydrophilic interaction liquid chromatography(HILIC) will be presented. SPPs comprise the State of Art in support material for HPLC stationary phases for obtaining fast and efficient analyses. Other two similar chromatographic columns were prepared with fully porous silicaparticles (FPPs) with diameter of 3 µm and 5 µm (FRULIC-N). The presence ofa solid core within these particles provided extremely fast and efficient analyses when compared to those obtained by FPPs. The synthetic process of the stationary phases was identical and their characterization was performed by CHN elemental analysis, allowing to obtain the absolute and relative substitution degrees for the new SPPs based column, which were 0,86 µmol m-2and 12,8% (w/w), respectively. Among the evaluated chromatographic parameters, van Deemter parameters, peak efficiency, analysis time andselectivity were included. Performance evaluation in the HILIC mode showed that the proposed column presented separations up to 85% faster and efficiencies up to 3.7 times higher than those obtained by the FPPs based columns. All columns were also evaluated under normal phase conditions. It was observed that, in the HILIC mode, the mass-transfer process is influenced by the adsorbed water layer on the stationary phase and, thus, the SPPs advantages under high flow velocities are pronounced in the normal phasemode. However, the column prepared by cyclofructan-6 chemically bonded to SPPs showed clear advantages in terms of efficiency and analysis time in both the evaluated chromatographic modes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-05-31T14:08:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 345681.pdf: 3192043 bytes, checksum: 52204e1cf0d8404b3e10f9861fd69fa1 (MD5) Previous issue date: 2016 / Os propósitos deste estudo foram a aplicação da técnica deinjeções múltiplas para a construção e comparação entre curvas analíticas e introdução de uma nova variação de padronização interna: o padrão interno em plugue externo (OPIS), que é o próprio analito sequencialmente injetado em um plugue externo à amostra. Para os estudos com injeções múltiplas foi desenvolvido um método isocrático para determinação de cloridrato de clindamicina, eritromicina estolato e azitromicina em formulações farmacêuticas por LC-ESI-MS/MS. Foram estatisticamente comparadas 60 curvas analíticas pertencentes a cinco diferentes estratégias de calibração: calibração externa simples, calibração externa por MISER (Multiple Injection in a Single Experimental Run), calibração externa simples com OPIS, e calibração externa por MISER com OPIS. Como resultados, a cromatografia MISER possibilitou a construção de curvas de calibração confiáveis em menos decinco minutos, triplicando a frequência analítica e reduzindo consumo de solventes e geração de resíduos frente ao método convencional de calibração. Além disso, a técnica de injeções múltiplas demonstrou-se valiosa em permitir a adição do OPIS em substituição aos padrões internos clássicos para correção de erros espectrais.<br> / Abstract : The goal of this study was the application of the multiple injections technique for calibration curves elaboration and the introduction of a brand-new type of internal standardization: the Outer Plug Internal Standard (OPIS), which is the very analyte sequentially injected in a external plug. For the multiple injections studies an isocratic LC-ESIMS/MS method for determining clindamycin hydrochloride, erythromycin estolate and azithromycin in pharmaceuticals was developed. Statistical comparison was applied to 48 calibration curves belonging to four different calibration strategies: simple external calibration, MISER (Multiple Injection in a Single Experimental Run) external calibration, simple external calibration with OPIS, and MISER external calibration with OPIS. As results, MISER chromatography has turned possible the construction of trustworthy calibration curves in less than five minutes, tripling the analytical throughput and reducing solvente consumption and waste production opposite the conventional calibration method. Besides, the multiple injections technique proved to be valuable in allowing the addition of OPIS in replacement to classic internal standardization to correct spectral errors.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2012. / Submitted by Tania Milca Carvalho Malheiros (tania@bce.unb.br) on 2013-10-10T14:23:41Z No. of bitstreams: 1 2012_Everton Macêdo Silva_Parcial.pdf: 4350005 bytes, checksum: b1cc5a012af06cef690b398003c2d5b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-10-14T15:16:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_Everton Macêdo Silva_Parcial.pdf: 4350005 bytes, checksum: b1cc5a012af06cef690b398003c2d5b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-14T15:16:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_Everton Macêdo Silva_Parcial.pdf: 4350005 bytes, checksum: b1cc5a012af06cef690b398003c2d5b9 (MD5) / A leishmaniose tegumentar, causada por protozoários do gênero Leishmania, é uma doença endêmica que provoca lesões destrutivas e persistentes na pele e mucosas. Os medicamentos disponíveis apresentam toxicidade considerável e observa-se o crescente aparecimento de resistência medicamentosa, o que demonstra a necessidade da busca por compostos mais específicos para tratar esse agravo. A investigação do potencial de substâncias naturais se mostra uma abordagem eficiente, inclusive como parâmetro para a obtenção de compostos semi-sintéticos e sintéticos. Neste estudo, foi testada a atividade leishmanicida in vitro dos extratos das espécies do bioma Cerrado Austroplenckia populnea (Reissek) Lundell (Celastraceae); Clusia pernambucensis G. Mariz (Clusiaceae) e Maprounea guianensis Aubl. (Euphorbiaceae) entre 100 e 1,56 g/mL em formas promastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis. O extrato acetato de etila da casca do caule de Clusia pernambucensis apresentou atividade com CI50 = 65,0 µg/mL, e a menor citotoxicidade observada em fibroblastos da linhagem celular NIH-3T3, com CC50 = 100,5 µg/mL, sendo selecionado para os estudos químicos. O fracionamento desse extrato por cromatografia em coluna e CLAE permitiu o isolamento de sete substâncias, identificadas por espectroscopia de infravermelho, ressonância magnética nuclear 1H e 13C e espectrometria de massas de alta resolução. Foi isolada e caracterizada uma xantona ainda não relatada na literatura, 6,9-dihidróxi-3,3-dimetil-5-(3-metilbut-2-enil)pirano[2,3-c]xanten-7(3H), denominada pelo nosso grupo de clusiaxantona (CP1). Esse composto apresentou CI50 = 25,3 µg/mL em formas amastigotas de L. (L.) amazonensis no interior de macrófagos peritoneais coletados de camundongos Balb/C, enquanto seu derivado semi-sintético metil éter (1a) obteve CI50 = 22,5 µg/mL. Quatro tocotrienóis ainda não descritos nessa espécie também foram isolados e identificados: ácido Z-?-tocotrienolóico (CP2), ?- tocotrienol (CP3), ?-tocotrienol-metil-éster (CP4), e álcool ?-tocotrienólico (CP5). Os compostos CP3 e CP4 foram isolados pela primeira vez de fonte natural. Em relação a atividade em macrófagos murinos infectados com L. (L.) amazonensis, o ácido Z-?-tocotrienolóico (CP2) mostrou CI50 = 77,3 µg/mL, enquanto que o seu derivado metilado (2a) e os compostos CP3, CP4 e CP5 não apresentaram ação leishmanicida. O ácido betulínico (CP6) e o ?-sitosterol (CP7) também foram isolados. A citoxicidade em macrófagos murinos mostrou CC50 = 17,22 µg/mL para a clusiaxantona (CP1), 32,56 µg/mL para o derivado 1a e 78,04 µg/mL para o ?-tocotrienol-metil-éster (CP4). Outros derivados serão propostos para diminuir a citoxicidade e aumentar a atividade leishmanicida. Os compostos isolados e já caracterizados servirão como base para avançar na busca por candidatos a compostos líderes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Cutaneous leishmaniasis, caused by protozoa of the genus Leishmania, is na endemic disease that causes detructive and persistente lesions in skin and musoux. The available drugs presente significant toxicity and the increasing drug resistance is observed, which demonstrates the need to search for more specific compunds to treat this disease. The investigation of the potential of natural substances shows itself na eficiente approach, including as a parameter jfor obtaining semi-synthetic and synthetic compounds. In this study, we tested the in vitro leishmanicidal activity of extracts from species of the Cerrado biome Austropenckia populnea (Reissek) Lundell (Celastraceae); Clusia Pernambucensis G. Mariz (Clusiaceae) and Maprounea guianensis Aubl. (Euphorbikaceae) between 100 and 1.56 µg /mL in promastigotes of Leishmania (Leishmania) amazonenses. The ethyl acetate extract of the stem bark of Clusia pernambucensis, showed leishmanicidal activity with IC 50=65.0 µg /mL, and the lowest cytotoxicity observed in NIH-3T3 cell line fibrobasts with CC50=100.5 µg /mL, being selected for chemical studies. Fractionation of this extract by column chromatography and HPCL allowed the isolation of seven substances, identified with infrared spectroscopy, nuclear magnetic resonance 1H and 13C NMR and high-resolution mass spectrometry. It was isolated and characterized one xanthone not yet reported in the literature, 6,9-dihydroxy-3, 3-dimethyl-5-(3-methylbut-2enyl) pyrano[2,3-c]xanthen-7(3H), named clusiaxanthone (CP1) by our group. This compound showed IC50=25.3 µg /mL in amastigotes of L. (L.) amazonenses within peritoneal macrophages harvested from Balb/C mice, while its methyl ether semi-synthetic derivativa (1a) obteined IC50=22.5 µg /mL. Four tocotrienoloic not yet described in this specie were also isolated and identified: Z-?-tocotrienoloic acid (CP2), ?-tocotrienol (CP3), ?-tocotrienol-methyl-ester (CP4), and alcohol-? Tocotrienolic (CP5). The compound CP3 and CP4 were furst usikated from a natural source. Regarding the activity in murine macrophages infected with L. (l) amazonenses, the Z-?-tocotrienoloic acid (CP2) showed IC50=77.3 0 µg =/mL, whereas its semi-synthetic methylated derivative 2a and the compound CP3, CP4 and CP5 did not show anti-leishmanial activity. Betulinic acid (CP6) and β-sitosterol (CP7) were also isolated. The cytotoxicity in murine macrophages showed CC50=17.22 ug/mL for clusiaxanthone (CP1), 32.56 µg /mL for the derivative 1a and 78.04 µg /mL for the ?-tocotrienol-methyl ester (CP4). Other derivatives will be proposed to decrease cytotoxicity and increase the leishmanicidal activity. The compounds isolated and already characterized will serve as the basis for progress in the search for candidate lead compounds.

Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:46Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4867_1.pdf: 2673938 bytes, checksum: 936cca7358e1df135e6731cdb5f8bd3c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / As lectinas são proteínas ubíquas na natureza que se ligam reversívelmente a mono, oligo, polissacarídeos e glicoconjugados. Não apresentam atividade catalítica e ao contrário dos anticorpos, não são produtos de uma resposta imunológica. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a extração e a reextração de uma lectina purificada por cromatografia de troca iônica (CrataBL) e do extrato bruto (EB) da entrecasca de Crataeva tapia utilizando o sistema de micelas invertidas, constituídas pelo surfactante dioctilsulfosuccinato de sódio (AOT) em isooctano. A entrecasca de Crataeva tapia foi coletada na região da cidade do Recife (Pernambuco, Brasil) e o extrato [10 % (p/v) em 150 mM NaCl] foi obtido por trituração e agitação durante 16 h a 4 oC, filtrado em gaze e centrifugado (4.000 x g durante 15 min). O sobrenadante obtido foi denominado de extrato bruto (EB). Os fatores que afetam a extração da proteína tais como: tempo de contato de agitação (5 - 20 min), força iônica, incluindo o tipo de sal (NaCl, KCl e CaCl2) e concentração (30 300 mM), pH da fase aquosa (pH 3,0 12,0) e concentração do surfactante (5 - 100 mM AOT), foram investigados. Os parâmetros avaliados para a reextração foram: pH da fase aquosa (pH 5,0 7,0) e força iônica (50 - 1000 mM de KCl) tendo sido adicionado ao sistema 5% Butanol. Os parâmetros velocidade de agitação (900 rpm), temperatura (25oC) e concentração de proteína (0,374 mg/ml), foram mantidos constantes em todos os experimentos. Os melhores resultados para extração foram obtidos com 5 min de tempo de contanto entre as duas fases, 30 mM de NaCl, tampão citrato/fostato pH 5,5 e 5 mM de AOT, onde foi possível obter extrações protéicas de 100 % e 70 % para CrataBL e EB, respectivamente. Para a reextração, as melhores condições foram, tampão citrato/fosfato 10 mM, pH 5,5 acrescido de 1000 mM de KCl, onde foi possível obter uma recuperação protéica de 45,25 % (CrataBL) e 80,65 % (EB) com 50 % da atividade hemaglutinante para ambas as amostras. As amostras obtidas com as melhores condições de extração e reextração aplicadas ao EB revelaram apenas uma banda na PAGE para proteínas básicas e duas bandas no SDSPAGE. A cromatografia de gel filtração (AKTA) indicou dois picos: um de 40 KDa e outro de 29 KDa. A natureza oligomérica da lectina foi detectada por cromatografia de filtração em gel e SDS-PAGE. A comparação dos perfis cromatográficos de filtração em gel do EB com o da lectina purificada, indicaram a eficiência do sistema de micelas invertidas na purificação da lectina

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia de Alimentos, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2018-01-09T03:21:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 348725.pdf: 2029389 bytes, checksum: 571f6387803287d79cd3388d1aa78257 (MD5) Previous issue date: 2017 / Evidências científicas sugerem que compostos fenólicos obtidos através da dieta são responsáveis pelos benefícios à saúde como: aumento da resistência ao estresse oxidativo, processos inflamatórios, disfunções endoteliais, funções vasculares e plaquetárias; pressão sanguínea e perfil lipídico. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi a aplicação de métodos de extração, sem uso de solventes orgânicos, para obtenção de extratos de jambolão ricos em compostos bioativos. Os maiores rendimentos de extração foram obtidos pelo método sólido-liquido convencional. O maior teor de compostos fenólicos dos métodos de extração avaliados foi encontrado para o extrato do jambolão liofilizado, obtido por extração sólido-líquido convencional (ensaio 6: 9g/ 30 °C/ 5 h) com 5763 EAG/ 100 g de extrato. O menor valor de EC50 (µg·mL-1) (concentração de extrato que neutraliza 50 % dos radicais livres), determinado pelo método do radical DPPH, também foi obtido por um extrato do fruto liofilizado, mas, dessa vez, para a extração sólido-líquido assistida por ultrassom (71,80 µg·mL-1 - EC50). O maior valor da atividade antioxidante por FRAP foi 19819,14 µmol·100 g-1 de extrato, para o extrato proveniente do método sólido-líquido convencional para a amostra liofilizada. Os compostos identificados pela análise de cromatografia gasosa acoplada ao espectrômetro de massas (CG-EM) em um maior número de amostras foram: carvestreno e canfeno. Os compostos quantificados pela análise de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando detector de arranjo de diodo, em um maior número de amostras foram: catequina, tirosol e epicatequina. O potencial das propriedades terapêuticas encontradas para os extratos aquosos de jambolão levam a importantes resultados que possibilitam a posterior aplicação desses compostos, como encapsulamento e avaliação in vivo. / Abstract : Research suggests that phenolic compounds obtained in diet are usually associated with health benefits, such as: Increase on the oxidative stress resistance, inflammatory processes, endothelial dysfunctions, cardiovascular and platelet functions; blood pressure and lipid profile. Realizing it, the objective of this work was the application of the extraction methods without organic solvents, for the obtainment of jambolan extracts rich in bioactive substances. The highest yields were achieved by the liquid-liquid extraction, also the highest level of organic compounds, considering all the evaluated extraction methods, was obtained by the solid-liquid extraction (test 6- 9g/ 30 ºC/ 5 hours) with 5763 EAG/100 g of extract. The lowest value of EC50 (extract concentration which neutralises 50% of free radicals) determined by the DPPH method was also presented by the lyophilised fruit, but the extraction process was assisted by ultrasound (71.80 EC50). The best value of antioxidant activity achieved by the FRAP method was of 19819.14 µmol/100g of extract, for the lyophilised sample using the regular solid-liquid extraction. The identified substances using the gas chromatography (CG-EM) in greater number of samples were the carvestrene and camphene. By high efficiency liquid chromatography (HPLC) analysis the substances higher quantified were catechin, tyrosol and epicatechin. The potential of therapeutic application of the jambolan aqueous extracts provide important data for posterior application of those substances, such as encapsulation and in vivo evaluation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2017. / Made available in DSpace on 2017-10-24T03:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 347954.pdf: 2389487 bytes, checksum: d13e521f19c50d36677fc9bcd8c5a2fc (MD5) Previous issue date: 2017 / Este trabalho tem como foco o desenvolvimento de metodologias para a determinação de pesticidas em diferentes matrizes. O primeiro capítulo trata da avaliação da exposição de operadores de tratores agrícolas com cabines seladas, durante a aplicação real de fenitrotion em pomares de maça. Esta exposição foi testada por meio do uso de alvos artificiais de algodão como método de amostragem, com posterior extração ultrassônica e determinação por cromatografia líquida com detecção por ultravioleta (HPLC-UV). Para a cromatografia foi aplicado um planejamento experimental com resposta máxima utilizando a composição em fase móvel de 35:65 (água: acetonitrila), temperatura da coluna em 40 °C e taxa de fluxo de fase móvel de 1,0 mL min-1. O método foi avaliado por critérios estipulados pela ANVISA, apresentando boa seletividade e calibração por adição de padrão sobre a matriz linear na faixa de 0,50 a 2,01 mg kg-1. A metodologia demonstrou-se precisa e exata, com coeficientes de variação entre 0,17 e 3,41% e recuperação entre 94 e 104 %. O método foi capaz de detectar o fenitrotion sobre a matriz a partir de 0,18 mg kg-1 e quantificar a partir de 0,50 mg kg-1. As amostras de alvos artificiais de algodão, usadas na avaliação da exposição dos EPIs dos agricultores e do interior da cabine de um trator agrícola, apresentaram valores de fenitrotion abaixo do limite de detecção do método. O segundo capítulo trata da aplicação de metodologias propostas pela Norma Brasileira, NBR 10004/2004, no preparo de amostras e determinação de dezoito pesticidas em matrizes de água residual e resíduos de diatomáceas, utilizadas como modelo de resíduos líquidos e sólidos, respectivamente, da indústria petrolífera. As amostras líquidas foram submetidas à microextração líquida e as sólidas à extração ultrassônica, com determinação por cromatografia a gás e espectrometria de massa (GC/MS). A avaliação do método apresentou linearidade ideal (r > 0,99) na calibração externa para todos os analitos em duas faixas lineares estudadas, a curva 1 de 0,5 a 10 µg L-1 e a curva 2 de 10 a 200 µg L-1. As precisões intra-corridas e intermediárias apresentram coeficientes de variação superiores a 5%, porém a exatidão se mostrou adequada com porcentagens de recuperação entre 94,4 e 103,7 % na curva 1, e entre 103,0 a 109,8 % na curva 2. Por fim, os limites de detecção e quantificação demonstraram a capacidade em determinar os analitos nos limites preconizados pela NBR 10004/2004.<br> / Abstract : This work has as main focus the development of methodologies for the determination of agrochemicals in different matrices. The first chapter deals with the evaluation of the level of exposure of farmers in agricultural tractors with sealed cabins, during the actual application of fenitrotion in apple orchards. The exposure was evaluated through the use of artificial cotton targets with subsequent ultrasonic extraction and determination by liquid chromatography with ultraviolet detection (HPLC-UV). For the latter, a maximum response experimental design using the mobile phase composition of 35:65 (water: acetonitrile), column temperature at 40 ° C and mobile phase flow rate of 1.0 mL min-1 was applied. The method was evaluated by criteria stipulated by ANVISA, showing good selectivity and calibration by addition of standard on the linear matrix in the range of 0.50 to 2.01 mL min-1. The methodology was shown to be accurate and accurate, with coefficients of variation between 0.17 and 3.41% and recovery levels between 94 and 104%. The method was able to detect fenitrothion on the matrix from 0.18 mg kg-1 and quantify it from 0.50 mg kg-1. All actual samples of artificial cotton targets showed fenitrothion values below the detection limit of the method. The second chapter deals with the application of methodologies proposed by the Brazilian Standard, NBR 10004/2004, in the preparation of samples and determination of eighteen pesticides in diatomaceous and wastewater matrices from the petroleum industry. The liquid samples were submitted to liquid microextraction and the solid samples were subjected to ultrasonic extraction, determined by gas chromatography and mass spectrometry (GC/MS). The evaluation of the method showed ideal linearity (r> 0.99) in the external calibration for all analytes in two linear ranges studied, curve 1 of 0.5 to 10 µg L-1 and curve 2 of 10 to 200 µg L-1. The daily precision of the method presented a slight imprecision, with variations between 7.80 and 13.50% for curve 1 and between 6.15 and 8.78% for curve 2. The intermediate precision presented values with greater variation, with Between 23.6 and 33.0% for curve 1 and 19.0 to 30.5% for curve 2. The accuracy of the method presented adequate values, with recovery levels between 94.4 and 103.7% for Curve 1, 103 to 109.8% and curve 2. Finally, the limits of detection and quantification demonstrated the ability of the method to determine the analytes within the limits stipulated by NBR 10004.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-04-07T20:01:31Z No. of bitstreams: 1 2017_KarenRappPy-Daniel.pdf: 6420974 bytes, checksum: 33a42a53183e114b8235aadbb5e889c0 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2017-04-18T14:22:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_KarenRappPy-Daniel.pdf: 6420974 bytes, checksum: 33a42a53183e114b8235aadbb5e889c0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T14:22:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_KarenRappPy-Daniel.pdf: 6420974 bytes, checksum: 33a42a53183e114b8235aadbb5e889c0 (MD5) / Sistemas de liberação de fármacos com base em nanossistemas tornou-se um campo de interesse nas últimas décadas devido à sua capacidade de transporte e entrega de fármacos, proteção contra a degradação do princípio ativo e redução de efeitos colaterais. Entretanto, elucidar como os componentes de nanossistemas se comportam quando expostos a sistemas biológicos, é um passo fundamental a ser dado para que possamos compreender melhor como fazer seu uso clínico. O fotossensibilizante hidrofóbico alumínio-cloro ftalocianina (AlClFt) já foi utilizado no tratamento de câncer de língua, na eliminação de cáries dentárias, câncer de pulmão, entre outros, associada a nanossistemas para superar a hidrofobicidade de AlClFt. Entretanto, pouco se sabe sobre a consequência biológica da exposição à AlClFt, tanto in vitro quanto in vivo. No presente estudo foram realizadas três abordagens visando esclarecer a dinâmica biológica de nanossistemas contendo AlClFt. Na primeira abordagem micelas de Pluronic® F-127 contendo AlClFt (F-127/AlClFt), foram preparadas, caracterizadas fotofísicamente e testadas quanto à geração de oxigênio singleto e sua eficiência terapêutica contra células de adenocarcinoma de pulmão foi confirmada. A segunda abordagem visou estudar por espectrometria de massa a molécula AlClFt antes e após exposição a tecidos biológicos, além de desenvolver e validar método de cromatografia líquida de ultra alta eficiência para detecção de AlClFt em nanossistemas e matrizes biológicas. O método foi validado quanto à seletividade, linearidade, limites de detecção e quantificação, precisão e recuperação. A massa molecular de AlClFt identificada experimentalmente por espectrometria de massa foi menor do que a massa esperada indicando a perda do átomo de cloro quando em solução e a formação de aduto com solvente eluente (metanol) quando associada a cromatografia líquida. O método bioanalítico desenvolvido apresentou aplicabilidade e robustez para uso em estudos de biodistribuição. A terceira abordagem apresentou uma nanoemulsão magnética contendo AlClFt, sua caraterização, efetividade terapêutica in vitro nas linhagens de carcinoma de pulmão de células não pequenas e em macrófagos murinos, assim como sua biodistribuição in vivo avaliada por tomografia computadorizada por emissão de fóton único, fluorescência por imagem e por cromatografia líquida de alta eficiência. A caracterização físico-química de NE-MAG indicou a presença de duas subpopulações compondo o produto final: uma nanoemulsão não-magnética e uma nanoemulsão magnética. A instabilidade decorrente do isolamento das subpopulações, levou à realização do presente trabalho com o nanossistema contendo a mistura das duas subpopulações. A terapia fotodinâmica das células expostas a NE-MAG resultou na identificação de concentração citotóxica que diminui a viabilidade em 50% mais baixa do que já descrito para outras linhagens com o mesmo fotossensibilizante. A biodistribuição de componente magnético por emissão de fóton único indicou captação majoritária pelo fígado e baço em todos os tempos estudados (até 72 horas). A análise de fluorescência por imagem de AlClFt no nanossistema, mostrou intensa captação por fígado e pulmão enquanto que a quantificação analítica de AlClFt por cromatografia líquida indicou maior quantidade de AlClFt recuperado de fígado e rins. A diversidade do encontrado nas diferentes técnicas é justificada pela complexidade do nanossistema utilizado e reforça a importância da associação de técnicas para estudos de biodistribuição devido às diversas vantagens e limitações de cada técnica. Desta forma, as três abordagens utilizadas contribuem para a elucidação da dinâmica biológica de nanossistemas contendo AlClFt. / Nanosystem-based drug delivery systems have become a field of interest in recent decades due to their ability to transport and deliver drugs, avoid degradation of the active principle and prevent side effects. However, elucidating how components of a nanosystem behave once exposed to biological systems is a fundamental step to be taken so that we can understand how to use them in living beings. The hydrophobic photosensitizer aluminum-chlorine phthalocyanine (AlClFt) has already been used in the treatment of tongue cancer, against dental caries, lung cancer, among others, associated with nanosystems to overcome the hydrophobicity of AlClFt. However, little is known about the biological consequence of exposure to AlClFt, both in vitro and in vivo. In the present study three approaches were made to clarify the biological dynamics of nanosystems containing AlClFt. In the first approach, Pluronic F-127 micelles containing AlClFt (F-127/AlClFt) were produced, photophysically characterized and tested for singlet oxygen generation and their therapeutic efficacy against lung adenocarcinoma was confirmed. The second approach was to study by mass spectrometry AlClFt molecule before and after exposure to biological tissues and to develop and validate an ultra-high performance liquid chromatography method for detection of AlClFt in nanosystems and in biological matrices. The method was validated for selectivity, linearity, limits of detection and quantification, accuracy and recovery. The mass of AlClFt experimentally identified by mass spectrometry was lower than the predicted mass indicating the loss of the chlorine atom when in solution and the formation of aducts with eluting solvent (methanol) when combined with liquid chromatography. The developed bioanalytical method presented applicability and robustness for use in biodistribution studies. The third approach presented magnetic nanoemulsion containing AlClFt, its characterization, in vitro therapeutic effectiveness in non-small cell lung carcinomas and murine macrophages, as well as its in vivo biodistribution evaluated by single photon emission computed tomography, fluorescence imaging and by high performance liquid chromatography. The physico-chemical characterization indicated the presence of two subpopulations composing the final product: a non-magnetic nanoemulsion and a magnetic nanoemulsion containing AlClFt (NE-MAG-Ft). The instability resulting from the isolation of the subpopulations led to the use in the present work of nanosystem containing the mixture of the two subpopulations. Photodynamic therapy of cells with NE-MAG-Ft yielded a cytotoxic concentration that decreases viability by 50% lower than previously described for other strains with the same photosensitizer. The biodistribution of the magnetic component by single photon emission demonstrated a major uptake by the liver and spleen at all studied times (up to 72 hours). Fluorescence analysis of AlClFt in the nanosystem demonstrated intense liver and lung uptake while analytical quantification of AlClFt by liquid chromatography indicated more AlClFt in liver and kidneys. The diversity of the different techniques is justified by the complexity of the nanosystem used and reinforces the importance of the association of techniques for biodistribution studies due to the different advantages and limitations of each technique. In this way, the three approaches used contribute to the elucidation of the biological dynamics of AlClFtcontaining nanosystems.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Química, 2013. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2014-03-26T12:32:31Z No. of bitstreams: 1 2013_JessicadeAguiafrança.pdf: 2054879 bytes, checksum: 41746e33a38032a4742dbd76315b4e94 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2014-03-27T13:46:52Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_JessicadeAguiafrança.pdf: 2054879 bytes, checksum: 41746e33a38032a4742dbd76315b4e94 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-03-27T13:46:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_JessicadeAguiafrança.pdf: 2054879 bytes, checksum: 41746e33a38032a4742dbd76315b4e94 (MD5) / A entomotoxicologia forense advém da união da toxicologia e das ciências forenses com a entomologia, área da biologia que estuda os insetos. Em casos avançados de putrefação do cadáver, amostras de tecidos humanos para análise toxicológica não estão disponíveis, e a utilização de larvas de insetos para acessar a exposição a substâncias tóxicas pode auxiliar na elucidação da causa mortis. Os objetivos deste trabalho foram desenvolver e validar um método analítico para determinação de onze substâncias em larvas de insetos necrófagos e analisar amostras entomológicas coletadas pelo Instituto Médico Legal do Distrito Federal. O método desenvolvido envolveu extração sólido-líquido com purificação à baixa temperatura (ESL-PBT) e análise por LC-MS/MS. Após otimização por testes univariados e um planejamento fatorial, o método foi validado seguindo protocolos internacionalmente aceitos. Foi observado efeito significativo da matriz na resposta de todos os analitos, havendo a necessidade do uso de curva de calibração em matriz fortificada pré-extração e regressão por mínimos quadrados ponderados. Os limites de quantificação (LOQ) variaram entre 1,0 e 40 ng g-1 e o coeficiente de variação nos ensaios de repetitividade, entre 2,83 e 16,9%. O método validado foi utilizado para análise de 27 amostras de larvas coletadas de cadáveres do IML-DF entre 2009 e 2012. Em 37% das amostras foi determinada pelo menos uma substância: cocaína (3 amostras), seu metabólito benzoilecgonina (4 amostras), diazepam (3 amostras), carbamazepina (1 amostra) e amitriptilina (1 amostra). Os resultados encontrados neste estudo representam as primeiras amostras entomotoxicológicas analisadas no Brasil. O método desenvolvido para este trabalho pode suprir a demanda da Polícia Civil do Distrito Federal de uma ferramenta complementar para elucidar casos de morte relacionados a intoxicações em situações onde as matrizes toxicológicas usuais não se encontram disponíveis. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Entomotoxicology emerges as the union of toxicology, forensic sciences and entomology, the area of biological sciences that studies the insects. When the body is in advanced putrefaction state, human tissues for toxicological analysis may not be availabe, and the use of insect larvae to access exposure to toxic substances may aid in the elucidation of the causa mortis. The aims of this study were to develop and validate an analytical method for the determination of eleven substances in necrophagous insect larvae, and to analyze entomological samples collected by the Medico-Legal Institute of the Federal District (IML-DF). The method involves a solid-liquid extraction with low temperature purification (SLE-LTP) and analysis by LC-MS/MS. Upon optimization by univariate analysis and a factorial design, the method was validated following internationally accepted protocols. Significant matrix effect was observed for all analytes, indicating the need to use calibration curves in pre-extraction spiked matrix and regression using weighted least squares. The limits of quantification (LOQ) ranged from 1,0 to 40 ng g-1, with coefficient of variation determined in the repeatability assays between 2.83 and 16.9%. The validated method was used to analyze 27 larvae samples collected from corpses by the IML-DF between 2009 and 2012. At least one substance was determined in 37% of the samples analyzed: cocaine (3 samples), its metabolite benzoylecgonine (4 samples), diazepam (3 samples), carbamazepine (1 sample) and amitriptyline (1 sample). The results obtained in this study represent the first entomotoxicological samples analyzed in Brazil. The method developed can be implemented in the Civil Police of the Federal District as a complementary tool to elucidate intoxication-related deaths where usual toxicological matrices are not available.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Físicas e Matemáticas, Programa de Pós-Graduação em Química, Florianópolis, 2016 / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:06:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 340441.pdf: 2618341 bytes, checksum: d6c59c9cd18aa18afee0e5b9c44de7ad (MD5) Previous issue date: 2016 / O presente trabalho trata da utilização de um reator de plasma frio de descarga elétrica de alta tensão estabilizada por fluxo de gás sobre a degradação do corante azo Alaranjado de metila (AM) em solução aquosa.Enfoque é dado nas espécies químicas ativas formadas e nos subprodutos de degradação em função dos diferentes gases plasmogênicos. O estudo da influência dos parâmetros experimentais do sistema de plasma mostrou que a taxa de descoloração do AM é maior em função do aumento da temperatura da solução e da potência elétrica aplicada, enquanto é menor em função do aumento da concentração do AM. Demais parâmetros de funcionamento apresentaram valores ótimos de 10 mm para o gap de descarga, 1,0 L min-¹ para o fluxo de gás, 500 rpm para a agitação da solução e valor de pH igual a 2. Nessas condições, todos os experimentos de descoloração do AM ocorreram segundo um perfil cinético de ordem zero para os três gases plasmogênicos. H2O2 foi produzido em fase aquosa com três diferentes perfis de produção utilizando N2, O2 e Ar na formação do plasma. NO2- e NO3- foram identificados apenas quando se utilizou plasma de N2. Na aplicação do plasma de N2, estima-se que H2O2, NO2- e NO3- participem de um equilíbrio em que H2O2 e NO2- são consumidos na reação de formação do ácido peroxinitroso, o qual, se não consumido, sofre isomerização para ácido nítrico. Experimentos de espectroscopia de emissão ótica revelaram espécies radicalares (H, OH, O), excitadas (Ar*, N2*) e outras mais no espectro de emissão do plasma de Ar. A influência do gás plasmogênico mostrou que a produção de radicais OH e H é maior segundo a ordem: Ar > O2 > N2. A região de maior produção para ambos os radicais se identificou na interface líquido/plasma. A água ativada por plasma foi constatada para os três gases plasmogênicos, sendo que a total descoloração do AM ocorreu apenas na ativação por plasma de N2. Experimentos de cromatografia líquida de alta eficiência revelaram a formação de distintos subprodutos em fase líquida para a degradação do AM em função dos diferentes gases plasmogênicos e em função dos diversos sistemas tamponantes utilizados. Já na fase gasosa foram identificados os subprodutos CO2, N2O, NO, HNO3, NO2 e N2O5 durante a aplicação de plasma de N2; CO2 e NO2 para plasma de O2; e CO2, NO,HNO3, NO2 e N2O5 para plasma de Ar. A quantificação do CO2 produzidoevidenciou que a mineralização do AM seguiu a ordem Ar > O2 > N2,enquanto que a descoloração seguiu a ordem O2 > N2 > Ar, mostrando que descoloração e mineralização são diferentes processos.<br> / Abstract: The present work deals about the use of a high voltage discharge nonthermal plasma reactor stabilized by gas flow on the degradation of the azodye Methyl Orange (MO) in aqueous solution. Focus is given on the active species formation and degradation byproducts according to different plasma feed gases. Study on the influence of experimental parameters ofplasma system shown that the rate of MO decay is higher as the increase of solution temperature and electric power applied, while is lower as the MO concentration is higher. Other experimental parameters presented optimal values such as 10 mm for the discharge gap, 1.0 L min?1 for gasflow, 500 rpm for solution mixing and pH value of 2. Under these experimental parameters, all MO color decay experiments followed a kinetic profile of zero order for the three feed gases used. H2O2 wasidentified in the aqueous phase with three different profiles production using N2, O2 and Ar as feed gases, while NO2- and NO3- were identifiedonly when N2 gas was used. Concerning N2 plasma application, it is estimated that H2O2, NO2- and NO3- participate in an chemical equilibriumin which H2O2 and NO2- are consumed in the peroxynitrous acid formation, which if not consumed, under goes isomerization to nitric acid. Opticalemission spectroscopy experiments revealed radicals (H, OH O),excited atoms and molecules (Ar *, N2 *) and other active species in the Arplasma emission spectrum. Different feed gases showed that the productionof OH and H radicals production is higher in the order: Air> O2 > N2. The region of highest production for both radicals were identified in the interface liquid/plasma. The Plasma Activated Water was observed for thethree feed gases, and the total MO decay occurred only in the N2 plasma activation. Chromatography analysis of the MO degradation in aqueousphase show various and different byproducts according different feed gasesand buffer systems used. In the gas phase CO2, N2O, NO, HNO3, NO2, andN2O5 were identified during the N2 plasma application; CO2 and NO2 forO2 plasma application ; and CO2, NO, HNO3, NO2, and N2O5 for Ar plasma application. Measurements of CO2 in the gas phase showed that the mineralization of MO followed the order Ar> O2 > N2, while the color decay followed the order O2 > N2 > Ar, showing that the color attenuation and mineralization are different processes.