Made available in DSpace on 2018-08-01T22:57:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9923_ALDA TRIVELLATO LANNA NETA.pdf: 696628 bytes, checksum: ed0894194de5775ad2668613855581e6 (MD5) Previous issue date: 2018-01-09 / Pteridiumsp.(samambaia) é uma planta responsável por diversos quadros de intoxicação em animais e seres humanos. Em bovinos, um dos quadros comuns na região sul do Espírito Santo é a hematúria enzoótica bovina (HEB) que não possui tratamento. Assim, o objetivo do presente trabalho foi determinar os efeitos do selênio associado a vitamina E como suplemento em animais intoxicados cronicamente pelo Pteridium sp. Foram selecionados 21 animais intoxicados cronicamente pela planta e com HEB. Os animais foram examinados clinicamente e foi realizada a coleta da urina para a confirmação da hematúria. O delineamento experimental foi feito em quatro grupos divididos ao acaso (controle soro fisiológico; tratamento 1 0,05 mg/Kg do suplemento;tratamento20,10mg/Kgdosuplemento;tratamento30,20mg/Kgdo suplemento). Foi feita a suplementação parenteral, via intramuscular, uma vez por semana, durante 13 semanas. Quinzenalmente os animais foram avaliados clinicamente e foram coletadas amostras de sangue para dosagem do selêniosérico. A análise de selênio foi feita nos momentos inicial, antes da suplementação com selênio (M0), após quatro semanas de tratamento (M4), após oito semanas (M8) e após 12 semanas (M12), pelo método de espectrofotometria de absorção atômica. Utilizou-seaanálisedevariância(ANOVA)seguidadotestedeTukeya5%.Verificou-se que houve maior ganho de peso dos animais tratados com selênio em relação ao grupocontrolee,também,entreosgrupos.Aintensidadedahematúriareduziuapartir da sexta semana e houve diferença significativa entre os grupos tratados e o grupo controle, assim como entre os grupos. Houve diferença significativa da concentração sérica de selênio entre os tratamentos. Assim, conclui-se que o selênio associado a vitaminaEcomosuplementoparabovinosintoxicadoscronicamenteporPteridiumsp. no Espirito Santo com quadro de HEB teve efeito dose dependente sobre a melhora doquadroclínicocausandoreduçãodaintensidadedehematúriaeaumentodoganho de peso

Se realizó el estudio citooncológico, evaluando características de atipicidad y/o tumorales celulares en el sedimento de muestras de orina obtenidas de 210 bovinos hembra criadas de manera extensiva o semiextensiva en la provincia de Oxapampa (Pasco), zona con alta presencia del helecho Pteridium aquilinum y de la enfermedad Hematuria Vesical Enzoótica Bovina (HVEB). El proceso de toma, centrifugado, obtención de sedimento urinario, frotís y fijado de la muestra se realizó en campo, mientras que la tinción con colorante Wright y evaluación microscópica se efectuó en Laboratorio de Histología, Embriología y Patología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM. El punto significativo para la detección de animales positivos a la enfermedad fue el hallazgo por evaluación citooncológica urinaria principalmente de células epiteliales atípicas de citoplasma poligonal, basófilo o levemente basófilo con marcado incremento de la relación núcleo/citoplasma a favor del núcleo, membrana nuclear irregular y condensación de cromatina. Lo que manifiesta el hallazgo y relación a HVEB de células tumorales malignas de blastodermia orientada hacia la epitelial. Además, como dato se reporta el hecho de encontrar mayor cantidad de células uroteliales exfoliadas de apariencia normal, y acompañadas de escaso a leve número de eritrocitos maduros en la mayoría de muestras diagnosticadas positivas. Es así que por medio del presente estudio se comprueba que utilizando como método diagnóstico la citooncología urinaria la frecuencia de presentación de HVEB en la población estudiada es de 64 casos (30.47 %), demostrando la utilidad de la evaluación citooncológica urinaria, especialmente para el diagnóstico de la enfermedad en estadios iniciales. El presente trabajo apoya además el reporte de HVEB en nuestro país y la necesidad de determinar un método diagnostico precoz y desarrollable en campo para el monitoreo y control de la enfermedad en nuestro medio. Por lo tanto, la citooncología urinaria podría ser la prueba de ‘’oro’’ estándar para HVEB, necesitando de investigación futura que afine el método y demuestre esta posibilidad diagnóstica. Palabras Clave: Citooncología urinaria, Hematuria Vesical Enzoótica Bovina (HVEB), células atípicas, Bovinos, Pteridium aquilinum(Pa). / -- A cytooncologic test was performed in order to evaluate tumoral characteristics in the sediment of urine samples obtained from 210 bovine females, extensively or semiextensively bred in the province of Oxapampa (Pasco), area with a high presence of the bracken fern (Pteridium aquilinum) and a high prevalence of the Bovine Enzootic Vesical Haematuria (BEVH) disease. The processes of sample collection, centrifugation, urinary sediment collection, smear and fixation of the sample were performed in the field, while the Wright Test and the microscopic evaluation were done at the Laboratory of Histology, Embryology and Pathology at the School of Veterinary Medicine of the Universidad Nacional Mayor de San Marcos. The significant point in the detection of animals positive to this disease was mostly the finding of epithelial apaatypical cells with basophilic and polygonal cytoplasm. And with significant increasement of the nuclear-cytoplasm ratio favoring the nucleus. As an additional fact, it has been reported that most of the samples diagnosed as positive to the disease showed an increased number of apparently normal exfoliated urothelial cells accompanied by low number of mature erithrocytes. The present study demonstrated that using urinary cytooncology as a diagnostic method, 64 animals (30.47%) of the studied population show to be positive to the BEVH disease, thus demonstrating the usefulness of urinary cytooncologic evaluation, specially for the diagnose of the disease in its initial phases. In addition, the present work supports the BEVH report in our country and the need to determine a precocious and easy to develope “in the field” diagnostic method that may help monitoring and controling the disease in our environment. Therefore, urinary cytooncology could become the “golden” standard test to diagnose BEVH, although further research needs to be done in order to demonstrate the usefulness of this diagnostic tool. Key Words: Urinary Cytooncology, Bovine Enzootic Vesical Haematuria (BEVH), atypical cells, Bovine, Pteridium aquilinum (Pa).

A bactéria Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína e se adere às células do epitélio ciliar pulmonar do hospedeiro para a colonização. Essa doença é responsável por perdas econômicas em muitos países devido à morbidade dos rebanhos. A bactéria Mycoplasma flocculare é encontrada principalmente na mucosa traqueal de suínos, como M. hyopneumoniae, mas é uma bactéria comensal. Ambas apresentam similaridades genéticas, como o compartilhamento de 90% das proteínas de superfície preditas e o perfil transcritômico dos genes que codificam adesinas, proteínas que proporcionam a aderência do micro-organismo, altamente semelhante. Contudo, análises genômicas e transcritômicas não foram capazes de explicar a diferença fenotípica entre M. hyopneumoniae e M. flocculare no hospedeiro. Considerando estudos realizados previamente, se hipotetiza que parte dessa diferença ocorra devido a discrepâncias na sequência de aminoácidos de proteínas de superfície ortólogas, uma vez que 85% dos pares de proteínas ortólogas destas espécies apresentam, pelo menos, um domínio diferencial. Tais domínios diferenciais podem determinar variação funcional e/ou variação na resposta imune induzida no suíno. Para caracterizar imunologicamente um par de proteínas ortólogas de superfície de M. hyopneumoniae e M. flocculare, MHP556 e MF306, respectivamente, as versões recombinantes dessas foram expressas em Escherichia coli BL21 pLysE. Os produtos recombinantes, MHP556-GST e MF306-GST, foram purificados e utilizados em ensaios de avaliação de imunogenicidade e antigenicidade. Foram demonstradas a antigenicidade das proteínas nativas MHP556 e MF306, além da imunogenicidade da proteína recombinante MF306-GST. A comparação desses resultados contribuirá para a elucidação da função dessas proteínas de superfície na interação patógeno-hospedeiro e da importância da presença de domínios diferenciais entre proteínas ortólogas na resposta imune desencadeada pelo hospedeiro. / The bacteria Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of swine enzootic pneumonia and attaches to the cilliary tracheal cells to colonize the host. This disease is responsible for economic losses in many countries due to the morbidity of pig herds. The bacteria Mycoplasma flocculare is also found mainly in the tracheal mucosal, as M. hyopneumoniae, but it is a commensal species. Both species have genetic similarities as they share 90% of their predicted surface proteins and the transcriptomic profiles of the genes encoding adhesins, proteins that enable the attachment in host tissue, very similar. Yet, genomic and transcriptional analysis does not explain the phenotypic difference between M. hyopneumoniae and M. flocculare within its host. Considering these previous studies, it was hypothesized that the difference in pathogenicity may be due, in part, tothe amino acid sequence of the orthologous surface proteins, once that 85% of all orthologous surface proteins of both species show, at least, one differential domain. These differential domains may trigger functional modifications and/or immunological modifications by the host. To immunologically characterize a pair of orthologous surface proteins MHP556 and MF306, from M. hyopneumoniae and M. flocculare, respectively, recombinant versions were expressed in Escherichia coli BL21 pLysE. The recombinant products, MHP556-GST and MF306-GST, were purified and used in immunological and antigenicity assay. The antigenicity of the native proteins MHP556 and MF306 were established, and the immunogenicity of the recombinant protein MF306-GST as well. The comparison of the results of this study may help to elucidate the different functions of both surface proteins in the host-pathogen interaction and shed light about the importance of the presence of differential domains in orthologous proteins in the host immune response.

La hematuria vesical enzoótica bovina (HVEB) es una enfermedad crónica no infecciosa causada por el consumo continuo de pequeñas cantidades del helecho Pteridium aquilinum durante un tiempo aproximado de 2 a 3 años. Es un síndrome común en bovinos de 4 a 12 años de edad (Borzacchiello et al., 2003; França et al., 2002). La presentación de HVEB ha sido reportada en diversas partes del mundo, en especial en áreas templadas y asociadas a tierras poco fértiles o poco cultivadas (Sánchez et al., 1999). Se ha reportado en países como Brasil, Venezuela, Estados Unidos, Bulgaria, Escocia, Irán o Kenia (Anjos et al., 2008; Gaste y Sánchez, 2008; Sánchez et al., 1999 y 2008). En Perú, la HVEB ha sido reportada en la zona de Oxapampa, Cerro de Pasco y Pucallpa siendo una de las enfermedades que más afectan al ganado bovino de crianza al pastoreo (Gonzáles y Carpio, 1973; Gonzáles et al., 2004). P. aquilinum es una planta que pertenece a la familia de las Hipolepidáceas. Se desarrolla de manera rápida entre los pastizales perennes y a pesar de un bloqueo parcial de la luz solar (Sánchez et al., 1999). Este helecho está entre las cinco plantas más comunes del mundo y es la única planta superior que se conoce causa neoplasias naturalmente en los animales, como consecuencia de una considerable cantidad de componentes tóxicos, dentro de los cuales está el ptaquilósido (PT), un componente radiomimético glucósido sesquiterpenoide capaz de inducir clastogénesis en los cultivos celulares con actividad mutagénica y carcinogénica (Riet-Correa et al., 2001; Vargas et al., 2003). El PT es eliminado en la orina induciendo tumores vesicales y también es eliminado en la leche, con potencial riesgo para la salud humana (AlonsoAmelot, 1999). La incidencia global de la enfermedad no es muy grande, pero es importante en la ganadería porque causa un gran impacto económico debido a la pérdida prematura de animales. Por otro lado, no hay un tratamiento específico de la enfermedad por lo que se opta por el sacrificio de los animales afectados (Radostits et al., 2002; Giles y Andrews, 2004). Entre los signos clínicos y patológicos observados se encuentran la anemia, leucopenia, reducida hemoglobina, hemorragias de la pared vesical, disuria y escasa productividad del animal (Prasad e Iyer, 1986; Sandoval et al., 2002). El animal puede morir tras una enfermedad de 1 a 2 semanas en los casos agudos; en los casos menos graves con hematuria intermitente o subclínica persistente, se observa un empeoramiento progresivo del estado general del animal a lo largo de varios meses (Riet-Correa et al., 2001; Jackson y Cockcroft, 2002; Radostits et al., 2002). La enfermedad también está asociada con cambios neoplásicos en la mucosa de la vejiga. Las lesiones neoplásicas observadas generalmente son hemangioendoteliomas, adenocarcinomas, carcinomas de células transicionales, papilomas, fibromas, leiomiomas, carcinomas de células escamosas y mixomas (França et al., 2002; Vargas et al., 2003). Para el diagnóstico presuntivo bastan los signos clínicos con los datos epidemiológicos de la zona (Prasad e Iyer, 1986). Sin embargo, para llegar a un diagnóstico definitivo hay que tomar en cuenta la historia de la enfermedad, los signos clínicos y la histopatología hallada en las lesiones. En la actualidad se han desarrollado diversas pruebas diagnósticas como la histopatología (Vargas et al., 2003), patología clínica (Sánchez et al., 2004), ecografía (Hoque et al., 2002; Sandoval et al., 2002), tiras reactivas para orina, examen microscópico del sedimento urinario (Sánchez et al., 2006), PCR semi-anidada para la detección y tipificación de Papilomavirus bovino tipo 2 en las lesiones vesicales (Stocco dos Santos et al., 1998), hibridación por Southern blot (Saveria et al., 1992) detección de gangliósidos y glucoesfingolípidos que modulan la señalización celular esencial para la proliferación, invasión y metástasis tumoral (Roperto et al., 2007), e incluso la detección de aberraciones cromosomales relacionadas a la enfermedad (Lioi et al., 2004). / Tesis

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Se realizó el estudio citooncológico, evaluando características de atipicidad y/o tumorales celulares en el sedimento de muestras de orina obtenidas de 210 bovinos hembra criadas de manera extensiva o semiextensiva en la provincia de Oxapampa (Pasco), zona con alta presencia del helecho Pteridium aquilinum y de la enfermedad Hematuria Vesical Enzoótica Bovina (HVEB). El proceso de toma, centrifugado, obtención de sedimento urinario, frotís y fijado de la muestra se realizó en campo, mientras que la tinción con colorante Wright y evaluación microscópica se efectuó en Laboratorio de Histología, Embriología y Patología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la UNMSM. El punto significativo para la detección de animales positivos a la enfermedad fue el hallazgo por evaluación citooncológica urinaria principalmente de células epiteliales atípicas de citoplasma poligonal, basófilo o levemente basófilo con marcado incremento de la relación núcleo/citoplasma a favor del núcleo, membrana nuclear irregular y condensación de cromatina. Lo que manifiesta el hallazgo y relación a HVEB de células tumorales malignas de blastodermia orientada hacia la epitelial. Además, como dato se reporta el hecho de encontrar mayor cantidad de células uroteliales exfoliadas de apariencia normal, y acompañadas de escaso a leve número de eritrocitos maduros en la mayoría de muestras diagnosticadas positivas. Es así que por medio del presente estudio se comprueba que utilizando como método diagnóstico la citooncología urinaria la frecuencia de presentación de HVEB en la población estudiada es de 64 casos (30.47 %), demostrando la utilidad de la evaluación citooncológica urinaria, especialmente para el diagnóstico de la enfermedad en estadios iniciales. El presente trabajo apoya además el reporte de HVEB en nuestro país y la necesidad de determinar un método diagnostico precoz y desarrollable en campo para el monitoreo y control de la enfermedad en nuestro medio. Por lo tanto, la citooncología urinaria podría ser la prueba de ‘’oro’’ estándar para HVEB, necesitando de investigación futura que afine el método y demuestre esta posibilidad diagnóstica. Palabras Clave: Citooncología urinaria, Hematuria Vesical Enzoótica Bovina (HVEB), células atípicas, Bovinos, Pteridium aquilinum(Pa). / A cytooncologic test was performed in order to evaluate tumoral characteristics in the sediment of urine samples obtained from 210 bovine females, extensively or semiextensively bred in the province of Oxapampa (Pasco), area with a high presence of the bracken fern (Pteridium aquilinum) and a high prevalence of the Bovine Enzootic Vesical Haematuria (BEVH) disease. The processes of sample collection, centrifugation, urinary sediment collection, smear and fixation of the sample were performed in the field, while the Wright Test and the microscopic evaluation were done at the Laboratory of Histology, Embryology and Pathology at the School of Veterinary Medicine of the Universidad Nacional Mayor de San Marcos. The significant point in the detection of animals positive to this disease was mostly the finding of epithelial apaatypical cells with basophilic and polygonal cytoplasm. And with significant increasement of the nuclear-cytoplasm ratio favoring the nucleus. As an additional fact, it has been reported that most of the samples diagnosed as positive to the disease showed an increased number of apparently normal exfoliated urothelial cells accompanied by low number of mature erithrocytes. The present study demonstrated that using urinary cytooncology as a diagnostic method, 64 animals (30.47%) of the studied population show to be positive to the BEVH disease, thus demonstrating the usefulness of urinary cytooncologic evaluation, specially for the diagnose of the disease in its initial phases. In addition, the present work supports the BEVH report in our country and the need to determine a precocious and easy to develope “in the field” diagnostic method that may help monitoring and controling the disease in our environment. Therefore, urinary cytooncology could become the “golden” standard test to diagnose BEVH, although further research needs to be done in order to demonstrate the usefulness of this diagnostic tool. Key Words: Urinary Cytooncology, Bovine Enzootic Vesical Haematuria (BEVH), atypical cells, Bovine, Pteridium aquilinum (Pa).

Mycoplasma hyopneumoniae é a bactéria causadora da pneumonia micoplásmica suína, que afeta o rebanho suíno em nível mundial. Durante o processo de infecção, o sistema imune de organismos afetados produz espécies reativas de oxigênio (ERO), conhecidas por causarem uma variedade de lesões celulares, como uma das estratégias para neutralização do patógeno. Embora a presença de enzimas antioxidantes clássicas seja esperada em M. hyopneumoniae, genes importantes relacionados à proteção contra ERO como superóxido-dismutase, catalases e glutationa-peroxidase não foram identificados por homologia na anotação de seqüências genômicas. Entre os poucos genes de M. hyopneumoniae codificando proteínas possivelmente envolvidas na supressão da resposta do hospedeiro através da produção de ERO, foi identificado um codificando uma peroxirredoxina. Análises de seqüência e filogenéticas mostram que a peroxirredoxina de M. hyopneumoniae (MhPrx) está relacionada com a subfamília das peroxirredoxinas 2-Cys atípica, embora ela tenha apenas uma cisteína em sua seqüência. A seqüência de DNA codificadora (CDS) da MhPrx foi clonada e expressa em Escherichia coli para a produção de uma MhPrx recombinante (rMhPrx), a qual foi purificada e usada para a imunização de camundongos para produzir um anti-soro policlonal anti-MhPx. Este anti-soro foi utilizado para investigar extratos protéicos de M. hyopneumoniae e demonstrou a expressão de MhPrx nas três cepas testas (J, 7422 e 7448). A atividade da rMhPrx foi determinada com uso de um sistema de oxidação catalisado por metais, que mostrou que esta enzima pode proteger moléculas de DNA do dano causado por ERO e deve ter uma função essencial durante a infecção. / Mycoplasma hyopneumoniae is the causative agent of the porcine enzootic pneumonia, which affects swineherds worldwide causing heavy economical losses. In the infection process, the host generates reactive oxygen species (ROS) as one of the strategies used to neutralize the pathogen. Although the presence of classical antioxidant enzymes would be expected in M. hyopneumoniae, important genes directly related to protection against ROS, like superoxide-dismutase, catalases and glutathione-peroxidase were not identified by sequence homology in the genome sequence annotation. Among the few identified M. hyopneumoniae genes coding for proteins possibly involved with suppression of the host ROS-mediated response, one coding for a peroxiredoxin was recognized. Sequence and phylogenetic analysis indicate that M. hyopneumoniae peroxiredoxin (MhPrx) is closely related to the atypical 2-Cys peroxiredoxin subfamily, although it has only one cysteine in its sequence. The MhPrx coding DNA sequence was cloned and expressed in Escherichia coli to produce a recombinant MhPrx (rMhPrx), which was purified and used to immunize mice and produce an anti-MhPrx polyclonal antiserum. This antiserum was used to probe M. hyopneumoniae extracts and demonstrated that MhPrx is expressed in all three tested strains (J, 7422 and 7448). A metal catalyzed oxidation system was used to assay the activity of rMhPrx, showing that it can protect DNA from ROSmediated damage and may play an essential role during infection.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-07T19:38:54Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633033 bytes, checksum: c748f1b0f141a1d3290f72efa2a8a458 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-07T19:38:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 633033 bytes, checksum: c748f1b0f141a1d3290f72efa2a8a458 (MD5) Previous issue date: 2002-02-07 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Com o objetivo de avaliar a utilização da técnica da imunoperoxidase como método auxiliar para a detecção de Mycoplasma hyopneumoniae em pulmão de suínos naturalmente infectados, foram colhidos 80 fragmentos de pulmão, sendo 40 de animais provenientes de granjas consideradas negativas e 40 de granjas com diagnóstico positivo para pneumonia enzoótica. Os resultados obtidos com a utilização de soro policlonal específico (IgG de coelho anti- M. hyopneumoniae) demonstraram uma correlação positiva de 77% entre os diagnósticos microscópicos e imunohistoquímicos, enquanto a correlação entre os diagnósticos macroscópicos e imunohistoquímicos foi inferior, equivalendo a 49%. Nas granjas negativas observou-se a presença de discreta imunorreação em 22,5% dos casos, o que poderia indicar a existência de reação cruzada com outros microrganismos. Já nas granjas com diagnóstico positivo para pneumonia enzoótica, a técnica da Peroxidase-anti- Peroxidase (PAP) revelou diferentes graus de intensidade de imunomarcação, variando de discreto até espesso depósito amarronzado no epitélio ou na luz das vias aéreas, ou ainda no interior de macrófagos, com uma relação direta entre a intensidade das lesões morfológicas e da imunomarcação. Verificou-se ainda que a técnica imunohistoquímica possui sensibilidade de 95% e especificidade de 77,5%, podendo a mesma ser recomendada como ferramenta auxiliar, rápida e de baixo custo, para o diagnóstico da pneumonia enzoótica suína em laboratórios de rotina em histopatologia. / The aim of this work is to evaluate the use of the imunoperoxidase technique as a supporting method for the detection of the Mycoplasma hyopneumoniae in the lungs of naturally infected swine. For this purpose, 80 lung fragments were collected - 40 of animals from pig farms considered to be "negative" and 40 of animals from pig farms with positive diagnosis of enzootic pneumonia. The results obtained with the use of specific policlonal serum (rabbit anti M. hyopneumoniae IgG) show a positive correlation at the rate of 77% between the microscopical and imunohistochemical diagnoses, whereas correlation between macroscopical and immunohistochemical diagnoses occured at the lower rate of 49%. In the "negative" farms, discrete immunereaction was observed in 22.5% of cases, which could point to cross reaction with other microorganisms. In the other hand, in the farms with positive diagnosis for enzootic pneumonia, the peroxidase-anti-peroxidase technique (PAP) showed different grades of intensity of immunomarking. It was also observed that the immunohistochemical technique has 95% sensitivity and 77.5% specificity. This would enable this technique to be a recommendable fast and cost-effective supporting tool for the diagnosis of enzootic pneumonia in routine laboratories Histopathology.

A bactéria Mycoplasma hyopneumoniae é o agente etiológico da pneumonia enzoótica suína e se adere às células do epitélio ciliar pulmonar do hospedeiro para a colonização. Essa doença é responsável por perdas econômicas em muitos países devido à morbidade dos rebanhos. A bactéria Mycoplasma flocculare é encontrada principalmente na mucosa traqueal de suínos, como M. hyopneumoniae, mas é uma bactéria comensal. Ambas apresentam similaridades genéticas, como o compartilhamento de 90% das proteínas de superfície preditas e o perfil transcritômico dos genes que codificam adesinas, proteínas que proporcionam a aderência do micro-organismo, altamente semelhante. Contudo, análises genômicas e transcritômicas não foram capazes de explicar a diferença fenotípica entre M. hyopneumoniae e M. flocculare no hospedeiro. Considerando estudos realizados previamente, se hipotetiza que parte dessa diferença ocorra devido a discrepâncias na sequência de aminoácidos de proteínas de superfície ortólogas, uma vez que 85% dos pares de proteínas ortólogas destas espécies apresentam, pelo menos, um domínio diferencial. Tais domínios diferenciais podem determinar variação funcional e/ou variação na resposta imune induzida no suíno. Para caracterizar imunologicamente um par de proteínas ortólogas de superfície de M. hyopneumoniae e M. flocculare, MHP556 e MF306, respectivamente, as versões recombinantes dessas foram expressas em Escherichia coli BL21 pLysE. Os produtos recombinantes, MHP556-GST e MF306-GST, foram purificados e utilizados em ensaios de avaliação de imunogenicidade e antigenicidade. Foram demonstradas a antigenicidade das proteínas nativas MHP556 e MF306, além da imunogenicidade da proteína recombinante MF306-GST. A comparação desses resultados contribuirá para a elucidação da função dessas proteínas de superfície na interação patógeno-hospedeiro e da importância da presença de domínios diferenciais entre proteínas ortólogas na resposta imune desencadeada pelo hospedeiro. / The bacteria Mycoplasma hyopneumoniae is the etiological agent of swine enzootic pneumonia and attaches to the cilliary tracheal cells to colonize the host. This disease is responsible for economic losses in many countries due to the morbidity of pig herds. The bacteria Mycoplasma flocculare is also found mainly in the tracheal mucosal, as M. hyopneumoniae, but it is a commensal species. Both species have genetic similarities as they share 90% of their predicted surface proteins and the transcriptomic profiles of the genes encoding adhesins, proteins that enable the attachment in host tissue, very similar. Yet, genomic and transcriptional analysis does not explain the phenotypic difference between M. hyopneumoniae and M. flocculare within its host. Considering these previous studies, it was hypothesized that the difference in pathogenicity may be due, in part, tothe amino acid sequence of the orthologous surface proteins, once that 85% of all orthologous surface proteins of both species show, at least, one differential domain. These differential domains may trigger functional modifications and/or immunological modifications by the host. To immunologically characterize a pair of orthologous surface proteins MHP556 and MF306, from M. hyopneumoniae and M. flocculare, respectively, recombinant versions were expressed in Escherichia coli BL21 pLysE. The recombinant products, MHP556-GST and MF306-GST, were purified and used in immunological and antigenicity assay. The antigenicity of the native proteins MHP556 and MF306 were established, and the immunogenicity of the recombinant protein MF306-GST as well. The comparison of the results of this study may help to elucidate the different functions of both surface proteins in the host-pathogen interaction and shed light about the importance of the presence of differential domains in orthologous proteins in the host immune response.

Mycoplasma hyopneumoniae é a bactéria causadora da pneumonia micoplásmica suína, que afeta o rebanho suíno em nível mundial. Durante o processo de infecção, o sistema imune de organismos afetados produz espécies reativas de oxigênio (ERO), conhecidas por causarem uma variedade de lesões celulares, como uma das estratégias para neutralização do patógeno. Embora a presença de enzimas antioxidantes clássicas seja esperada em M. hyopneumoniae, genes importantes relacionados à proteção contra ERO como superóxido-dismutase, catalases e glutationa-peroxidase não foram identificados por homologia na anotação de seqüências genômicas. Entre os poucos genes de M. hyopneumoniae codificando proteínas possivelmente envolvidas na supressão da resposta do hospedeiro através da produção de ERO, foi identificado um codificando uma peroxirredoxina. Análises de seqüência e filogenéticas mostram que a peroxirredoxina de M. hyopneumoniae (MhPrx) está relacionada com a subfamília das peroxirredoxinas 2-Cys atípica, embora ela tenha apenas uma cisteína em sua seqüência. A seqüência de DNA codificadora (CDS) da MhPrx foi clonada e expressa em Escherichia coli para a produção de uma MhPrx recombinante (rMhPrx), a qual foi purificada e usada para a imunização de camundongos para produzir um anti-soro policlonal anti-MhPx. Este anti-soro foi utilizado para investigar extratos protéicos de M. hyopneumoniae e demonstrou a expressão de MhPrx nas três cepas testas (J, 7422 e 7448). A atividade da rMhPrx foi determinada com uso de um sistema de oxidação catalisado por metais, que mostrou que esta enzima pode proteger moléculas de DNA do dano causado por ERO e deve ter uma função essencial durante a infecção. / Mycoplasma hyopneumoniae is the causative agent of the porcine enzootic pneumonia, which affects swineherds worldwide causing heavy economical losses. In the infection process, the host generates reactive oxygen species (ROS) as one of the strategies used to neutralize the pathogen. Although the presence of classical antioxidant enzymes would be expected in M. hyopneumoniae, important genes directly related to protection against ROS, like superoxide-dismutase, catalases and glutathione-peroxidase were not identified by sequence homology in the genome sequence annotation. Among the few identified M. hyopneumoniae genes coding for proteins possibly involved with suppression of the host ROS-mediated response, one coding for a peroxiredoxin was recognized. Sequence and phylogenetic analysis indicate that M. hyopneumoniae peroxiredoxin (MhPrx) is closely related to the atypical 2-Cys peroxiredoxin subfamily, although it has only one cysteine in its sequence. The MhPrx coding DNA sequence was cloned and expressed in Escherichia coli to produce a recombinant MhPrx (rMhPrx), which was purified and used to immunize mice and produce an anti-MhPrx polyclonal antiserum. This antiserum was used to probe M. hyopneumoniae extracts and demonstrated that MhPrx is expressed in all three tested strains (J, 7422 and 7448). A metal catalyzed oxidation system was used to assay the activity of rMhPrx, showing that it can protect DNA from ROSmediated damage and may play an essential role during infection.