Introdução: O Débito Cardíaco Diminuído e o Volume Excessivo de Líquidos são os principais diagnósticos de Enfermagem (DE) presentes em pacientes admitidos com insuficiência cardíaca (IC) descompensada. A avaliação e determinação das características definidoras (CD) destes diagnósticos são fundamentais para orientar as intervenções de enfermagem adequadas e preconizadas para estes pacientes. A validação clínica das CD destes diagnósticos permanecem inexploradas no contexto da IC descompensada. Objetivo: Validar clinicamente as CD dos DE Débito Cardíaco Diminuído e Volume Excessivo de Líquidos em pacientes com IC descompensada. Métodos: Estudo transversal contemporâneo realizado de janeiro a junho de 2007 em hospital universitário em Porto Alegre, Rio Grande do Sul. Para a validação clínica utilizou-se- um instrumento contendo as CD dos diagnósticos em estudo, aplicado por duas enfermeiras peritas em cardiologia. Incluiu-se pacientes com fração de ejeção do ventrículo esquerdo  45% e que obtiveram oito ou mais pontos, conforme os critérios de Boston para classificação de IC descompensada. Para a validação do diagnóstico Volume Excessivo de Líquidos incluiu-se pacientes com disfunção sistólica ou diastólica Resultados da validação do DE Débito Cardíaco Diminuído: Incluiu-se 29 pacientes com idade média de 61 + 14 anos; 15 (51%) sexo masculino; fração de ejeção média de 28% + 9; De acordo com a taxa de fidedignidade (R) entre as peritas, as CD consideradas maiores (R ≥ 0,80) para a validação do diagnóstico foram a fadiga (R=1), a fração de ejeção do ventrículo esquerdo diminuída (R=1), a dispnéia (R=0,96), o edema (R= 0,95), a ortopnéia (R= 0,95), a dispnéia paroxística noturna (R=0,88) e a pressão venosa central elevada (R=0,85). As características consideradas como menores ou secundárias foram o ganho de peso (R=0,78), a distenção da veia jugular (R=0,74), as palpitações (R=0,71), a oligúria (R=0,67), a tosse (R=0,63), a pele fria e pegajosa (R=0,61) e as mudanças na cor da pele (R=0,52). Resultados da validação do DE Volume Excessivo de Líquidos: Incluiu-se 32 pacientes com idade média de 60,5 + 14,3 anos; 17 (53%) sexo masculino; fração de ejeção média de 31% + 11,5. Seguindo a taxa de fidedignidade (R) entre as peritas, as CD consideradas maiores (R ≥ 0,80) para a validação do diagnóstico Volume Excessivo de Líquidos foram a dispnéia (R=0,97), a ortopnéia (R=0,95), o edema (R= 0,91), o refluxo hepatojugular positivo (R=0,90), a dispnéia paroxística noturna (R=0,88), a congestão pulmonar (R=0,87) e a pressão venosa central elevada (R=0,85). As características consideradas como menores ou secundárias foram o ganho de peso (R=0,79), a hepatomegalia (R=0,78), a distenção da veia jugular (R=0,76), as crepitações (R=0,66), a oligúria (R=0,63) e o hematócrito e a hemoglobina diminuídos (R=0,51). Conclusão: Demonstrou-se neste estudo que as características definidoras com R entre 0,50 e 1 foram validadas para os diagnósticos Débito Cardíaco Diminuído e Volume Excessivo de Líquidos em pacientes com IC descompensada. / Introduction: Decreased Cardiac Output and Fluid Volume Excess are the major nursing diagnoses (ND) among patients with decompensated heart failure (DHF). The assessment and determination of the defining characteristics (DC) of those diagnoses are crucial for selecting the appropriate nursing interventions indicated for these patients. The clinical validation of the DC of those diagnoses has not been investigated in the context of DHF. Purpose: To clinically validate the DC of Decreased Cardiac Output and Fluid Volume Excess ND in patients with DHF. Methods: Cross-sectional study conducted from January to June 2007 at a teaching hospital in Porto Alegre, state of Rio Grande do Sul, Brazil. A questionnaire containing the DC of the diagnoses, applied by two nurses with expertise in cardiology, was used for clinical validation. To validate Decreased Cardiac Output ND were included patients with left ventricle ejection fraction  45% whose scores, according to the Boston criteria for classification of DHF, were 8 or higher were included in the study. To validate Fluid Volume Excess ND were included patients with systolic or diastolic dysfunction. Results of validate Decreased Cardiac Output ND: A total of 29 patients with mean age of 61+14 years; 15 (51%) male patients; and patients with mean ejection fraction of 28%+9 were included. Based on the reliability index (R) between the experts, the major DC (R ≥ 0.80) for the validation of the ND were fatigue (R=1), decreased left ventricle ejection fraction (R=1), dyspnea (R=0.96), edema (R= 0.95), orthopnea (R= 0.95), paroxysmal nocturnal dyspnea (R=0.88) and elevated central venous pressure (R=0.85). Minor or secondary characteristics were weight gain (R=0.78), jugular vein distension (R=0.74), palpitations (R=0.71), oliguria (R=0.67), cough (R=0.63), cold clammy skin (R=0.61) and changes in skin color (R=0.52). Results of validate Fluid Volume Excess ND: A total of 32 patients with mean age of 60.5+14.3 years; 17 (53%) male patients; and patients with mean ejection fraction of 31%+11.5 were included. Based on the reliability index (R) between the experts, the major DC (R ≥ 0.80) for the validation of the fluid overload ND were dyspnea (R=0.97), orthopnea (R=0.95), edema (R= 0.91), positive hepatojugular reflux (R=0.90), paroxysmal nocturnal dyspnea (R=0.88), pulmonary congestion (R=0.87) and elevated central venous pressure (R=0.85). Minor or secondary characteristics were weight gain (R=0.79), hepatomegaly (R=0.78), jugular vein distension (R=0.76), rales (R=0.66), oliguria (R=0.63) and low hematocrit and hemoglobin levels (R=0.51).Conclusion: This study showed that the major defining characteristics with R between 0,50 and 1 were validated for the diagnoses of decreased cardiac output or Fluid Volume Excess in patients with DHF. / Introducción: Débito Cardíaco Disminuido y Volumen Excesivo de Líquidos son los principales diagnósticos de Enfermería (DE) presentes en pacientes admitidos con insuficiencia cardiaca (IC) descompensada. La evaluación y determinación de las características definidoras (CD) de estos diagnóstico son fundamentales para orientar las intervenciones de enfermería adecuadas y recomendadas a los pacientes. La validación clínica de las CD de estos diagnósticos permanece inexplorada en el contexto de la IC descompensada. Objetivo: Validar clínicamente las CD de los DE Débito Cardíaco Disminuido y Volumen Excesivo de Líquidos en pacientes con IC descompensada. Métodos: Estudio transversal contemporáneo, realizado de enero a junio de 2007, en hospital universitario en Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil. Para la validación clínica, se utilizó un instrumento conteniendo las CD de los diagnósticos, aplicado por dos enfermeras peritas en cardiología. Se incluyeron pacientes con fracción de eyección del ventrículo izquierdo  45% y que obtuvieron ocho o más puntos, conforme a los criterios de Boston para la clasificación de IC descompensada. Para la validacíon de el DE Volume Excessivo de Líquidos se incluyeron pacientes com con disfunción sistólica o diastólica. Resultados de la validación de el diagnóstico Débito Cardíaco Diminuído: Se incluyeron 29 pacientes con edad media de 61±14 años; 15 (51%) del sexo masculino; fracción de eyección media del 28%±9. Conforme a la tasa de fidedignidad (R) entre las peritas, las CD consideradas mayores (R ≥ 0,80) para la validación del diagnóstico fueron la fatiga (R=1), la fracción de eyección del ventrículo izquierdo reducida (R=1), la disnea (R=0,96), el edema (R+0,95), la ortonea (R=0,95), la disnea paroxística nocturna (R=0,88) y la presión venosa central elevada (R=0,85). Las características consideradas como menores o secundarias fueron la ganancia de peso (R=0,78), la distensión de la vena yugular (R=0,74), las palpitaciones (R=0,71), la oliguria (R=0,67), la tos (R=0,63), la piel fría y pegajosa (R=0,61) y los cambios en el color de la piel (R=0,52). Resultados de la validación de el diagnóstico Volumen Excesivo de Líquidos: Se incluyeron 32 pacientes con edad media de 60,5±14,3 años; 17 (53%) del sexo masculino; fracción de eyección media de 31%±11,5. Siguiendo la tasa de fidedignidad (R) entre las peritas, las CD consideradas mayores (R ≥ 0,80) para la validación del diagnóstico Volumen Excesivo de Líquidos fueron la disnea (R=0,97), la ortonea (R=0,95), el edema (R=0,91), el reflujo hepatoyugular positivo (R=0,90), la disnea paroxística nocturna (R=0,88), la congestión pulmonar (R=0,87) y la presión venosa central elevada (R=0,85). Las características consideradas como menores o secundarias fueron la ganancia de peso (R=0,79), la hepatomegalia (R=0,78), la distensión de la vena yugular (R=0,76), las crepitaciones (R=0,66), la oliguria (R=0,63) y el hematocrito y hemoglobina disminuidos (R=0,51). Conclusión: Se demostró, en este estudio, que las características definidoras con R entre 0,50 y 1 fueron validadas para el diagnóstico Débito Cardíaco Disminuido o Volumen Excesivo de Líquidos en pacientes con IC descompensada.

Introdução: O Débito Cardíaco Diminuído e o Volume Excessivo de Líquidos são os principais diagnósticos de Enfermagem (DE) presentes em pacientes admitidos com insuficiência cardíaca (IC) descompensada. A avaliação e determinação das características definidoras (CD) destes diagnósticos são fundamentais para orientar as intervenções de enfermagem adequadas e preconizadas para estes pacientes. A validação clínica das CD destes diagnósticos permanecem inexploradas no contexto da IC descompensada. Objetivo: Validar clinicamente as CD dos DE Débito Cardíaco Diminuído e Volume Excessivo de Líquidos em pacientes com IC descompensada. Métodos: Estudo transversal contemporâneo realizado de janeiro a junho de 2007 em hospital universitário em Porto Alegre, Rio Grande do Sul. Para a validação clínica utilizou-se- um instrumento contendo as CD dos diagnósticos em estudo, aplicado por duas enfermeiras peritas em cardiologia. Incluiu-se pacientes com fração de ejeção do ventrículo esquerdo  45% e que obtiveram oito ou mais pontos, conforme os critérios de Boston para classificação de IC descompensada. Para a validação do diagnóstico Volume Excessivo de Líquidos incluiu-se pacientes com disfunção sistólica ou diastólica Resultados da validação do DE Débito Cardíaco Diminuído: Incluiu-se 29 pacientes com idade média de 61 + 14 anos; 15 (51%) sexo masculino; fração de ejeção média de 28% + 9; De acordo com a taxa de fidedignidade (R) entre as peritas, as CD consideradas maiores (R ≥ 0,80) para a validação do diagnóstico foram a fadiga (R=1), a fração de ejeção do ventrículo esquerdo diminuída (R=1), a dispnéia (R=0,96), o edema (R= 0,95), a ortopnéia (R= 0,95), a dispnéia paroxística noturna (R=0,88) e a pressão venosa central elevada (R=0,85). As características consideradas como menores ou secundárias foram o ganho de peso (R=0,78), a distenção da veia jugular (R=0,74), as palpitações (R=0,71), a oligúria (R=0,67), a tosse (R=0,63), a pele fria e pegajosa (R=0,61) e as mudanças na cor da pele (R=0,52). Resultados da validação do DE Volume Excessivo de Líquidos: Incluiu-se 32 pacientes com idade média de 60,5 + 14,3 anos; 17 (53%) sexo masculino; fração de ejeção média de 31% + 11,5. Seguindo a taxa de fidedignidade (R) entre as peritas, as CD consideradas maiores (R ≥ 0,80) para a validação do diagnóstico Volume Excessivo de Líquidos foram a dispnéia (R=0,97), a ortopnéia (R=0,95), o edema (R= 0,91), o refluxo hepatojugular positivo (R=0,90), a dispnéia paroxística noturna (R=0,88), a congestão pulmonar (R=0,87) e a pressão venosa central elevada (R=0,85). As características consideradas como menores ou secundárias foram o ganho de peso (R=0,79), a hepatomegalia (R=0,78), a distenção da veia jugular (R=0,76), as crepitações (R=0,66), a oligúria (R=0,63) e o hematócrito e a hemoglobina diminuídos (R=0,51). Conclusão: Demonstrou-se neste estudo que as características definidoras com R entre 0,50 e 1 foram validadas para os diagnósticos Débito Cardíaco Diminuído e Volume Excessivo de Líquidos em pacientes com IC descompensada. / Introduction: Decreased Cardiac Output and Fluid Volume Excess are the major nursing diagnoses (ND) among patients with decompensated heart failure (DHF). The assessment and determination of the defining characteristics (DC) of those diagnoses are crucial for selecting the appropriate nursing interventions indicated for these patients. The clinical validation of the DC of those diagnoses has not been investigated in the context of DHF. Purpose: To clinically validate the DC of Decreased Cardiac Output and Fluid Volume Excess ND in patients with DHF. Methods: Cross-sectional study conducted from January to June 2007 at a teaching hospital in Porto Alegre, state of Rio Grande do Sul, Brazil. A questionnaire containing the DC of the diagnoses, applied by two nurses with expertise in cardiology, was used for clinical validation. To validate Decreased Cardiac Output ND were included patients with left ventricle ejection fraction  45% whose scores, according to the Boston criteria for classification of DHF, were 8 or higher were included in the study. To validate Fluid Volume Excess ND were included patients with systolic or diastolic dysfunction. Results of validate Decreased Cardiac Output ND: A total of 29 patients with mean age of 61+14 years; 15 (51%) male patients; and patients with mean ejection fraction of 28%+9 were included. Based on the reliability index (R) between the experts, the major DC (R ≥ 0.80) for the validation of the ND were fatigue (R=1), decreased left ventricle ejection fraction (R=1), dyspnea (R=0.96), edema (R= 0.95), orthopnea (R= 0.95), paroxysmal nocturnal dyspnea (R=0.88) and elevated central venous pressure (R=0.85). Minor or secondary characteristics were weight gain (R=0.78), jugular vein distension (R=0.74), palpitations (R=0.71), oliguria (R=0.67), cough (R=0.63), cold clammy skin (R=0.61) and changes in skin color (R=0.52). Results of validate Fluid Volume Excess ND: A total of 32 patients with mean age of 60.5+14.3 years; 17 (53%) male patients; and patients with mean ejection fraction of 31%+11.5 were included. Based on the reliability index (R) between the experts, the major DC (R ≥ 0.80) for the validation of the fluid overload ND were dyspnea (R=0.97), orthopnea (R=0.95), edema (R= 0.91), positive hepatojugular reflux (R=0.90), paroxysmal nocturnal dyspnea (R=0.88), pulmonary congestion (R=0.87) and elevated central venous pressure (R=0.85). Minor or secondary characteristics were weight gain (R=0.79), hepatomegaly (R=0.78), jugular vein distension (R=0.76), rales (R=0.66), oliguria (R=0.63) and low hematocrit and hemoglobin levels (R=0.51).Conclusion: This study showed that the major defining characteristics with R between 0,50 and 1 were validated for the diagnoses of decreased cardiac output or Fluid Volume Excess in patients with DHF. / Introducción: Débito Cardíaco Disminuido y Volumen Excesivo de Líquidos son los principales diagnósticos de Enfermería (DE) presentes en pacientes admitidos con insuficiencia cardiaca (IC) descompensada. La evaluación y determinación de las características definidoras (CD) de estos diagnóstico son fundamentales para orientar las intervenciones de enfermería adecuadas y recomendadas a los pacientes. La validación clínica de las CD de estos diagnósticos permanece inexplorada en el contexto de la IC descompensada. Objetivo: Validar clínicamente las CD de los DE Débito Cardíaco Disminuido y Volumen Excesivo de Líquidos en pacientes con IC descompensada. Métodos: Estudio transversal contemporáneo, realizado de enero a junio de 2007, en hospital universitario en Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil. Para la validación clínica, se utilizó un instrumento conteniendo las CD de los diagnósticos, aplicado por dos enfermeras peritas en cardiología. Se incluyeron pacientes con fracción de eyección del ventrículo izquierdo  45% y que obtuvieron ocho o más puntos, conforme a los criterios de Boston para la clasificación de IC descompensada. Para la validacíon de el DE Volume Excessivo de Líquidos se incluyeron pacientes com con disfunción sistólica o diastólica. Resultados de la validación de el diagnóstico Débito Cardíaco Diminuído: Se incluyeron 29 pacientes con edad media de 61±14 años; 15 (51%) del sexo masculino; fracción de eyección media del 28%±9. Conforme a la tasa de fidedignidad (R) entre las peritas, las CD consideradas mayores (R ≥ 0,80) para la validación del diagnóstico fueron la fatiga (R=1), la fracción de eyección del ventrículo izquierdo reducida (R=1), la disnea (R=0,96), el edema (R+0,95), la ortonea (R=0,95), la disnea paroxística nocturna (R=0,88) y la presión venosa central elevada (R=0,85). Las características consideradas como menores o secundarias fueron la ganancia de peso (R=0,78), la distensión de la vena yugular (R=0,74), las palpitaciones (R=0,71), la oliguria (R=0,67), la tos (R=0,63), la piel fría y pegajosa (R=0,61) y los cambios en el color de la piel (R=0,52). Resultados de la validación de el diagnóstico Volumen Excesivo de Líquidos: Se incluyeron 32 pacientes con edad media de 60,5±14,3 años; 17 (53%) del sexo masculino; fracción de eyección media de 31%±11,5. Siguiendo la tasa de fidedignidad (R) entre las peritas, las CD consideradas mayores (R ≥ 0,80) para la validación del diagnóstico Volumen Excesivo de Líquidos fueron la disnea (R=0,97), la ortonea (R=0,95), el edema (R=0,91), el reflujo hepatoyugular positivo (R=0,90), la disnea paroxística nocturna (R=0,88), la congestión pulmonar (R=0,87) y la presión venosa central elevada (R=0,85). Las características consideradas como menores o secundarias fueron la ganancia de peso (R=0,79), la hepatomegalia (R=0,78), la distensión de la vena yugular (R=0,76), las crepitaciones (R=0,66), la oliguria (R=0,63) y el hematocrito y hemoglobina disminuidos (R=0,51). Conclusión: Se demostró, en este estudio, que las características definidoras con R entre 0,50 y 1 fueron validadas para el diagnóstico Débito Cardíaco Disminuido o Volumen Excesivo de Líquidos en pacientes con IC descompensada.

All companies have strategic assets comprising financial capital, physical capital, human capital and organisational capital which, when effectively utilised, contribute to the competitive advantage necessary to survive in a globalised economy. The manifestation of adverse factors in a company will impact detrimentally on the performance of these strategic assets. Since the 1980s, one factor has become prominent in the management of a company’s human capital, namely sexual harassment. Sexual harassment constitutes behaviour of a sexual nature that leads to, and perpetuates, a working environment in which it becomes unpleasant to work, and if allowed to go unchecked, will lead to the underperformance of the company’s human capital. Besides the cost of litigation associated with sexual harassment, companies are confronted with the more troubling and subtle costs arising out of the psychological and physiological harm to both victims and co-workers. The psychological and physiological effects manifest themselves in symptoms such as depression, frustration, decreased self-esteem and fatigue which, in turn, lead to decreased productivity and increased absenteeism. Accordingly, in an effort to gain the competitive advantage to survive in a globalised economy, companies must manage the phenomenon of sexual harassment in the workplace. The existing theoretical principles relating to the management of sexual harassment in the workplace have been analysed in depth and a model developed to satisfy this need. This model was subsequently used to determine to what extent sexual harassment management is taking place within companies affiliated to the Steel and Engineering Industries Federation of South Africa (SEIFSA). Various informative findings resulted from the investigation, amongst which were the lack of a proper sexual harassment policy within companies, the lack of proper training of employees regarding the occurrence of this phenomenon in the workplace, and the absence of proper formal/informal complaints procedures. It thus became evident that the management of sexual harassment in these companies – despite the Government’s Code of Good Practice on the Handling of Sexual Harassment Cases – had not been fully established and that there is a need for guidelines in this regard. / Business Management / D. Comm. (Business Management)

Title: Competitive Balance of the selected football leagues in Europe, their development and comparison. Goals: Determining the competitive balance in the six top European football competitions. This is a Czech Gambrinus liga, Dutch Eredivisie, German Bundesliga, Austrian Bundesliga, Ukrainian Premier liha Hungarian OTP liga, compare to competition and an outline of the development trend. Methods: The standard deviation of percentage wins, correlation coefficient, the presentation of results based on percentages, graphs, trends. Results: All results are presented in the analytical part of the work, verify predetermined hypotheses and are an important source of comparison for each event and outline trends. Keywords: Competition, equilibrium, European football league, football league, static balance, dynamic balance, season, club, reform, UEFA, sport, decreased balance, standard deviation, correlation coefficient.

All companies have strategic assets comprising financial capital, physical capital, human capital and organisational capital which, when effectively utilised, contribute to the competitive advantage necessary to survive in a globalised economy. The manifestation of adverse factors in a company will impact detrimentally on the performance of these strategic assets. Since the 1980s, one factor has become prominent in the management of a company’s human capital, namely sexual harassment. Sexual harassment constitutes behaviour of a sexual nature that leads to, and perpetuates, a working environment in which it becomes unpleasant to work, and if allowed to go unchecked, will lead to the underperformance of the company’s human capital. Besides the cost of litigation associated with sexual harassment, companies are confronted with the more troubling and subtle costs arising out of the psychological and physiological harm to both victims and co-workers. The psychological and physiological effects manifest themselves in symptoms such as depression, frustration, decreased self-esteem and fatigue which, in turn, lead to decreased productivity and increased absenteeism. Accordingly, in an effort to gain the competitive advantage to survive in a globalised economy, companies must manage the phenomenon of sexual harassment in the workplace. The existing theoretical principles relating to the management of sexual harassment in the workplace have been analysed in depth and a model developed to satisfy this need. This model was subsequently used to determine to what extent sexual harassment management is taking place within companies affiliated to the Steel and Engineering Industries Federation of South Africa (SEIFSA). Various informative findings resulted from the investigation, amongst which were the lack of a proper sexual harassment policy within companies, the lack of proper training of employees regarding the occurrence of this phenomenon in the workplace, and the absence of proper formal/informal complaints procedures. It thus became evident that the management of sexual harassment in these companies – despite the Government’s Code of Good Practice on the Handling of Sexual Harassment Cases – had not been fully established and that there is a need for guidelines in this regard. / Business Management / D. Comm. (Business Management)

Syfte: Syftet med studien var att jämföra två metoder vid undersökning av tårfilmsanalys; tårflödesbeteende-metoden och fluorescein break-up mönster och om deras mätresultat överensstämmer med varandra. Detta för att diskutera om någon av metoderna kunde vara ett bättre alternativ att adaptera ute i praktiken för vårdgivare inom ögonvården. Metod: Initialt fick deltagarna besvara en OSDI-enkät (ocular surface disease index), därefter gjordes resterande mätningar i biomikroskopet. I biomikroskopet utfördes initialt dem icke-invasiva mätningarna som tillhörde tårflödesbeteende-metoden (mätning av TMH (tårmeniskhöjd), debrishastighet efter blinkning och mätning av lipidlagrets interferensmönster) även NiBUT (non-invasive tear break-up time) utfördes. Efter dem icke-invasiva mätningarna tillsattes fluorescein i inferiora temporala fornix och dem invasiva testerna; TBUT (tear break-up time) och FBUP (fluorescein break-up mönster) utfördes tre gånger. Alla mätningar dokumenterades med video. Tre oberoende bedömningar utfördes. Studien undersökte om resultatet av tårflödesbeteendet och FBUP hade ett samband och vilken utav metoderna som fick en högre intravaliditet utefter dem bedömningar som utfördes. Resultat: Totalt deltog 26 deltagare varav 4 exkluderades. Deltagarna var mellan 19–57 år gamla med en genomsnittsålder på 35 år och en standardavvikelse på ±12,3 år. Samtliga presenterade med en OSDI ≥13, alternativt hade en visuellt frekvent blinkfrekvens. Det återfanns ett samband mellan tårflödesbeteende-metoden och FBUP i studien, dock ingen av klinisk signifikans ((bedömare 1, Cramer’s V= 0,46 p=0,06) (bedömare 2, Cramer’s V=0,33 p=0,32) (bedömare 3, Cramer’s V=0,33 p=0,34)). Tårflödesbeteende-metoden (Fleiss kappa =0,29, p=0,40) och FBUP (Fleiss kappa =0,25, p=0,40) uppvisade båda på en mindre god intra-validitet Slutsats: Det finns ett samband mellan tårflödesbeteende-metoden och FBUP men ingen statistisk signifikans. Intravaliditeten är marginellt högre vid tårflödesbeteende-metoden än vid FBUP i studien. / Aim: The aim of this study was to compare two methods used during tear-film analysis; tear-flow behaviour, and fluorescein break-up pattern and if their measured results are in an agreement. This in order to discuss which one of the methods would be more suitable to apply in clinical practice for healthcare workers in the field of optometry.  Method: Initially the participants filled out an OSDI questionnaire (ocular surface disease index), thereafter measurements were done in the biomicroscope. Initially the non-invasive measurements such as the tear-flow behaviour method (measurements of TMH (tear meniscus height), speed of debris movement across the tear film after blinking and measurements of the lipid layer interference) and NiBUT (non-invasive break-up time) were measured. Afterwards fluorescein was applied in the inferior temporal fornix and the invasive measurements; TBUT (tear break-up time) and FBUP (fluorescein break-up pattern) were measured three times. All measurements done in the biomicroscope were documented with video and three independent assessments were done. This study looked at the results from the tear-flow behaviour and FBUP and if they agreed with one another. It also looked into which one of the methods presented a higher intra-validity in regard to the assessments made. Results: The study had a total of 26 participants, of which 4 were excluded. The participants were between the ages of 19-57 years old with an average age of 35 years with a standard deviation of ±12,3 years. The participants presented with an OSDI of ≥13, with exceptions made if a participant visually had a high blink frequency. A correspondence between the tear-flow behaviour method and  FBUP could be observed, however none of statistical significance ((assessor 1, Cramer’s V= 0,46 p=0,06) (assessor 2, Cramer’s V=0,33 p=0,32) (assessor 3, Cramer’s V=0,33 p=0,34)). The intra-validity of the tear-flow behaviour method (Fleiss kappa =0,29, p=0,40) and FBUP (Fleiss kappa =0,25, p=0,40) were both categorized as weak intra-validity.  Conclusion: There is a correspondence between the tear-flow method and FBUP, without statistical significance. The intra-validity was marginally higher within the tear-flow method compared to FBUP in the study.

O Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é o agente etiológico da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). A AIDS é uma doença de distribuição mundial, e estima-se que existam atualmente pelo menos 36,9 milhões de pessoas infectadas com o vírus. Durante o seu ciclo replicativo, o HIV promove diversas alterações na fisiologia da célula hospedeira a fim de promover sua sobrevivência e potencializar a replicação. A rápida progressão da infecção pelo HIV-1 em humanos e em modelos animais está intimamente ligada à função da proteína acessória Nef. Dentre as diversas ações de Nef está a regulação negativa de proteínas importantes na resposta imunológica, como o receptor CD4. Sabe-se que esta ação resulta da indução da degradação de CD4 em lisossomos, mas os mecanismos moleculares envolvidos ainda são totalmente elucidados. Nef forma um complexo tripartite com a cauda citosólica de CD4 e a proteína adaptadora 2 (AP-2), em vesículas revestidas por clatrina nascentes, induzindo a internalização e degradação lisossomal de CD4. Pesquisas anteriores demonstraram que o direcionamento de CD4 aos lisossomos por Nef envolve a entrada do receptor na via dos corpos multivesiculares (MVBs), por um mecanismo atípico, pois, embora não necessite da ubiquitinação de carga, depende da ação de proteínas que compõem os ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) e da ação de Alix, uma proteína acessória da maquinaria ESCRT. Já foi reportado que Nef interage com subunidades dos complexos AP-1, AP-2, AP-3 e Nef não parece interagir com subunidades de AP-4 e AP-5. Entretanto, o papel da interação de Nef com AP-1 e AP-3 na regulação negativa de CD4 ainda não está totalmente elucidado. Ademais, AP-1, AP-2 e AP-3 são potencialmente heterogêneos devido à existência de isoformas múltiplas das subunidades codificadas por diferentes genes. Todavia, existem poucos estudos para demonstrar se as diferentes combinações de isoformas dos APs são formadas e se possuem propriedades funcionais distintas. O presente trabalho procurou identificar e caracterizar fatores celulares envolvidos na regulação do tráfego intracelular de proteínas no processo de regulação negativa de CD4 induzido por Nef. Mais especificamente, este estudo buscou caracterizar a participação do complexo AP-1 na modulação negativa de CD4 por Nef de HIV-1, através do estudo funcional das duas isoformas de ?-adaptina, subunidades de AP-1. Utilizando a técnica de Pull-down demonstramos que Nef é capaz de interagir com ?2. Além disso, nossos dados de Imunoblot indicaram que a proteína ?2-adaptina, e não ?1-adaptina, é necessária no processo de degradação lisossomal de CD4 por Nef e que esta participação é conservada para degradação de CD4 por Nef de diferentes cepas virais. Ademais, por citometria de fluxo, o silenciamento de ?2, e não de ?1, compromete a diminuição dos níveis de CD4 por Nef da membrana plasmática. A análise por imunofluorêsncia indireta também revelou que a diminuição dos níveis de ?2 impede a redistribuição de CD4 por Nef para regiões perinucleares, acarretando no acúmulo de CD4, retirados por Nef da membrana plasmática, em endossomos primários. A depleção de ?1A, outra subunidade de AP-1, acarretou na diminuição dos níveis celulares de ?2 e ?1, bem como, no comprometimento da eficiente degradação de CD4 por Nef. Além disso, foi possível observar que, ao perturbar a maquinaria ESCRT via super-expressão de HRS (uma subunidade do complexo ESCRT-0), ocorreu um acumulo de ?2 em endossomos dilatados contendo HRS-GFP, nos quais também detectou-se CD4 que foi internalizado por Nef. Em conjunto, os resultados indicam que ?2-adaptina é uma importante molécula para o direcionamento de CD4 por Nef para a via ESCRT/MVB, mostrando ser uma proteína relevante no sistema endo-lisossomal. Ademais, os resultados indicaram que as isoformas ?-adaptinas não só possuem funções distintas, mas também parecem compor complexos AP-1 com diferentes funções celulares, já que apenas a variante AP-1 contendo ?2, mas não ?1, participa da regulação negativa de CD4 por Nef. Estes estudos contribuem para o melhor entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na atividade de Nef, que poderão também ajudar na melhor compreensão da patogênese do HIV e da síndrome relacionada. Em adição, este trabalho contribui para o entendimento de processos fundamentais da regulação do tráfego de proteínas transmembrana no sistema endo-lisossomal. / The Human Immunodeficiency Virus (HIV) is the etiologic agent of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). AIDS is a disease which has a global distribution, and it is estimated that there are currently at least 36.9 million people infected with the virus. During the replication cycle, HIV promotes several changes in the physiology of the host cell to promote their survival and enhance replication. The fast progression of HIV-1 in humans and animal models is closely linked to the function of an accessory protein Nef. Among several actions of Nef, one is the most important is the down-regulation of proteins from the immune response, such as the CD4 receptor. It is known that this action causes CD4 degradation in lysosome, but the molecular mechanisms are still incompletely understood. Nef forms a tripartite complex with the cytosolic tail of the CD4 and adapter protein 2 (AP-2) in clathrin-coated vesicles, inducing CD4 internalization and lysosome degradation. Previous research has demonstrated that CD4 target to lysosomes by Nef involves targeting of this receptor to multivesicular bodies (MVBs) pathway by an atypical mechanism because, although not need charging ubiquitination, depends on the proteins from ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) machinery and the action of Alix, an accessory protein ESCRT machinery. It has been reported that Nef interacts with subunits of AP- 1, AP-2, AP-3 complexes and Nef does not appear to interact with AP-4 and AP-5 subunits. However, the role of Nef interaction with AP-1 or AP-3 in CD4 down-regulation is poorly understood. Furthermore, AP-1, AP-2 and AP-3 are potentially heterogeneous due to the existence of multiple subunits isoforms encoded by different genes. However, there are few studies to demonstrate if the different combinations of APs isoforms are form and if they have distinct functional properties. This study aim to identify and characterize cellular factors involved on CD4 down-modulation induced by Nef from HIV-1. More specifically, this study aimed to characterize the involvement of AP-1 complex in the down-regulation of CD4 by Nef HIV-1 through the functional study of the two isoforms of ?-adaptins, AP-1 subunits. By pull-down technique, we showed that Nef is able to interact with ?2. In addition, our data from immunoblots indicated that ?2- adaptin, not ?1-adaptin, is required in Nef-mediated targeting of CD4 to lysosomes and the ?2 participation in this process is conserved by Nef from different viral strains. Furthermore, by flow cytometry assay, ?2 depletion, but not ?1 depletion, compromises the reduction of surface CD4 levels induced by Nef. Immunofluorescence microscopy analysis also revealed that ?2 depletion impairs the redistribution of CD4 by Nef to juxtanuclear region, resulting in CD4 accumulation in primary endosomes. Knockdown of ?1A, another subunit of AP-1, resulted in decreased cellular levels of ?1 and ?2 and, compromising the efficient CD4 degradation by Nef. Moreover, upon artificially stabilizing ESCRT-I in early endosomes, via overexpression of HRS, internalized CD4 accumulates in enlarged HRS-GFP positive endosomes, where co-localize with ?2. Together, the results indicate that ?2-adaptin is a molecule that is essential for CD4 targeting by Nef to ESCRT/MVB pathway, being an important protein in the endo-lysosomal system. Furthermore, the results indicate that ?-adaptins isoforms not only have different functions, but also seem to compose AP-1 complex with distinct cell functions, and only the AP-1 variant comprising ?2, but not ?1, acts in the CD4 down-regulation induced by Nef. These studies contribute to a better understanding on the molecular mechanisms involved in Nef activities, which may also help to improve the understanding of the HIV pathogenesis and the related syndrome. In addition, this work contributes with the understanding of primordial process regulation on intracellular trafficking of transmembrane proteins.

O Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) é o agente etiológico da Síndrome da Imunodeficiência Adquirida (AIDS). A AIDS é uma doença de distribuição mundial, e estima-se que existam atualmente pelo menos 36,9 milhões de pessoas infectadas com o vírus. Durante o seu ciclo replicativo, o HIV promove diversas alterações na fisiologia da célula hospedeira a fim de promover sua sobrevivência e potencializar a replicação. A rápida progressão da infecção pelo HIV-1 em humanos e em modelos animais está intimamente ligada à função da proteína acessória Nef. Dentre as diversas ações de Nef está a regulação negativa de proteínas importantes na resposta imunológica, como o receptor CD4. Sabe-se que esta ação resulta da indução da degradação de CD4 em lisossomos, mas os mecanismos moleculares envolvidos ainda são totalmente elucidados. Nef forma um complexo tripartite com a cauda citosólica de CD4 e a proteína adaptadora 2 (AP-2), em vesículas revestidas por clatrina nascentes, induzindo a internalização e degradação lisossomal de CD4. Pesquisas anteriores demonstraram que o direcionamento de CD4 aos lisossomos por Nef envolve a entrada do receptor na via dos corpos multivesiculares (MVBs), por um mecanismo atípico, pois, embora não necessite da ubiquitinação de carga, depende da ação de proteínas que compõem os ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) e da ação de Alix, uma proteína acessória da maquinaria ESCRT. Já foi reportado que Nef interage com subunidades dos complexos AP-1, AP-2, AP-3 e Nef não parece interagir com subunidades de AP-4 e AP-5. Entretanto, o papel da interação de Nef com AP-1 e AP-3 na regulação negativa de CD4 ainda não está totalmente elucidado. Ademais, AP-1, AP-2 e AP-3 são potencialmente heterogêneos devido à existência de isoformas múltiplas das subunidades codificadas por diferentes genes. Todavia, existem poucos estudos para demonstrar se as diferentes combinações de isoformas dos APs são formadas e se possuem propriedades funcionais distintas. O presente trabalho procurou identificar e caracterizar fatores celulares envolvidos na regulação do tráfego intracelular de proteínas no processo de regulação negativa de CD4 induzido por Nef. Mais especificamente, este estudo buscou caracterizar a participação do complexo AP-1 na modulação negativa de CD4 por Nef de HIV-1, através do estudo funcional das duas isoformas de ?-adaptina, subunidades de AP-1. Utilizando a técnica de Pull-down demonstramos que Nef é capaz de interagir com ?2. Além disso, nossos dados de Imunoblot indicaram que a proteína ?2-adaptina, e não ?1-adaptina, é necessária no processo de degradação lisossomal de CD4 por Nef e que esta participação é conservada para degradação de CD4 por Nef de diferentes cepas virais. Ademais, por citometria de fluxo, o silenciamento de ?2, e não de ?1, compromete a diminuição dos níveis de CD4 por Nef da membrana plasmática. A análise por imunofluorêsncia indireta também revelou que a diminuição dos níveis de ?2 impede a redistribuição de CD4 por Nef para regiões perinucleares, acarretando no acúmulo de CD4, retirados por Nef da membrana plasmática, em endossomos primários. A depleção de ?1A, outra subunidade de AP-1, acarretou na diminuição dos níveis celulares de ?2 e ?1, bem como, no comprometimento da eficiente degradação de CD4 por Nef. Além disso, foi possível observar que, ao perturbar a maquinaria ESCRT via super-expressão de HRS (uma subunidade do complexo ESCRT-0), ocorreu um acumulo de ?2 em endossomos dilatados contendo HRS-GFP, nos quais também detectou-se CD4 que foi internalizado por Nef. Em conjunto, os resultados indicam que ?2-adaptina é uma importante molécula para o direcionamento de CD4 por Nef para a via ESCRT/MVB, mostrando ser uma proteína relevante no sistema endo-lisossomal. Ademais, os resultados indicaram que as isoformas ?-adaptinas não só possuem funções distintas, mas também parecem compor complexos AP-1 com diferentes funções celulares, já que apenas a variante AP-1 contendo ?2, mas não ?1, participa da regulação negativa de CD4 por Nef. Estes estudos contribuem para o melhor entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos na atividade de Nef, que poderão também ajudar na melhor compreensão da patogênese do HIV e da síndrome relacionada. Em adição, este trabalho contribui para o entendimento de processos fundamentais da regulação do tráfego de proteínas transmembrana no sistema endo-lisossomal. / The Human Immunodeficiency Virus (HIV) is the etiologic agent of Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS). AIDS is a disease which has a global distribution, and it is estimated that there are currently at least 36.9 million people infected with the virus. During the replication cycle, HIV promotes several changes in the physiology of the host cell to promote their survival and enhance replication. The fast progression of HIV-1 in humans and animal models is closely linked to the function of an accessory protein Nef. Among several actions of Nef, one is the most important is the down-regulation of proteins from the immune response, such as the CD4 receptor. It is known that this action causes CD4 degradation in lysosome, but the molecular mechanisms are still incompletely understood. Nef forms a tripartite complex with the cytosolic tail of the CD4 and adapter protein 2 (AP-2) in clathrin-coated vesicles, inducing CD4 internalization and lysosome degradation. Previous research has demonstrated that CD4 target to lysosomes by Nef involves targeting of this receptor to multivesicular bodies (MVBs) pathway by an atypical mechanism because, although not need charging ubiquitination, depends on the proteins from ESCRTs (Endosomal Sorting Complexes Required for Transport) machinery and the action of Alix, an accessory protein ESCRT machinery. It has been reported that Nef interacts with subunits of AP- 1, AP-2, AP-3 complexes and Nef does not appear to interact with AP-4 and AP-5 subunits. However, the role of Nef interaction with AP-1 or AP-3 in CD4 down-regulation is poorly understood. Furthermore, AP-1, AP-2 and AP-3 are potentially heterogeneous due to the existence of multiple subunits isoforms encoded by different genes. However, there are few studies to demonstrate if the different combinations of APs isoforms are form and if they have distinct functional properties. This study aim to identify and characterize cellular factors involved on CD4 down-modulation induced by Nef from HIV-1. More specifically, this study aimed to characterize the involvement of AP-1 complex in the down-regulation of CD4 by Nef HIV-1 through the functional study of the two isoforms of ?-adaptins, AP-1 subunits. By pull-down technique, we showed that Nef is able to interact with ?2. In addition, our data from immunoblots indicated that ?2- adaptin, not ?1-adaptin, is required in Nef-mediated targeting of CD4 to lysosomes and the ?2 participation in this process is conserved by Nef from different viral strains. Furthermore, by flow cytometry assay, ?2 depletion, but not ?1 depletion, compromises the reduction of surface CD4 levels induced by Nef. Immunofluorescence microscopy analysis also revealed that ?2 depletion impairs the redistribution of CD4 by Nef to juxtanuclear region, resulting in CD4 accumulation in primary endosomes. Knockdown of ?1A, another subunit of AP-1, resulted in decreased cellular levels of ?1 and ?2 and, compromising the efficient CD4 degradation by Nef. Moreover, upon artificially stabilizing ESCRT-I in early endosomes, via overexpression of HRS, internalized CD4 accumulates in enlarged HRS-GFP positive endosomes, where co-localize with ?2. Together, the results indicate that ?2-adaptin is a molecule that is essential for CD4 targeting by Nef to ESCRT/MVB pathway, being an important protein in the endo-lysosomal system. Furthermore, the results indicate that ?-adaptins isoforms not only have different functions, but also seem to compose AP-1 complex with distinct cell functions, and only the AP-1 variant comprising ?2, but not ?1, acts in the CD4 down-regulation induced by Nef. These studies contribute to a better understanding on the molecular mechanisms involved in Nef activities, which may also help to improve the understanding of the HIV pathogenesis and the related syndrome. In addition, this work contributes with the understanding of primordial process regulation on intracellular trafficking of transmembrane proteins.