As células-tronco mesenquimais (CTMs) tornaram-se um grande interesse para a ciência por serem capazes de estimular a regeneração tecidual, apresentarem habilidade de se expandir e diferenciar em cultura e, consequentemente, apresentarem diversas possibilidades terapêuticas, bem como para a engenharia de tecidos. Muitos dos tecidos dentários também apresentam nichos de CTMs. O fácil acesso à polpa dos dentes decíduos, em virtude da esfoliação dental, a torna uma fonte muito atraente para a terapêutica e a engenharia de tecidos. Todos os avanços advindos das terapias baseadas em células-tronco tornam a preservação das fontes celulares, por longos períodos de tempo, um assunto de suma importância. Para que isso possa ocorrer, métodos de armazenamento devem ser adotados, tanto para as culturas celulares já estabelecidas, quanto para os tecidos inteiros. Uma das formas mais comuns de manutenção de culturas e de tecidos é a criopreservação em nitrogênio líquido. Contudo, existem poucas evidências no sentido de estabelecer um protocolo eficaz para o congelamento do dente decíduo intacto. Dessa forma, esse trabalho objetivou isolar, cultivar e caracterizar, para parâmetros apresentados para CTMs, as células pulpares após a criopreservação de dentes decíduos intactos por 7 dias. Para isso, vinte e seis dentes decíduos foram alocados em 2 grupos experimentais, sendo: grupo 1, células pulpares de dentes decíduos criopreservados intactos (grupo Crio) e grupo 2, células pulpares de dentes decíduos isoladas imediatamente após a exodontia (grupo fresco - controle). As células pulpares de ambos os grupos foram isoladas, cultivadas, analisadas por citometria de fluxo (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 e HLA-DR), submetidas aos protocolos de diferenciação osteogênica, adipogênica e condrogênica, e aos ensaios de proliferação celular (WST-8). A morfologia celular de ambos os grupos foi avaliada por microscopia confocal. Os resultados demonstraram uma taxa de cultivo de 30% para o grupo Crio e 61% para o grupo Fresco. Não houve diferença estatística entre os grupos para os marcadores de superfície analisados. As células de ambos os grupos foram capazes de se diferenciar em células das 3 linhagens testadas. Para o ensaio de proliferação, não houve diferença estatística entre os grupos ao longo dos tempos testados (p>0,05), embora a média de dias entre o isolamento e a quinta passagem foi menor para o grupo controle (p=0,035). As células do grupo Crio mostraram morfologia alterada. Assim, conclui-se ser possível obter células-tronco da polpa de dentes decíduos congelados pelo protocolo sugerido, sem alterações imunofenotípicas. No entanto, esse protocolo demonstrou baixas taxas de sucesso de isolamento, menor capacidade de diferenciação e de proliferação, além de alteração da morfologia celular. / Mesenchymal stem cells (MSC) became of great value for science for being capable of stimulating tissue regeneration and showing ability to proliferate and differentiate when cultured properly. Dental tissues also present MSC niches as well. Mesenchymal stem cells from the pulp of deciduous teeth are considered an easy access source during a specific period of time in the patients life, when teeth are undergoing exfoliation; therefore, very attractive for cell based therapeutics and tissue engineering. All advances seen in cell based therapies for the last years depend on cell or tissue preservation for long periods of time. Thus, storage methods must be adopted for cultures of cells and whole tissues. The most common technique to preserve cell cultures and tissues is cryopreservation with liquid nitrogen. However, fragile evidence concerns the cryopreservation of intact deciduous teeth. This research aimed to isolate, cultivate and characterize the dental pulp cells of intact cryopreserved deciduous teeth and compare to the dental pulp cells of non-cryopreserved deciduous teeth. Thirteen pairs of deciduous teeth were donated from patients in orthodontic treatment and were randomly allocated in two different groups. The first group was made of cryopreserved intact deciduous teeth (Cryo group), and in second group pulp cells were isolated from fresh teeth (Fresh group). The cells of both groups were isolated, cultivated and characterized for mesenchymal stem cell parameters, and then compared for isolation and proliferation rates, surface markers expression (CD14, CD29, CD34, CD45, CD73, CD90 and HLA-DR), differentiation ability and morphology. The culture rate was 30% for the cryopreserved group and 61% for the fresh. There were no statistical differences between the groups for the surface markers tested. Cells in both groups were capable of differentiating in the 3 mesenchymal lineages. For the proliferation assay, there was no statistical difference between groups throughout the time tested although the mean time between isolation and the fifth passage was lower for the control group (p=0,035). Cells from Cryo group showed altered morphology. The present study showed that Dental Pulp Stem Cells can be obtained from cryopreserved intact deciduous teeth without changes in the immunophenotypical profile, however low success rates for isolation, differentiation ability and morphological alterations were observed.

Bisfosfonatos são fármacos moduladores do metabolismo ósseo, prescritos em diferentes regimes de dose, potência, duração e via, para um amplo espectro de doenças ósseas. Dentre estas, osteoporose, doença de Paget, mieloma múltiplo e metástases esqueléticas. Nos últimos anos, um número crescente de casos de osteonecrose dos maxilares associadas ao consumo destes medicamentos foi reportado. A busca por alterações morfológicas prévia ao aparecimento da doença pode permitir seu diagnóstico precoce. Objetivos: investigar as alterações na anatomia radiográfica periapical em mulheres usuárias de bisfosfonatos orais. Metodologia: radiografias periapicais de caninos inferiores de 32 pacientes usuárias de bisfosfonatos orais foram comparadas às de 16 pacientes não usuárias. A presença do espaço do ligamento periodontal, a identificabilidade da lâmina dura e a densidade óssea foram avaliadas por examinador cego. Resultados: não houve diferenças na densidade do osso alveolar, tampouco na presença de ligamento periodontal ou na identificabilidade da lâmina dura entre os grupos. Conclusões: o uso de bisfosfonatos orais não se mostrou relacionado a alterações da anatomia radiográfica periapical em mulheres após menopausa, na amostra estudada. / The Biphosphonates are prescribed in different doses, duration and route regimens for a varied specter of bone illnesses (e.g. osteoporosis, Paget`s disease, multiple myeloma, bone metastasis), aiming to modulate the osseous metabolism. In the past 11 years a growing number of cases of osteonecrosis related to biphosphonates therapy were reported. The search for morphologic alterations previous to the symptomatic stages of this disease could improve early diagnosis. Objectives: to evaluate radiographic anatomy in women receiving oral biphosphonates. Patients and methods: standard periapical radiographs from 32 postmenopausal women using oral BS were compared to 16 non-users women for the presence of the space of the periodontal ligament, integrity of lamina dura and periapical bone density, by a blind evaluator. Results: there were no differences for the variables measured. Conclusions: oral BS therapy was not related to radiographic periapical anatomy changes for this sample.

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.

Orientadores: Marcio Zaffalon Casati, Sergio de Toledo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T01:28:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_EricaDelPeloso_D.pdf: 610626 bytes, checksum: 77eba31c722b912eac6fdb2cdbc2b89a (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do debridamento periodontal associado ou não à administração sistêmica de metronidazol e amoxicilina no tratamento da periodontite crônica avançada. Foram selecionados 50 pacientes com pelo menos 8 dentes com sangramento à sondagem (SS) e profundidade de sondagem (PS) = 5 mm, sendo 2 dentes com PS = 6 mm e mais 2 com PS = 7 mm. Os pacientes foram divididos, aleatoriamente, em 4 grupos: raspagem e alisamento radicular + placebo (RAR); RAR + metronidazol e amoxicilina (RAR/AB); debridamento periodontal + placebo (DB) e DB + metronidazol e amoxicilina (DB/AB). Os seguintes parâmetros clínicos foram avaliados: índice de placa, índice gengival, SS, posição da margem gengival, PS e nível clínico de inserção relativo (NICr). A avaliação microbiológica foi feita através da reação da polimerase em cadeia (PCR) em tempo real para quantificação de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Aggregatibacter actinomycetemcomitans. O teste imunoenzimático (ELISA) permitiu a detecção dos níveis de PGE2, IL-1ß, IFN-? e IL-10 no fluido gengival. Os parâmetros descritos foram avaliados antes do tratamento, 1, 3 e 6 meses após. Não foi observada diferença estatística entre os grupos quanto ao SS, PMG e NICr (p>0,05). Em relação à redução na PS, esta foi, no 6° mês, inferior no grupo DB quando comparada aos grupos RAR/AB e DB/AB (p<0,05). Não foi detectada diferença estatística entre os grupos na prevalência e quantidade de P. gingivalis, T. forsythia e A. actinomycetemcomitans tanto em bolsas inicialmente moderadas e profundas. Também não foi observada diferença entre os tratamentos quanto aos níveis de PGE2, IL-1ß, IFN-?, IL-10 e na proporção IL-1ß/IL-10. Pode-se concluir, portanto, que o debridamento periodontal é uma abordagem justificável para tratamento da periodontite crônica avançada e que a único benefício da utilização adjunta de metronidazol e amoxicilina parece ser a redução na necessidade de retratamento. / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the effect of periodontal debridement, with or without the systemic administration of metronidazole and amoxicillin, in the treatment of severe chronic periodontitis. Fifty patients presenting at least 8 teeth with probing pocket depth (PPD) = 5 mm and bleeding on probing (BOP), out of which at least 2 teeth had PPD = 7 mm and a further 2 teeth with PPD = 6 mm, were selected. Patients were randomly divided into four groups: scaling and root planning + placebo (SRP); SRP + metronidazole and amoxicillin (SRP/AB); periodontal debridement + placebo (DB) and DB + metronidazole and amoxicillin (DB/AB). The following clinical outcomes were evaluated: visible plaque index, gingival index, BOP, position of the gingival margin (PGM), relative attachment level (RAL) and PPD. The microbiological analysis was done by real-time polymerase chain reaction (PCR) for quantification of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Aggregatibacter actinomycetemcomitans. The enzyme-linked immunosorbent assay technique (ELISA) permitted the detection of PGE2, IL-1ß, IL-10 and IFN-? levels in gingival crevicular fluid. All parameters were evaluated at baseline and 1, 3 and 6 months after periodontal treatment. No difference was observed between groups regarding BOP, PGM and RAL (p>0.05). Six months after treatment, the DB group showed less PPD reduction than SRP/AB and DB/AB groups (p<0.05). The results of realtime PCR failed to demonstrate significant differences between groups in the prevalence and quantity of A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis and T. forsythia. Also, no difference was observed between groups in the levels of PGE2, IL-1ß, IFN-?, IL-10 and on the proportion of IL-1ß/IL-10. It can be concluded that periodontal debridement is a justified approach for the treatment of severe chronic periodontitis and that only benefit of the adjunct use of metronidazole and amoxicillin was the reduction in the need of retreatment. / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Objetivo: O objetivo do presente estudo foi avaliar morfologicamente os tecidos pulpar e periapical de molares de ratos com a polpa vital e expostos ao meio bucal durante o desenvolvimento radicular, além de detectar a localização do STRO-1 e do BMP4 nos mesmos. Métodos: Foram utilizados 24 ratos machos da linhagem Wistar com quatro semanas de idade. A fim de induzir a necrose, foi realizada a exposição pulpar dos primeiros molares inferiores esquerdos em condições não-assépticas e deixando a polpa exposta ao ambiente oral (grupo teste). Os molares inferiores do lado direito não sofreram intervenção e serviram como grupo controle. A eutanásia dos animais foi realizada nos tempos de 7, 10, 13 e 16 semanas de vida (o equivalente a 3, 6, 9 e 12 semanas após a intervenção). Após, as mandíbulas foram dissecadas e processadas para a análise histológica através de Hematoxilina-Eosina e Imunohistoquímica. Foram comparadas, entre os grupos, em cada um dos períodos, a reação inflamatória periapical, as características do tecido pulpar (células inflamatórias, vascularização, odontoblastos, degeneração, destruição tecidual), fechamento do forame e presença de reabsorções. Resultados: Todos os dentes do grupo teste apresentaram necrose pulpar e a interrupção do desenvolvimento radicular. Enquanto isso, os dentes do grupo controle apresentaram o desenvolvimento normal dos tecidos dentários. Quanto à imunohistoquímica, foi constatada a marcação pelo BMP-4 no tecido pulpar dos dentes do grupo controle. Não houve, no entanto, marcação nos dentes do grupo teste. Para o STRO-1, a marcação foi mais evidente na região dos vasos sanguíneos, tanto no grupo controle, quanto no grupo teste. Para nenhum dos anticorpos, foi constatada marcação na região da papila apical. Conclusão: No presente estudo, a técnica imunohistoquímica não foi suficiente para a avaliação da presença de células-tronco na região da papila de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar. É possível que a presença de infecção e a reação inflamatória tenham bloqueado a expressão do STRO-1 e do BMP-4. / Objective: the aim of this study was to characterize the features of live and necrotic dental pulps of molar teeth in rats with developing roots, and to assess the expression of STRO-1 and BMP-4. Methods: twenty-four 4-month-old male Wistar rats were used. To induce necrosis, the pulps of the first lower left molars were exposed to the oral environment. The lower right molars served as the control non-operated group. Euthanasia of animals was carried out at 7, 10, 13 and 16 weeks and the jaws were dissected and processed for histological analysis by hematoxylin-eosin and immunohistochemistry. The periapical inflammatory reaction, the characteristics of the pulp tissue (inflammatory cells, vascularity, odontoblasts, degeneration, tissue destruction), closure of the foramen and presence of resorptions were described at each period. Results: all teeth from the test group presented pulp necrosis, occurring discontinuation of root development. Meanwhile, the teeth of the control group showed normal development of dental tissues. BMP-4-positive cells were detected in the pulp of teeth from the control group. However, there was no expression in teeth of the test group. For STRO-1, expression was more evident in the blood vessels, both for the control group and for the test group. Apical papilla evidenced no BMP-4 nor STRO-1 expression. Conclusion: Immunohistochemistry was not sufficient to evaluate the presence of stem cells in the apical papilla region of nonvital immature teeth. It is possible that the inflammatory process has blocked the expression of STRO-1 and BMP-4., Probably, infection has negatively modulated this expression.

O objetivo deste estudo foi de tentar isolar e cultivar células da polpa de dentes decíduos humanos hígidos com diferentes graus de rizólise e avaliá-las após a expansão in vitro para parâmetros apresentados por células-tronco. Para tanto, o tecido pulpar foi obtido a partir de 30 dentes de crianças de 6 a 12 anos. A exodontia dos dentes foi indicada pelo cirurgião-dentista responsável pelo tratamento da criança. Os responsáveis pelos pacientes assinaram um termo de doação de material biológico aprovado pelo comitê de ética da UFRGS. Do total de dentes, 21 estavam em processo avançado de rizólise (grupo I), sendo que 17 possuíam raiz totalmente reabsorvida e 4 apresentavam cerca de de raiz residual. Os 9 dentes restantes não apresentavam reabsorção visível (grupo II). Todos os dentes extraídos foram imersos em meio de cultura para o transporte ao laboratório. Na capela de fluxo laminar, o tecido pulpar foi removido e incubado com colagenase tipo I e submetido a dissociação mecânica. A suspensão obtida foi semeada em placa de 12 poços e o meio de cultura trocado após 24 horas e após a cada 4 dias até a confluência de 90% ser atingida, quando eram realizadas as passagens. Na quinta e décima passagens, as células foram avaliadas pela citometria de fluxo quanto a seu fenótipo para CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 e HLA-DR e para determinar a presença/ausência da expressão gênica de OCT4, por meio de RT-PCR. Nas mesmas passagens, as células foram submetidas a avaliação do seu crescimento in vitro e foram induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica. O isolamento das células foi considerado com sucesso em 25 amostras nas quais células aderidas foram verificadas após 24h. Apenas 17 destas atingiram confluência de 90%. Não foi possível estabelecer cultura do grupo II (n=9). O estabelecimento das culturas e a capacidade de proliferação foram independentes da quantidade de tecido pulpar remanescente coletado. As células nas quinta e décima passagens foram positivas para CD29, CD44 e CD90 (>95%) e para a expressão gênica de OCT-4. Positividade moderada foi vista para CD117 e CD133 e expressão inferior a 3% para CD34, CD45, HLA-DR, CD184 e STRO-1 em todas as análises. Foi pequena também, a marcação de CD146. O CD146 está relacionado com as células-tronco localizadas nos pericitos, sendo descrito como possível nicho das células-tronco pulpares. Todas as culturas foram capazes de diferenciação nas 3 linhagens celulares citadas. Portanto, as células isoladas eram células-tronco, pois foram aderentes ao plástico, positivas para marcadores característicos de células-tronco mesenquimais e pluripotentes. Considerando os baixos níveis de expressão de CD146, nós podemos sugerir que o nicho perivascular não é o único provedor das células-tronco pulpares. A facilidade de obtenção das células parece estar ligada ao processo de rizólise, visto que as células do tecido pulpar do grupo I apresentaram-se capazes de proliferação in vitro, enquanto que no grupo II esta não foi suficiente para permitir o estabelecimento das culturas. / The aim of this study was to isolate and grow cells from the pulp of human sound deciduous teeth with different levels of resorption, and evaluate stem cell parameters after growing them in vitro. Pulp tissue was removed from 30 different patients, aged from 6 to 12. A free informed term of consent was signed by the patient’s next of kin, approved by UFRGS’s Ethical Committee. From all the teeth, 21 were in advanced levels of resorption (group I): 17 had completely reabsorbed roots and 4 had ⅓ of residual roots. The 9 teeth left did not show any visible re-absorption (group II). The teeth were immersed in culture medium to be transported to the lab. In aseptic conditions, pulp tissue was removed, incubated with type I collagenase and mechanically dissociated. The suspension was seeded onto 12 well plates and the medium was changed every 4 days until the culture reached 90% confluence, when a passage was performed. The phenotype of the cells was analyzed on fifth and tenth passages, by flow cytometry for the following markers: CD29, CD34, CD44, CD45, CD90, CD117, CD133, CD146, CD184, STRO-1 and HLA-DR; and RT-PCR for OCT-4. On the same passages, cells were differentiated into adipocytes, osteoblasts and chondrocytes. Cell isolation was successful in 25 samples, where adherent cells were observed after 24h. Only 17 of these samples reached 90% confluence. It was not possible to establish cell culture from group II teeth (n=9). Cell growth and ability to proliferate in vitro were not dependent on the amount of pulp tissue that was collected. Cells on both fifth and tenth passages were positive for CD29, CD44 and CD90 (>95%) and also for the expression of OCT-4. Moderate labelling was observed for CD117 and CD133, while an expression lower than 3% for CD34, CD45, HLA-DR, CD 184 and STRO-1 was detected. Low amounts of CD146 were found in all analysis. CD146 is related to pericytes stem cells and therefore can be pulp stem cells niche. All cultures were able differentiate into all 3 cell types. According to these findings, the isolated pulp cells can be considered stem cells: they were adherent to plastic, positive for stem cell related markers and pluripotent. Considering the cells expressed low levels of CD146, we can infer that the perivascular niche isn’t the only source of pulpar stem cells. The easiness to obtain cells seems to be related to the root resorption process, because the cells from group I were able to proliferate in vitro, while group II cells were not.

As células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados (SHED) são uma fonte promissora de células-tronco para a terapia regenerativa. Já foi demonstrado que elas podem se diferenciar em células endoteliais, mas os mecanismos envolvidos nesse processo ainda são desconhecidos. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo elucidar os mecanismos moleculares relacionados à diferenciação endotelial dessas células. Para isso, um meio de cultura para células endoteliais (EGM-2MV), suplementado por 50ng/mL rhVEGF, foi utilizado com sucesso como estímulo para as SHED se diferenciarem em células endoteliais em cultura de monocamada. Uma vez que, elas expressaram os marcadores endoteliais VEGFR-2 e CD-31. Além disso, quando as SHED foram expostas ao meio de diferenciação, a fosforilação de STAT-3 (um marcador de células-tronco) foi inibida de acordo com a concentração utilizada, enquanto a fosforilação de ERK e AKT foi estimulada. Quando um inibidor de ERK foi adicionado ao meio, a fosforilação de STAT-3 aumentou. Por outro lado, quando um inibidor de STAT-3 foi adicionado ao meio de cultura, a fosforilação de ERK aumentou. A inibição de ERK também impediu a diferenciação endotelial. Para confirmar esse resultado, shRNA MEK-1 SHED também falharam em expressar VEGFR-2 quando estimuladas. Além disso, scaffolds de fatias dentais foram semeadas com shRNA VEGFR-1 SHED ou shRNA controle e implantadas no subcutâneo de camundongos imunodeficientes. Após recuperados, um tecido muito semelhante à polpa dental foi formado no interior das fatias. No entanto, havia menos células CD-31 positivas nos vasos sanguíneos dos implantes semeados com VEGFR-1 shRNA SHED, sugerindo um papel do VEGFR-1 na formação de vasos sanguíneos. Em conclusão, o VEGFR-1 e a via de sinalização de ERK estão envolvidos no processo de diferenciação das SHED em células endoteliais. / Stem Cells from Exfoliated Deciduous Teeth (SHED) are a promising source of stem cells for regenerative therapy. It was already shown they can differentiate into endothelial cells, but the mechanisms involved in this process remain unclear. Therefore, the following study aimed to elucidate the molecular mechanisms related to endothelial differentiation of SHED. For this purpose, a culture media for endothelial cells (EGM-2MV), supplemented with 50ng/ml rhVEGF, was successfully used as stimuli for SHED to undergo endothelial differentiation in monolayer culture, as they expressed the endothelial markers VEGFR-2 and CD- 31. Moreover, when SHED were exposed to the differentiation medium, STAT-3 phosphorilation (a stemness marker) was inhibited while the ERK and AKT phosphorilation was stimulated. When an ERK inhibitor was added to the medium, the STAT-3 phosphorilation increased in a dependent concentration manner. On the other hand, when a STAT-3 inhibitor was added the ERK phosphorilation increased. The ERK inhibition also arrested endothelial differentiation. To confirm this results, shRNA MEK-1 SHED also failed to express VEGFR-2 when stimulated. Additionally, tooth slice scaffolds were seeded with shRNA VEGFR-1 SHED or shRNA control SHED and implanted, subcutaneously, into immunodeficient mice. After retrieved, a dental pulp-like tissue had been formed inside the tooth slice. However, there were fewer CD-31 positive blood vessels in the shRNA VEGFR-1 implants suggesting a role of VEGFR-1 in the formation of blood vessels by SHED. In conclusion, the VEGFR-1 and ERK pathway are involved in the process of differentiation of SHED into endothelial cells.

O desvio apical é um fator bastante relevante na terapia endodôntica pela possibilidade de conduzir o tratamento proposto ao insucesso. Este estudo se propôs a realizar uma avaliação in vitro da ocorrência de desvio apical e sua magnitude nas instrumentações manual com limas de aço-inoxidável, rotatória de giro contínuo com o sistema K3 e rotatória de giro alternado com contra-ângulo NSK e limas de aço-inoxidável, em raízes mésio-vestibulares de molares superiores. A amostra foi formada por 60 raízes que, após a inclusão numa modificação da mufla de Bramante, foram seccionadas longitudinalmente. De acordo com o ângulo e raio da curvatura do seu canal, as raízes foram paritariamente divididas em três grupos. Uma das metades de cada raiz teve sua face interna digitalizada por scanner de mesa. As raízes foram remontadas nas muflas e seus canais instrumentados. A mesma metade de cada raiz teve sua face interna novamente digitalizada em três momentos distintos: primeiro, na confecção do preparo apical com a lima 30, após com a lima 35 e, por fim, com a lima 40. Cada imagem pós operatória (limas 30, 35 e 40) foi sobreposta à imagem pré-opertória no programa Adobe Photoshop. Após, foram transferidas ao programa AutoCad, onde o desvio apical foi mensurado. Para a comparação entre as limas dos três grupos foram utilizados os testes nãoparamétricos de Friedman e Wilcoxon que encontraram diferença significativa. (p=0,000) Para a comparação entre os três grupos foi utilizado o teste não-paramétrico Kruskal-Wallis (p=0,000) que demonstrou haver diferença significativa entre os grupos estudados. / Apical transportation has considerable relevance in endodontic therapy, as it may lead to treatment failure. This study conducted an in vitro comparative analysis of apical transportation produced in mesiobuccal roots of upper molars by (i) manual instrumentation using stainless steel files, (ii) K3 rotary Ni-Ti system, and (iii) a reciprocating NSK handpiece, also with stainless steel files. The sample comprised 60 roots that were inserted in a Bramante muffle and then longitudinally sectioned. Roots were subdivided pair-wise into three groups according to canal angle and radius. The inner surface of one root half was digitized using a scanner. Roots were then reassembled onto the muffles and had their canals instrumented. The same root half had its inner surface digitized again after instrumentation with three different file sizes: 30, 35 and 40. Each image obtained therefrom was superimposed over the pre-operative image using the Adobe Photoshop software. After, images were transferred to the AutoCad software for apical transportation measurements. The non-parametric Friedman and Wilcoxon tests were adopted to compare results for the three different file sizes, and showed the statistically significant differences between the results obtained (p=0,000). Similarly, the comparison between the three treatment groups by the nonparametric Kruskal-Wallis test revealed statistically significant differences.

Observar há relação entre o CPO-D e a dependência ao açúcar extrínseco não láctico (AENL) na faixa etária de 15 a 19 anos em escolares da rede pública estadual do ensino médio do município de Porto Alegre. Metodologia: Este estudo é observacional do tipo analítico transversal, realizado no município de Porto Alegre; cuja amostra incluiu 400 escolares de ambos os sexos de nove escolas sorteadas da rede pública estadual com faixa etária entre 15 e 19 anos. Para a coleta dos dados foram utilizados ficha de levantamento epidemiológico para o CPO-D, baseada na do Projeto Saúde Bucal Brasil (2004) e aplicação do questionário de abuso e dependência de AENL (ROSA, 2005). Resultados: O CPO-D médio da amostra foi de 0,90; sendo no sexo feminino (0,98) ligeiramente maior que no masculino (0,79). A relação entre CPOD dos dependentes (0,94) e dos não dependentes (0,88) não se mostrou estatisticamente significativa (p=0,794).No que tange a variável dependência 34% responderam positivamente ao questionário; sendo que o sexo feminino (42,5) apresentou maior dependência que o masculino (22,7%), tendo assim uma diferença estatística significativa (p<0,001). Conclusões: A relação entre dependência de AENL e o CPO-D não foi significativa, contudo existem fatores de proteção, como flúor, acesso a serviço odontológico, fator econômico e outros que podem ter interferido no resultado. / To observe the relation between the DMF-T index and the dependency to non lactic extrinsic sugars (NLES) in teenagers from 15-19 years of age belonging to state public schools in the city of Porto Alegre. Methodology: This study is observational analytical cross, held in the city of Porto Alegre, whose sample included 400 male and female students from nine schools drawn from the public network with state age group between 15 and 19 years. For data collection were used sheet of epidemiological survey for the DMF-T, based on the Project's Oral Health Brazil (2004) and implementation of the questionnaire of abuse and dependence on NLES (ROSA, 2005).Results: The mean DMF-T was 0.90; being the sex feminine (0.98) slightly higher than the masculine (0.79). The relation between the DMF-T of the dependents (0.94) and from the non-dependents (0.88) was not statistically significant (p=0,794). In relation to the variable dependency, 34% answered positively the questionnaire; the feminine group (42, 5%) presented a higher dependancy than the male group (22, 7%), and this difference was statistically significant (p<0,001). Conclusions: The relation between dependancy of NLES and DMF-T was not statistically significant; nevertheless there are factors of caries protection, as fluoride, access to dental service, economical factors and others that can interfere in this result.

Exames radiográficos para fins de saúde constituem a principal fonte de exposição da população à radiação ionizante artificial, devendo empregar a dose mínima necessária para que se obtenha imagem de qualidade. Colimadores retangulares têm sido propostos em substituição aos circulares para reduzir a exposição de órgãos críticos. Este estudo teve por objetivo verificar se existe diferença na dose de radiação nas regiões de cristalino e tireóide durante a realização de um exame periapical completo, em função da forma e do tamanho do colimador utilizado. Trinta pacientes foram aleatoriamente distribuídos em três grupos: 1 - colimador circular convencional com 60 mm de diâmetro; 2 - colimador retangular com 24 x 32 mm² e 3 - colimador retangular com 30 x 40 mm2. As condições de exame foram padronizadas para os três grupos. A dose foi obtida por meio de dosímetros termoluminescentes de LiF:Mg.Cu.P (TLD-100H), que permaneceram, durante a execução das 14 radiografias do exame completo periapical, posicionados sobre os olhos (cristalino) direito e esquerdo e sobre a região da tireóide, abaixo do protetor plumbífero. Os resultados finais foram submetidos aos testes não-paramétricos de Kruskal-Wallis e Friedman, ambos complementados por seus testes de comparações múltiplas, ao nível de significância de 5%. No grupo 2 houve redução significativa na dose de radiação absorvida na região dos olhos em relação aos grupos 1 e 3. Os grupos 2 e 3 apresentaram redução significativa na dose de radiação absorvida na tireóide em relação ao grupo 1. Nos três grupos, a dose absorvida na região dos olhos é significativamente maior do que a dose absorvida pela tireóide. O uso do colimador retangular reduziu significativamente a dose absorvida na tireóide. / X rays examinations are the main source of population's exposure to artificial ionizing radiation. Radiation dose in such examinations should be as low as possible but still ensuring a good image quality. Rectangular collimators have been proposed in substitution to the circular ones in order to minimize the radiation exposure to nearby critical organs. This study aims to compare the radiation doses in the lens of the eyes (right and left) and thyroid gland obtained using different collimators, in a complete periapical examination (14 radiographic exposures). Thirty patients have been randomly allocated to three groups: 1 - using a 60 mm diameter conventional circular collimator; 2 - using a 24 x 32 mm² rectangular collimator; and 3 - using a 30 x 40 mm2 rectangular collimator. The doses were measured by LiF:Mg,Cu,P thermoluminescent dosimeters (TLD-100H) positioned over both right and left eyes and under the lead thyroid protector shield, in the thyroid gland position. Final results were submitted to Kruskal-Wallis and Friedman non-parametric statistics analysis, complemented by multiple comparison tests, with 5% significance level. Group 2 presented a significant dose reduction in the eyes region compared to groups 1 and 3. Groups 2 and 3 showed a significant dose reduction in the thyroid gland region compared to group1.