Orientador: Juliana Regina Peiró / Banca: Guilherme de Paula Nogueira / Banca: Valéria Marçal Felix de Lima / Banca: João Pessoa Araujo Junior / Banca: Daniel de Jesus Cardoso de Oliveira / Resumo: A endometrite é um dos problemas de maior frequência e relevância na reprodução de éguas. Os objetivos deste trabalho foram determinar o perfil das concentrações de IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6, IL-10 e IL-4 presentes no soro sanguíneo e no lavado uterino de éguas com endometrite naturalmente adquirida e naquelas clinicamente saudáveis, bem como definir o padrão da resposta imune (TH1 e TH2); observar se a inflamação local no útero pode gerar inflamação sistêmica; e, verificar se o lavado uterino e o tratamento com enrofloxacina alteram o perfil de concentração das citocinas nestas éguas. Foram utilizadas 12 éguas da raça Quarto de Milha incluídas em programa de transferência de embriões e subdivididas em 2 grupos, com 6 animais cada: GC (animais sadios) e GE (animais com endometrite). Amostras de soro e lavado uterino foram colhidas nos dias 1 (início do cio), 2, 3, 4 e 5 dias após o início do cio. As concentrações de TNF-α, IL-2 e IFN-γ (TH1); IL-4, IL-6, e IL-10 (TH2) foram mensuradas por citometria de fluxo pelo método Cytometric Bead Array (CBA). As diferentes citocinas avaliadas nas amostras de lavado uterino, à exceção da IL-4, apresentaram concentrações mais elevadas em éguas do GE comparadas às do GC no dia 1. A utilização de lavados uterinos seriados associados a antibioticoterapia sistêmica não provocaram alterações significativas nas concentrações de citocinas presentes no útero de éguas do GC. As concentrações séricas de citocinas não diferiram entre os grupos. Nosso... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Endometritis is one of the most frequent and relevant diseases in mares. The goals of this study were to determine the profile concentration of cytokines such as IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6, IL-10 and IL-4 present in blood serum and uterine lavage of mares with naturally acquired endometritis and those clinically healthy, well as set the pattern of immune response (TH1 and TH2); see if local inflammation in the uterus can cause systemic inflammation; and check whether the uterine lavage and the treatment with enrofloxacin alter the concentration profile of cytokines in these mares. Twelve Quarter Horse mares from an embryo transfer program were divided into 2 groups, with 6 animals each: control group (CG, healthy animals) and experimental group (EG, animals with endometritis). Blood serum and uterine lavage samples were collected on days 1 (onset of estrus), 2, 3, 4 and 5 (after onset of estrus). Concentrations of TNF-α, IL-2 and IFN-γ (TH1); IL-4, IL-6, and IL-10 (TH2) were measured by flow cytometry using the Cytometric Bead Array method (CBA). All cytokines, but not IL- 4, evaluated in the uterine lavage samples showed higher concentrations in mares with endometritis compared to healthy animals on day 1. The use of serial uterine lavages associated with systemic antibiotic therapy did not cause significant changes in concentrations of cytokines in the uterus of mares without endometritis. Serum concentrations of cytokines did not differ between groups. Our results establishe... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by Victor Hugo Mendonça (victorhmendonca22@gmail.com) on 2016-07-14T18:34:53Z No. of bitstreams: 1 Tese_Victor_14_07_2016 final.pdf: 911359 bytes, checksum: 60f1e386da3b1337919d14a76237ba08 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O título presente na ficha catalográfica e capa do trabalho está diferente do título que consta na folha de aprovação. Por favor, corrija as informações e realize uma nova submissão Agradecemos a compreensão. on 2016-07-14T18:45:52Z (GMT) / Submitted by Victor Hugo Mendonça (victorhmendonca22@gmail.com) on 2016-07-14T19:37:52Z No. of bitstreams: 1 Tese_Victor_14_07_2016 final2.pdf: 910821 bytes, checksum: 1c2a6fac92c5cd96775707dcc1b13a52 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-15T19:43:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 mendonca_vh_dr_araca.pdf: 910821 bytes, checksum: 1c2a6fac92c5cd96775707dcc1b13a52 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-15T19:43:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 mendonca_vh_dr_araca.pdf: 910821 bytes, checksum: 1c2a6fac92c5cd96775707dcc1b13a52 (MD5) Previous issue date: 2016-05-20 / A endometrite é um dos problemas de maior frequência e relevância na reprodução de éguas. Os objetivos deste trabalho foram determinar o perfil das concentrações de IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6, IL-10 e IL-4 presentes no soro sanguíneo e no lavado uterino de éguas com endometrite naturalmente adquirida e naquelas clinicamente saudáveis, bem como definir o padrão da resposta imune (TH1 e TH2); observar se a inflamação local no útero pode gerar inflamação sistêmica; e, verificar se o lavado uterino e o tratamento com enrofloxacina alteram o perfil de concentração das citocinas nestas éguas. Foram utilizadas 12 éguas da raça Quarto de Milha incluídas em programa de transferência de embriões e subdivididas em 2 grupos, com 6 animais cada: GC (animais sadios) e GE (animais com endometrite). Amostras de soro e lavado uterino foram colhidas nos dias 1 (início do cio), 2, 3, 4 e 5 dias após o início do cio. As concentrações de TNF-α, IL-2 e IFN-γ (TH1); IL-4, IL-6, e IL-10 (TH2) foram mensuradas por citometria de fluxo pelo método Cytometric Bead Array (CBA). As diferentes citocinas avaliadas nas amostras de lavado uterino, à exceção da IL-4, apresentaram concentrações mais elevadas em éguas do GE comparadas às do GC no dia 1. A utilização de lavados uterinos seriados associados a antibioticoterapia sistêmica não provocaram alterações significativas nas concentrações de citocinas presentes no útero de éguas do GC. As concentrações séricas de citocinas não diferiram entre os grupos. Nossos resultados estabeleceram o perfil de concentração de TNF-α, IFN-, IL-2, IL-6 e IL-10 bem como demonstraram que o padrão TH1 predominou sobre o TH2 no útero de éguas do GE quando comparado ao perfil de animais do GC no dia 1. Como ambas as vias estavam ativadas, sugere-se que o padrão TH0 esteja atuante no ambiente uterino de éguas com endometrite naturalmente adquirida. O tratamento com lavagens uterinas seriadas e antibiótico sistêmico foi eficiente em reduzir a concentração de citocinas no lavado uterino de éguas com endometrite em 72 horas, equiparando-se com os níveis do grupo de éguas saudáveis. / Endometritis is one of the most frequent and relevant diseases in mares. The goals of this study were to determine the profile concentration of cytokines such as IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-6, IL-10 and IL-4 present in blood serum and uterine lavage of mares with naturally acquired endometritis and those clinically healthy, well as set the pattern of immune response (TH1 and TH2); see if local inflammation in the uterus can cause systemic inflammation; and check whether the uterine lavage and the treatment with enrofloxacin alter the concentration profile of cytokines in these mares. Twelve Quarter Horse mares from an embryo transfer program were divided into 2 groups, with 6 animals each: control group (CG, healthy animals) and experimental group (EG, animals with endometritis). Blood serum and uterine lavage samples were collected on days 1 (onset of estrus), 2, 3, 4 and 5 (after onset of estrus). Concentrations of TNF-α, IL-2 and IFN-γ (TH1); IL-4, IL-6, and IL-10 (TH2) were measured by flow cytometry using the Cytometric Bead Array method (CBA). All cytokines, but not IL- 4, evaluated in the uterine lavage samples showed higher concentrations in mares with endometritis compared to healthy animals on day 1. The use of serial uterine lavages associated with systemic antibiotic therapy did not cause significant changes in concentrations of cytokines in the uterus of mares without endometritis. Serum concentrations of cytokines did not differ between groups. Our results established the concentration profile of TNF-α, IFN-, IL-2, IL-6 and IL-10 concentrations and showed that the TH1 immune response predominated over TH2 in the uterus of mares with endometritis when compared to healthy animals on day 1. As both pathways were activated, it is suggested that the TH0 immune response is active in the uterine environment of mares with naturally acquired endometritis. Treatment with serial uterine flushings and systemic antibiotic were effective in reducing the concentration of cytokines in uterine lavage of mares with endometritis in 72 hours, equating to the levels of healthy mares group.

No description available.

The cancer stem cell (CSC) concept is still very controversial; therefore identification and isolation of this specific population remain challenging. A variety of putative markers have been described and measurement of high aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity has been defined as a characteristic of stem cells (SCs). In this study, a library of novel small molecules (1,4-disubstituted acetalanthraquinones, AAQs), containing an acetal group as protected aldehyde functionality, was designed with the aim of probing affinity for ALDH metabolism and demonstrating their potential as molecular fluorescent probes to identify CSCs. The AAQs were shown to be subjective to acidic hydrolysis using 2M HCl at 37ºC; however compounds containing secondary or tertiary amine functionalities in their sidechain were only partly hydrolysed at 70 ºC. Metabolism studies were conducted using cytosolic fractions from rat liver enriched in ALDHs, yeast ALDH and human recombinant ALDH1A1. Some evidence was demonstrated which linked ALDH metabolism with aldehyde functionalities of hydrolysed AAQs (HAAQs). The AAQs were shown to emit far-red fluorescence (600-750 nm). A close relationship between structure modifications and alteration of cellular localisation, with gained specificity for selected sub-cellular compartments were achieved when assessed in A549 and U-2 OS cell lines. Thermal DNA denaturation and chemosensitivity assays were used to obtain information about DNA binding properties and cytotoxicity of AAQs and HAAQ congeners. All compounds were shown to be weak-to-moderately binding to DNA, and symmetrical 1,4-disubstituted compounds were shown to be non-toxic (IC50 = 100 :M) with nonsymmetrical analogues generating IC50 values in the 1-100 :M range. No fundamental variation in the biological activity was observed when comparing AAQs with HAAQs in the A549 (+ALDH) and MCF7 (-ALDH) cell lines. A pilot investigation revealed that aberrant gene methylation was cell-type dependent for three ALDH isoforms (1A1, 2, 3A1). Decitabine treatment led to enhanced protein expression for ALDH1A1 (A549), ALDH2 (MCF7) and ALDH3A1 (A549). In contrast, the protein level was reduced for ALDH1A1 in HT29 cells after decitabine treatment. ALDH1A1, ALDH2 and ALDH3A1 were highly expressed in prostate cell lines, with expression linked to promoter methylation. In contrast, low levels of DNA methylation were found in primary prostate cancer cells and benign prostatic hyperplasia. Interestingly, ALDH1A1, considered a SC marker, was found to be expressed at low levels in CD133⁺/ α₂β₁ hi stem cell fraction and upregulated in CD133⁻/ α₂β₁ lo differentiated prostate cancer cells. In summary, the results in this thesis demonstrate the complexity and tumour type specificity of ALDH expression. This creates challenges for the development of selective probes for CSC isolation, such as the AAQs discussed in this thesis. Although inconclusive results were obtained in regard to AAQs and their potential in targeting ALDHs, selected AAQs were shown to reveal interesting biological features highlighting them as potential non-invasive cytometric probes for tracking molecular interactions in live cells.

The cancer stem cell (CSC) concept is still very controversial; therefore identification and isolation of this specific population remain challenging. A variety of putative markers have been described and measurement of high aldehyde dehydrogenase (ALDH) activity has been defined as a characteristic of stem cells (SCs). In this study, a library of novel small molecules (1,4-di-substituted acetalanthraquinones, AAQs), containing an acetal group as protected aldehyde functionality, was designed with the aim of probing affinity for ALDH metabolism and demonstrating their potential as molecular fluorescent probes to identify CSCs. The AAQs were shown to be subjective to acidic hydrolysis using 2M HCl at 37ºC; however compounds containing secondary or tertiary amine functionalities in their sidechain were only partly hydrolysed at 70 ºC. Metabolism studies were conducted using cytosolic fractions from rat liver enriched in ALDHs, yeast ALDH and human recombinant ALDH1A1. Some evidence was demonstrated which linked ALDH metabolism with aldehyde functionalities of hydrolysed AAQs (HAAQs). The AAQs were shown to emit far-red fluorescence (600-750 nm). A close relationship between structure modifications and alteration of cellular localisation, with gained specificity for selected sub-cellular compartments were achieved when assessed in A549 and U-2 OS cell lines. Thermal DNA denaturation and chemosensitivity assays were used to obtain information about DNA binding properties and cytotoxicity of AAQs and HAAQ congeners. All compounds were shown to be weak*to*moderately binding to DNA, and symmetrical 1,4-di-substituted compounds were shown to be non*toxic (IC50 = 100 :/! with non-symmetrical analogues generating IC50 values in the 1-100 :/ range. No fundamental variation in the biological activity was observed when comparing AAQs with HAAQs in the A549 (+ALDH) and MCF7 (-ALDH) cell lines. A pilot investigation revealed that aberrant gene methylation was cell-type dependent for three ALDH isoforms (1A1, 2, 3A1). Decitabine treatment led to enhanced protein expression for ALDH1A1 (A549), ALDH2 (MCF7) and ALDH3A1 (A549). In contrast, the protein level was reduced for ALDH1A1 in HT29 cells after decitabine treatment. ALDH1A1, ALDH2 and ALDH3A1 were highly expressed in prostate cell lines, with expression linked to promoter methylation. In contrast, low levels of DNA methylation were found in primary prostate cancer cells and benign prostatic hyperplasia. Interestingly, ALDH1A1, considered a SC marker, was found to be expressed at low levels in CD133+/ α2β1hi stem cell fraction and upregulated in CD133-= α2β1lo differentiated prostate cancer cells. In summary, the results in this thesis demonstrate the complexity and tumour type specificity of ALDH expression. This creates challenges for the development of selective probes for CSC isolation, such as the AAQs discussed in this thesis. Although inconclusive results were obtained in regard to AAQs and their potential in targeting ALDHs, selected AAQs were shown to reveal interesting biological features highlighting them as potential non-invasive cytometric probes for tracking molecular interactions in live cells. / EPSRC, Biostatus / The full text was made available at the end of the re-embargo period, 1st September 2017.

Since ancient times, indigenous plants have been used by traditional healers for treating various ailments. Sutherlandia frutescens is one of the most commonly used medicinal plants of southern Africa. This widely distributed plant has been traditionally used to treat cancer and HIV patients; however scientific validation is still in high demand. This research aimed to phytochemically characterise the various extracts prepared and to determine if any chemotypes were present. Subsequent biological characterisation was carried out to preliminary ascertain whether this medicinal plant could have anti-cancer and/or immunemodulating properties and which compounds might be responsible for these actions. Various traditional and organic extracts were prepared. Extracts, fractions and compounds generated were analysed and chemical profiles obtained. Column chromatographic techniques were used to isolate and purify compounds and structure elucidation was carried out using various analytical techniques. Sulforhodamine B and cytometric bead array assays were performed to determine the biological activities of samples generated. / Life and Consumer Sciences / (M. Sc. (Life Sciences)

As síndromes mielodisplásicas (SMD) se caracterizam por terem uma hematopoese displásica, citopenias e pelo risco de progressão para leucemia mielóide aguda. O diagnóstico baseia-se na clínica e nos achados citomorfológicos da medula óssea (MO) e citogenéticos. Na fase inicial ou quando a MO é hipocelular o diagnóstico é difícil e a citogenética frequentemente é normal. A imunofenotipagem (IMF) tem sido cada vez mais utilizada nos casos de SMD em adultos e pouco explorada na SMD pediátrica. Os nossos objetivos foram: estudar os casos de SMD e doenças correlatas (LMA relacionada à SMD: LMA-rMD; leucemia mielomonocítica crônica: LMMC e leucemia mielomonocítica juvenil: LMMJ) em adultos e crianças, associando os dados clínicos e laboratoriais aos obtidos pela IMF, que utilizou um painel de anticorpos monoclonais para as várias linhagens medulares. No período compreendido entre 2000 e 2010 foram estudados 87 pacientes (64 adultos e 23crianças) oriundos do HUPE/UERJ e IPPMG/UFRJ e 46 controles (23 adultos e 20 crianças). Todos os doentes realizaram mielograma, biópsia óssea, citogenética, citoquímica e estudo imunofenotípico. Segundo os critérios da OMS 50 adultos foram classificados como SMD, 11 como LMA-rMD e 3 LMMC. Entre as crianças 18 eram SMD, 2 LMA e 3 LMMJ. Os pacientes adultos com SMD foram divididos em alto risco (n = 9; AREB-1 e AREB-2) e baixo risco (n=41; CRDU, CRDM, CRDM-SA, SMD-N e SMD-5q-). As crianças com SMD em CR (n=16) e AREB (n = 2). Anormalidades clonais recorrentes foram encontradas em 22 pacientes adultos e em 7 crianças. Na análise da IMF foi utilizada a metodologia da curva ROC para a determinação dos valores de ponto de corte a fim de identificar os resultados anormais dos anticorpos monoclonais nos pacientes e nos controles, permitindo determinar a sensibilidade e especificidade desses em cada linhagem. A IMF foi adequada para a análise em todos os pacientes e 3 ou mais anormalidades foram encontradas. A associação da IMF aumentou a sensibilidade da análise morfológica na linhagem eritróide de 70 para 97% nos adultos e de 59 para 86% nas crianças; na linhagem granulocítica de 53 para 98% nos adultos e de 50 para 100% nas crianças. Nos monócitos, onde a morfologia não foi informativa, mostrou uma sensibilidade de 86% nos adultos e 91% nas crianças. Enquanto que na linhagem megacariocítica, não analisada pela IMF, a morfologia mostrou uma sensibilidade de 95% nos adultos e 91% nas crianças. Na população de blastos foi expressiva a ausência de precursores linfóide B (em 92% dos adultos e em 61% das crianças). Os resultados observados nas crianças com SMD foram semelhantes aos encontrados nos adultos. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a IMF é um método complementar ao diagnóstico da SMD e doenças correlatas tanto em adultos quanto em crianças podendo contribuir para o reconhecimento rápido e precoce dessas enfermidades, devendo ser incorporado aos procedimentos de rotina diagnóstica. / As síndromes mielodisplásicas (SMD) se caracterizam por terem uma hematopoese displásica, citopenias e pelo risco de progressão para leucemia mielóide aguda. O diagnóstico baseia-se na clínica e nos achados citomorfológicos da medula óssea (MO) e citogenéticos. Na fase inicial ou quando a MO é hipocelular o diagnóstico é difícil e a citogenética frequentemente é normal. A imunofenotipagem (IMF) tem sido cada vez mais utilizada nos casos de SMD em adultos e pouco explorada na SMD pediátrica. Os nossos objetivos foram: estudar os casos de SMD e doenças correlatas (LMA relacionada à SMD: LMA-rMD; leucemia mielomonocítica crônica: LMMC e leucemia mielomonocítica juvenil: LMMJ) em adultos e crianças, associando os dados clínicos e laboratoriais aos obtidos pela IMF, que utilizou um painel de anticorpos monoclonais para as várias linhagens medulares. No período compreendido entre 2000 e 2010 foram estudados 87 pacientes (64 adultos e 23crianças) oriundos do HUPE/UERJ e IPPMG/UFRJ e 46 controles (23 adultos e 20 crianças). Todos os doentes realizaram mielograma, biópsia óssea, citogenética, citoquímica e estudo imunofenotípico. Segundo os critérios da OMS 50 adultos foram classificados como SMD, 11 como LMA-rMD e 3 LMMC. Entre as crianças 18 eram SMD, 2 LMA e 3 LMMJ. Os pacientes adultos com SMD foram divididos em alto risco (n = 9; AREB-1 e AREB-2) e baixo risco (n=41; CRDU, CRDM, CRDM-SA, SMD-N e SMD-5q-). As crianças com SMD em CR (n=16) e AREB (n = 2). Anormalidades clonais recorrentes foram encontradas em 22 pacientes adultos e em 7 crianças. Na análise da IMF foi utilizada a metodologia da curva ROC para a determinação dos valores de ponto de corte a fim de identificar os resultados anormais dos anticorpos monoclonais nos pacientes e nos controles, permitindo determinar a sensibilidade e especificidade desses em cada linhagem. A IMF foi adequada para a análise em todos os pacientes e 3 ou mais anormalidades foram encontradas. A associação da IMF aumentou a sensibilidade da análise morfológica na linhagem eritróide de 70 para 97% nos adultos e de 59 para 86% nas crianças; na linhagem granulocítica de 53 para 98% nos adultos e de 50 para 100% nas crianças. Nos monócitos, onde a morfologia não foi informativa, mostrou uma sensibilidade de 86% nos adultos e 91% nas crianças. Enquanto que na linhagem megacariocítica, não analisada pela IMF, a morfologia mostrou uma sensibilidade de 95% nos adultos e 91% nas crianças. Na população de blastos foi expressiva a ausência de precursores linfóide B (em 92% dos adultos e em 61% das crianças). Os resultados observados nas crianças com SMD foram semelhantes aos encontrados nos adultos. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a IMF é um método complementar ao diagnóstico da SMD e doenças correlatas tanto em adultos quanto em crianças podendo contribuir para o reconhecimento rápido e precoce dessas enfermidades, devendo ser incorporado aos procedimentos de rotina diagnóstica.

Since ancient times, indigenous plants have been used by traditional healers for treating various ailments. Sutherlandia frutescens is one of the most commonly used medicinal plants of southern Africa. This widely distributed plant has been traditionally used to treat cancer and HIV patients; however scientific validation is still in high demand. This research aimed to phytochemically characterise the various extracts prepared and to determine if any chemotypes were present. Subsequent biological characterisation was carried out to preliminary ascertain whether this medicinal plant could have anti-cancer and/or immunemodulating properties and which compounds might be responsible for these actions. Various traditional and organic extracts were prepared. Extracts, fractions and compounds generated were analysed and chemical profiles obtained. Column chromatographic techniques were used to isolate and purify compounds and structure elucidation was carried out using various analytical techniques. Sulforhodamine B and cytometric bead array assays were performed to determine the biological activities of samples generated. / Life and Consumer Sciences / (M. Sc. (Life Sciences)

As síndromes mielodisplásicas (SMD) se caracterizam por terem uma hematopoese displásica, citopenias e pelo risco de progressão para leucemia mielóide aguda. O diagnóstico baseia-se na clínica e nos achados citomorfológicos da medula óssea (MO) e citogenéticos. Na fase inicial ou quando a MO é hipocelular o diagnóstico é difícil e a citogenética frequentemente é normal. A imunofenotipagem (IMF) tem sido cada vez mais utilizada nos casos de SMD em adultos e pouco explorada na SMD pediátrica. Os nossos objetivos foram: estudar os casos de SMD e doenças correlatas (LMA relacionada à SMD: LMA-rMD; leucemia mielomonocítica crônica: LMMC e leucemia mielomonocítica juvenil: LMMJ) em adultos e crianças, associando os dados clínicos e laboratoriais aos obtidos pela IMF, que utilizou um painel de anticorpos monoclonais para as várias linhagens medulares. No período compreendido entre 2000 e 2010 foram estudados 87 pacientes (64 adultos e 23crianças) oriundos do HUPE/UERJ e IPPMG/UFRJ e 46 controles (23 adultos e 20 crianças). Todos os doentes realizaram mielograma, biópsia óssea, citogenética, citoquímica e estudo imunofenotípico. Segundo os critérios da OMS 50 adultos foram classificados como SMD, 11 como LMA-rMD e 3 LMMC. Entre as crianças 18 eram SMD, 2 LMA e 3 LMMJ. Os pacientes adultos com SMD foram divididos em alto risco (n = 9; AREB-1 e AREB-2) e baixo risco (n=41; CRDU, CRDM, CRDM-SA, SMD-N e SMD-5q-). As crianças com SMD em CR (n=16) e AREB (n = 2). Anormalidades clonais recorrentes foram encontradas em 22 pacientes adultos e em 7 crianças. Na análise da IMF foi utilizada a metodologia da curva ROC para a determinação dos valores de ponto de corte a fim de identificar os resultados anormais dos anticorpos monoclonais nos pacientes e nos controles, permitindo determinar a sensibilidade e especificidade desses em cada linhagem. A IMF foi adequada para a análise em todos os pacientes e 3 ou mais anormalidades foram encontradas. A associação da IMF aumentou a sensibilidade da análise morfológica na linhagem eritróide de 70 para 97% nos adultos e de 59 para 86% nas crianças; na linhagem granulocítica de 53 para 98% nos adultos e de 50 para 100% nas crianças. Nos monócitos, onde a morfologia não foi informativa, mostrou uma sensibilidade de 86% nos adultos e 91% nas crianças. Enquanto que na linhagem megacariocítica, não analisada pela IMF, a morfologia mostrou uma sensibilidade de 95% nos adultos e 91% nas crianças. Na população de blastos foi expressiva a ausência de precursores linfóide B (em 92% dos adultos e em 61% das crianças). Os resultados observados nas crianças com SMD foram semelhantes aos encontrados nos adultos. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a IMF é um método complementar ao diagnóstico da SMD e doenças correlatas tanto em adultos quanto em crianças podendo contribuir para o reconhecimento rápido e precoce dessas enfermidades, devendo ser incorporado aos procedimentos de rotina diagnóstica. / As síndromes mielodisplásicas (SMD) se caracterizam por terem uma hematopoese displásica, citopenias e pelo risco de progressão para leucemia mielóide aguda. O diagnóstico baseia-se na clínica e nos achados citomorfológicos da medula óssea (MO) e citogenéticos. Na fase inicial ou quando a MO é hipocelular o diagnóstico é difícil e a citogenética frequentemente é normal. A imunofenotipagem (IMF) tem sido cada vez mais utilizada nos casos de SMD em adultos e pouco explorada na SMD pediátrica. Os nossos objetivos foram: estudar os casos de SMD e doenças correlatas (LMA relacionada à SMD: LMA-rMD; leucemia mielomonocítica crônica: LMMC e leucemia mielomonocítica juvenil: LMMJ) em adultos e crianças, associando os dados clínicos e laboratoriais aos obtidos pela IMF, que utilizou um painel de anticorpos monoclonais para as várias linhagens medulares. No período compreendido entre 2000 e 2010 foram estudados 87 pacientes (64 adultos e 23crianças) oriundos do HUPE/UERJ e IPPMG/UFRJ e 46 controles (23 adultos e 20 crianças). Todos os doentes realizaram mielograma, biópsia óssea, citogenética, citoquímica e estudo imunofenotípico. Segundo os critérios da OMS 50 adultos foram classificados como SMD, 11 como LMA-rMD e 3 LMMC. Entre as crianças 18 eram SMD, 2 LMA e 3 LMMJ. Os pacientes adultos com SMD foram divididos em alto risco (n = 9; AREB-1 e AREB-2) e baixo risco (n=41; CRDU, CRDM, CRDM-SA, SMD-N e SMD-5q-). As crianças com SMD em CR (n=16) e AREB (n = 2). Anormalidades clonais recorrentes foram encontradas em 22 pacientes adultos e em 7 crianças. Na análise da IMF foi utilizada a metodologia da curva ROC para a determinação dos valores de ponto de corte a fim de identificar os resultados anormais dos anticorpos monoclonais nos pacientes e nos controles, permitindo determinar a sensibilidade e especificidade desses em cada linhagem. A IMF foi adequada para a análise em todos os pacientes e 3 ou mais anormalidades foram encontradas. A associação da IMF aumentou a sensibilidade da análise morfológica na linhagem eritróide de 70 para 97% nos adultos e de 59 para 86% nas crianças; na linhagem granulocítica de 53 para 98% nos adultos e de 50 para 100% nas crianças. Nos monócitos, onde a morfologia não foi informativa, mostrou uma sensibilidade de 86% nos adultos e 91% nas crianças. Enquanto que na linhagem megacariocítica, não analisada pela IMF, a morfologia mostrou uma sensibilidade de 95% nos adultos e 91% nas crianças. Na população de blastos foi expressiva a ausência de precursores linfóide B (em 92% dos adultos e em 61% das crianças). Os resultados observados nas crianças com SMD foram semelhantes aos encontrados nos adultos. Em conclusão, nossos resultados mostraram que a IMF é um método complementar ao diagnóstico da SMD e doenças correlatas tanto em adultos quanto em crianças podendo contribuir para o reconhecimento rápido e precoce dessas enfermidades, devendo ser incorporado aos procedimentos de rotina diagnóstica.

This thesis is a biosystematic study focusing on the taxonomy and variability of selected taxa of the genus Sorbus, one of the most diverse and taxonomically complicated plant groups in Europe. Classical and modern biosystematic methods - comparative study, chromosome counting, analysis of nuclear microsatellite markers, flow cytometry, and traditional multivariate and outline morphometric analyses were used to assess the morphological, karyological and genetic variability of the genus. The final synthesis of these approaches led to the description of several new taxa (species, hybrids and a subgenus) and the correction of several taxonomic misinterpretations. To reveal ongoing evolutionary processes responsible for the generation of the observed variability, the reproductive modes of 42 Sorbus taxa were examined using flow-cytometric seed and pollen screens. Apart from revealing major trends, the study estimates the frequency of rare events and provides several novel conclusions that are relevant both specifically to Sorbus/Rosaceae and to apomixis in general.