Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-04-29Bitstream added on 2014-06-13T19:24:35Z : No. of bitstreams: 1 prado_fra_dr_jabo.pdf: 264327 bytes, checksum: dd7379d7711c643e9ed9087d9e75a42d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / objetivo deste estudo foi contribuir para o conhecimento da técnica de criopreservação de embriões in vitro. Oócitos (n=965) foram maturados durante 24h em TCM-199 suplementado com 0,2mM de piruvato, 25 mM de bicarbonato de sódio e 75 mg/ml de gentamicina. Os zigotos foram cultivados em meio SOFm suplementado com 0,5% BSA e FCS 2,5%. Culturas foram realizadas a 38,5°C em 5% de CO2 no ar umidificado, em 100 μl de meio de gotículas recuperado com óleo mineral. No sétimo dia da cultura, os embriões (n = 387) foram marcados e apenas blastocistos excelente a boa qualidade foram criopreservados (10 embriões / palheta 0,25 ml). Os seguintes grupos experimentais foram concebidos, nomeado de acordo com a solução de crioprotetor utilizado: glicerol 1,0 M de etileno glicol em PBS (G); glicerol 1,0 M + 0,3 M de sacarose em PBS (GS); etilenoglicol 1.5 M em PBS (E) e 1,5 M + 0,3 M de sacarose em PBS (ES). Após o descongelamento, os embriões foram re-cultivadas em 100 ml de meio de gotas SOFm a 38,5 º C e 5% de CO2 no ar por 72 h. Os dados demonstraram que a qualidade do embrião, avaliada pelo escore de embriões e número de células embrionárias, parece ser melhor no grupo E e ES. No processo de vitrificação, 300 embriões de excelente qualidade morfológica, Bi e Bl foram vitrificados, e foram sincronizadas 500 receptoras de embriões, divididas em 3 grupos de 150 animais cada grupo. O diagnóstico de gestação nas receptoras após a inovulação dos embriões foram realizados após 42 dias. A taxa de concepção variou entre os grupos, sendo que no grupo I obteve 6 gestações (18,75%) de receptoras que receberam embriões da raça Nelore, 9 gestações (26,47%) de receptoras que receberam embriões da raça Brangus e 12 gestações (35,3%) de receptoras que receberam embriões da raça Brahman... / The aim of this study was to contribute to the knowledge of the technique of cryopreservation of embryos in vitro. Oocytes (n = 965) were matured for 24h in TCM- 199 supplemented with 0.2 mM pyruvate, 25 mM sodium bicarbonate and 75 mg / ml of gentamicin. Zygotes were cultured in medium supplemented with 0.5% SOFm BSA and 2.5% FCS. Cultures were performed at 38.5 ° C in 5% CO2 in humidified air in 100 l of medium droplets recovered with mineral oil. On the seventh day of culture, the embryos (n = 387) were scored and only good quality excellent blastocysts were cryopreserved (10 embryos / straw 0.25 ml). The following experimental groups were designed, named according to the cryoprotectant solution used: glycerol 1.0 M ethylene glycol in PBS (G) 1.0 M glycerol + 0.3 M sucrose in PBS (GS), ethylene glycol 1.5 M PBS (E) and 1.5 M + 0.3 M sucrose in PBS (ES). After thawing, the embryos were re-grown in 100 ml of medium SOFm drops to 38.5 º C and 5% CO2 in air for 72 h. The data demonstrated that embryo quality was evaluated by scoring the number of embryos and embryonic cells, seems to be better in group E and ES. In the process of vitrification, 300 embryos of excellent morphology, Bi and Bl, were vitrified, and 500 were synchronized embryo recipients were divided into 3 groups of 150 animals each group. Pregnancies after embryo transfer in recipient embryos were performed after 42 days. The conception rate varied between the groups, whereas in group I had six pregnancies (18.75%) of recipients that received embryos Nellore, 9 pregnancies (26.47%) of recipients that received embryos of Brangus and 12 pregnancies (35.3%) of recipients that received embryos from Brahman ... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2018-07-27T18:26:07Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-09-30. Added 1 bitstream(s) on 2018-07-27T18:30:18Z : No. of bitstreams: 1 000866601.pdf: 1192960 bytes, checksum: b230a294adc85fc16f62c1b42c3673a6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi verificar o efeito de diferentes meios e tempos de refrigeração sobre o desenvolvimento e expressão gênica de embriões bovinos produzidos in vitro. Para tanto, blastocistos D7 foram divididos em três grupos: controle, embriões mantidos em meio SOFaa, em incubadora de CO2, por 6 e 48h; refrigerados, embriões mantidos a 5 °C, em Meio 199, por 24 (M199-24h) e 48h (M199-48h) ou em meio BotuEmbryo®, por 24 (BE-24h) e 48h (BE-48h). Após a refrigeração, os embriões foram cultivados sob as mesmas condições do grupo controle para avaliação da viabilidade embrionária às 6 e 48h, e das taxas de reexpansão e eclosão, às 24 e 48h, respectivamente. Às 6h de cultivo parte dos embriões foi retirada e armazenada para posterior análise de qPCR e TUNEL. Menor porcentagem (P<0,05) de blastocistos viáveis, às 6 e 48h, foi observada no grupo M199-48 em relação ao grupo controle. A taxa de reexpansão não diferiu entre os embriões refrigerados e o grupo controle, porém, menor (P<0,05) taxa de eclosão foi observada nos grupos M199-48h e BE-48h do que no grupo controle. Maior (P<0,05) porcentagem de células apoptóticas foi observada no grupo BE-48h do que nos grupos controle e BE-24h. Os meios e tempos utilizados não alteraram a expressão dos genes HSPA1A, PRDX1, SOD1 e SLC2A1. Portanto, de modo geral, o meio e o tempo de refrigeração não promoveram efeito potencial adverso sobre a viabilidade embrionária, taxa de reexpansão e eclosão, número de células apoptóticas e expressão gênica, sugerindo o emprego do meio BotuEmbryo®, o qual é disponível comercialmente / This study was carried out to investigate the effects of different media and cooling times on the development and gene expression of in vitro-derived bovine embryos. Therefore, blastocysts D7 were divided into three groups: control, embryos kept in SOFaa medium, under CO2 incubation, for 6, 24 and 48 hours; cooled embryos, kept in Medium 199, for 24 (M199-24h) and 48 hours (M199-48h) or in BotuEmbryo® medium, for 24 (BE-24h) and 48 hours (M199-48h). After cooling, the embryos were cultured under the same conditions used for the control group for evaluation of embryo viability at 6 and 48 hours, and of re-expansion and hatching rates, at 24 and 48 hours, respectively. At 6h of culture part of the embryos was removed and stored for later analysis of qPCR and TUNEL. Low percentage (P<0.05) of viable blastocysts, at 6 and 48 hours, was observed in group M199-48h than for control group. Re-expansion rate did not differ between cooled embryos and control group, however, lower (P<0.05) hatching rate was observed in M199-48h and BE-48h groups than for control group. Higher (P<0.05) percentage of apoptotic cells was found in BE-48h compared with control and BE-24h groups. Media and cooling times used did not alter the expression of genes HSPA1A, PRDX1, SOD1 and SLC2A1. Thus, overall, medium and cooling time did not promoted potential adverse effect on the embryonic viability, re-expansion and hatching rate, number of apoptotic cells and gene expression, suggesting the use of BotuEmbryo® medium, which is commercially available / FAPESP: 13/15905-9

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-28Bitstream added on 2014-06-13T20:59:30Z : No. of bitstreams: 1 mattos_mcc_me_botfmvz.pdf: 2029467 bytes, checksum: 940e4724967df5043139371eecb13c64 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivou-se com o presente estudo avaliar a criotorerância de mórulas e blastocistos produzidos in vivo de doadoras da raça Sindi e Nelore (Bos indicus) e Holandês Preto e Branco (HPB - Bos taurus). No Experimento 1, 24 fêmeas lactantes e não lactantes da raça Sindi foram superovuladas com 100 mg de FSH suíno com protocolos em que as duas últimas aplicações de FSH foram substituídas ou não por 300 UI de eCG. Sete dias após a indução da ovulação, os embriões foram colhidos e avaliados quanto ao estágio de desenvolvimento embrionário e grau de qualidade. Dois terços dos embriões foram destinados à criopreservação, dos quais metade foi congelada pelo método convencional, com curva de resfriamento de –0,5ºC/min e a outra metade foi vitrificada pela técnica de Cryotop. Em seguida, foram descongelados e transferidos para receptoras sincronizadas, de maneira contemporânea aos embriões frescos. No Experimento 2, 31 fêmeas da raça Nelore foram superovuladas com 133 mg de FSH suíno e os dois terços dos embriões colhidos foram criopreservados e transferidos semelhantemente ao Experimento 1. No Experimento 3, 67 vacas lactantes e novilhas da raça HPB foram superovuladas com 500 e 300 UI de FSH suíno, respectivamente, e após a colheita dos embriões foram adotados os mesmos procedimentos realizados nos Experimentos 1 e 2. Os resultados foram analisados por modelos lineares generalizados e estão apresentados na forma de média dos quadrados mínimos ± erro padrão. Nos Experimentos 1 e 2, os embriões transferidos a fresco apresentaram maior taxa de concepção aos 30 dias do que os vitrificados e congelados (54,8±7,4a, 17,7±7,3b e 19,5±6,6%b; respectivamente; P 0,0013) na raça Sindi (n=231 embriões) e (46,0±6,1a; 31,2±5,4b e 28,1±5,3%b; respectivamente, P 0,04) na raça Nelore (n=297 embriões). O estágio de desenvolvimento embrionário parece não... / The aim of this study was to evaluate the cryotolerance of morulae and blastocysts produced in vivo in Sindhi and Nelore (Bos indicus) and Holstein (Bos taurus) donnors. In Experiment 1, 24 lactating and non-lactating Sindhi donnors were superovulated with 100 mg porcine FSH with protocols in which the last two FSH treatments were replaced or not by 300 IU eCG. Embryos were collected 7 days after ovulation induction and embryo development and quality degree were accessed. Two thirds of the embryos were cryopreserved, by the conventional freezing or Cryotop method. After that, embryos were thawed and transferred to synchronized recipients, simultaneously to fresh embryos. In Experiment 2, 31 Nelore cows were superovulated with 133 mg porcine FSH and two thirds of the embryos were cryopreserved and transferred similarly to Experiment 1. In Experiment 3, 67 Holstein lactating dairy cows and heifers were superovulated with 500 and 300 IU pFSH, respectively, and the same procedures were performed as in Experiments 1 and 2. Results were analyzed using generalized linear models and are presented as least squares means ± standard error. In Experiments 1 and 2, fresh embryos had a higher conception rate at Day 30 than those vitrified and frozen (54.8±7.4a, 17.7±7.3b and 19.5±6.6%b; respectively; P 0.0013) in Sindhi donnors (n=231 embryos) and (46.0±6.1a; 31.2±5.4b and 28.1±5.3%b; respectively; P 0.04) in Nelore donors (n = 297 embryos). Embryo developmental stage seems to have not influenced conception rates of Zebu embryos, especially cryopreserved ones. Finnaly, in Experiment 3, conception rates of fresh and cryopreserved embryos were similar (37.4±12.3, 24.5±11.3 and 21.0±9.5%; respectively, P>0.15) and also no difference was detected for the cryotolerance of morulae versus blastocysts (P>0.10)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:17:40Z : No. of bitstreams: 1 leao_bcs_me_jabo.pdf: 368973 bytes, checksum: a4f7d50e91951c5624d19b1b82c2c21c (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da suplementação lipídica sobre o desenvolvimento embrionário e criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro (PIV). Para tanto, em uma primeira etapa foi avaliado o efeito da suplementação alimentar de novilhas Nelore com uma fonte de gordura protegida ruminal, rica em ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) Omega 6 (n-6) e 3 (n-3) sobre a população folicular, número de oócitos recuperados, desenvolvimento in vitro e sobrevivência embrionária após 3 e 24h de CIV pós-desvitrificação. Não houve diferença significativa (P>0,05) quanto à população folicular (17,9±1,0 vs 15,8±1,0), número de oócitos recuperados (14,4±1,4 vs 14,5±1,3) e número de oócitos viáveis (12,1±1,2 vs 12,5±1,1) para a PIV de embriões, respectivamente para os grupos CONTR e GORD. Da mesma forma, a taxa de clivagem (68,7±3,2 vs 61,3±3,0), desenvolvimento embrionário (47,0±3,7 vs 39,4±3,6) e re-expansão embrionária pós-aquecimento não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos CONTR e GORD (3h: 77,5 vs 78,4%; 24h: 77,5 vs 81,1%), muito embora tenha sido observado um incremento numérico na taxa de sobrevivência embrionária após 24h de CIV pós-desvitrificação no grupo GORD. Já em uma segunda etapa, foi avaliado o efeito da adição de Ácido Linoléico Conjugado (CLA), Ácido Docosaexaenóico (DHA) ou CLA+DHA durante os cultivos de maturação, desenvolvimento ou ambos, sobre o desenvolvimento in vitro e sobrevivência embrionária após 3 e 24h de CIV pós-desvitrificação. Não houve efeito entre o tipo de PUFA utilizado, assim como o momento da suplementação sobre as taxas de clivagem, de desenvolvimento embrionário até a fase de blastocistos e de sobrevivência embrionária em relação ao grupo controle (P>0,05). As maiores taxas... / The aim of this study was to evaluate the effects of lipid supplementation on embryo development and cryotolerance of in vitro produced (IVP) bovine embryos. In a first step, was evaluated the effect of heifers dietary supplementation with a source of rumen protected fat, rich in polyunsaturated fatty acids (PUFAs) Omega 6 (n-6) and 3 (n-3) on follicular population, number of recovered oocytes, in vitro development and embryo survival after 3 and 24h of post-devitrification IVC. There was no significant difference (P>0.05) on follicular population (17.9±1.0 vs 15.8±1.0), number of recovered oocytes (14.4±1.4 vs 14.5±1.3) and number of viable oocytes (12.1±1.2 vs 12.5±1.1) for IVP embryos, respectively for CONTR and GORD groups. Similarly, the cleavage rate (68.7±3.2 vs 61.3±3.0), embryonic development (47.0±3.7 vs 39.4±3.6) and embryo re-expansion post-heating didn’t differ (P>0.05) between CONTR and GORD treatments (3h: 77.5 vs 78.4%; 24: 77.5 vs 81.1%), although it has been observed a number increment on embryo survival rate after 24h of post-devitrification IVC on GORD group. In a second step, was evaluated the effect of addition of Conjugated Linoleic Acid (CLA), Docosahexaenoic acid (DHA) or CLA + DHA during maturation, development or both cultures on in vitro development and embryo survival after 3 and 24h of post-devitrification IVC. There was no effect between the type of PUFA used, and the time of supplementation on cleavage, embryo development until the blastocyst stage and embryo survival rates compared to the control group (P>0.05). The highest embryo survival rates after 3h of post-warming IVC were observed in groups supplemented with DHA during IVM (76.2%) or IVM+IVC (78.8%), differing significantly (P<0.05) of supplemented groups with CLA (52.7%) or CLA+DHA (55.3%), during IVM. There was no significant difference... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-01-23Bitstream added on 2014-06-13T19:38:32Z : No. of bitstreams: 1 derussi_aap_me_botfmvz.pdf: 919371 bytes, checksum: 2a418e27dc57dd6def1de0d243e28651 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do benzoato de estradiol na prevenção de gestação em cadelas recém-acasaladas. Utilizou-se 24 fêmeas: GRUPO I (Experimental) – 12 cadelas que receberam uma única aplicação de benzoato de estradiol, dose de 0,2 mg/Kg, via intramuscular, entre o 2º e 7º dia da data da última cobertura. GRUPO II (Controle)- 12 cadelas que receberam solução oleosa diluente, dose de 0,2 ml/Kg, via intramuscular, entre os dias 2 e 7 da última data de cobertura. A ovariohisterectomia (OSH) foi realizada entre os dias 6 a 16 após a última cobertura e foram avaliadas: taxa de recuperação e degeneração ovocitária/ embrionária; viabilidade embrionária e a influência do fármaco sobre à migração, clivagem e implantação embrionária. Foi examinado, também, os efeitos do benzoato de estradiol no sistema hematológico após a utilização da droga. Para avaliação dos hemogramas foi realizado análise de variância –ANOVA (p< 0,05) para medidas repetidas e o teste de Tukey para os parâmetros hematológicos. Para as variáveis recuperação ovocitária e embrionária foi utilizado o coeficiente de correlação de Pearson; para migração embrionária e clivagem embrionária foi realizado o teste de qui-quadrado, na análise de viabilidade embrionária foi utilizado teste exato de Fisher e na análise da implantação foi utilizada análise descritiva dos dados. Todos os testes foram realizados a 5% de nível de significância. Obteve-se 03 embriões no grupo experimental e 52 no grupo controle; o benzoato de estradiol exerceu influencia sobre o número de estruturas recuperadas, porém não influenciou a migração, clivagem e a viabilidade embrionária quando utilizado até o 7°dia após a cobertura. Não foi detectada a presença de vesículas embrionárias implantadas em ambos os grupos, porém... / The purpose of this experiment was to evaluate the effects of the estradiol benzoate on the prevention of pregnancy in mismantig dogs. For that, 24 bitches were divided, in: Experimental Group - 12 bitches that has received a single application of the estradiol benzoate (dose of 0,2 mg/Kg, intramuscular application), in a 2 to 7º days after the last mating. Control Group - 12 bitches received an oily solution (dose of 0,2 mL/Kg, intramuscular application) on the same period (between 2 to 7 days after the last mating). Ovariohysterectomy (OSH) has performed, between days 6 and 16 after the last mating and the parameters evaluated were the recovery rate and the embryonic/ oocytary degeneration rate and the influence of the drug on the migration, the viability, clivage and embryonic implantation. The effect of the estradiol benzoate on the hematologic system after the use of the drug was also investigate. For the oocytary and embryonic recovery variables the coefficient of Pearson correlation was used, in the analysis of the embryonic migration and embryonic clivage a qui-square test was carried qui-square test, in the analysis of embryonic viability were used the Fisher’s exact test were used and in the analysis of the implantation descriptive analysis o was used. All the tests used 5% of significance level.Three embryos in the experimental group and 52 embryos in the control group were acquired; estradiol benzoate did practise influences on the number of structures recouvered, but, nor on the migration, clivage and embryonic viability, when used until the 7° day after the mating. There was no detection the presence of embryonic vesicles in both the groups, Apparently, OSHs were performed to soon for the detection of embryonic vesicle... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Renato Luis Furlan / Banca: Lizandra Amoroso / Banca: Silvana Martinez Baraldi Artoni / Banca: Daniel Emygdiode Faria Filho / Banca: José Fernado Machado Menten / Resumo: O fornecimento de CO2 durante as primeiras 240 horas de incubação melhora os resultados de incubação e pós-eclosão, porém o seu uso em diferentes idades de matriz é pouco compreendido. Portanto, foram realizados três experimentos com os seguintes objetivos: O primeiro objetivo foi avaliar o efeito de duas idades de matriz (36 e 55 semanas) e três concentrações de CO2 (controle, 1,0% e 1,4%) durante as primeiras 240 horas de incubação sobre o desenvolvimento embrionário de frangos de corte. O segundo objetivo foi avaliar o desempenho, rendimento de órgãos, morfologia intestinal, rendimento de carcaça e índice cardíaco de frangos de corte oriundos de duas idades de matriz e três concentrações de CO2. Finalmente, o objetivo do terceiro estudo foi avaliar os efeitos da incubação com CO2 (aumento gradual até 1,5%) durante 10 dias (0 - 240 horas de incubação) na vascularização da membrana corioalantóide (CAM), nas variáveis sanguíneos do embrião e pós-eclosão e nos resultados de incubação de frangos de corte. Os resultados mostraram que a exposição ao CO2 promoveu alterações no desenvolvimento embrionário e na qualidade pós-eclosão. A idade de matriz deve ser considerada no processo de incubação com CO2. A idade de matriz e a exposição ao CO2 nas primeiras 240h de incubação exerceramm influencia no desempenho pós-eclosão. A exposição gradual de 1,5% de CO2 nas primeiras 240 horas de incubação aumenta a vascularização da CAM, altera as variáveis sanguíneas, influencia negativamente o desenvolvimento embrionário e o metabolismo pós-eclosão. Em conclusão, a interação idade de matriz e concentração de até 1,4% de CO2, na primeira fase de incubação afeta o metabolismo embrionário, principalmente em matriz com idade de 55 semanas. A exposição a 1,5% CO2 aumenta a vascularização da CAM, mas afeta negativamente o desenvolvimento embrionário / Abstract: Supplementing CO2 during the first 240 hours of incubation has been proposed for improving incubation and post hatch performance, but its use on eggs coming from breeders of different ages needs to be better understood. Therefore, three experiments were carried out with the following objectives: The first objective was to evaluate the effects of two breeder ages (36 and 55 weeks) and three concentrations of CO2 (control, 1,0% and 1,4%) during the first 240 hours of incubation on the embryonic development of broilers. The second objective was to evaluate the performance, organ performance, intestinal morphology, carcass yield, and cardiac index of broilers from two breeder ages and three CO2 concentrations. Finally, the objective of the third experiment was to evaluate the effects of incubation with increasing CO2 concentration up to 1,5% for 240 hours of incubation on the vascularization of the chorioallantoic membrane (CAM) in embryogenic and post-hatch blood parameters, and the results of chickens at post hatch. The results showed that exposure to CO2 promoted changes in embryonic development and post-hatching quality. The old breeder must be considered in the process of incubation with CO2.The breeder ages and exposure to CO2 in the first 240h incubation exert influence in post-hatching performance. The gradual exposure of 1,5% of CO2 in the first incubation phase (240 hours) increased vascularization of the CAM, altered blood parameters, adversely influenced embryonic development and metabolism post-hatching. In conclusion, the interaction of breeder age and CO2 concentration up to 1,4% in the first stage of incubation affects the embryonic metabolism, especially in a old breeder at 55 weeks of age. The exposure to 1,5% CO2 increases vascularization of CAM and negatively affects embryonic development / Doutor

Orientador: Laura Satiko Okada Nakaghi / Coorientador: George Shigueki Yasui / Banca: Sérgio Fonseca Zaiden / Banca: Rafael Henrique Nóbrega / Banca: Flávio Vieira Meirelles / Banca: Luciano Andrade Silva / Resumo: O transplante de células germinativas primordiais (CGPs) é uma abordagem promissora para área da Aquicultura, mas para isso é necessária à compreensão dos estágios de desenvolvimento embrionário e larval como também a padronização de técnicas relacionadas à micromanipulação do embrião e de células germinativas a fim de obter com sucesso quimeras germinativas. Assim, os objetivos desta pesquisa foram avaliar o efeito de três temperaturas (22ºC, 26ºC e 30ºC) sob o desenvolvimento inicial de B. amazonicus (espécie doadora); desenvolver protocolos para micromanipulação de ovos, de células embrionárias e de criopreservação de blastômeros em Astyanax altiparanae (espécie receptora); identificar as CGPs e a rota de migração dessas células em ambas as espécies, além da produção de quimeras germinativas através do transplante de células embrionárias a fim de que a espécie receptora estéril (3n) produza gametas da espécie doadora. Para isso, os reprodutores das espécies envolvidas foram induzidos hormonalmente à reprodução, os gametas foram extrusados e fertilizados pelo método a seco. Para avaliar o desenvolvimento inicial, ovos recém-fertilizados foram distribuídos em aquários com oxigenação e temperatura controlada, coletados em momentos pré-estabelecidos e analisados sob estereomicroscópio. Para o desenvolvimento do protocolo de micromanipulação de ovos de Astyanax altiparanae, inicialmente avaliou-se a eficácia na remoção do córion em alíquotas de ovos recém-fertilizados distribuí... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Primordial germ cell (PGCs) transplantation is a promising approach for aquaculture area, but it is necessary the understanding of the embryonic and larval development stages as well as the standardization of techniques related to embryo micromanipulation and germ cells in order to get germ chimeras successfully. Thus, the aims of this research were to evaluate the effect of three temperatures (22°C, 26°C and 30°C) on the early development of Brycon amazonicus (donor species); develop protocols for micromanipulation of egg, embryonic cells and blastomeres cryopreservation in Astyanax altiparanae (host species); identify the PGCs and their migration route in both species, also producing germ chimeras through transplantation of embryonic cells to host sterile species (3n) in order to produce gametes from the donor species. For this, broodstock of the involved species were hormonally induced to reproduction, and the gametes were stripped and fertilized by dry method. To evaluate the early development, newly fertilized eggs were distributed into aquarium with controlled oxygenation and temperature, collected at pre-established times and analyzed under a stereomicroscope. For the development of micromanipulation protocol of eggs from Astyanax altiparanae, it was initially evaluated the effectiveness of removing the chorion, in aliquots of newly fertilized eggs distributed on Petri dishes containing pronase (0.05%) or trypsin (0.15%) diluted in saline solutions (Holtfreter; Characin; Ringer; Hanks, D-PBS or MEM) and it was observed the most efficient enzymatic solution without affecting the viability of the embryo. After dechorionation, the eggs were submerged the same saline solutions tested for removing the chorion, free of enzymes. To determine the best incubation saline solution, morphology and quantification of the eggs were ... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Gisele Zoccal Mingoti / Banca: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Ériklis Nogueira / Resumo: O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da suplementação lipídica sobre o desenvolvimento embrionário e criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro (PIV). Para tanto, em uma primeira etapa foi avaliado o efeito da suplementação alimentar de novilhas Nelore com uma fonte de gordura protegida ruminal, rica em ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) Omega 6 (n-6) e 3 (n-3) sobre a população folicular, número de oócitos recuperados, desenvolvimento in vitro e sobrevivência embrionária após 3 e 24h de CIV pós-desvitrificação. Não houve diferença significativa (P>0,05) quanto à população folicular (17,9±1,0 vs 15,8±1,0), número de oócitos recuperados (14,4±1,4 vs 14,5±1,3) e número de oócitos viáveis (12,1±1,2 vs 12,5±1,1) para a PIV de embriões, respectivamente para os grupos CONTR e GORD. Da mesma forma, a taxa de clivagem (68,7±3,2 vs 61,3±3,0), desenvolvimento embrionário (47,0±3,7 vs 39,4±3,6) e re-expansão embrionária pós-aquecimento não diferiram (P>0,05) entre os tratamentos CONTR e GORD (3h: 77,5 vs 78,4%; 24h: 77,5 vs 81,1%), muito embora tenha sido observado um incremento numérico na taxa de sobrevivência embrionária após 24h de CIV pós-desvitrificação no grupo GORD. Já em uma segunda etapa, foi avaliado o efeito da adição de Ácido Linoléico Conjugado (CLA), Ácido Docosaexaenóico (DHA) ou CLA+DHA durante os cultivos de maturação, desenvolvimento ou ambos, sobre o desenvolvimento in vitro e sobrevivência embrionária após 3 e 24h de CIV pós-desvitrificação. Não houve efeito entre o tipo de PUFA utilizado, assim como o momento da suplementação sobre as taxas de clivagem, de desenvolvimento embrionário até a fase de blastocistos e de sobrevivência embrionária em relação ao grupo controle (P>0,05). As maiores taxas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effects of lipid supplementation on embryo development and cryotolerance of in vitro produced (IVP) bovine embryos. In a first step, was evaluated the effect of heifers dietary supplementation with a source of rumen protected fat, rich in polyunsaturated fatty acids (PUFAs) Omega 6 (n-6) and 3 (n-3) on follicular population, number of recovered oocytes, in vitro development and embryo survival after 3 and 24h of post-devitrification IVC. There was no significant difference (P>0.05) on follicular population (17.9±1.0 vs 15.8±1.0), number of recovered oocytes (14.4±1.4 vs 14.5±1.3) and number of viable oocytes (12.1±1.2 vs 12.5±1.1) for IVP embryos, respectively for CONTR and GORD groups. Similarly, the cleavage rate (68.7±3.2 vs 61.3±3.0), embryonic development (47.0±3.7 vs 39.4±3.6) and embryo re-expansion post-heating didn't differ (P>0.05) between CONTR and GORD treatments (3h: 77.5 vs 78.4%; 24: 77.5 vs 81.1%), although it has been observed a number increment on embryo survival rate after 24h of post-devitrification IVC on GORD group. In a second step, was evaluated the effect of addition of Conjugated Linoleic Acid (CLA), Docosahexaenoic acid (DHA) or CLA + DHA during maturation, development or both cultures on in vitro development and embryo survival after 3 and 24h of post-devitrification IVC. There was no effect between the type of PUFA used, and the time of supplementation on cleavage, embryo development until the blastocyst stage and embryo survival rates compared to the control group (P>0.05). The highest embryo survival rates after 3h of post-warming IVC were observed in groups supplemented with DHA during IVM (76.2%) or IVM+IVC (78.8%), differing significantly (P<0.05) of supplemented groups with CLA (52.7%) or CLA+DHA (55.3%), during IVM. There was no significant difference... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Joaquim Mansano Garcia / Banca: Cesar Roberto Esper / Banca: Marcos Brandão Dias Ferreira / Resumo: Animais da raça Holandesa, criados nas regiões de clima temperado a quente apresentam baixa eficiência quanto ao número, qualidade e competência oocitária para a produção in vitro de embriões, em comparação às raças Zebuínas. Por outro lado o controle da onda folicular e a estimulação com FSH exógeno pode incrementar o número e melhorar a qualidade e competência oocitária para a produção embrionária. Com o objetivo comparativo sete novilhas, sete vacas não lactantes e sete vacas em lactação foram utilizadas em um delineamento em "crossover" foram submetidas a quatro tratamentos: T1 - Aspiração folicular ao acaso em dia aleatório do ciclo estral; T2 - Aspiração folicular dois dias após a remoção do folículo dominante; T3 - Aspiração folicular 24 horas após remoção do folículo dominante e estimulação com dose única de FSH (100 UI para novilhas e 200 UI para vacas não lactantes ou em lactação) vinte quatro horas antes da aspiração folicular; T4 - Aspiração folicular após estimulação e indução do pico de LH (inserção de implante de progestágeno, aspiração do folículo dominante e estimulação com FSH na dose de 250 UI para novilhas, 500 UI para vacas não lactantes e lactantes, subdividas em 8 doses decrescentes, indução de luteólise e retirada do implante 36 horas antes do GnRH e aspiração folicular 24 horas após a administração de GnRH). Não foi observada diferença estatística entre os tratamentos (P>0,05) quando foi avaliada a recuperação de oócitos, no entanto a categoria de novilhas obteve melhores resultados e apresentou diferença estatística (P<0,05) quando comparada com vacas lactantes e não lactantes, porém não foi observada diferença estatística entre as categorias vacas não lactantes ou vacas lactantes. Quando os oócitos viáveis foram avaliados, a categoria de novilhas apresentou melhor resultado e diferença significativa ... / Abstract: Holstein cows, bred in temperate to hot climate have low efficiency on the number, quality and oocyte competence for in vitro production of embryos, compared to Zebu breeds. On the other hand the control of follicular wave and stimulation with exogenous FSH can increase the number and improve the quality and oocyte competence for embryo production. With the comparative goal seven heifers, seven non-lactating cows and seven lactating cows were used in a complete "crossover" were subjected to four treatments: T1 - Follicular Aspiration randomly at any time of the estrous cycle; T2 - Follicular Aspiration two days after removal of the dominant follicle; T3 - Follicular Aspiration 24 hours after removal of the dominant follicle and stimulation with single dose of FSH (100 IU to 200 IU for heifers and non-lactating cows or lactating) twenty four hours before follicular aspiration; T4 - Follicular Aspiration after stimulation and induction of the LH surge (progestagen implant insertion, aspiration of the dominant follicle and FSH stimulation at a dose of 250 IU to 500 IU for heifers and non-lactating and lactating cows, subdivided in 8 decreasing doses, induce luteolysis and removal of the implant 36 hours before of the GnRH and follicular aspiration 24 hours after GnRH administration). No statistical difference between treatments (P>0.05) was evaluated oocyte retrieval was observed, however category heifers achieved better results and statistical differences (P<0.05) compared with lactating cows and non-lactating, although no statistical difference between the categories of non-lactating cows and lactating cows was observed. When the viable oocytes were evaluated, the grade of heifers showed better results and significant difference (P <0.05) compared with lactating and non-lactating cows, and no significant difference was observed between non-lactating cows and lactating cows (P>0.05). In relation to treatments, treatment 1 (T1) differed ... / Mestre

Este estudo tem por objetivo mostrar algumas das questões relacionadas à célula-tronco embrionária no que diz respeito ao início da vida como tem sido tratado pela física, pela biologia e pela religião. Faz-se também uma análise sobre a medicina como técnica médica e as repercussões disso na política. / This study intends to discuss some questions about embryos in beggining of life\'s concept and its treatment by physics, biology and religion. Also analyses the medical technic and its reflections in politics and rights.