Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1998. / Vita. Includes bibliographical references (leaves [114]-124).

Thesis (Ph. D.)--University of California, Riverside, 2009. / Includes abstract. Includes bibliographical references. Issued in print and online. Available via ProQuest Digital Dissertations.

In biennial following (spring 2005, autumn 2005, spring 2006, autumn 2006) we're rasitology examine 288 samples dropping from heifers and 288 samples dropping from bulls. Exhibits we're examined floatation in Sheather´s sugar solution. In examinate dropping we're proved present cysts Giardia intestinalis and oocysts Cryptosporidium andersoni and family Eimeria. In heifers was most frequent parasites coccidia Eimeria sp. (28,5 %). Flagellata Giardia intestinalis occur in 17 % of all designs. At least we're open up Cryptospordium andersoni (9,4 %). In bulls we're noted highest occurrence coccidia Eimeria sp. (19,1 %). Almost same occurrence we're found out near Giardia intestinalis (18,8 %). Very low prevalence we're have observed near Cryptosporidium andersoni (1,4 %).

Orientador: Marcelo Vasconcelos Meireles / Banca: Luzia Helena Queiroz / Banca: Valéria de Sá Jayme / Resumo: A infecção por algumas espécies ou genótipos de Cryptosporidium representa um risco em potencial para a saúde pública, principalmente por causa de morbidade e mortalidade em crianças de zero a cinco anos de idade e em pacientes imunodeprimidos. Embora existam alguns relatos de infecção por Cryptosporidium em animais exóticos, sua participação na epidemiologia da criptosporidiose humana é incerta, e a literatura sobre esse tema ainda é bastante escassa. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência e realizar a classificação molecular de Cryptosporidium spp. em amostras fecais de animais exóticos criados como animais de estimação no Brasil. Um total de 386 amostras de seis espécies de animais exóticos foi colhido e armazenado em solução de dicromato de potássio 5% a 4°C. Os oocistos foram purificados por centrífugo-sedimentação em água-éter, seguindo-se a extração de DNA genômico e a realização da nested-PCR para amplificação de fragmento parcial do gene da subunidade 18S do rRNA. Positividade para Cryptosporidium spp. foi observada em 11,40% (44/386) das amostras. O sequenciamento de fragmentos amplificados permitiu a identificação de Cryptosporidium tyzzeri (Cryptosporidum genótipo I de camundongos) em camundongos (Mus musculus), Cryptosporidium muris em camundongos, hamster (Mesocricetus auratus e Cricetulus griseus) e chinchila (Chinchilla lanigera), Cryptosporidium parvum em chinchila e Cryptosporidium sp. em porquinho-da-índia (Cavia porcellus). Os resultados deste estudo mostram que há uma variedade de espécies de Cryptosporidium spp. presentes em animais exóticos de companhia no Brasil. Os dados sugerem que esses animais podem participar da epidemiologia da criptosporidiose humana, particularmente por seu estreito convívio / Abstract: Infection by some species or genotypes of Cryptosporidium represents a potential risk to public health, mainly because of the morbidity and mortality in children from zero to five years of age and in immunocompromised patients. Although there are some reports of Cryptosporidium infection in exotic animals, the participation of these animals in the epidemiology of human cryptosporidiosis is uncertain and studies on this topic is still rather scarce. The aim of this study was to determine the occurrence as well as to perform the molecular classification of Cryptosporidium spp. in faecal samples of exotic animals raised as pets in Brazil. A total of 386 faecal samples from six species of exotic animals was collected and stored in a solution 5% potassium dichromate at 4°C. The oocysts were purified by centrifugal sedimentation water-ether, followed by genomic DNA extraction and the performance of the nested-PCR to amplify partial gene fragment of 18S rRNA. Positivity for Cryptosporidium spp. was obtained in 11.40% (44/386) of samples. The sequencing of the amplified fragments allowed the identification of Cryptosporidium tyzzeri (Cryptosporidium mouse genotype I) on mice (Mus musculus), Cryptosporidium muris in mice, hamster (Mesocricetus auratus and Cricetulus griseus) and chinchilla (Chinchilla lanigera), Cryptosporidium parvum in chinchila and Cryptosporidium sp. in guinea pig (Cavia porcellus). The results of this study show that there are a variety of species of Cryptosporidium spp. present in exotic animals company in Brazil. The data suggest that these animals may have zoonotic potential and participate in the epidemiology of human cryptosporidiosis / Mestre

A giardíase e a criptosporidiose estão entre as enfermidades de veiculação hídrica originadas por protozoários que têm ganhado maior notoriedade nas últimas décadas. Os microrganismos causadores dessas doenças têm-se tornado um desafio para as empresas de abastecimento de água. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium sp e Giardia sp nas águas brutas de quatro afluentes do Lago Guaíba: Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí. Juntos, abastecem uma população de dezenas de municípios da Região Metropolitana de Porto Alegre. Foram feitas amostragens mensais, durante doze meses, em cada afluente. Foi empregado o método de filtração em membrana para pré-concentração, centrifugação para concentração, separação imunomagnética para purificação e comparados três métodos de detecção para ambos os microrganismos: DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol), Safranina e Kinyoun para Cryptosporidium e DAPI, Iodo Lugol e Iodo Tricrômico para Giardia. A avaliação microscópica e contagem de (oo)cistos foram feitas utilizando-se microscopia de imunofluorescência e contraste de fase para o DAPI e microscopia óptica para as demais colorações. Obtiveram-se os seguintes resultados: para os Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí, respectivamente: 75, 42, 33 e 25% das amostras foram positivas para Cryptosporidium e 92, 83, 67 e 50% para Giardia. As concentrações médias de Giardia foram superiores às de Cryptosporidium em todos os quatro afluentes. Os valores médios observados foram: 80 oocistos e 176 cistos/100L no Taquari; 47 oocistos e 66 cistos/100L no Caí; 19 oocistos e 53 cistos/100L no Sinos; 16 oocistos e 92 cistos/100L no Gravataí. Estes podem estar subestimados devido à baixa recuperação dos métodos analíticos existentes e empregados. As densidades encontradas indicam que os protozoários estão disseminados nas águas superficiais dos formadores do Lago Guaíba.

The study was focused on study of diversity of Cryptosporidium spp. in wild canines and bears in the Czech Republic, Slovak Republic, Poland and Romania. A total of 359 faecal samples were collected from 179 red foxes (Vulpes vulpes), 83 grey wolves (Canis lupis), 63 brown bears (Ursus arctos) and 34 jackals (Canis aureus). Faecal samples were screened for Cryptosporidium by microscopy and PCR/sequencing. Phylogenetic analysis of small-subunit rRNA, actin and 60-kDa glycoprotein sequences revealed the presence of C. tyzzeri, C. andersoni in red foxes, C. canis and C. ubiquitum in gray wolves and C. galli in a brown bear and a red fox. Subtyping of C. ubiquitum and C. tyzzeri isolate by sequence analysis of the 60-kDa glycoprotein gene showed that isolates belonged to the XIId and IXa subtype family, respectively. Detection of host-non-specific cryptosporidia, except C. canic and C. ubiquitum, in wild canine and bears shows rather a food preference of screened carnivors than on an active infection.

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O diagnóstico da Cryptosporidium pode também ser realizado pela detecção de coproantígenos por ensaio imunoenzimático (ELISA) ou pela amplificação do DNA através da reação em cadeia da polimerase (PCR), dispensando a identificação morfológica dos oocistos. Além disso, a análise do polimorfismo genético de fragmentos de restrição (PCR-RFLP) pode ser utilizada na caracterização das espécies de Cryptosporidium, permitindo um melhor entendimento da dinâmica da transmissão deste parasito. Os objetivos deste trabalho foram: (1) comparar as técnicas de concentração de formol-acetato de etila (FE) e sedimentação por centrifugação (SC), bem como as técnicas de coloração de Ziehl-Neelsen modificado (ZN), auramina (AR) e safranina (SF) na detecção de oocistos de Cryptosporidium e Isospora belli em amostras fecais; (2) comparar a microscopia com a pesquisa de coproantígeno para o diagnóstico de Cryptosporidium e avaliar os resultados discordantes utilizando a PCR e (3) caracterizar as espécies de Cryptosporidium de amostras fecais humanas, através da PCR-RFLP. Para comparação entre os métodos de concentração de oocistos, FE e SC, e as técnicas de coloração, ZN, AR e SF, foram utilizadas amostras fecais positivas para Cryptosporidium (n=27) e I. belli (n=15), conservadas em formalina a 10%. Os métodos foram avaliados quanto ao número de oocistos detectados e a qualidade microscópica dos esfregaços. Para comparação entre o método de ZN e ELISA para o diagnóstico de Cryptosporidium foram examinadas amostras fecais de 626 crianças de diferentes grupos. Posteriormente, todas as amostras positivas para Cryptosporidium obtidas no estudo, juntamente com outros isolados disponíveis no laboratório, foram submetidos à extração de DNA e análise por Nested-PCR/RFLP dos genes COWP e 18S rRNA, para determinação das espécies de Crptosporidium. Os métodos SC e ZN identificaram mais oocistos de ambos parasitos do que os demais métodos avaliados (p<0,05). Houve perda de oocistos no anel de detritos gordurosos no FE em praticamente todas as amostras de Cryptosporidium e I. belli. Por outro lado, os métodos FE e AR apresentaram menos artefatos nos esfregaços comparados aos demais, sendo classificados com qualidade microscópica superior. A frequência de Cryptosporidium nas crianças foi de 2,6% (16/626), sendo maior no grupo com doença diarreica, enfatizando a importância deste coccídeo como agente etiológico da diarreia infantil. A sensibilidade e especificidade do ELISA foram de 85,7% e 99,7%, respectivamente. A eficiência da amplificação do DNA de Cryptosporidium foi de 92% (23/25), considerando os resultados dos dois genes analisados. As espécies do parasito identificadas foram C. hominis (78,3%), C. felis (8,7%), C. parvum (4,3%) e mistura C. felis + C. hominis (8,7%). Esses dados são os primeiros de genotipagem de Cryptosporidium de indivíduos de Salvador, demonstrando a predominância de C. hominis nas infecções, e a elevada frequência de C. felis, sugerindo um provável papel de gatos na transmissão do parasito aos humanos em nosso meio. / The diagnosis of coccidia Isospora belli and Cryptosporidium is usually accomplished by identification of oocysts in stained fecal smears. However, there is a lack of standardization in the routine laboratory for microscopic identification of these coccidia. The diagnosis of Cryptosporidium can also be done by detecting coproantigens using the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) or by parasite DNA amplification by polymerase chain reaction (PCR), eliminating the need of morphological identification of oocysts. Furthermore, the analysis of restriction fragment length polymorphism of amplified DNA (RFLP-PCR) can be used to characterize the species of Cryptosporidium, allowing a better understanding of the transmission dynamics of the parasite. The objectives of this study were: (1) to compare the techniques of concentration of formalin-ethyl acetate (FE) and sedimentation by centrifugation (SC), as well as the techniques of modified Ziehl-Neelsen (ZN), auramin (AR) and safranin (SF) in the detection of Cryptosporidium and Isospora belli in stool samples, (2) to compare the microscopy with coproantigen detection for the diagnosis of Cryptosporidium and evaluate discordant results using PCR and (3) to characterize the species Cryptosporidium in human fecal samples by PCR-RFLP. To compare the methods for concentration, FE and SC, and staining of oocysts, ZN, AR and SF, there were used positive fecal samples for Cryptosporidium (n = 27) and I. belli (n = 15), preserved in 10% formalin. The methods were evaluated according the numbers of oocysts detected and the microscopic quality of smears. For comparison between ELISA and ZN for the diagnosis of Cryptosporidium in faecal samples, there were examined 626 stool samples from children of different groups. Subsequently, all positive samples for Cryptosporidium obtained in the study, along with other isolates available in the laboratory, were subjected to DNA extraction and analysis by Nested-PCR/RFLP of the COWP and 18S rRNA genes to determine the species of Crptosporidium. The SC and ZN methods identified more oocysts of both parasites than other methods tested (p <0.05). The loss of oocysts in the fatty debris layer of FE method was observed in all Cryptosporidium and I. belli samples. Moreover, the methods of FE and AR had fewer artifacts in smears compared to the others, being ranked with higher microscopic quality. The frequency of Cryptosporidium in children was 2.6% (16/626), being higher in patients with diarrheic disease, emphasizing the importance of this protozoan as etiologic agent of childhood diarrhea. The sensitivity and specificity of ELISA were 85.7% and 99.7%, respectively. The efficiency of amplification of Cryptosporidium DNA was 92% (23/25), considering the results of the two genes. The species of the parasite identified were C. hominis (78.3%), C. felis (8.7%), C. parvum (4.3%) and a mixture of C. felis + C. hominis (8.7%). To our knowledgment, these data represent the first genotyping study of Cryptosporidium from individuals of Salvador, demonstrating the dominance of C. hominis infection and the high frequency of C. felis, suggesting a potential role of cats in the transmission of the parasite to humans in our area.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental. / Made available in DSpace on 2012-10-20T15:19:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 198734.pdf: 455399 bytes, checksum: 33119cfc4d386da3d5993bfc7984fc89 (MD5)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-04-17Bitstream added on 2014-06-13T19:22:37Z : No. of bitstreams: 1 lima_rca_dr_jabo.pdf: 689333 bytes, checksum: b8de9b1893e535c64bce7067077a1c6b (MD5) / A criptosporidiose é uma enfermidade de veiculação hídrica, possui como agravante a dificuldade de prevenção da contaminação ambiental e ausência de medidas terapêuticas eficazes. Com acentuada importância na bovinocultura, ocasiona inflamação e atrofia das vilosidades intestinais resultando em perda da superfície de absorção. O presente estudo teve como objetivo caracterizar molecularmente a infecção por Cryptosporidium spp. em bezerros do Município de Formiga, região Centroeste de Minas Gerais. Um total de 300 amostras de fezes de bezerros holandeses, nelore e sem raça definida, foram avaliadas pela técnica de coloração contraste negativo de verde malaquita e por meio da reação de nested-PCR para amplificação de fragmentos de DNA da subunidade 18S do gene do RNA ribossômico. Ocorrência de 5,33% (16/300) pelo verde malaquita e 4,66% (14/300) pela PCR foram observadas, sendo que por meio da caracterização molecular foram identificadas as espécies Cryptosporidium andersoni e Cryptosporidium ryanae. Os bezerros infectados apresentavam baixa eliminação de oocistos de Cryptosporidium spp. Não houve sendo que não houve relação da positividade com todas as variáveis estudadas. No sequenciamento foi encontrado as espécies de C. andersoni e C. ryanae, inclusive parasitando bezerros em faixas etárias, não relatadas na literatura. Estas duas espécies de Cryptosporidium, caracterizados molecularmente (Nested-PCR), no presente estudo, são descritas pela primeira vez parasitando bovinos do estado de Minas Gerais, Brasil / Cryptosporidiosis is a waterborne disease, has as aggravating the difficulty of preventing environmental contamination and the absence of effective therapeutic measures. With pronounced importance to the cattle, causes villous atrophy and inflammation resulting in loss of intestinal absorption surface. The present study aimed to characterize molecularly infection by Cryptosporidium spp. calves in the City of Formiga, Midwest region of Minas Gerais. A total of 300 stool samples from Holstein calves, and Nelore breed were evaluated by negative contrast staining of malachite green and through the reaction of nested-PCR for amplification of DNA fragments of the 18S subunit of the RNA gene ribosomal. Occurrence of 5.33% (16/300) for malachite green and 4.66% (14/300) were observed by PCR, and by molecular characterization were identified species Cryptosporidium andersoni and Cryptosporidium ryanae. Calves infected had lower elimination of Cryptosporidium spp. There was no positive relationship with all the variables. Sequencing were found in the species C. andersoni and C. ryanae, including parasitizing calves in age, not reported in the literature. These two species of Cryptosporidium, molecularly characterized (nested PCR), the present study describes for the first time parasitizing cattle in the state of Minas Gerais, Brazil

A giardíase e a criptosporidiose estão entre as enfermidades de veiculação hídrica originadas por protozoários que têm ganhado maior notoriedade nas últimas décadas. Os microrganismos causadores dessas doenças têm-se tornado um desafio para as empresas de abastecimento de água. Este trabalho teve como objetivo verificar a ocorrência dos protozoários Cryptosporidium sp e Giardia sp nas águas brutas de quatro afluentes do Lago Guaíba: Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí. Juntos, abastecem uma população de dezenas de municípios da Região Metropolitana de Porto Alegre. Foram feitas amostragens mensais, durante doze meses, em cada afluente. Foi empregado o método de filtração em membrana para pré-concentração, centrifugação para concentração, separação imunomagnética para purificação e comparados três métodos de detecção para ambos os microrganismos: DAPI (4’,6-diamidino-2-fenilindol), Safranina e Kinyoun para Cryptosporidium e DAPI, Iodo Lugol e Iodo Tricrômico para Giardia. A avaliação microscópica e contagem de (oo)cistos foram feitas utilizando-se microscopia de imunofluorescência e contraste de fase para o DAPI e microscopia óptica para as demais colorações. Obtiveram-se os seguintes resultados: para os Rios Taquari, Caí, dos Sinos e Gravataí, respectivamente: 75, 42, 33 e 25% das amostras foram positivas para Cryptosporidium e 92, 83, 67 e 50% para Giardia. As concentrações médias de Giardia foram superiores às de Cryptosporidium em todos os quatro afluentes. Os valores médios observados foram: 80 oocistos e 176 cistos/100L no Taquari; 47 oocistos e 66 cistos/100L no Caí; 19 oocistos e 53 cistos/100L no Sinos; 16 oocistos e 92 cistos/100L no Gravataí. Estes podem estar subestimados devido à baixa recuperação dos métodos analíticos existentes e empregados. As densidades encontradas indicam que os protozoários estão disseminados nas águas superficiais dos formadores do Lago Guaíba.