Orientador: Flávia Lombardi Lopes / Resumo: A meningite se caracteriza pela inflamação da aracnóide, pia-máter e líquor; causando danos às estruturas corticais e subcorticais. As meningites bacterianas estão intimamente relacionadas ao nível de desenvolvimento socioeconômico do país e são consideradas endêmicas no Brasil. Apesar dos esforços para o desenvolvimento de medicamentos e vacinas, a doença ainda possui altos índices de morbidade. Ela ocorre quando bactérias atravessam barreiras de proteção do corpo e alcançam o sistema nervoso central, desencadeando uma resposta imunológica. Sabe-se que durante o curso da doença os níveis de homocisteína do líquor aumentam, promovendo desmielinização e danos neuronais, e que a vitamina B12 é um tratamento utilizado para diminuir danos. Os microRNAs (miRNAs) são instrumentos de resposta fisiológica, tendo sua expressão modificada em diferentes tecidos, em decorrência de diferentes estímulos fisiológicos e patológicos. Estão associados ao controle da expressão de diferentes mediadores inflamatórios e sua ausência é capaz de causar danos severos a resposta imune. Considerando a importância dos miRNAs para regulação de processos imunes o presente estudo visou elucidar os padrões de expressão dos miRNAs durante o processo inflamatório da meningite pneumocócica (MP), bem como observar esses padrões em resposta ao tratamento adjuvante da doença com vitamina B12. Observamos um total de 37 miRNAs diferencialmente expressos, a infecção regulou positivamente 22 deles, e outros 7 negativ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Meningitis is characterized by an arachnoid, pia mater and cerebrospinal fluid inflammation; causing damage to the cortical and subcortical structures. Bacterial meningitis is closely related to the level of socioeconomic development of country and is considered endemic in Brazil. Despite efforts to develop drugs and vaccines, the disease still has high rates of morbidity and mortality. Occurring when bacteria cross body protection barriers and reach the central nervous system, triggering immune response. It is known that during disease course the the levels of homocysteine increase in cerebrospinal fluid, leading to demyelination and neuronal damage, and that vitamin B12 is a treatment used to reduce those damages. MicroRNAs (miRNAs) are instruments of physiological response, having their expression modified in different tissues, due to different physiological and pathological stimuli. They are associated with expression control of different inflammatory mediators and their absence is capable of causing severe damage to the immune response. Considering the importance of miRNAs in regulation of immune processes, the present study aimed to elucidate miRNA expression patterns during the inflammatory process resulting from pneumococcal meningitis (PM), and to observe these patterns in response to adjuvant treatment of vitamin B12 in infected rats. We observed a total of 37 differentially expressed miRNAs; the infection positively regulated 22 and negatively regulated 7 of them, ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

INTRODUÇÃO. Os efeitos da poluição atmosférica sobre a saúde humana são cada vez mais reconhecidos. A exposição ao combustível diesel, que contribui significativamente para a poluição em zonas de tráfego veicular intenso, pode ser ao menos parcialmente, responsável por estes efeitos. Estudos epidemiológicos demonstram maior incidência de pré-eclampsia, prematuridade e baixo peso ao nascer. Maiores taxas de falha de implantação e alterações da morfologia placentária são demonstrados em estudos experimentais. OBJETIVO. Análise morfológica do ovário e do útero de camundongos após exposição crônica ao combustível diesel durante a fase intra-uterina e pós-natal. MÉTODO. Estudo experimental prospectivo com crossover. Camundongos foram expostos durante uma hora a doses de combustão do diesel que correspondem a média diária de material particulado fino (MP2.5) recomendado pela Organização Mundial da Saúde (WHO) e a doses acima da média anual recomendada pela mesma. A dose de exposição a MP2.5 foi abaixo da dose recomendada pela Comissão Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Quatro grupos foram formados: animais expostos a ar filtrado no período intra-uterino e no período pós-natal (CC); animais expostos a diesel apenas no período intra-uterino, sendo que no período pós-natal foram expostos a ar filtrado (EC); animais expostos a ar filtrado no período intra-uterino e a diesel no pós-natal (CE), e animais expostos a diesel nos períodos intra-uterino e pós-natal (EE). A análise morfométrica do ovário e do útero foi realizada para definir a área relativa ocupada por cada tipo de folículo, pelo corpo lúteo e pelo estroma, e a proporção de área ocupada por glândulas, estroma e epitélio no endométrio. RESULTADOS. Uma redução significativa de folículos primordiais foi observada em animais expostos a diesel durante o período intra-uterino (p=0,035) e durante o período pós-natal (p=0,015), assim como em animais expostos a diesel nos dois períodos (p=0.004). Houve redução significativa de folículos primários quando os animais foram expostos no período intra-uterino (p=0.04). Não foram demonstradas alterações significativas no útero. CONCLUSÃO. A exposição a níveis considerados aceitáveis de combustão do diesel é prejudicial ao potencial reprodutivo de camundongos fêmeas, diminuindo sua reserva ovariana ao atingir a maturidade sexual, sugerindo o envolvimento de alterações epigenéticas. Tal efeito aumenta o risco de menopausa precoce. Estes resultados sugerem que diretrizes ambientais sejam revisadas, já que a exposição prejudica gerações futuras, diminuindo a janela reprodutiva, já comprometida pelo desejo de grande parte das mulheres de adiar a maternidade / BACKGROUND. There is growing awareness that ambient air pollution compromises human health. Exposure to diesel exhaust, which significantly contributes to pollution in heavy traffic areas, may be at least partially responsible for the observed effects of pollution on human health. Poor reproductive outcomes, such as preeclampsia, preterm deliveries and low birth weight, are described in epidemiological studies. Moreover, experimental evidence shows increased implantation failure rates and placental morphology alterations in exposed mice. OBJECTIVE. The purpose of this study was to analyse ovarian and uterine morphological changes resulting from chronic intrauterine and postnatal exposure to diesel exhaust in mice. METHODS. A experimental prospective crossover study. Mice were exposed to diesel exhaust with doses that correspond to the daily average PM2.5 levels reported by the World Health Organization (WHO) and above the annual average PM2.5 levels. The diesel exhaust exposure doses were also below daily and annual levels recommended by the National Council of Environment (CONAMA). Four groups were examined: intrauterine and postnatal clean, filtered air exposure; intrauterine exposure to diesel only; postnatal exposure to diesel only; and intrauterine and postnatal exposure to diesel. Morphometric analyses of the ovaries and uterus were performed to define the relative area occupied by follicles, corpus luteum and stroma. These analyses also aimed to determine the proportionate area of glands, the epithelial layer and stroma within the uterine endometrium. RESULTS: A significant reduction in primordial follicles was observed in intra-uterine-exposed animals (p=0.035), those exposed during the postnatal period (p=0.015) and in animals exposed during both phases (p=0.004). Primary follicles were reduced in animals exposed during pregnancy (p=0.04). No significant changes were detected in uterine morphology. CONCLUSIONS: Intrauterine exposure to currently acceptable levels of diesel exhaust compromises the reproductive potential of female mice, diminishing ovarian reserve when sexual maturity is achieved suggesting involvement of epigenetic changes. This effect in turn increases the risk of premature menopause. These findings suggest that environmental guidelines should be reviewed because diesel exposure affects future generations. Premature menopause reduces the span of the reproductive window, which is already shortening due to womens desire to bear children later in life

INTRODUÇÃO. Os efeitos da poluição atmosférica sobre a saúde humana são cada vez mais reconhecidos. A exposição ao combustível diesel, que contribui significativamente para a poluição em zonas de tráfego veicular intenso, pode ser ao menos parcialmente, responsável por estes efeitos. Estudos epidemiológicos demonstram maior incidência de pré-eclampsia, prematuridade e baixo peso ao nascer. Maiores taxas de falha de implantação e alterações da morfologia placentária são demonstrados em estudos experimentais. OBJETIVO. Análise morfológica do ovário e do útero de camundongos após exposição crônica ao combustível diesel durante a fase intra-uterina e pós-natal. MÉTODO. Estudo experimental prospectivo com crossover. Camundongos foram expostos durante uma hora a doses de combustão do diesel que correspondem a média diária de material particulado fino (MP2.5) recomendado pela Organização Mundial da Saúde (WHO) e a doses acima da média anual recomendada pela mesma. A dose de exposição a MP2.5 foi abaixo da dose recomendada pela Comissão Nacional do Meio Ambiente (CONAMA). Quatro grupos foram formados: animais expostos a ar filtrado no período intra-uterino e no período pós-natal (CC); animais expostos a diesel apenas no período intra-uterino, sendo que no período pós-natal foram expostos a ar filtrado (EC); animais expostos a ar filtrado no período intra-uterino e a diesel no pós-natal (CE), e animais expostos a diesel nos períodos intra-uterino e pós-natal (EE). A análise morfométrica do ovário e do útero foi realizada para definir a área relativa ocupada por cada tipo de folículo, pelo corpo lúteo e pelo estroma, e a proporção de área ocupada por glândulas, estroma e epitélio no endométrio. RESULTADOS. Uma redução significativa de folículos primordiais foi observada em animais expostos a diesel durante o período intra-uterino (p=0,035) e durante o período pós-natal (p=0,015), assim como em animais expostos a diesel nos dois períodos (p=0.004). Houve redução significativa de folículos primários quando os animais foram expostos no período intra-uterino (p=0.04). Não foram demonstradas alterações significativas no útero. CONCLUSÃO. A exposição a níveis considerados aceitáveis de combustão do diesel é prejudicial ao potencial reprodutivo de camundongos fêmeas, diminuindo sua reserva ovariana ao atingir a maturidade sexual, sugerindo o envolvimento de alterações epigenéticas. Tal efeito aumenta o risco de menopausa precoce. Estes resultados sugerem que diretrizes ambientais sejam revisadas, já que a exposição prejudica gerações futuras, diminuindo a janela reprodutiva, já comprometida pelo desejo de grande parte das mulheres de adiar a maternidade / BACKGROUND. There is growing awareness that ambient air pollution compromises human health. Exposure to diesel exhaust, which significantly contributes to pollution in heavy traffic areas, may be at least partially responsible for the observed effects of pollution on human health. Poor reproductive outcomes, such as preeclampsia, preterm deliveries and low birth weight, are described in epidemiological studies. Moreover, experimental evidence shows increased implantation failure rates and placental morphology alterations in exposed mice. OBJECTIVE. The purpose of this study was to analyse ovarian and uterine morphological changes resulting from chronic intrauterine and postnatal exposure to diesel exhaust in mice. METHODS. A experimental prospective crossover study. Mice were exposed to diesel exhaust with doses that correspond to the daily average PM2.5 levels reported by the World Health Organization (WHO) and above the annual average PM2.5 levels. The diesel exhaust exposure doses were also below daily and annual levels recommended by the National Council of Environment (CONAMA). Four groups were examined: intrauterine and postnatal clean, filtered air exposure; intrauterine exposure to diesel only; postnatal exposure to diesel only; and intrauterine and postnatal exposure to diesel. Morphometric analyses of the ovaries and uterus were performed to define the relative area occupied by follicles, corpus luteum and stroma. These analyses also aimed to determine the proportionate area of glands, the epithelial layer and stroma within the uterine endometrium. RESULTS: A significant reduction in primordial follicles was observed in intra-uterine-exposed animals (p=0.035), those exposed during the postnatal period (p=0.015) and in animals exposed during both phases (p=0.004). Primary follicles were reduced in animals exposed during pregnancy (p=0.04). No significant changes were detected in uterine morphology. CONCLUSIONS: Intrauterine exposure to currently acceptable levels of diesel exhaust compromises the reproductive potential of female mice, diminishing ovarian reserve when sexual maturity is achieved suggesting involvement of epigenetic changes. This effect in turn increases the risk of premature menopause. These findings suggest that environmental guidelines should be reviewed because diesel exposure affects future generations. Premature menopause reduces the span of the reproductive window, which is already shortening due to womens desire to bear children later in life

O transtorno do espectro do autismo (TEA) é um transtorno do neurodesenvolvimento com apresentação clínica heterogênea. A nova classificação dimensional do DSM-5 permitiu a inclusão de toda a variabilidade fenotípica sob o mesmo guarda-chuva, criando a oportunidade de entender melhor os subgrupos de TEA de acordo com seus mecanismos fisiopatológicos heterogêneos. O objetivo deste estudo foi buscar componentes de vulnerabilidade a partir de fatores de risco (escolaridade materna, classe social, estresse e exposição tóxico ambiental durante a gestação, complicações na gravidez e história psiquiátrica familiar) e caracterizar subgrupos de TEA a partir destes componentes. Para evitar qualquer possível agrupamento baseado em parâmetros fenotípicos estabelecidos, como QI e gravidade, analisamos especificamente um grupo de pacientes homogêneos com TEA grave. A análise de componentes principais (PCA) foi realizada em dados de 68 crianças com TEA entre 3 e 7 anos de idade, e encontramos dois componentes principais: PC1, componente de vulnerabilidade genética e metabólica e PC2 componente de vulnerabilidade psicosocial. Com os escores do PCA, realizamos uma análise de clusters . Os resultados mostraram um cluster representando uma dimensão com maior vulnerabilidade genética, e outro com maior exposição a ambiente desfavorável e estressante durante a gestação. A análise de metiloma foi realizada para validar e explorar melhor a diferença entre os subgrupos. Encontramos 11.879 probes (p < 0.05) diferencialmente metiladas (DMPs). Os sítios CpG das DMPs estavam enriquecidos para regiões de metilação variáveis (VMRs). Sondas hipermetiladas apresentaram taxas mais altas nas características rVarBase associadas a SNPs funcionais, indicando maior risco de doença explicado por variações comuns (SNPs). A análise do módulo funcional dos promotores de genes encontrou diferenças relacionadas à resposta imune, processos metabólicos e estresse. A análise do relógio de metilação do DNA mostrou uma tendência de aumento do DNAm Age para ambos o clusters, mas sem diferença estatística. Por fim, a análise do exoma de 33 pacientes representantes dos dois clusters mostrou como esperado que ambos os subgrupos têm variantes raras deletérias, mas sem diferenças entre eles no número de variantes em genes intolerantes à variância de acordo com o escore RVIS. Nossos resultados mostram que estes grupos apresentam diferenças quanto aos componentes de vulnerabilidade uma relacionada com antecedentes genéticos hereditários comuns e, outra mais relacionada à resposta ambiental ao estresse. Este estudo corrobora que variações comuns e raras são importantes, mas influências ambientais devem ser consideradas para melhor encontrar subgrupos de TEA / Autism spectrum disorder (ASD) is a neurodevelopmental disorder with highly heterogeneous clinical presentation. The new dimensional DSM-5 classification allowed the inclusion of all phenotypic variability under the same umbrella, creating the opportunity to better understand ASD subgroups according to its heterogeneous pathophysiology mechanisms. The aim of this study was to search components of vulnerability from risk factors during gestation (mother schooling, social class, stress and environmental toxic exposition during gestation, pregnancy complications and familial psychiatric history) e characterize ASD subgroups from those components. To avoid any possible grouping based on phenotypic established parameters such as IQ and severity, we analysed a group of homogeneous patients with severe ASD specifically. Principal component analysis (PCA) was performed on data from 68 children with ASD between 3 and 7 years of age, and we found two principal components: PC1, component of genetic and metabolic vulnerability e PC2 component of unfavorable social environment vulnerability. With the PCA scores we performed clustering analysis. The results showed one cluster representing a dimension with stronger genetic vulnerability, and the other with more exposure to unfavorable and stressful environment during gestation. Methylome analysis has been performed to better explore subgroup difference. We found 11.879 (p < 0.05) differentially methylated probes (DMPs). CpG sites from those DMPs were found to be enriched in variable methylated regions (VMRs). The clusters have hypermethylated probes presented higher rates in different rVarBase regulatory regions associated to functional SNPs, indicating they may have different affected regulatory regions and more liability to disease explained by common variations (SNPs). Functional module analysis on gene promoters found differences related to immune response , metabolic processes and stress. DNA methylation clock analysis showed a tendency of higher DNAm Age for both Clusters, but here was no statistical DMAm Age acceleration difference. Lastly exome analysis of 33 patients representing both clusters showed as expected that both subgroups have deleterious rare variants, but without differences between them in the number of variants in genes intolerants to variance according to RVIS score. Our results show that this groups presents differences of vulnerability components, one related to common hereditary genetic antecedents, and another more related to the environmental response to stress. This study corroborates that common and rare variants are important, but environmental influences should be considered to better find subgroups of ASD

Orientador: Doris Hissako Matsushita / Banca: Maria Aparecida Visconti / Banca: Flávia Lombardi Lopes / Banca: Joel Claudio Heimann / Banca: Fernando Yamamoto Chiba / Resumo: Atualmente, está bem estabelecido que o ambiente fetal está ligado à saúde materna, e estímulos ou agressões anormais durante a vida intra-uterina podem resultar em mudanças na fisiologia e metabolismo da prole, aumentando o risco de doenças na vida adulta, este fenômeno é conhecido como programação fetal. Alterações na metilação do DNA e expressão gênica são consideradas mecanismos moleculares responsáveis por esta programação. Estudos anteriores demonstraram que a doença periodontal (DP) materna promove resistência insulínica, aumento nas concentrações plasmáticas de citocinas, redução do conteúdo de GLUT4 e do seu índice de translocação para membrana plasmática em sua prole adulta. E citocinas, como por exemplo, o TNF-α, têm sido relacionadas com a redução da expressão de GLUT4 por meio da ativação do fator de transcrição nuclear κappa B (NF-κB). Além disso, esta citocina pode estimular algumas serinas quinases, incluindo IκB quinase (IKK), c-Jun amino-terminal kinase (JNK) e quinases reguladas por sinais extracelulares (ERKs) que estão envolvidas na resistência insulínica. Tais achados evidenciam a necessidade de realizar mais estudos para verificar os mecanismos envolvidos nestas alterações. Portanto, os objetivos do presente estudo foram avaliar em ratos adultos, proles de ratas com DP: 1) glicemia e insulinemia; 2) expressão do RNAm da proteína transportadora de glicose GLUT4 e do IRS1 em muscular esquelético gastrocnêmio (MG); 3) o grau de metilação do DNA na região p... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: It is well establishedthat the fetal environment is linked to maternal health, and abnormal stimuli or aggressions during intrauterine life can result in changes in the physiology and metabolism of offspring, increasing the risk of disease in adult life, this phenomenon is known as fetal programming. Changes in DNA methylation and gene expression are considered molecular mechanisms responsible for this programming. Previous studies have demonstrated that maternal periodontaldisease (PD) promotes insulin resistance, increased plasma concentrations of cytokines, reduced GLUT4 content and its plasma membrane translocation index in its adult offspring. And cytokines, such as TNF-α, have been linked to reduced GLUT4 expressionthrough the activation of nuclear transcription factor kappa B (NF-κB). In addition, this cytokine can stimulate some serine kinases including IκB kinase (IKK), c-Jun amino-terminal kinase (JNK) and extracellular signal-regulated kinases (ERKs)that are involved in insulin resistance. These findings evidenced the need for further studies to verify the mechanisms involved in these changes. Therefore, the objectives of the present study were to evaluate in adult rats, offspring of rats with PD: 1) birth weight and during the75 days of age;2) glycemia and insulinemia; 3) GLUT4 and IRS1mRNA expression in skeletal muscle gastrocnemius (MG); 4) the degree of DNA methylation in the promoter region of the GLUT4 gene in MG; 5) phosphorylation of JNK, IKKα/β, ERK 1/2, N... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor