Orientador: Mary Massumi Itoyama / Banca: Satiko Nanya / Banca: Maria Aparecida Marin Morales / Resumo: Os aspectos da espermatogênese e do comportamento nucleolar foram analisados em Brachymetra albinerva, Cylindrostethus palmaris, Halobatopsis platensis, Limnogonus aduncus (Gerridae), Martarega sp. (Notonectidae), Rhagovelia whitei e Rhagovelia sp. (Veliidae). Os testículos são arredondados (Veliidae), alongados (Gerridae) ou espiralados (Notonectidae) e apresentam membrana transparente recobrindo-os. O complemento cromossômico encontrado foi de 2n = 23 (22A + X0, L. aduncus e R. sp.); 25 (24A + X0, B. albinerva e H. platensis); 26 (22A + 2m + XY, Martarega sp.); 29 (28A + X0, C. palmaris) ou 39 (38A + X0, R. whitei) cromossomos, sendo que a única espécie com sistema cromossômico do sexo diferente foi M. sp., que apresentou sistema XY, além de ser, também, a única espécie com m-cromossomos. O comportamento meiótico de todas as espécies foi semelhante, isto é, apresentaram: cromossomos holocêntricos, material heteropicnótico na prófase; quiasmas intersticiais e/ou terminais; primeira divisão reducional para os autossomos e o inverso para os cromossomos sexuais. A única diferença observada foi com relação ao tamanho extremamente maior das células de M. sp., em todas as fases da espermatogênese. Com relação ao comportamento nucleolar as espécies não apresentaram diferenças, somente M. sp. que possui nucléolos maiores que as demais espécies. A única espécie na qual foi possível identificar com clareza a região da RON foi L. aduncus, na região terminal de um autossomo. Confirmou-se, também, através da espécie L. aduncus, que as associações teloméricas não ocorrem ao acaso. Nas demais espécies a marcação da RON foi bastante discreta, não sendo possível afirmar com clareza onde ela está localizada. / Abstract: The aspects of spermatogenesis and nucleolar behaviour were analyzed in Brachymetra albinerva, Cylindrostethus palmaris, Halobatopsis platensis, Limnogonus aduncus (Gerridae), Martarega sp. (Notonectidae), Rhagovelia whitei and Rhagovelia sp. (Veliidae). The testicles are rounded (Veliidae), elongated (Gerridae) or spiral (Notonectidae) and have a transparent membrane covering them. The complement chromosome was 2n = 23 (22A + X0, L. aduncus and R. sp.), 25 (24A + X0, B. albinerva and H. platensis), 26 (22A + 2m + XY, Martarega sp.), 29 (28A + X0, C. palmaris) or 39 (38A + X0, R. whitei) chromosomes, and the only specie with different sex chromosome system was M. sp., which presented XY system and m-chromosomes. The meiotic behavior of all species was similar: holocentric chromosomes, heteropicnotic material at prophase; chiasmas interstitial and/or terminal; first reductional division for the autosomes and the reverse for the sex chromosomes. The only difference observed was related to the very largest size of the cells M. sp. in all stages of spermatogenesis. With regard to the nucleolar behavior, the species did not show differences, only M. sp. which has nucleoli larger than the other species. The only species in which it was clearly possible to identify the region of NOR was L. aduncus, in the region of a terminal autosome. It was also confirmed that the telomeric associations do not occur at random. In other species the marking was very discreet, no one can clearly say where NOR is located. / Mestre

Orientador: Mary Massumi Itoyama / Banca: Ester Tartarotti / Banca: Maria Aparecida Marin Morales / Resumo: Clicar acesso eletrônico abaixo / Abstract: Click electronic access below / Mestre

Orientador: Eliana Morielle-Versute / Banca: Shirlei Maria Recco-Pimentel / Banca: Cleida Aparecida de Oliveira / Banca: Carlos Alberto Vicentini / Banca: Isabel Cristina Cherici Camargo / Resumo: Embora o processo de reprodução tenha sido objeto de estudo em muitos mamíferos, relativamente pouca atenção tem sido dada a esse estudo em morcegos, apesar dessa ser uma grande e diversa classe de organismos, que apresenta diferentes estratégias reprodutivas para ajustar esses animais às várias condições ecológicas e comportamentais as quais estão submetidos. Da mesma forma, em geral todas as observações sobre o ciclo nucleolar foram feitas a partir da análise de células mitóticas. Assim, o intuito do presente estudo foi analisar características reprodutivas e do ciclo nucleolar meiótico de espécies de morcegos Neotropicais. No epitélio seminífero, três tipos de espermatogônias foram reconhecidos: Ad, Ap e B. Essas após entrarem em meiose, passam por duas divisões celulares e formam espermátides haplóides, que sofrem diferenciação, compactando seu DNA, alongando seu núcleo e formando o flagelo e acrossomo, num processo que, em microscopia eletrônica de transmissão, pode ser dividido em doze fases. Observamos que o processo de espermiogênese ocorre de forma semelhante em Platyrrhinus lineatus, Molossus molossus e Myotis nigricans e que os espermatozóides de P. lineatus e M. molossus apresentam semelhanças, como o formato mais alongado da cabeça, a presença do perforatorium e espessamentos nas fibras densas externas 1, 5 e 6. Por outro lado, M. nigricans apresenta a ausência de perforatorium e espessamentos nas fibras axilares 1, 5, 6 e 9. Comparando os padrões reprodutivos de Artibeus planirostris e M. nigricans, observamos que, apesar de ambos serem espécies Neotropicais, eles diferem acentuadamente em sua reprodução. Artibeus planirostris apresenta um perfil de espermatogênese ativo durante todo o ano, possivelmente apresentando um padrão poliéstrico... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Although the process of reproduction has been studied in many mammals, relatively little attention has been given to this study in bats, this large and diverse order of organisms, which presents different reproductive strategies to adjust the animals to various environmental conditions and behaviors that they are inserted. Likewise, in general all studies on the nucleolar cycle were made based on the analysis of mitotic cells. Thus, the purpose of this study was to analyze the reproductive characteristics and the nucleolar meiotic cycle of Neotropical bat species. In the seminiferous epithelium, three types of spermatogonia were recognized: Ad, Ap and B. These, after enter in meiosis, undergo two cell divisions to form haploid spermatids, which undergo differentiation, compressing their DNA, stretching its nucleus and forming the acrosome and flagellum, a process that, in transmission electron microscopy, can be divided into twelve stages. We note that the process of spermiogenesis occured similarly in Platyrrhinus lineatus, Molossus molossus and Myotis nigricans and that the spermatozoon of P. lineatus and M. molossus have similarities, as the more elongated shape of the head, the presence of perforatorium and thickening in the outer dense fibers 1, 5 and 6. On the other hand, M. nigricans did not present the perforatorium and the thickening was presented in the fibers 1, 5, 6 and 9. Comparing the reproductive patterns of Artibeus planirostris and M. nigricans, we observed that, although both are Neotropical species, they differ markedly in their reproduction. Artibeus planirostris presents an active pattern of spermatogenesis throughout the year, possibly exhibiting a polyestral bimodal pattern, with two pronounced peaks of spermatogenic production, one in September and another in February. On the other... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Alexandre Ninhaus Silveira / Banca: Danilo Pedro Streit Júnior / Banca: José Augusto Senhorini / Resumo: O pintado Pseudoplatystoma corruscans é uma espécie com ampla distribuição na América do Sul e de grande valor comercial. P. corruscans necessita migrar para reproduzir e, atualmente, apresenta seus estoques comprometidos devido às alterações dos rios, construção de barragens e pela sobre-pesca. Os objetivos são analisar as características espermáticas e desenvolver um método de congelamento para o sêmen de P. corruscans. Para isso, catorze machos maduros de pintado foram selecionados e induzidos hormonalmente à espermiação. Foram avaliadas as características seminais do sêmen fresco (cor, concentração espermática, motilidade subjetiva). Para o sêmen descongelado foi utilizado o sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analisis), onde se fez a verificação da motilidade seminal. Para o desenvolvimento dos protocolos de criopreservação, utilizou-se uma solução diluidora composta de glucose (5,0g), gema de ovo (10%), crioprotetor (DMSO e DMA a 8% e 10%) e água destilada (a.d.q.s). O material espermático foi coletado em dois locais, na Estação de Hidrobiologia e Aquicultura da Usina Hidroelétrica de Jupiá, Castilho, SP, onde as análises do sêmen fresco apresentaram sêmen de cor branco, muito diluído com pouca viscosidade e um volume seminal 4,6±1,5 (mL); a motilidade total espermática média foi de 92,3±9,7%; a concentração espermática média de 85,7 x 10 6 ± 35,49 sptz/mL; e um tempo de ativação de 35 segundos. O material espermático coletado no CEPTA-ICMBIO apresentou uma cor branca com alta viscosidade e um volume seminal de 7±2,3 (mL); foi encontrada uma concentração espermática média de 111,458 x 10 6 ±6,71 espermatozoides/mL; uma motilidade total espermática média de 92,4±5,2%; e um tempo médio de ativação de 32,33±4,0 segundos. As análises da motilidade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: he pintado Pseudoplatystoma corruscans is a species with wide distribution in South America and of great commercial value. P. corruscans need to migrate to reproduce, and currently has compromised their inventories due to changes in rivers, dams and overfishing. The goal, analyze the sperm characteristics and develop a method for freezing semen of P. corruscans. For this, fourteen of mature males were selected and painted to hormonally induced spermiation. We evaluated the seminal characteristics of fresh semen (color, sperm concentration, motility subjective). The thawed semen was used CASA system (Computer Assisted Sperm Analysis), where he made the seminal verification motility. For the development of cryopreservation protocols, we used a diluting solution consisting of glucose (5.0 g), egg yolk (10%), cryoprotectant (DMSO and DMA 8% and 10%) and distilled water (adqs). Spermatic material was collected at two sites in Hydrobiology and Aquaculture Station Hydroeletric Jupiá, Castilho, BC, where the fresh semen analysis showed semen color white, diluted with very little viscosity and a seminal volume 4.6 ± 1.5 (ml), sperm motility overall average was 92.3 ± 9.7%, the average sperm concentration of 85.7 ± 35.49 x 106 SPTZ / mL, and an activation time of 35 seconds. The material collected in the spermatic CEPTA-ICMBIO had a white color and light brown with high viscosity and a seminal volume of 7 ± 2.3 (ml), sperm concentration was found an average of 111.458 ± 6.71 x 106 sperm / mL; one sperm motility overall average of 92.4 ± 5.2%, and an average time of activation of 32.33 ± 4.0 seconds. Analysis of the motility after thawing showed a decrease in sperm motility by prior activation due to high level of urine in fish. And when you compare the two treatments with cryoprotectants DMSO and DMA were no... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Este trabalho caracteriza os efeitos das condições reais de exposição ao material particulado urbano na espermatogênese por meio de análises histológicas de testículos de duas gerações de camundongos BALB/c durante o período gestacional, pósgestacional ou em ambos os momentos combinados. A geração parental foi exposta à poluição do ar em câmaras com ou sem filtros para PM2,5 (câmaras filtrada e não filtrada, respectivamente) por 4 meses, formando dois grupos: não exposto; e exposto. Estes animais foram acasalados e a freqüência do plug vaginal apresentou tendência de queda nas fêmeas expostas (p>0,05). O número de fêmeas prenhes também foi reduzido (p=0,007) e o número de nativivos foi menor na câmara não filtrada (186) quando comparada com a filtrada (268), contudo, o número de animais por ninhada não foi alterado (p>0,05). Após o acasalamento os machos foram eutanasiados, seus testículos pesados, fixados em solução de Bouin ou paraformaldeído 4% e corados com HE, PCNA, Ki67 ou TUNEL. Metade dos animais produzidos na primeira geração, constituída de animais de 1 dia de vida, foi transferida de uma câmara para outra formando os grupos pré-natal e pós-natal. Os animais remanescentes das câmaras filtrada e não filtrada constituíram os grupos não exposto e pré+pós-natal, respectivamente. Após 90 dias, os animais da primeira geração foram eutanasiados e seus testículos foram retirados, pesados, fixados e corados da mesma forma que sua geração parental. Os animais expostos ao PM2,5 da geração parental apresentaram aumento do peso dos testículos (p=0,002), dos epidídimos (p<0,001) e do peso relativo testículo/corpo (p=0,003), epidídimo/corpo (p=0,001). Não houve alteração no número de células germinativas e somáticas e nem na proliferação celular (p>0,05). A apoptose pela coloração de HE foi reduzida no estádio IV (p=0,046) e aumentada no estádio VIII (p=0,019) da espermatogênese. Pela técnica de TUNEL os estádios IV (p=0,017), V (p=0,035) e VIII (p=0,024) mostraram apoptose menor nos animais do grupo exposto. O estádio IV foi identificado como o de maior apoptose espontânea nas duas técnicas empregadas, HE (p<0,001); e TUNEL (p<0,001), entre os animais não expostos. O ciclo do epitélio seminífero foi alterado com freqüência reduzida do estádio IV entre os animais expostos (p=0,005). Os animais da primeira geração expostos no período pré-natal apresentaram redução de peso corpóreo (p<0,001) e dos testículos (p=0,012), bem como, aumento do peso relativo testículos/corpo (p=0,013). O número de células somáticas não foi alterado, mas o de espermatócitos nos grupos pós-natal (p=0,011) e pré+pós-natal foi aumentado (p=0,035) enquanto nos grupos pré-natal e pós-natal houve redução no número de espermátides alongadas (p<0,001). Não houve diferença significativa na taxa de proliferação, apoptose e freqüência dos estádios do ciclo do epitélio seminífero entre os grupos de exposição (p>0,05). O estádio IV mostrou-se o mais sensível para a ocorrência de apoptose espontânea nas duas técnicas empregadas: HE (p<0,001); e TUNEL (p<0,001). A freqüência normal dos estádios entre os animais não expostos mostrou que os estádios finais são os mais freqüentes (VI, VIII e VII, nesta ordem) e os iniciais os menos freqüentes (II e I, nesta ordem) para ambas as gerações. Estes resultados fornecem dados que sugerem que o PM2.5 da poluição atmosférica urbana é capaz de alterar o sistema reprodutivo masculino e a espermatogênese não dependendo do período da vida (durante ou após a gestação) em que os animais são expostos. / The present paper describes the effects of real exposure to urban PM2.5 on spermatogenesis by histological analysis of testes of mice (BALB/c) from two generations during fetal or postnatal phases of development and of mice exposed in both phases of development. Parental generations (BALB/c mice) were exposed to air pollution in chambers with or without filters for PM2.5 for 4 months (filtered and non-filtered chambers, respectively), forming two groups, namely non-exposed and exposed. These animals were mated and a frequency of decrease on vaginal plug in the exposed females was observed (p>0.05). The number of pregnant females was reduced as well (p=0.007) and the number of born alive decreased in the non-filtered chamber (186) when compared to the filtered chamber (268); however, the litter size was not altered (p>0.05). After mating, the male were killed, their testes were weighed and fixed in Bouins solution or 4% paraformaldehyde and stained in H&E, PCNA, Ki67 or TUNEL. Half of 1-day old offspring was crossed over between chambers forming the prenatal and postnatal groups; remaining offspring from filtered and non-filtered chambers comprised the non-exposed and pre+postnatally exposed groups, respectively. After 90 days, the animals from first generation were killed and their testes were removed, weighed, fixed and stained like the parental generation. The animals exposed to PM2.5 from the parental generation showed increased testis weight (p=0.002), epididymis weight (p<0.001), relative testis weight (p=0.003), and relative epididymis weight (p=0.001). The germ and somatic cells number was not reduced, and neither was cell proliferation (p>0.05). The apoptosis labeled by H&E was reduced in stage IV (p=0.046) and increased in stage VIII (p=0.019) of spermatogenesis. By using the TUNEL technique, stages IV (p=0.017), V (p=0.035) and VIII (p=0.024) showed fewer apoptosis in the exposed animal group. Stage IV was identified as the most spontaneous apoptosis in both methods: HE (p<0.001) and TUNEL (p<0.001), among the non-exposed animals. The cycle of the seminiferous epithelium was altered with reduced frequency of stage IV between the exposed animals (p=0.005). The animals from the first generation exposed during the prenatal period had a reduced body (p<0.001) and testis weight (p=0.012) and an increased relative testis weight (p=0.013). Differences in germ cell proliferation, apoptosis, and staging were not significantly different among treatment groups (p>0.05). Nevertheless, germ cell populations of post- (p=0.011) and pre+postnatally (p=0.035) PM-exposed animals contained an increased percentage of spermatocytes, while pre- and postnatal groups (p<0.001) had a reduced number of elongated spermatids. Stage IV was shown to be the most sensitive for the occurrence of spontaneous apoptosis in both methods used: H&E (p<0.001); and TUNEL (p<0.001). The normal frequency of the stages between non-exposed animals showed that the final stages are more frequent (VI, VIII e VII) and the beginning stages less frequent (II e I) to both generations. These results suggest that PM2.5 from urban air pollution is capable of altering the male reproductive system and spermatogenesis independently of the period of life when the animals are exposed to it (during or after pregnancy).

Neste estudo foram investigados os efeitos da inalação crônica de cocaína crack na espermatogênese de camundongos púberes e maduros. Camundongos Balb/c machos de duas diferentes idades, jovem e adulta (n=20), foram expostos à fumaça de 5g de cocaína crack em uma câmara de inalação, 5 dias por semana, durante 2 meses. Animais controle (n=10) foram mantidos em biotério durante o período de experimentação. Análises morfométricas quantitativas de cortes histológicos de testículos foram feitas em microscopia óptica. A qualidade da espermatogênese foi avaliada durante a fase VII de maturação do epitélio seminífero, através da quantificação dos tipos celulares normais e degenerados presentes nos espaços intra e intertubular (células germinativas, células de Sertoli e células de Leydig). As diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05. O número de túbulos seminíferos em fase VII por testículo mostrou significante redução (p=0,023) em animais jovens expostos. Houve redução significativa observada no número de células de Sertoli (p=0,000) e espermátides alongadas (p=0,005) de animais jovens expostos. A degeneração celular é aumentada em todos os grupos expostos, com maior severidade no grupo jovem (p=0,000). A inalação de fumaça de cocaína crack induz a alterações na espermatogênese, sendo sua toxicidade maior em animais jovens expostos durante a fase de maturação gonadal . Estes achados são de interesse na saúde pública e mais investigações devem ser feitas focando efeitos similares em homens. / In the present study, the effects of chronic inhalation of crack cocaine on the spermatogenesis of pubertal and mature mice were investigated. Balb/c mice of two different ages, young and adult (n=20), were exposed to the smoke of 5g of crack in an inhalation chamber for 5 days a week during 2 months. Correspondents control animals (n=10) were kept in animal house during experimentation. Morphological quantitative analyses of testis were made in optical microscope. The spermatogenesis was evaluated during phase VII of maturation of the seminiferous epithelium. The number of spermatogenesis cell types (germ cells and Sertoli cells), the germ cell degenerations and the intertubular Leydig cells population was scored. Differences were considered significant when p<0.05. The number of tubular phase VII per testis showed significant (p= 0,023) reduction in young exposed animals. Significant reductions (p=0,000) were observed in Sertoli cells and spermatids elongated (p=0,005) in young intoxicated animals. Apoptosis is also increased in all intoxicated groups being more severe in young groups (p=0,000). Inhalation of crack cocaine smoke induced spermatogenesis disruption of chronic exposed mice. Crack toxicity was more severe in pubertal mice when sexual gonad undergoes maturation. We think that our findings should be of public health concern and that further investigations focusing similar effects on human males are warranted.

O objetivo, deste estudo foi investigar o comportamento dos hormônios esteróides 17β-Estradiol (E2), 17α-hidroxiprogesterona (17α-OHP), Testosterona (T) e 11-Ketotestosterona (11-KT), em piracanjuba Brycon orbignyanus de diferentes sexos e idades, na estação reprodutiva, e nas fêmeas submetidas à reprodução induzida. Os animais utilizados no trabalho, eram criados em piscicultura comercial, mantidos em 3 viveiros, separados por lotes de diferentes idades. A coleta dos animais, consistiu de quatro machos e cinco fêmeas (48 meses), identificados através do dimorfismo sexual da espécie, e as demais idades, (12 e 24 meses), coletaram-se, 20 peixes de cada idade, para identificação do sexo através de histologia. Já o experimento de caracterização dos esteróides sexuais na reprodução induzida, foram coletadas cinco fêmeas, selecionadas através das características com: abdome abaulado, papila urogenital, saliente e avermelhada. Após captura, os peixes foram transportados ao laboratório, onde houve coleta de sangue, para quantificação do perfil plasmático de E2, 17α-OHP, T e 11-KT. Posteriormente, os animais foram abatidos e suas gônadas coletadas e fixadas, a fim de que fosse realizada análise histológica para identificação do sexo. Na reprodução induzida, foi coletado sangue em dois momentos: pré-indução (PI) e pós-extrusão (PE). O nível plasmático de E2 nos machos de 12 meses destaca sua ação no processo de proliferação e renovação das espermatogônia observado em machos imaturos. Nas fêmeas o E2 apresentou os maiores níveis (P<0,05) nos animais de 48 meses, confirmando assim, sua principal função na estimulação do processo de vitelogênese, e maturação final do oócito. Quanto aos andrógenos T e 11-KT, os maiores níveis (p<0,05) foram observados nos peixes adultos (48 meses), permitindo afirmar que estes atuam como feedback negativo, do FSH e feedback positivo do LH, fundamental no processo de maturação final e liberação dos gametas, além de regular o comportamento reprodutivo. O resultado da 17α-OHP, sugere que, nas idades estudadas, é indispensável por participar como precursor dos principais esteróides (T, E2 e 11-KT), além da 17α,20β dihydroxy-4-pregnen-3-one (17α,20β-DHP), essencial no estágio final de maturação, e desova na reprodução induzida. / The objective of this study was to investigate the physiological behavior of steroid hormones 17β-Estradiol (E2), 17α-hydroxyprogesterone (17α-OHP), testosterone (T) and 11-Ketotestosterone (11-KT) in Brycon orbignyanus with different sex and ages on the reproductive season and in females submitted to induced reproduction. The animals used in the study were kept in three ponds on a commercial fish farming, separated by lots with different ages. The sampling of animals consisted of the collection of four males and five females (48 months) identified by the sexual dimorphism of the specie. In the other groups (12 and 24 months), 20 fish of each age were collected for identification of sex through histology. In the experiment with characterization of the sexual steroids in the induced reproduction, were collected five females selected through the following characteristics: bulging abdomen and prominent reddish genital papilla. After capture, the fish were transported to the laboratory, where blood was collected for quantification of the plasma profile of E2, 17α-OHP, T and 11-KT Subsequently, the animals were slaughtered and their gonads were collected and fixed for histological analysis. In the induced females, blood was collected at two moments: pre-induction (PI) and post-extrusion (PE). The plasma profile of E2 is fundamental in immature males, highlighting its action in the process of proliferation and renewal of spermatogonia, observed in males of 12 months. In females E2 presented the highest levels (P <0.05) in animals at 48 months, thus confirming its main function in the stimulation of the vitellogenesis process and final oocyte maturation. The highest levels (p <0.05) of T and 11-KT androgens were observed in adult fish (48 months), allowing to affirm that they are acting as FSH negative feedback and LH positive feedback, fundamental in the final maturation and release of the gametes, besides regulating the reproductive behavior of the fish. The results of 17α-OHP suggest this hormon is fundamental in the studied ages because it is a precursor of the main steroids (T, E2 and 11-KT) and 17α, 20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one (17α, 20β-DHP), essential in the final stage of maturation and spawning in induced reproduction.

A espécie em estudo (Brycon orbignyanus) vem apresentando um declínio populacional importante nos últimos anos em função de interferências antrópicas. Por este motivo, populações naturais na bacia do rio Uruguai são praticamente inexistentes, e os estoques mantidos em cativeiro apresentam razões sexuais desproporcionais e perdas importantes de variabilidade genética, o que prejudica o uso desta espécie em programas de conservação. Esta tese tem como objetivo principal avaliar parâmetros populacionais e reprodutivos de Brycon orbignyanus sob condições de cativeiro visando a aplicabilidade deste conhecimento em programas de conservação. Com isso, objetivou-se no primeiro experimento avaliar as flutuações na razão sexual ao longo do desenvolvimento ontogenético e os diferentes padrões morfológicos de crescimento entre os sexos. Quinhentos exemplares foram amostrados de uma piscicultura comercial e os dados biométricos foram registrados para a realização de uma regressão linear entre peso e comprimento. A partir do teste Qui-Quadrado (χ²) foi possível observar que a razão sexual apresentou desproporções nas classes de comprimento superiores. Os machos e fêmeas apresentaram crescimento alométrico positivo (b=3,35 e b=3,44), enquanto indivíduos sexualmente indiferenciados apresentaram alometria negativa (b=2,96) O objetivo do segundo estudo foi descrever os processos de diferenciação sexual, afim de definir o período termossensível. Após eutanásia dos animais, as gônadas foram coletadas e fixadas em solução formaldeído tamponado 4%. Os cortes seriados (3μm) foram corados com Azul de Toluidina e analisados por microscopia de luz. Os primeiros sinais de diferenciação sexual foram observados apenas aos 323 dias após a fertilização (DAF) e, aos 730 DAF todos os indivíduos já estavam diferenciados sexualmente. O objetivo do terceiro estudo foi descrever o ciclo reprodutivo de machos de B. orbignyanus, a fim de se estabelecer uma escala de maturação para machos desta espécie. Para isto, exemplares da espécie foram coletados periodicamente em uma estação de piscicultura comercial. Assim como no experimento anterior, as gônadas foram coletadas e fixadas para análise histológica. As análises das imagens foram obtidas através de microscópio óptico e a descrição das fases reprodutivas seguiu recomendações de Brown-Peterson et al. (2011). Foram estabelecidas 5 fases reprodutivas de acordo com as características macroscópicas dos testículos, presença e distribuição das células espermatogênicas e variações no índice gonadossomático. Os primeiros indivíduos aptos à reprodução foram observados aos 435 DAF. / The species under study (Brycon orbignyanus) has undergone a important population decline in the last years due to anthropic interferences. For this reason, natural populations in the Uruguay River basin are practically non-existent, and stocks kept in captivity suffer from disproportionate sex ratios, and significant losses of genetic variability, impairing the use of this species in conservation programs. The main objective of this thesis is to evaluate the population and reproductive parameters of Brycon orbignyanus under captive conditions aiming the applicability of this knowledge in conservation programs. Thus, the objective of the first experiment was to evaluate the fluctuations in sexual ratio along the ontogenetic development and the different morphological patterns of growth between the sexes. Five hundred specimens were sampled from commercial fish farming and biometric data were recorded for a linear regression between weight and length. From the chi-square test (χ²) it was possible to observe that the sex ratio showed disproportions in the upper length classes. Males and females showed positive allometric growth (b = 3.35 and b = 3.44), while sexually undifferentiated individuals showed negative allometry (b = 2.96). The objective of the second experiment was describe the processes of sexual differentiation, in order to define the thermosensitive period After euthanasia of the animals, the gonads were collected and fixed in 4% buffered formaldehyde solution. Serial sections (3 μm) were stained with Toluidine Blue and analyzed by light microscopy. The first signs of sexual differentiation were observed only at 323 days after fertilization (DAF), and at 730 DAF all individuals were already sexually differentiated. The objective of the third experiment was to describe the reproductive cycle of B. orbignyanus males, in order to establish a maturation scale for males of this species. For this, specimens were collected periodically in a commercial fish farm. As in the previous experiment, the gonads were collected and fixed for histological analysis. The images were obtained through an optical microscope and analyzed according to the description of the reproductive phases suggested by Brown-Peterson et al. (2011). Five reproductive phases were established according to macroscopic characteristics of the testes, presence and distribution of spermatogenic cells and variations in the gonadosomatic index. The first individuals able to reproduce were observed at 435 DAF.

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:57:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 camila_ machado.pdf: 1503244 bytes, checksum: 361dda1eae6076e04495b3c6a4455f6e (MD5) Previous issue date: 2016-03-14 / The triclosan (TCS) is a bactericidal agent widely used in personal hygiene products, in the context of odontology, this substance has been showing itself efficient in reducing the dental plaque and gingivitis, besides controlling the progression of periodontal disease. However, it's questionable the real benefits of using the TCS in large scale in different products, once this compound has been included on the list of endocrine disrupters. The growing observation of the prevalence of environmental contaminant with properties for the endocrine disrupting has been generating a considerable debate between the scientists, regulatory agencies and general public, about the potential risks which these substances represent to the man's and animal's productive health. Many of these compounds are present in our daily routine. The objective of this study was to evaluate the effects resulted from the exposure to TCS bactericidal, during pregnancy and lactation of mother rats, on the physical development, initial sexual and testicular function of the male son on the following phase of the development: puberty and sexual maturity. For this, 16 rats Wistarprenhes were used, separated in four experimental groups, with 4 animals each one: GI- received corn oil daily by gavage; GII - received TCS, at a dose of 75 mg/kg/day. GIII- received TCS, at the dose of 150 mg/kg/day and GIV - received TCS, at the dose 300 mg/kg/day. The rats where weighed in alternate days throughout the experimental period, to the adjustment of the dose and monitored about the birth of the offspring. At birth, the offspring was weighed and evaluated about the initial physical development: age of the ears' detachment, hair onset, and eruption of incisors and eyes opening. The male offspring were kept and monitored about the external physical parameter of initial sexual development (descended testicles age and prepuce separation). When they're 60 (puberty) days and 90 (sexual maturity) years old, they were weighed and sacrificed to the organs collecting and weighing and histological analysis of the spermatogenesis stages and Sertoli cells counting. The results showed that the gain of body weight of the female rats during the pregnancy was similar to the experimental groups. However, there was a body weight-loss in the end of the experimental period, of the rats of group GIV in comparison to 14 group GI. The pregnancy average time and size of the offspring were similar between the groups. The average weigh of the offspring treated with TCS, in different doses was smaller (p<0,05), in comparison to group GI. The initial physical development and the descended testiscles were similar between the experimental groups. The offspring exposed to TCS, during pregnancy and lactation, it was observed a delay (days) on the prepucial separation. In puberty (60 days), it was observed a meaningful weight-loss of the seminal gland on groups GIII and GIV, in comparison to group GI. When they were 90 days old, it was observed liver weight-loss and a weight gain of the prostate of the animals of group GIV, in comparison to the animals of group GI. The analysis of the stages of the seminiferous epithelium cycle of the 60 days animals showed an increase of the stages I-VI on the animals treated with TCS 300mg/kg/day in comparison to group GI (p<0,01). The 90 days animals showed an increase of the stages VII-VIII, IX-XIII and decrease on the frequency of the stage XIV of the animal spermatogenesis treated with different doses of TCS when compared to group GI (p<0,01). There was no difference on the number counting of Sertoli cells between the animals of the different experimental groups. We concluded that the maternal exposition to TCS during the gestation period and lactation causes on the male offspring, intrauterine development restriction, delay on the puberty installation, change the weight of the seminal gland in animals at 60 days, as well, changes in liver weight and prostate in animals with 90 days, and disrupting the seminiferous epithelial cycle in both age. / O triclosan (TCS) é um agente bactericida amplamente utilizado em produtos de higiene pessoal. No contexto da odontologia, esta substância tem se mostrado eficaz em reduzir a placa dentária e gengivite, além de controlar a progressão da doença periodontal crônica. Entretanto, questiona-se o real benefício da utilização em larga escala do TCS em diferentes produtos, uma vez que este composto tem sido incluído na lista dos desreguladores endócrinos (DE). A crescente observação da prevalência de contaminantes ambientais com propriedades para a desregulação endócrina tem gerado considerável debate entre os cientistas, agências regulatórias e público em geral, sobre os potenciais riscos que estas substâncias representam para a saúde reprodutiva do homem e dos animais e muitos destes compostos estão presentes em nosso cotidiano. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos decorrentes da exposição ao TCS, durante a prenhez e lactação das ratas mães, no desenvolvimento físico, sexual inicial e função testicular da prole masculina na puberdade e vida adulta. Para tanto, foram utilizadas 16 ratas Wistar prenhes separadas em quatro grupos experimentais, com 4 animais em cada: GI- receberam óleo de milho diariamente por gavage; GII - receberam TCS, na dose de 75 mg/kg/dia; GIII- receberam TCS, na dose de 150 mg/kg/dia e GIV- receberam TCS, na dose de 300 mg/kg/dia. As ratas foram pesadas em dias alternados ao longo de todo o período experimental, para ajuste da dose, e monitoradas quanto ao nascimento dos filhotes. Ao nascimento, a ninhada foi pesada e avaliada quanto ao desenvolvimento físico inicial: idades de descolamento das orelhas, nascimento de pêlos, erupção dos incisivos e abertura dos olhos. Os filhotes machos foram mantidos e monitorados quanto aos parâmetros físicos externos do desenvolvimento sexual inicial (idades da descida testicular e separação prepucial). Aos 60 dias de idade (puberdade) e 90 dias de idade (maturidade sexual), foram pesados e sacrificados para a coleta e pesagem de órgãos e análise histológica dos estágios da espermatogênese e contagem de células de Sertoli. Os resultados indicaram que o ganho de peso corporal das ratas ao longo da gestação foi semelhante entre os grupos experimentais. Entretanto, houve diminuição do peso corporal, ao final do período experimental, das ratas do grupo GIV, 12 quando comparado ao grupo GI. O tempo médio da gestação e tamanho da ninhada foi semelhante entre os grupos. O peso médio das ninhadas das ratas tratadas com TCS, nas diferentes doses, foi menor (p<0,05), quando comparado ao grupo GI. O desenvolvimento físico inicial e as idades de descida testicular foram semelhantes entre os grupos experimentais. Na prole exposta ao TCS, durante a gestação e lactação, foi observado um atraso no tempo (dias) da separação prepucial. Na puberdade (60 dias), foi observada uma diminuição significativa no peso da glândula seminal nos grupos GIII e GIV, quando comparado ao grupo GI. Aos 90 dias de idade, foi observada diminuição do peso do fígado e um aumento no peso da próstata dos animais do grupo GIV, quando comparado aos animais do grupo GI. A análise dos estágios do ciclo do epitélio seminífero dos animais de 60 dias mostrou aumento dos estágios I-VI nos animais tratados com TCS 300mg/Kg/dia quando comparado ao grupo GI (p<0,01). Aos 90 dias de idade os animais mostraram aumento dos estágios VII-VIII, IX-XIII e diminuição na frequência do estágio XIV da espermatogênese nos animais tratados com diferentes doses de TCS quando comparado ao grupo GI (p<0,01). Não houve diferença na contagem do número de células de Sertoli entre os animais dos diferentes grupos experimentais. Foi possível concluir que, a exposição materna ao TCS durante a gestação e lactação causa efeitos na prole masculina, tais como: Restrição de desenvolvimento intrauterino, atraso na instalação da puberdade, alteração do peso da glândula seminal nos animais com 60 dias, como também, alteração no peso do fígado e da próstata nos animais com 90 dias e desregulação no ciclo do epitélio seminífero em ambas as idades.

A hipertensão arterial sistêmica (HAS) é um problema de saúde pública, geralmente associada a outras doenças, como obesidade, diabetes, doença renal, aterosclerose, acidente vascular cerebral (AVC) e identificado como um dos fatores de risco mais prevalentes para o desenvolvimento de doenças cardiovasculares. Orgãos-alvo, como coração, rins, cérebro e olhos, são comumente afetados em pacientes hipertensos. No entanto, o dano testicular causado pela hipertensão não foi claramente definido. A hipertensão é um fator de risco bem estabelecido para a disfunção erétil, mas sua relação com o dano testicular e a fertilidade masculina não é claramente compreendida. Este estudo avalia a morfologia testicular e alguns parâmetros espermáticos de ratos espontaneamente hipertensos (SHR), virgem de tratamento e tratados com enalapril. Ratos SHR foram distribuídos em dois grupos, um grupo hipertenso (H), e um grupo tratado com enalapril (HE). Ratos Wistar-Kyoto (WKY) foram utilizados como controles. A pressão arterial sistólica foi medida semanalmente, até o final do experimento. A concentração de espermatozóides, motilidade e viabilidade foram determinadas em amostras coletadas da cauda do epidídimo. Métodos estereológicos foram usados para analisar objetivamente a morfologia testicular macroscopicamente e microscopicamente. Todos os dados foram analisados por ANOVA com pós-teste de Tukey, considerando p <0,05. Ao final do experimento a pressão arterial sistólica no grupo HE (153,9 mmHg 21,03 ) foi semelhante a dos animais pertencentes ao grupo WKY (153,4 24,41) e menor que a dos animais H (205,1 24,9). A concentração espermática do grupo H (1,31 x 107 sptz/ml 0,27) foi inferior à do grupo WKY (2,11 x 107 sptz/ml 0,34), entretanto o controle da pressão arterial com o enalapril melhorou este parâmetro e a concentração espermática do grupo HE (2,46 x 107 sptz/ml 0,54) foi semelhante a do WKY. A densidade volumétrica vascular também foi alterada no grupo de hipertensos, enquanto que os animais do grupo HE foram semelhantes aos controles. O epitélio seminífero dos animais HE apresentou a maior densidade volumétrica, indicando um possível efeito protetor indireto do enalapril na espermatogênese. Neste modelo animal, a HAS promoveu alterações morfológicas no testículo, com conseqüências sobre a produção de espermatozóides. O controle da pressão arterial com o enalapril protegeu o testículo destas alterações, restabelecendo a produção normal dos espermatozóides. / Hypertension is a major public health problem, usually associated with other disorders such as obesity, diabetes, kidney disease, atherosclerosis, stroke and identified as one of the most prevalent risk factors for developing cardiovascular diseases. Target organs, such as heart, kidney, brain and eyes, are very commonly affected in hypertensive patients. However the testicular damage caused by hypertension has not been clearly defined. Hypertension is a well-established risk factor for erectile dysfunction, but its relation to testicular damage and male fertility is not clearly understood. This study evaluates the testicular morphology and some spermatozoid parameters of spontaneously hypertensive rats (SHR) untreated and treated with enalapril. SHR rats were assigned into two groups, a hypertensive group (H), and an enalapril treated group (HE). Wistar-Kyoto rats (WKY) were used as controls. Systolic blood pressure was measured weekly until at the end of the experiment. The spermatozoid concentration, motility and viability were determined in epididimal tail collected sample. Stereological methods were used to analyze testicular morphology macroscopically and microscopically. Data were analyzed by one-way ANOVA and Tukeys post test, considering p<0.05. At the end of the experiment systolic blood pressure in the HE group (153,9 mmHg 21,03 ) was similar to WKY animals (153,4 24,41), and lower than H animals (205,1 24,9). Sperm concentration of the H group (1,31 x 107 sptz/ml 0,27) was lower than WKY group (2,11 x 107 sptz/ml 0,34). The blood pressure control with enalapril improved this parameter and HE group (2,46 x 107 sptz/ml 0,54) was similar to WKY. Testicular vascular volumetric density was also higher in hypertensive group while HE animals were similar to controls. The seminiferous epithelium of HE animals showed the highest volumetric density, indicating a possible positive indirect effect of enalapril in spermatogenesis. In this animal model, hypertension promoted morphological changes in the testicle with consequences on spermatozoid production. The blood pressure control with enalapril protected the testicle from these alterations, restoring normal spermatozoid production.