A papaína é uma enzima utilizada em formulações tópicas como agente proteolítico debridante, no tratamento de lesões abertas de grande extensão e queimaduras. Também empregada como agente promotor da permeação cutânea, peeling químico e como agente depilatório progressivo. A estabilidade de formulações contendo enzimas não é facilmente alcançada. No presente trabalho realizou-se a modificação da papaína com polietilenoglicol, visando maior estabilidade. O Teste de Estabilidade Normal de formulações cosméticas incorporadas de papaína não modificada e modificada apresentou um perfil diferenciado para a atividade da enzima modificada, nas diferentes condições de temperatura (5 ± 1 °C; 22 ± 2 °C, 40 ± 2 °C), sendo que a mais adequada para a papaína não modificada foi de 5 ± 1 °C e para a modificada foi de 22 ± 2,0 °C. Estes resultados confirmam o aumento da estabilidade da papaína modificada e o seu potencial de aplicação em formulações de uso tópico. / Papain is an enzyme used in formulations for local application as proteolitic debridant agent, treatment of wound exposed in large extension and burns. It is also applied as promotor agent of cutaneous permeation, chemical peeling and as progressive depilatory agent. The stability of formulations with enzymes is not easily obtained. In this work modification of papain with polyethylenglycol was made in order to obtain more stability. The Test of Normal Stability of cosmetic formulations incorporated with papain not-modified and modified, showed a differentiated profile for modified enzyme in different conditions of temperature (5 ± 1 °C; 22 ± 2 °C, 40 ± 2 °C), being that, the most adequated for papain not-modified was 5 ± 1°C and for modified was 22 ± 2,0 °C. These results confirm the increase of stability of papain modified and its potential application in formulations for local application.

A linezolida é um antibiótico oxazolidinona efetivo contra bactérias patogênicas gram-positivas, incluindo Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), Staphylococcus aureus resistente a glicopeptídeos (GISA) e enterococci resistente a vancomicina (VRE). As oxazolidinonas inibem a translação bacteriana na fase de iniciação da síntese de proteínas, enquanto que a síntese de RNA e DNA não são afetadas. Diversos métodos por cromatografia líquida de alta-eficiência (HPLC) têm sido relatados para a determinação da concentração de linezolida em plasma humano, soro e urina. Entretanto, um número pequeno de métodos estão disponíveis para a determinação de linezolida em formulações farmacêuticas. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar métodos espectrofotométrico, de cromatografia líquida de ultraeficiência em fase reversa (RP-UPLC), doseamento microbiológico em placas e doseamento microbiológico rápido em microplacas com leitura cinética para a determinação de linezolida em soluções injetáveis e comprimidos. Adicionalmente, foram identificadas e quantificadas as principais fontes de incerteza relacionadas aos métodos. O desenvolvimento dos métodos utilizou uma abordagem racional, empregando-se planejamento de experimentos (análise fatorial e metodologia de superfície resposta) para otimização das condições analíticas. As fontes de incertezas foram identificadas empregando-se diagrama de Ishikawa e quantificadas conforme procedimento da Eurachem/Citac. Os métodos desenvolvidos apresentaram especificidade/seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez adequadas, conforme os critérios estabelecidos pelo ICH e ANVISA. A análise estatística demonstrou equivalência entre os resultados providos por cada um dos métodos, sendo intercambiáveis entre si. Portanto, os métodos podem ser empregados no controle de qualidade de rotina na indústria farmacêutica. / Linezolid is an oxazolidinone antibiotic effective against gram-positive pathogenic bacteria, including methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), glycopeptide-intermediate Staphylococcus aureus (GISA) and vancomycin-resistant enterococci (VRE). Oxazolidinones inhibit bacterial translation at the initiation phase of protein synthesis, while RNA and DNA synthesis are not affected. Several high performance liquid chromatographic (HPLC) methods have been reported to determine the concentration of linezolid in human plasma, serum and urine. However, a few number of methods are available to determine the concentration of linezolid in pharmaceutical dosage forms. The aim of the present work was to develop and validate a spectrophotometric method, a reverse-phase ultra-high performance liquid chromatographic method, microbiological assay and microbiological rapid assay in microplates using kinetic reading for the determination of linezolid in injections and tablets dosage forms. In addition, the most important sources of uncertainty were identified and quantified for each method. A rational approach was used in the development of these methods, using design of experiments (factorial design and response surface methodology) for optimization of analytical conditions. The sources of uncertainties were identified using Ishikawa diagram and quantified as described in Eurachem/Citac procedure. The developed methods were specific/selective, linear, precise, accurate and robust, as required by ICH and ANVISA guidelines. Statistical analysis showed equivalence among the results provided by each method, being interchangeable. Thus, the methods may be employed in routine quality control analysis by pharmaceutical industry.

A linezolida é um antibiótico oxazolidinona efetivo contra bactérias patogênicas gram-positivas, incluindo Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA), Staphylococcus aureus resistente a glicopeptídeos (GISA) e enterococci resistente a vancomicina (VRE). As oxazolidinonas inibem a translação bacteriana na fase de iniciação da síntese de proteínas, enquanto que a síntese de RNA e DNA não são afetadas. Diversos métodos por cromatografia líquida de alta-eficiência (HPLC) têm sido relatados para a determinação da concentração de linezolida em plasma humano, soro e urina. Entretanto, um número pequeno de métodos estão disponíveis para a determinação de linezolida em formulações farmacêuticas. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e validar métodos espectrofotométrico, de cromatografia líquida de ultraeficiência em fase reversa (RP-UPLC), doseamento microbiológico em placas e doseamento microbiológico rápido em microplacas com leitura cinética para a determinação de linezolida em soluções injetáveis e comprimidos. Adicionalmente, foram identificadas e quantificadas as principais fontes de incerteza relacionadas aos métodos. O desenvolvimento dos métodos utilizou uma abordagem racional, empregando-se planejamento de experimentos (análise fatorial e metodologia de superfície resposta) para otimização das condições analíticas. As fontes de incertezas foram identificadas empregando-se diagrama de Ishikawa e quantificadas conforme procedimento da Eurachem/Citac. Os métodos desenvolvidos apresentaram especificidade/seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez adequadas, conforme os critérios estabelecidos pelo ICH e ANVISA. A análise estatística demonstrou equivalência entre os resultados providos por cada um dos métodos, sendo intercambiáveis entre si. Portanto, os métodos podem ser empregados no controle de qualidade de rotina na indústria farmacêutica. / Linezolid is an oxazolidinone antibiotic effective against gram-positive pathogenic bacteria, including methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), glycopeptide-intermediate Staphylococcus aureus (GISA) and vancomycin-resistant enterococci (VRE). Oxazolidinones inhibit bacterial translation at the initiation phase of protein synthesis, while RNA and DNA synthesis are not affected. Several high performance liquid chromatographic (HPLC) methods have been reported to determine the concentration of linezolid in human plasma, serum and urine. However, a few number of methods are available to determine the concentration of linezolid in pharmaceutical dosage forms. The aim of the present work was to develop and validate a spectrophotometric method, a reverse-phase ultra-high performance liquid chromatographic method, microbiological assay and microbiological rapid assay in microplates using kinetic reading for the determination of linezolid in injections and tablets dosage forms. In addition, the most important sources of uncertainty were identified and quantified for each method. A rational approach was used in the development of these methods, using design of experiments (factorial design and response surface methodology) for optimization of analytical conditions. The sources of uncertainties were identified using Ishikawa diagram and quantified as described in Eurachem/Citac procedure. The developed methods were specific/selective, linear, precise, accurate and robust, as required by ICH and ANVISA guidelines. Statistical analysis showed equivalence among the results provided by each method, being interchangeable. Thus, the methods may be employed in routine quality control analysis by pharmaceutical industry.

Os ensaios microbiológicos são utilizados para avaliar a atividade antimicrobiana desde a descoberta do uso dos antibióticos. Apesar dos ensaios microbiológicos serem amplamente empregados para determinação da potência de antibióticos em formas farmacêuticas, uma vez que fornecem a medida da atividade biológica, apresentam limitações quanto a baixa reprodutibilidade e tempo de análise. O objetivo deste trabalho foi desenvolver, otimizar e validar ensaio colorimétrico rápido em microplaca para determinar a potência da neomicina e bacitracina em produtos farmacêuticos. Metodologias de análise fatorial e análise de superfície de resposta foram utilizadas no desenvolvimento e otimização da escolha do microrganismo, da composição do meio de cultura, da proporção de inóculo, e das concentrações de cloreto de trifeniltetrazólio e dos antibióticos. Os métodos otimizados foram validados pela avaliação da linearidade, precisão, exatidão e robustez. Análise estatística mostrou equivalência entre o método de difusão em ágar e o método colorimétrico rápido em microplaca para ambos antibióticos. Além disso, o ensaio em microplaca apresentou vantagens em relação à reprodutibilidade, sensibilidade, tempo de incubação e quantidades necessárias de meio de cultura e soluções para ambos os antibióticos. / Microbiological assays have been used to evaluate antimicrobial activity since the discovery of the first antibiotics. Despite of microbiological assays have been widely employed to determine antibiotic potency of pharmaceutical dosage forms, once they provide a measure of biological activity, they have limitations regarding the low reproducibility and increased time of analysis. The aim of this work is to develop, optimize and validate a rapid colorimetric microplate bioassay for the potency of neomycin and bacitracin in pharmaceutical drug products. Factorial and response surface methodologies were used in the development and optimization of the choice of microorganism, culture medium composition, amount of inoculum, triphenyltetrazolium chloride (TTC) concentration and antibiotic concentration. The optimized bioassays methods were validated by the assessment of linearity, precision, accuracy, and robustness. Statistical analysis showed equivalency between agar diffusion microbiological assays and rapid colorimetric microplate bioassays. In addition, microplate bioassay had advantages concerning the reproducibility, sensitivity of response, time of incubation, and amount of culture medium and solutions required.

A papaína é uma enzima utilizada em formulações tópicas como agente proteolítico debridante, no tratamento de lesões abertas de grande extensão e queimaduras. Também empregada como agente promotor da permeação cutânea, peeling químico e como agente depilatório progressivo. A estabilidade de formulações contendo enzimas não é facilmente alcançada. No presente trabalho realizou-se a modificação da papaína com polietilenoglicol, visando maior estabilidade. O Teste de Estabilidade Normal de formulações cosméticas incorporadas de papaína não modificada e modificada apresentou um perfil diferenciado para a atividade da enzima modificada, nas diferentes condições de temperatura (5 ± 1 °C; 22 ± 2 °C, 40 ± 2 °C), sendo que a mais adequada para a papaína não modificada foi de 5 ± 1 °C e para a modificada foi de 22 ± 2,0 °C. Estes resultados confirmam o aumento da estabilidade da papaína modificada e o seu potencial de aplicação em formulações de uso tópico. / Papain is an enzyme used in formulations for local application as proteolitic debridant agent, treatment of wound exposed in large extension and burns. It is also applied as promotor agent of cutaneous permeation, chemical peeling and as progressive depilatory agent. The stability of formulations with enzymes is not easily obtained. In this work modification of papain with polyethylenglycol was made in order to obtain more stability. The Test of Normal Stability of cosmetic formulations incorporated with papain not-modified and modified, showed a differentiated profile for modified enzyme in different conditions of temperature (5 ± 1 °C; 22 ± 2 °C, 40 ± 2 °C), being that, the most adequated for papain not-modified was 5 ± 1°C and for modified was 22 ± 2,0 °C. These results confirm the increase of stability of papain modified and its potential application in formulations for local application.

Made available in DSpace on 2014-07-29T16:11:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Ane Rosalina.pdf: 643729 bytes, checksum: d56b1036dd88e160ac45e72dcf99a2d6 (MD5) Previous issue date: 2008-10-29 / Phytomedicines must to have as active ingredients only products derived from plants. The quality control of these medicines has not yet properly established criteria even with the growing consumption of these drugs worldwide. Among the assays to evaluate the quality there is the test of dissolution, used to examine the release of the active principle from a capsule or tablet in medium that simulates the place of their absorption. Among the nature drugs best known there is Passiflora incarnata L., whose possess sedative action. The C-flavonoid glycosides vitexin and isovitexin are the main components found in aereal parts of Passiflora sp and are used as markers of the genus in the tests of quality control. This study was conducted to apply the test of dissolution to phytotherapy containing passion flower. The method for quantifying of capsules and tablets used was the spectrophotometric assay described in British Pharmacopoeia (2007) to the powder of P. incarnata. The method has been validated for capsules and then used in the tests of dissolution, with apparatus shovel, 37 C ± 0.5 ° C, speed of 50 rpm in 500 mL of the medium of dissolution 0.1 M HCl pH 1.2, collecting 50 ml at the end of 30 minutes. We have investigated an alternative method for quantification of total flavonoids in ultraviolet spectrophotometer , in a wavelength of 269 nm or 350 nm, looking for a more simple and quick method to be used in routine testing, and because be less polluting and unhealthy. In the tests carried out to quantify the levels of total flavonoids found for the manipulated capsules were 2% for powder and 0.975 % for dry extract; for industrialized tablets the levels were 5.5% and 1.52%. The dissolution assay of the pharmaceutical forms at this study showed that the capsules containing dry extract or powder and one of the industrialized tablets showed 87%, 75% e 76%, respectively, of dissolution within 30 minutes of tests. In relation to the proposed alternative method, was selected the wavelength 350 nm for direct quantification of flavonoids presents in the phytomedicines and at the medium of dissolution. It can be noted that the results were consistent and similar to the datas of the validated method: 85% to dry extract, 80% to powder e 75% to one of the industrialized tablets. Whereas the phytomedicines represent a niche market and an opportunity for diversification of the national pharmaceutical industry, it is necessary to defined parameters of quality to ensure its therapeutic action. So, the studies of dissolution are an essential tool which helps to ensuring the quality of these medicines. / Fitoterápicos são medicamentos cujos princípios ativos são exclusivamente derivados de drogas vegetais. O controle de qualidade de fitoterápicos ainda não tem critérios devidamente estabelecidos mesmo com o crescente consumo destes medicamentos em todo o mundo. Dentre os ensaios para avaliar a qualidade destaca-se o teste de dissolução, usado para analisar a liberação do princípio ativo a partir de uma cápsula ou comprimido em meio que simula o local de sua absorção. Entre os medicamentos naturais mais utilizados encontra-se Passiflora incarnata L., cujas indicações referem-se à ação sedativa desta espécie. Os flavonóides C-glicosídeos vitexina e isovitexina são os principais componentes encontrados nas partes aéreas de Passiflora sp, sendo usados como marcadores do gênero nas análises de controle de qualidade. Este estudo foi realizado visando aplicar o teste de dissolução para fitoterápicos à base de maracujá. O método de quantificação utilizado para cápsulas e comprimidos foi o ensaio espectrofotométrico descrito na Farmacopéia Britânica (2007), para o pó de P. incarnata. O método foi validado para cápsulas de maracujá e então empregado nos ensaios de dissolução com aparato pá, 37 °C ± 0,5 °C, velocidade de 50 rpm em 500 mL do meio de dissolução HCl 0,1 M pH 1,2, coletando-se 50 ml para análise ao final de 30 minutos. Investigou-se neste trabalho um método alternativo para quantificação dos flavonóides totais, em espectrofotometria na região do ultravioleta, nos comprimentos de onda de 269 nm ou 350 nm, visando uma metodologia mais simples e rápida a ser usada em análises de rotina, além de ser menos poluente e insalubre. Nos ensaios de quantificação realizados, os teores de flavonóides totais encontrados para as cápsulas manipuladas foram 2% para pó e 0,975% para o extrato seco; para os comprimidos industrializados os teores foram de 5,5% e 1,52%. Os ensaios de dissolução das formas farmacêuticas nesse estudo demonstraram que as cápsulas à base de extrato seco, à base de pó e um dos comprimidos industrializados apresentaram 87%, 75% e 76%, respectivamente, de dissolução em 30 minutos de ensaios. Em relação ao método alternativo proposto, foi selecionado o comprimento de onda 350 nm para quantificação direta dos flavonóides presentes nos fitoterápicos e nos meios de dissolução. Pode-se observar que os resultados encontrados foram coerentes e semelhantes aos do método validado: 85% para extrato seco, 80% para pó e 75% para um dos comprimidos industrializados. Considerando que os fitoterápicos representam um nicho de mercado e uma possibilidade para a diversificação da indústria farmacêutica nacional, torna-se necessário definir parâmetros de qualidade que assegurem sua ação terapêutica. Neste sentido, os estudos de dissolução constituem uma ferramenta essencial que contribui na garantia da qualidade destes medicamentos.