A review of literature related to community-acquired Clostridium difficile- associated disease (CA-CDAD) was conducted. Information was collected from Cumulative Index to Nursing and Allied Health (CINAHL) and MEDLINE-EBSCOhost databases. Clinical practice recommendations were obtained from the CDC. Studies were examined for epidemiology of infection due to C. difficile in the community and interventions to reduce transmission. Findings demonstrated a mirroring of to CA-CDAD to community-acquired Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Multiple studies found underlying gastrointestinal disorders and use of cephalosporin antibiotics to be a risk factor. Another identified risk factor was use of gastric acid suppressive drugs. Also, no particular C. difficile strain was more likely to cause recurrence. Many positive cases for CA-CDAD lacked traditional risk factors such as recent antibiotic exposure. To reduce transmission of community-acquired MRSA the CDC recommends MRSA should be considered in the differential diagnosis of soft skin tissue infections. Clinicians should also collect specimens for culture and antimicrobial susceptibility testing from all patients with abscesses. The CDC recommends clinicians should teach their patients to limit transmission and ask about similar cases in household members and close contacts. Therefore, to reduce transmission of CA-COAD, Clostridium difficile- associated disease should be considered in the differential diagnosis of diarrhea. Clinicians should collect specimens for culture based on patient history & current clinical presentation for patients with diarrhea. It is important that patients be taught the proper hygiene and cleaning protocols to reduce transmission

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Clostridium difficile est une bactérie Gram positive anaérobique responsable de plusieurs perturbations intestinales suite à la prise d’antibiotiques et est également reconnue comme une cause majeure de la colite pseudomembraneuse. La pathogenèse des infections à C. difficile est principalement associée aux toxines A et B, qui ont été largement étudiées dans les dernières années. Cependant, plusieurs autres aspects de la virulence de ce pathogène sont encore bien mal compris. Un bon nombre de protéines font partie de l’arsenal de facteurs de virulence qui jouent un rôle au niveau de l’adhésion de la bactérie ou qui dégradent certaines composantes de la paroi intestinale afin de permettre à la bactérie de coloniser son hôte. La régulation de l’expression de telles protéines nous permettrait d’en connaître davantage sur la colonisation de l’hôte par C. difficile. Chez plusieurs espèces bactériennes, le 3’5’ diguanosine monophosphate cyclique (c-di-GMP) est un second messager important qui régule plusieurs phénotypes. La formation de biofilm ainsi que la régulation de la transition de cellules motiles à un mode de persistance sont parmi les fonctions connues du c-di-GMP. Toutefois, la diversité des processus physiologiques bactériens régulés par le c-di-GMP reste encore pour la plupart peu expliquée chez les bactéries à Gram positif. Chez certaines bactéries, le c-di-GMP est impliqué dans le contrôle de la régulation de l’expression de gènes, via la liaison à des récepteurs à ARN, les riborégulateurs. Les riborégulateurs sont des séquences d’ARN non codants localisés dans la partie 5’UTR d’un ARNm et régulant l’expression de gènes par la liaison d’un ligand à son aptamère comme le c-di-GMP. Cette étude s’intéresse à la régulation et à la fonction des gènes CD2831 et CD2830 qui sont regroupés en un seul locus. L’expression de ces gènes est contrôlée par les niveaux de c-di-GMP intracellulaire via deux riborégulateurs en amont de ces gènes. Chez C. difficile, deux classes de riborégulateurs à c-di-GMP, de fonction similaire, mais qui diffèrent structurellement, ont été rapportées; c-di-GMP-I et c-di-GMP-II. L’expression relative du gène CD2830 en aval du riborégulateur à c-di-GMP de type I diminue de 23 à 29 fois lorsque le niveau de c-di-GMP intracellulaire augmente, tandis que pour les mêmes conditions, le gène CD2831 en aval du riborégulateur à c-di-GMP II était de 72 à 96 fois plus exprimé. Des essais β-galactosidase avec des fusions des riborégulateurs et lacZ, ont démontrés que l’expression des gènes CD2830 et CD2831 semble être contrôlée de façon opposée par leurs riborégulateurs transcriptionnels respectifs, selon les concentrations de c-di-GMP intracellulaire. La protéine CD2830 a été décrite comme une métalloprotéase zinc-dépendante ayant une activité sur la fibronectine, le fibrinogène de plasma humain et la protéine CD2831, qui code pour une adhésine putative. La fonction de cette dernière protéine reste encore mal connue. Cette étude n’a pas permis de démontrer que les protéines CD2830 et CD2831 jouent un rôle dans l’agrégation ou dans l’adhésion à la fibronectine et au fibrinogène lorsque la concentration de c-di-GMP intracellulaire varie. Cette étude suggère que chez C. difficile, la zinc-métalloprotéase CD2830 est impliquée dans un mécanisme de clivage de protéines d’adhésion, comme décrit chez plusieurs pathogènes, afin de contrôler l’adhésion cellulaire lors de processus biologique important. Ce mécanisme serait régulé par le c-di-GMP.

La procédure de sevrage ventilatoire vise à réduire la durée de la ventilation mécanique (VM) et de minimiser les risques de complications. Il est donc important d’identifier les stratégies de sevrage ventilatoire (SV) qui aident le patient à récupérer, dans les plus brefs délais possibles, son autonomie respiratoire et se séparer de la VM. Le mode NAVA présente des avantages potentiels pouvant aider à améliorer la qualité et la vitesse du sevrage. Ce projet est une étude clinique randomisée menée en parallèle de phase pilote qui vérifie si le NAVA pourrait permettre au patient une bonne tolérance au sevrage ventilatoire (TSV) et réduire la durée de sevrage (DSV) en le comparant avec la stratégie classique qui se base sur le mode de ventilation spontanée avec aide inspiratoire (VSAI). Un nombre de 8 patients classés dans la catégorie de «sevrage difficile» sont inclus dans cette étude. Ils sont répartis en deux groupes. Le groupe A est sevré en mode conventionnel VSAI tandis que le groupe B est sevré avec le mode NAVA. Un sevrage ventilatoire réussi et bien toléré fini par séparer le patient de son ventilateur dans les plus brefs délais et avec une récupération soutenue de la respiration spontanée. Les principaux résultats de cette étude affichent une DSV de 2,48 jours chez le groupe sevré en NAVA versus 4,96 jours chez le groupe sevré en VSAI. Cette différence, est statistiquement non significative à cause du petit nombre de sujets inclus. Pour mesurer la TSV, les tendances des paramètres hémodynamiques et oxygénatoires ont été enregistrées. La charge du travail respiratoire a été évaluée en observant les tendances de P0.1 qui est inférieur à 4 cmH[indice inférieur 2]O chez les patients NAVA, l'indice f/Vt qui a la tendance d’augmenter à la fin de sevrage chez les patients VSAI et l'Eadi qui reste normale chez les patients NAVA. Nous avons conclu que les patients en sevrage difficile pourraient être sevrés avec le mode NAVA. Toutefois, aucune différence statistiquement significative notée lorsque le mode NAVA est comparé avec le mode conventionnel VSAI quant à la durée de sevrage et au degré de la tolérance.

Contexte : Dans la foulée d'une éclosion multicentrique de cas de diarrhée associée au Clostridium difficile (DACD) au Québec, la surveillance s'est accrue, mais les facteurs de risque de cette maladie sont encore mal connus. Les données provenant de la littérature sont en effet multiples et parfois contradictoires. L'objectif de cette étude est de départager l'importance relative des facteurs de risque dans la survenue de la DACD. Méthodologie. Il s'agit d'une étude cas-témoins rétrospective avec revue des dossiers des cas de DACD identifiés à l'Hôpital Charles LeMoyne en 2004 ainsi que de témoins appariés selon la période administrative, le service médical et la durée de séjour. Pour, être éligibles, les témoins devaient avoir reçu au moins un antibiotique. Les facteurs de risque recueillis incluaient les caractéristiques du patient, la médication et les interventions médico-chirurgicales. Les analyses statistiques ont été effectuées par régression logistique conditionnelle. Résultats. Parmi les 189 cas et les 378 témoins appariés, l'âge médian est de 70 ans et la durée de séjour moyenne est de 21 jours. Dans les analyses univariées, la DACD est significativement associée aux quinolones, à la céfoxitine, à la céfépime, à la vancomycine intraveineuse, au nombre total d'antibiotiques reçus et à la durée totale de l'antibiothérapie. La chimiothérapie, la malnutrition, la neutropénie, l'insuffisance rénale sévère et l'alimentation entérale montrent également une association significative avec la DACD. Dans une première analyse multivariée excluant le nombre d'antibiotiques et la durée de l'antibiothérapie, l'alimentation entérale (RC = 2,4; IC 95 % = 1,2-4,8), la céfoxitine (RC = 2,7; IC 95% = 1,4-5,3), la chimiothérapie (RC = 2,6; IC 95% = 1,5-4,6), la vancomycine intraveineuse (RC = 2,3; IC 95% = 1,3-4,0) et les quinolones (RC = 2,2; IC 95% = 1,5-3,3) sont associées à un risque accru de DACD. Dans une seconde analyse incluant le nombre d'antibiotiques et la durée de l'antibiothérapie, ces dernières variables sont associées à la DACD (RC = 1,3; IC 95% =1,1-1,5 pour chaque antibiotique additionnel et RC = 1,03; IC 95% = 1,001-1,06 pour chaque jour additionnel de traitement). La chimiothérapie (RC = 2,8; IC 95% = 1,6-4,9), l'alimentation entérale (RC = 2,2; IC 95% = 1,1-4,6), la céfoxitine (RC = 2,3; IC 95% = 1,1-4,6) et les quinolones (RC = 1,6; IC 95% = 1,1-2,4) demeurent également significatives dans ce deuxième modèle. Les aminoglycosides se révèlent protecteurs dans les deux modèles (RC = 0,6; IC 95% = 0,3-0,98 et RC = 0,4; IC 95% = 0,2-0,7). Conclusion. Notre étude soulève l'importance de considérer le nombre total d'antibiotiques et la durée totale de l'antibiothérapie lorsque l'on s'intéresse aux facteurs de risque de la DACD.

Clostridium difficile, un bacille à Gram positif anaérobie strict qui forme des spores, est un pathogène opportuniste responsable de simples diarrhées ou de colites pseudomembraneuses qui peuvent provoquer la mort. Le traitement de base réside en l'arrêt des antibiotiques qui ont détruit la flore de l'hôte et provoqué les symptômes, ou en la prescription de vancomycine et/ou de métronidazole. Malheureusement, l'efficacité de ces antibiotiques est variable et le nombre de rechutes est élevé. En outre, de plus en plus de souches deviennent résistantes aux antibiotiques. C'est pour cette raison qu'un besoin d'alternatives thérapeutiques s'est fait ressentir. Une des approches prometteuses est l'utilisation des endolysines, qui sont des enzymes hydrolytiques encodées par les bactériophages et qui se sont déjà révélées être efficaces contre plusieurs bactéries à Gram positif. Dans cette étude, nous avons démontré l'activité lytique d'endolysines encodées par des phages de Clostridium difficile sur des cellules vivantes. Différentes endolysines ont été clonées dans E. coli, exprimées et purifiées, puis leur activité a été vérifiée de plusieurs manières. Certains facteurs biochimiques propres à ces enzymes ont été étudiés, tels que les cofacteurs nécessaires pour une meilleure activité lytique, le pH optimal et le spectre d'efficacité sur différentes souches bactériennes. Finalement, l'étude de ces enzymes comme outil de diagnostic ou de biologie moléculaire est abordée. Les résultats de nos travaux indiquent que les endolysines PlyCD52 et PlyCD38-2 de C. difficile possèdent une faible activité lytique. L'activité des endolysines n'est pas influencée par les cofacteurs Tween 0,5%, Triton 0,1%, MgCl[indice inférieur 2] contrairement à l'EDTA qui inhibe celle-ci. Le pH optimum semble être compris entre 7 et 8,5 et ces enzymes agissent sur différentes souches de C. difficile à l'exception de la souche CD630. Malgré ces résultats encourageants, des travaux supplémentaires seront nécessaires afin de stabiliser les enzymes qui ont une forte tendance à précipiter et d'obtenir une meilleure activité.

Clostridium difficile est la principale cause de diarrhées nosocomiales liées à la prise d'antibiotiques. La souche hypervirulente NAP1/027 est apparue récemment et a causé de nombreuses épidémies en Amérique du Nord et en Europe. On considère généralement que cette souche produit plus de toxines, sporule davantage, provoque des infections plus sévères menant à des complications et est souvent associée aux cas de récurrence. Toutefois, des études récentes ont montré des données contradictoires à ce sujet. L'objectif de mes travaux de recherche est donc de déterminer si l'issue clinique des infections à C. difficile (ICD) peut être prédite en fonction du génotype et de certains phénotypes bactériens associés à la virulence, comme la production de toxines et la sporulation. Pour ce faire, 21 isolats cliniques associés à des ICD de sévérité différente (légère à modérée, sévère, compliquée) ont été caractérisés par des méthodes de typage courantes, incluant le ribotypage par PCR, le typage des répétitions en tandem, l'analyse de loci multiples de répétitions en tandem polymorphe, la détection des toxines A, B et CDT, ainsi que le séquençage du gène tcdC. Les taux de sporulation et la production des toxines A et B ont aussi été évalués in vitro, de même que la résistance des isolats à certains antibiotiques. La mobilité, la sensibilité des isolats à certains bactériophages et leur contenu en prophages ont aussi été étudiés. Les résultats de mes travaux démontrent que les méthodes de typage utilisées ne permettent pas de prévoir avec certitude le phénotype bactérien ni de prédire la sévérité des ICD. En effet, les souches NAP1/027 peuvent autant provoquer des ICD non-sévères que mener à des complications. Le phénotype n'est pas non plus nécessairement un indice de la sévérité. Les souches NAP1/027 produisent généralement plus de toxines, mais ne possèdent pas forcément la capacité de sporulation qu'on leur attribue généralement. Par conséquent, les généralisations à propos des souches NAP1/027 devraient être évitées.

BACKGROUND:Clostridium difficile is an important cause of intestinal infections in some animal species and animals might be a reservoir for community associated human infections. Here we describe a collection of animal associated C. difficile strains from 12 countries based on inclusion criteria of one strain (PCR ribotype) per animal species per laboratory.RESULTS:Altogether 112 isolates were collected and distributed into 38 PCR ribotypes with agarose based approach and 50 PCR ribotypes with sequencer based approach. Four PCR ribotypes were most prevalent in terms of number of isolates as well as in terms of number of different host species: 078 (14.3% of isolates / 4 hosts), 014/020 (11.6% / 8 hosts) / 002 (5.4% / 4 hosts) and 012 (5.4% / 5 hosts). Two animal hosts were best represented / cattle with 31 isolates (20 PCR ribotypes / 7 countries) and pigs with 31 isolates (16 PCR ribotypes / 10 countries).CONCLUSIONS:This results show that although PCR ribotype 078 is often reported as the major animal C. difficile type, especially in pigs, the variability of strains in pigs and other animal hosts is substantial. Most common human PCR ribotypes (014/020 and 002) are also among most prevalent animal associated C. difficile strains worldwide. The widespread dissemination of toxigenic C. difficile and the considerable overlap in strain distribution between species furthers concerns about interspecies, including zoonotic, transmission of this critically important pathogen.

Chez une bactérie, la régulation de l’expression génétique est essentielle afin de maintenir l’équilibre, s’assurer du bon fonctionnement des processus cellulaires et mieux s’adapter aux changements environnementaux. Elle peut s’effectuer à plusieurs niveaux (la transcription, la traduction et la synthèse ou la dégradation des protéines), et par le bais de différents mécanismes, dont les protéines, font le plus grand part de cette régulation. Cependant, au début des années 2000, une découverte fascinante a mis en évidence un nouveau mécanisme de régulation dont l’ARN est l’acteur principal. Ce sont les riborégulateurs (riboswitches). Ces derniers sont localisés dans la partie non traduite de certains ARNmessagers (ARNm) et capable de lier un ligand spécifique sans l’intervention des protéines, afin de réguler l’expression génique du gène d’intérêt. Aujourd’hui, plusieurs familles de riborégulateurs sont caractérisées, entre autres les riborégulateurs c-di-GMP. Ces derniers sont présents chez plusieurs espèces bactériennes notamment les bactéries pathogènes telles que Clostridium difficile, une bactérie nosocomiale opportuniste qui a causé des problèmes majeurs durant les dernières années, vu sa multirésistance aux antibiotiques. Le séquençage de son génome a révélé la présence de 66 riborégulateurs dont 16 sont des riborégulateurs c-di-GMP. Il a été proposé que parmi ces derniers, certains régulent l’expression des gènes impliqués dans deux phénotypes essentiels chez C. difficile : la motilité et la formation du biofilm. La présente étude porte sur la caractérisation structurale et fonctionnelle de deux riborégulateurs c-di-GMP chez le C. difficile, le Cdi1-1 et Cdi1-12, qui se trouvent en amont du gène CD1990 et le gène CD2830 (ZmpI) respectivement. Au début, nous avons prédit les deux structures liées (en présence du ligand) et non liées (en absence du ligand). Nous avons ainsi démontré qu’un des deux riborégulateurs (Cdi1-12) est fonctionnel et capable de lier le c-di-GMP in vitro. Ensuite, nous avons caractérisé les changements structuraux potentiels lors de l’interaction riborégulateur Cdi1-12/ligand. Nous avons également caractérisé le mécanisme de régulation en cis du riborégulateur Cdi1-12 in vitro et nous avons constaté que c’est un riborégulateur transcriptionnel Rho-indépendant. À la fin de notre étude, nous avons confirmé le mode de régulation de ce riborégulateur in vivo dans la bactérie modèle Bacillus subtilis.

The number of cases of Clostridium difficile infection (CDI) has been increasing globally. CDI is the main cause of nosocomial diarrhoea, which may be life-threatening in complicated cases, and also costs the health care societies millions of pounds annually. The predominant types and their resistance to antibiotics have been changing and one of the major selective pressures which causes this is antimicrobial use. Although much is known about the role of the toxins in pathogenesis of CDI, the role of immunogenic cell wall components is unclear. They may play a role in colonisation and pathology and a study of these could clarify the infection process. It is therefore important to study the immune responses against these bacterial wall components from different strains and their effects on stimulation of leukocytes to produce cytokines and chemokines. This study was divided into four parts: 1. An epidemiological study to determine frequencies of the predominant types of C. difficile, thus 140 C. difficile isolates from surgical patients and their environment during 2009 were investigated to define their PCR ribotype. This utilised capillary sequencing gel electrophoresis for their analysis. 2. The determination of antimicrobial susceptibility to six antibiotics (ampicillin, erythromycin, tetracycline, metronidazole, moxifloxacin and vancomycin) was assessed and MIC determination by agar dilutions. 3. Investigation of host immunity to molecules with conserved molecular patterns. Surface-layer proteins (SLPs), lipocarbohydrate (LC) and flagellar proteins were separated and purified from five ribotypes of C. difficile (001, 002, 027, 078 and106) predominant in Scotland. a) The immune responses to these molecules were assessed by ELISA by exposing serum of patients and healthy donors and measuring specific IgG levels. b) Innate immunity was investigated by distinguishing responses of a macrophage cell line (THP1) to the above molecules. Induction of interleukins (IL)-1β, IL-6, IL- 8, IL-10 and IL-12 interleukins and TNF-α was detected by ELISA. In this study 15 different ribotypes were identified. The most frequent were 001, 020, 106 ribotypes (52.8%, 7.4% and 5.7%), respectively, while 13 isolates could not be assigned a ribotype. However, all isolates were sensitive to vancomycin, metronidazole and moxifloxacin, but 74.28% of isolates were resistant to erythromycin. The IgG level against bacterial antigens (SLPs, LC and flagella proteins) in donors’ serum showed almost normal distribution to all antigens from the different ribotypes and the sensitivity of the assays was increased by raising the concentration of antigens. Levels to SLPs were generally the highest, but the flagellar protein exceeded the SLPs of the 027 ribotype. The donors, controls, patients and carrier sera gave similar results. The greatest induction of interleukins was obtained using 50μg of antigen with the THP-1 cells activated with 50ng of PMA. The highest induction of all antigens was for IL-10. The highest values for the control LPS was with IL-12. But the best effect for SLPs of 027 was for IL-10 (109.1ng/ml), while the weakest for TNF for SLPs of 027 (4.7ng/ml). In general the IL-1β, IL-6, IL-8 and TNF concentrations ranged from 4.7-60ng/ml for all antigens and in contrast IL-12 and IL-10 average ranged 11- 109.1ng/ml. To conclude, the prevalence of C. difficile and their antibiotic susceptibility are constantly changing. IgG antibodies to SLPs and flagellar proteins from the hypervirulent ribotype 027 were highest in the community and hospitalized individuals. The molecules of conserved molecular patterns are immunogenic with various levels of response in the monocytic THP1 cells. SLPs were best in inducing interleukins. Flagellar proteins from 027 ribotypes accompanied SLPs in IL-10 induction levels. Consequently SLPs and flagellar proteins from 027 ribotypes appeared the best immunogenic bacterial molecules.