A leishmaniose é uma doença causada por parasitos do gênero Leishmania e transmitida por insetos flebotomíneos. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil da infecção por L. amazonenses em BALB/c, BALB/c nude e C57BL/6, e avaliar a expressão das proteínas CP, LACK, LRR17, metacaspase, PDI e STI, em amastigotas isolados de BALB/c e BALB/c nude. Observamos em 13 semanas o aumento mais precoce da espessura da pata em BALB/c do que em BALB/c nude. A carga parasitária nos animais nude foi superior à dos demais. Por outro lado, animais C57BL/6 controlaram a infecção a partir da sexta semana. A análise da expressão gênica nas lesões mostrou um padrão misto Th1/Th2 em todos os animais, e maior expressão de IFN-g, IL-4, IL1b e iNOS em BALB/c. Em baço e linfonodo observamos baixa expressão de CD3e e elevada expressão de iNOS em BALB/c nude. A análise por FACs mostrou em baço e linfonodo a esperada baixa porcentagem de células TCD4 e T CD8 em BALB/c nude, no entanto com capacidade de produzir IFN-g e IL-4. A LACK e a metacaspase estão aumentadas nos parasitas isolados de BALB/c nude. A metacaspase apresentou maior atividade também em nude. Não observamos diferença na expressão da LACK e metacaspase em amastigotas isolados de macrófagos infectados na presença de IFN-g e IL-4. / Leishmaniasis is caused by parasites of Leishmania genus, transmitted by phlebotomine sandflies. The aim of this study was to compare the profile of the infection by L. amazonenses in BALB/c, BALB/c nude and C57BL/6 and to analyze the expression of CP, LACK, LRR17, metacaspase, PDI and STI proteins, in amastigotes isolated from BALB/c and BALB/c nude lesions. We observed during 13 weeks an early increase in footpad thickness in BALB/c compared to BALB/c nude. Parasite loads in nude mice were higher than the others. C57BL/6 mice controlled infection since the sixth week. Gene expression analysis of the lesions indicated a mixed Th1/Th2 pattern in all mice, and higher expression of IFN-g, IL-4, IL1b and iNOS in BALB/c. In spleens and lymph nodes we observed lower expression of CD3e and high expression of iNOS in BALB/c nude. FACs analysis of spleens and lymph nodes showed low percentages of TCD4 and T CD8 cells in BALB/c nude, but producing IFN-g and IL-4. LACK and metacaspase are increased in parasites isolated from BALB/c nude, and metacaspase had higher enzymatic activity in amastigotes from nude. No differences in LACK or metacaspase in amastigotes isolated from macrophages infected in the presence of IFN-g and IL-4 were observed.

Submitted by Nadir Basilio (nadirsb@uninove.br) on 2018-07-17T21:50:50Z No. of bitstreams: 1 Solange Almeida dos Santos.pdf: 759875 bytes, checksum: f16dbd72a00c1e89bdc4543f27aacd3f (MD5) / Made available in DSpace on 2018-07-17T21:50:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Solange Almeida dos Santos.pdf: 759875 bytes, checksum: f16dbd72a00c1e89bdc4543f27aacd3f (MD5) Previous issue date: 2016-12-19 / Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic inflammatory disease characterized by chronic and systemic inflammation, which leads to destruction of the cartilage and bone, and affects tissues in multiple joints. Oxidative stress has been implicated in involvement in various disease conditions, such as rheumatoid arthritis (RA). In vivo experimental studies using photobiomodulation therapy (FBM) have shown positive effects in reducing lipid peroxidation and increasing antioxidant activity. The regular practice of physical exercise has also been reported as a beneficial treatment capable of reducing oxidative damage. The aim of this research was to analyze the effect of photobiomodulation therapy at 2 joules and 4 joules doses associated with physical exercise on oxidative stress in an experimental model of rheumatoid arthritis in protein expression: superoxide dismutase (SOD); Glutathione Peroxidase (GPX) and Catalase (CAT) on thiobarbituric acid reactive substances (TBARS). Twenty-four male Wistar rats divided into 4 groups were submitted to an AR model (CIA). First immunization were performed at the base of the tail on the days 0 and 07, and after 28 days the third dose was administered intra-articular in both knees of the animals. After the last induction, FBM therapy was started immediately, transcutaneously at two points: medial and lateral, with a total of 15 applications. Treadmill exercise started the day after the last induction and lasted 5 weeks. As results we obtained the decrease of the lipid peroxidation and the increase of antioxidant activities of SOD, GPX and CAT with physical exercise associated to FBM in doses of 2 joules and 4 joules. Conclusion: Physical exercise associated with FBM therapy decreases lipid peroxidation and increases antioxidant activity. / A artrite reumatóide (AR) é uma doença inflamatória crônica redicivante caracterizada por uma inflamação crônica e sistêmica. O estresse oxidativo tem sido referido no envolvimento em várias condições de doenças, como artrite reumatóide (AR). Estudos experimentais in vivo, utilizando a terapia de fotobiomodulação têm demonstrado efeitos positivos na diminuição da peroxidação lipídica, e no aumento das atividades antioxidantes. A prática regular de exercício físico também vem sendo relatada como um tratamento benéfico capaz de diminuir os danos oxidativos. Sendo assim, esta pesquisa tem por objetivo analisar os efeitos da terapia de fotobiomodualçao nas doses 2 joules e 4 joules associado ao exercício físico sobre marcadores de estresse oxidativo em modelo experimental de artrite reumatóide. Foram analisadas expressão proteica: superóxido dismutase (SOD); e Glutationa Peroxidase (GPX) e Catalase (CAT), sobre as substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS). 24 ratos machos wistar divididos em 4 grupos foram submetidos a um modelo de AR (CIA), 1ª imunização realizada na base da cauda nos dias 0, 07, e após 28 dias foi administrada 3ª dose intra-articular em ambos joelhos dos animais. Após última indução a terapia de fotobiomodulação foi iniciada imediatamente, por via transcutânea em dois pontos: medial e lateral, as aplicações seguintes aconteceram em dias alternados, totalizando 15 aplicações. O exercício na esteira começou no dia subsequente a última indução e teve duração de 5 semanas. Como resultados obtivemos a diminuição da peroxidação lipídica e aumento das atividades antioxidantes da SOD, GPX e CAT com exercício físico associado a terapia de fptpbiomodulação nas doses de 2 joules e 4 joules. Conclusão: O exercício físico associado a terapia de fotobiomodulação diminui peroxidação lipídica e aumenta atividades antioxidantes.

Como resultado do seu passado evolutivo, a família dos camarões Palaemonidae reúne representantes de ambientes osmóticos dos mais variados. Sejam de ambientes marinhos, estuarinos ou dulcícolas, estáveis ou variáveis, as espécies destes camarões mantêm a concentração osmo-iônica da hemolinfa independente da concentração do meio. Essas espécies hiper-regulam a osmolalidade e íons da hemolinfa em meio diluído e água doce e hipo-regulam em meio concentrado ou água do mar. Um importante local de transporte iônico envolvido na regulação osmo-iônica é o epitélio brânquial, pois nas membranas de seus ionócitos constituintes encontra-se um conjunto de transportadores que efetuam o movimento transepitelial de íons. Dentre estes transportadores, o simportador Na+, K+, 2Cl- (NKCC) é considerado ter um papel na secreção de sal, objetivo primário dessa investigação. Espécies representativas de habitat marinho do gênero Palaemon foram coletadas em regiões de estuário e de poça de maré, e de habitat dulcícola do gênero Macrobrachium foram coletadas em rios que desembocam no mar e também em riachos continentais sem influência do aporte salobro. Avaliou-se os limites letais de salinidade superior (LSS50) das espécies marinhas P. northropi e P. pandaliformis e dulcícolas diádromas M. acanthurus, M. olfersi, M. amazonicum que dependem de água salobra para completo desenvolvimento larval, e hololimnéticas M. potiuna e M. brasiliense com ciclo reprodutivo completo em água doce. Objetivou-se aqui (i) caracterizar os mecanismos de hiperregulação (condição controle de 18 S P. northropi, 17 S P. pandaliformis, água doce <0,5 S nas espécies de Macrobrachium) e hiporegulação [a curto (24 h) e longo prazo (120 h) em salinidade correspondente a 80% da LSS50] da osmolalidade e [Cl-] da hemolinfa, da expressão gênica e proteica e a localização por imunofluorescência do NKCC nos ionócitos branquiais; (ii) da existência de um padrão filogenético nesses parâmetros; e (iii) testar as hipóteses de um efeito da salinidade na evolução da expressão gênica e proteica desse simportador. As espécies de Palaemon apresentaram os maiores limites de tolerância ao aumento da salinidade, assim como exibiram uma maior capacidade hiporegulatória a longo prazo (120 h) comparada aos representantes de Macrobrachium. Dentre as espécies de Macrobrachium, os limites de tolerância foram maiores nas espécies diádromas do que nas hololimnéticas. Os parâmetros LSS50, osmolalidade e [Cl-] da hemolinfa demonstraram-se estruturados na filogenia, sendo as semelhanças compartilhadas justificadas pela estreita proximidade entre as espécies. As análises filogenéticas revelaram que a capacidade hiper-regulatória da [Cl-] da hemolinfa foi correlacionada com a expressão gênica do simportador NKCC nas brânquias, enquanto que a síntese proteica do NKCC parece estar associada à hiper-regulação da osmolalidade da hemolinfa. A avaliação da localização do NKCC por imunofluorescência demonstrou que o simportador está distribuído em ambas as células que compõem o epitélio das brânquias, as células pilares e células do septo intralamelar. A localização na porção inferior das franjas e no corpo da célula pilar e por toda célula do septo não diferiu entre as espécies, e também não difereiu entre as condições controle e a curto e longo prazo em salinidade elevada. Esses resultados em conjunto sugerem a importância do NKCC também na captação de sal pelas brânquias. Houve um aumento da síntese proteica do NKCC nas brânquias dos representantes de Macrobrachium, exceto M. potiuna, quando em salinidade elevada. Observou-se que este aumento é explicado pela proximidade filogenética entre as espécies. Não houve mudança na transcrição de RNAm para o NKCC apesar do aumento na síntese proteica, o que sugere uma possível regulação pós-transcricional. A reconstrução da história evolutiva da osmorregulação, incorporando o conceito de filofisiologia, revelou a existência de mecanismos em nível molecular, celular e sistêmico que evoluíram acompanhando os eventos cladogenéticos dos Palaemonidae durante a irradiação e ocupação de diferentes nichos osmóticos. / Owing to their evolutionary history, the shrimp family Palaemonidae includes species from widely distinct osmotic environments. Whether from marine, estuarine, or fresh waters, inhabiting stable or variable osmotic niches, these shrimps maintain the osmotic-ionic concentration of their hemolymph independently of the concentration of the external medium. These species hyper-regulate hemolymph osmolality and ions in dilute medium and fresh water and hypo-regulate this fluid in concentrated medium or seawater. The gill epithelium constitutes an important interface of ion transport, and its constituent ionocytes express an ensemble of ion transporters that enable active transepithelial ion movements. The Na+, K+, 2Cl- cotransporter (NKCC) is thought to play a significant role in compensatory salt secretion. Species representative of the marine habitat (Palaemon) were collected from estuaries and tidal pools; diadromous species from the fresh water habitat (Macrobrachium) were collected near the mouths of rivers that flow into the sea, while hololimnetic species were collected in continental streams lacking the influence of brackish waters. The critical upper salinity limits (LSS50) of the marine species P. northropi and P. pandaliformis and the diadromous freshwater species M. acanthurus, M. olfersi, M. amazonicum that depend on brackish water for complete larval development, and the hololimnetic M. potiuna and M. brasiliense that complete their reproductive cycle entirely in fresh water were established. Our objectives were to characterize the mechanisms of hyper-regulation (control condition 18 S P. northropi, 17 S P. pandaliformis, fresh water <0.5 S for Macrobrachium) and hypo-regulation [short-term (24 h) and long-term 120 h) at salinities corresponding to 80% of LSS50] of hemolymph osmolality and [Cl-], gene and protein expression, and NKCC localization for immunofluorescence in the gill ionocytes; (ii) the existence of a phylogenetic pattern in these parameters; and (iii) to test hypotheses for a salinity effect on the evolution of the gene and protein expression of this symporter. The species of Palaemon had the highest tolerance limits to increased salinity, and also exhibited a greater hypo-regulatory capacity for long-term acclimation compared to the species of Macrobrachium. Among the Macrobrachium species, the LSS50 were higher in the diadromous species than in the hololimnetic species. The parameters LSS50 and osmolality and [Cl-] of the hemolymph were phylogenetically structured, similarities being shared by closely related species. The hyper-regulatory capacity of hemolymph [Cl-] correlated with NKCC gene expression in the gills, while NKCC protein synthesis appears to be associated with hyper-regulation of hemolymph osmolality. Immunofluorescence analysis showed that the NKCC was located in both cell types that constitute the gill epithelium, the pillar cells and the septal cells. The location of the NKCC in the lower flanges and perikarya of the pillar cells and throughout the septal cells, did not differ among species, and also did not differ among control conditions or short and long-term exposure at high salinity. These results together also suggest the importance of the NKCC in salt uptake by the gills. When in high salinity there was an increase in NKCC protein synthesis in the gills of the Macrobrachium species, except for M. potiuna. This increase can be explained by the phylogenetic proximity among those species, which excludes adaptive inferences. There was no change in NKCC mRNA transcription, which suggests possible post-transcriptional regulation. The reconstruction of the evolutionary history of osmoregulation, incorporating the concept of phylophysiology, revealed the existence of mechanisms at the molecular, cellular and systemic levels that have evolved accompanying the cladogenetic events of the Palaemonidae during their radiation and occupation of different osmotic niches.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Neste estudo pretendeu-se avaliar a aclimataÃÃo de plantas de milho (Zea mays) à salinidade, apÃs serem prÃ-tratadas com nitroprussiato de sÃdio (NPS, composto capaz de liberar Ãxido nÃtrico). A concentraÃÃo de NPS utilizada foi definida em um primeiro experimento, no qual plantas de milho (variedade BR 5011) foram cultivadas por dois dias em soluÃÃo nutritiva de Hoagland acrescida de NPS nas concentraÃÃes de 0 (plantas nÃo prÃ-tratadas), 50, 75, 100 ou 200 ÂM, e submetidas depois à salinidade (NaCl a 0 ou 80 mM). Decorridos sete dias, as plantas prÃ-tratadas com NPS a 75 ÂM foram as que apresentaram melhor desempenho em condiÃÃes salinas, tendo em vista que elas apresentaram um crescimento maior, uma menor peroxidaÃÃo de lipÃdios nas folhas, um teor de K+ aumentado na planta e um menor teor de Na+ na parte aÃrea, em comparaÃÃo Ãs demais plantas nas condiÃÃes salinas. Com base nisso, foi realizado um segundo experimento, no qual a aclimataÃÃo de plantas de milho, mediada pelo prÃ-tratamento com NPS a 75 ÂM, foi avaliada apÃs 7 e 14 dias de estresse (NaCl a 80 mM). O prÃ-tratamento das plantas com NPS resultou em uma Ãrea foliar aumentada e em maior crescimento em condiÃÃes salinas, em comparaÃÃo Ãs plantas nÃo prÃ-tratadas, mas isso foi observado apenas aos 7 dias de estresse. Apesar de o estresse salino ter reduzido a condutÃncia estomÃtica das plantas nos dois tempos avaliados, houve aumento da fotossÃntese lÃquida e da transpiraÃÃo quando se prÃ-tratou as plantas com NPS. De modo geral, o estresse salino reduziu os teores de macronutrientes nas plantas de milho, em ambos os tempos de estresse, mas isso foi menos evidente naquelas que haviam sido prÃ-tratadas com NPS, especialmente aos 7 dias de estresse. Os danos oxidativos nas folhas e nas raÃzes das plantas de milho foram parcialmente atenuados pelo prÃ-tratamento com NPS. Nas condiÃÃes salinas, os teores de ascorbato e glutationa foram geralmente maiores nas plantas prÃ-tratadas com NPS do que nas nÃo prÃ-tratadas. De modo geral, a atividade das enzimas dismutase do superÃxido, catalase e peroxidase do ascorbato nas folhas e nas raÃzes de milho foi reduzida pelo prÃ-tratamento com NPS, e isso tambÃm dependeu do tempo de estresse a que as plantas foram submetidas. No entanto, houve pouca correlaÃÃo entre o prÃ-tratamento com NPS e a induÃÃo do sistema antioxidativo. A espectrometria de massas acoplada a cromatografia lÃquida permitiu a identificaÃÃo de diversas proteÃnas nos tecidos foliares e radiculares, entre as quais, proteÃnas envolvidas com a fotossÃntese e com o metabolismo oxidativo, e, de maneira geral, a expressÃo delas foi influenciada pelas condiÃÃes a que as plantas estiveram sujeitas. O prÃ-tratamento com NPS induz alteraÃÃes importantes nas plantas de milho, mais relacionadas à homeostase iÃnica que à defesa oxidativa, que nÃo perduram ao longo do desenvolvimento da planta. / This study was intended to evaluate the acclimation of maize (Zea mays) plants to salt stress, after pretreatment with sodium nitroprusside (SNP, a NO donor compound). The SNP concentration used was defined in an initial experiment, in which maize plants (variety BR 5011) were cultivated for two days in Hoagland solution plus NPS at 0 (not pretreated plants), 50, 75, 100 or 200 mM and then subjected to salt stress (NaCl at 0 or 80 mM). After seven days, the plants pretreated with NPS at 75 &#956;M showed the best performance in saline conditions, considering that they had a higher growth, a lower lipid peroxidation in leaves, an increased K+ content and a lower Na+ content in shoots compared to other plants in saline conditions. Based on this, it was performed a second experiment, in which the maize acclimation mediated by the pretreatment with 75 &#956;M SNP was evaluated after 7 and 14 days of stress salt (80 mM NaCl). The SNP-pretreatment resulted in an increased leaf area and a fastest growing in saline conditions as compared to non-pretreated plants, but this difference was observed only after 7 days of stress. Although salt stress have reduced stomatal conductance in both time periods, there was an increase in the net photosynthesis and transpiration when plants were pretreated with NPS. In general, the salt stress reduced the macronutrient content in plants, in both times of stress, but this was less evident in those who had been pretreated with NPS, especially after 7 days of stress. Oxidative damages in leaves and roots of maize plants have been partially mitigated by pretreatment with SNP. In saline conditions, the contents of ascorbate and glutathione were generally highest in plants pretreated with NPS than in non-pretreated. In general, the activity of superoxide dismutase, catalase and ascorbate peroxidase in leaves and roots of maize was reduced by pretreatment with SNP, and it also depended on the time of stress to which the plants were subjected. However, there was little correlation between pretreatment with SNP and induction of antioxidant system. The mass spectrometry-coupled liquid chromatography allowed the identification of several proteins in leaf and root tissues, including proteins involved in photosynthesis and oxidative metabolism and, in general, their expression was influenced by the conditions that plants were subjected. The pretreatment with SNP induced important changes in corn plants more closely related to the oxidative homeostasis that protection, which does not persist throughout plant development.

Como resultado do seu passado evolutivo, a família dos camarões Palaemonidae reúne representantes de ambientes osmóticos dos mais variados. Sejam de ambientes marinhos, estuarinos ou dulcícolas, estáveis ou variáveis, as espécies destes camarões mantêm a concentração osmo-iônica da hemolinfa independente da concentração do meio. Essas espécies hiper-regulam a osmolalidade e íons da hemolinfa em meio diluído e água doce e hipo-regulam em meio concentrado ou água do mar. Um importante local de transporte iônico envolvido na regulação osmo-iônica é o epitélio brânquial, pois nas membranas de seus ionócitos constituintes encontra-se um conjunto de transportadores que efetuam o movimento transepitelial de íons. Dentre estes transportadores, o simportador Na+, K+, 2Cl- (NKCC) é considerado ter um papel na secreção de sal, objetivo primário dessa investigação. Espécies representativas de habitat marinho do gênero Palaemon foram coletadas em regiões de estuário e de poça de maré, e de habitat dulcícola do gênero Macrobrachium foram coletadas em rios que desembocam no mar e também em riachos continentais sem influência do aporte salobro. Avaliou-se os limites letais de salinidade superior (LSS50) das espécies marinhas P. northropi e P. pandaliformis e dulcícolas diádromas M. acanthurus, M. olfersi, M. amazonicum que dependem de água salobra para completo desenvolvimento larval, e hololimnéticas M. potiuna e M. brasiliense com ciclo reprodutivo completo em água doce. Objetivou-se aqui (i) caracterizar os mecanismos de hiperregulação (condição controle de 18 S P. northropi, 17 S P. pandaliformis, água doce <0,5 S nas espécies de Macrobrachium) e hiporegulação [a curto (24 h) e longo prazo (120 h) em salinidade correspondente a 80% da LSS50] da osmolalidade e [Cl-] da hemolinfa, da expressão gênica e proteica e a localização por imunofluorescência do NKCC nos ionócitos branquiais; (ii) da existência de um padrão filogenético nesses parâmetros; e (iii) testar as hipóteses de um efeito da salinidade na evolução da expressão gênica e proteica desse simportador. As espécies de Palaemon apresentaram os maiores limites de tolerância ao aumento da salinidade, assim como exibiram uma maior capacidade hiporegulatória a longo prazo (120 h) comparada aos representantes de Macrobrachium. Dentre as espécies de Macrobrachium, os limites de tolerância foram maiores nas espécies diádromas do que nas hololimnéticas. Os parâmetros LSS50, osmolalidade e [Cl-] da hemolinfa demonstraram-se estruturados na filogenia, sendo as semelhanças compartilhadas justificadas pela estreita proximidade entre as espécies. As análises filogenéticas revelaram que a capacidade hiper-regulatória da [Cl-] da hemolinfa foi correlacionada com a expressão gênica do simportador NKCC nas brânquias, enquanto que a síntese proteica do NKCC parece estar associada à hiper-regulação da osmolalidade da hemolinfa. A avaliação da localização do NKCC por imunofluorescência demonstrou que o simportador está distribuído em ambas as células que compõem o epitélio das brânquias, as células pilares e células do septo intralamelar. A localização na porção inferior das franjas e no corpo da célula pilar e por toda célula do septo não diferiu entre as espécies, e também não difereiu entre as condições controle e a curto e longo prazo em salinidade elevada. Esses resultados em conjunto sugerem a importância do NKCC também na captação de sal pelas brânquias. Houve um aumento da síntese proteica do NKCC nas brânquias dos representantes de Macrobrachium, exceto M. potiuna, quando em salinidade elevada. Observou-se que este aumento é explicado pela proximidade filogenética entre as espécies. Não houve mudança na transcrição de RNAm para o NKCC apesar do aumento na síntese proteica, o que sugere uma possível regulação pós-transcricional. A reconstrução da história evolutiva da osmorregulação, incorporando o conceito de filofisiologia, revelou a existência de mecanismos em nível molecular, celular e sistêmico que evoluíram acompanhando os eventos cladogenéticos dos Palaemonidae durante a irradiação e ocupação de diferentes nichos osmóticos. / Owing to their evolutionary history, the shrimp family Palaemonidae includes species from widely distinct osmotic environments. Whether from marine, estuarine, or fresh waters, inhabiting stable or variable osmotic niches, these shrimps maintain the osmotic-ionic concentration of their hemolymph independently of the concentration of the external medium. These species hyper-regulate hemolymph osmolality and ions in dilute medium and fresh water and hypo-regulate this fluid in concentrated medium or seawater. The gill epithelium constitutes an important interface of ion transport, and its constituent ionocytes express an ensemble of ion transporters that enable active transepithelial ion movements. The Na+, K+, 2Cl- cotransporter (NKCC) is thought to play a significant role in compensatory salt secretion. Species representative of the marine habitat (Palaemon) were collected from estuaries and tidal pools; diadromous species from the fresh water habitat (Macrobrachium) were collected near the mouths of rivers that flow into the sea, while hololimnetic species were collected in continental streams lacking the influence of brackish waters. The critical upper salinity limits (LSS50) of the marine species P. northropi and P. pandaliformis and the diadromous freshwater species M. acanthurus, M. olfersi, M. amazonicum that depend on brackish water for complete larval development, and the hololimnetic M. potiuna and M. brasiliense that complete their reproductive cycle entirely in fresh water were established. Our objectives were to characterize the mechanisms of hyper-regulation (control condition 18 S P. northropi, 17 S P. pandaliformis, fresh water <0.5 S for Macrobrachium) and hypo-regulation [short-term (24 h) and long-term 120 h) at salinities corresponding to 80% of LSS50] of hemolymph osmolality and [Cl-], gene and protein expression, and NKCC localization for immunofluorescence in the gill ionocytes; (ii) the existence of a phylogenetic pattern in these parameters; and (iii) to test hypotheses for a salinity effect on the evolution of the gene and protein expression of this symporter. The species of Palaemon had the highest tolerance limits to increased salinity, and also exhibited a greater hypo-regulatory capacity for long-term acclimation compared to the species of Macrobrachium. Among the Macrobrachium species, the LSS50 were higher in the diadromous species than in the hololimnetic species. The parameters LSS50 and osmolality and [Cl-] of the hemolymph were phylogenetically structured, similarities being shared by closely related species. The hyper-regulatory capacity of hemolymph [Cl-] correlated with NKCC gene expression in the gills, while NKCC protein synthesis appears to be associated with hyper-regulation of hemolymph osmolality. Immunofluorescence analysis showed that the NKCC was located in both cell types that constitute the gill epithelium, the pillar cells and the septal cells. The location of the NKCC in the lower flanges and perikarya of the pillar cells and throughout the septal cells, did not differ among species, and also did not differ among control conditions or short and long-term exposure at high salinity. These results together also suggest the importance of the NKCC in salt uptake by the gills. When in high salinity there was an increase in NKCC protein synthesis in the gills of the Macrobrachium species, except for M. potiuna. This increase can be explained by the phylogenetic proximity among those species, which excludes adaptive inferences. There was no change in NKCC mRNA transcription, which suggests possible post-transcriptional regulation. The reconstruction of the evolutionary history of osmoregulation, incorporating the concept of phylophysiology, revealed the existence of mechanisms at the molecular, cellular and systemic levels that have evolved accompanying the cladogenetic events of the Palaemonidae during their radiation and occupation of different osmotic niches.