Óleos essenciais são produtos naturais produzidos no metabolismo secundário de certos vegetais, com propriedades, entre outras, de defesa contra agentes nocivos. No sul do Brasil, destacam-se duas espécies da família Asteraceae, Heterothalamus alienus e Heterothalamus psiadioides, cujas substâncias bioativas ainda são pouco estudadas quanto as suas propriedades. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana desses óleos essenciais e a atividade antibiofilme do óleo essencial de H. psiadioides. Os óleos foram obtidos a partir da hidrodestilação das folhas e caracterizados por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas. O espectro de ação foi avaliado contra bactérias e fungos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para cocos Gram-positivos resistentes a agentes antimicrobianos, como Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV), e a ação antibiofilme foi avaliada tanto pela interferência dos componentes dos óleos sobre a aderência microbiana quanto por sua ação sobre biofilme estabelecido. Os óleos essenciais de Heterothalamus sp. são constituídos por compostos terpênicos, sendo o β-pineno o componente majoritário. Ambos foram eficazes contra as bactérias Gram-positivas e fungos avaliados, porém não inibiram as bactérias Gram-negativas. A CIM variou entre 4 – 16%, sendo que isolados ERV foram também inibidos. A ação do óleo essencial de H. psiadioides diminuiu a aderência microbiana e, em menor escala, causou disrupção do biofilme pré-formado; no entanto, não foi verificada completa inibição do biofilme. Os resultados fornecem informações importantes sobre de ação antimicrobiana desses óleos essenciais e indicam o uso potencial dessas espécies como medicinais. / Essential oils are natural substances produced on secondary metabolism of some plants, with properties, among others, of defense against harmful agents. In southern Brazil, Heterothalamus alienus and Heterothalamus psiadioides (Asteraceae) are recognized by bioactive substances that are still little studied by their properties. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils from Heterothalamus sp. and the antibiofilm action of H. psiadioides essential oils. The oils were obtained from the hydrodistillation of the leaves and characterized by gas chromatography coupled mass spectrometry. The spectrum of action was determinate against bacteria and fungi. The minimal inhibitory concentration (MIC) was evaluated for Gram-positive cocci with antimicrobial resistance, as vancomycin-resistent Enterococcus faecalis (VRE) and the antibiofim action was assessed both by interference of the components of the oils on microbial adherence and by its action on established biofilm. The essential oils consist in terpene compounds, and the β-pinene was the major component. The essential oils were effective against Gram-positive bacteria and fungi, but did not inhibit Gram-negative bacteria. The MIC range 4 to 16% and the VRE isolates were also inhibit. The action of essential oils reduced microbial adherence and disrupted de pre-formed biofilm. However, the biofilm was not completely inhibited. These findings provide important information about the antimicrobial activity of these essential oils and indicated the potential use of this species as medicinal.

Submitted by MARIA TEREZA PEDROSA DE ALBUQUERQUE null (tereza.pedrosa@gmail.com) on 2016-01-22T13:37:18Z No. of bitstreams: 1 Tese_Tereza_final22.12.2015.pdf: 57930935 bytes, checksum: b8c015664fa46652372a48843c4f4e5d (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-01-25T15:37:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 albuquerque_mtp_dr_sjc.pdf: 57930935 bytes, checksum: b8c015664fa46652372a48843c4f4e5d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-25T15:37:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 albuquerque_mtp_dr_sjc.pdf: 57930935 bytes, checksum: b8c015664fa46652372a48843c4f4e5d (MD5) Previous issue date: 2015-12-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como objetivos: analisar a ação antimicrobiana de scaffolds contendo ciprofloxacina (CIP) sobre biofilme de Enterococcus faecalis (E. faecalis) (Artigo 1); Sintetizar, caracterizar e analisar a ação antimicrobiana do TAP-scaffold (Polidioxanona [PDS] + CIP, metronidazol [MET] e minociclina [MINO] ) contra biofilme de Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) (Artigo 2); Avaliar os efeitos do TAP-scaffold contra biofilme de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) (Artigo 3). Material e Métodos: Utilizando a técnica de electrospinning scaffolds foram desenvolvidos a partir de soluções de PDS puro e associadas a antibióticos para produzir CIP-scaffold e TAP-scaffold. (Artigos 1, 2 e 3). Espécimes de dentina foram inoculados com E. faecalis para formação de biofilme e expostos ao PDS (controle); PDS + CIP 25wt.% e PDS + CIP 5wt.%. A ação antimicrobiana foi avaliada por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC / mL) (n = 10) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n = 2) (Artigo 1). TAP-scaffolds foram caracterizados quanto a morfologia das fibras, propriedades mecânicas, e mecanismo de liberação do fármaco. Espécimes de dentina foram inoculados com A. naeslundii para formação de biofilme e foram expostos à TAP-scaffold, solução de TAP, PDS puro e espécimes de dentina infectada com biofilme (7 dias) sem medicação. A viabilidade bacteriana foi determinada por microscópio de varredura a laser confocal (CLSM) (Artigo 2). Espécimes de dentina inoculados com P. gingivalis foram expostos ao PDS (controle negativo), PDS + TAP 25wt.%, solução de TAP e dentinas infectadas sem tratamento (7 dias de biofilme) (n = 12). A viabilidade do biofilme foi determinada quantitativamente por (UFC/mL) e qualitativamente por MEV (Artigo 3). Resultados: A contagem das UFC/mL demonstrou máxima eliminação bacteriana promovida pelo grupo PDS + CIP 25 wt.% diferindo estatisticamente dos grupos PDS e PDS+CIP 5 wt.% (p < 0,05). A análise por MEV foi compatível com os dados obtidos por UFC/mL (Artigo 1). A caracterização das fibras, evidenciou diâmetro médio das fibras de 689 ± 312nm (PDS puro) e 718±125nm (TAP-scaffold). O TAP-scaffold demonstrou propriedades mecânicas significativamente menores que o PDS (p≤0,04040). Grande liberação de drogas nas primeiras 24 horas foi observada, destacando-se a CIP e a MET que mantiveram uma liberação mais prolongada (4 semanas) quando comparada à MINO (7 dias). Análise por CLSM demonstrou completa eliminação de bactérias viáveis expostas à solução de TAP. Por outro lado, TAP-scaffold reduziu significativamente (p < 0,05) a porcentagem de bactérias viáveis quando comparado ao grupo controle e ao PDS (Artigo 2). Para o biofilme de P.gingivalis, tanto a TAP-scaffold quanto a TAP foram capazes de eliminar completamente as bactérias viáveis, diferindo estatisticamente (p<0,055) do PDS e controle negativo (Artigo 3). Conclusões: Os resultados deste trabalho sugerem que scaffolds desenvolvidos com sistema de liberação controlada de drogas apresentam grande potencial para eliminação de biofilmes compostos por espécies bacterianas que colonizam o sistema de canais radiculares, com potencial promissor para o sucesso da regeneração endodôntica. / The present study aimed to: Evaluate the antimicrobial effects of scaffolds containing ciprofloxacin (CIP) into the fibers against Enterococcus faecalis (E. faecalis) biofilm (Article 1); Synthesize, characterize, and analyse the antimicrobial action TAP-scaffold containing CIP, metronidazole (MET) and minocycline (MINO) against Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) biofilm (Article 2); Evaluate the effects of TAP-scaffold to combat Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) biofilm (Article 3). Material e Methods: Scaffolds were developed from pure polidioxanone (PDS) solution alone or incorporated with antibiotics: MET, CIP and MINO (TAPscaffold and CIP-scaffold by electrospinning technique (Articles 1, 2, 3). E. faecalis solution was inoculated in dentin to induce biofilm formation that were exposed to PDS (control); PDS + CIP 25wt.% and PDS + CIP 5wt.%. The antimicrobial action were analysed by counting the colony units formation (CFU/mL) and through Scanning Electron Microscopy (SEM) (Article 1). Fiber morphology, mechanical properties, and drug release of TAP-scaffolds were investigated. Dentin specimens were inoculated with A. naeslundii for biofilm formation. The dentin specimens were exposed to TAP-mimic scaffolds, TAP solution (positive control), and pure PDS. Infected dentin (7-days biofilm) specimens were used for comparison. CLSM was performed to determine bacteria viability (Article 2). Dentin specimens were inoculated with P. gingivalis to allow biofilm formation and were exposed to the following treatments: PDS (control), PDS+25wt.%TAP, and TAP solution. Infected dentin specimens were left untreated (bacteria only). To determine the antimicrobial efficacy a colony forming unit (CFU/mL) measurement 27 and SEM analysis were performed (Article 3). Results: PDS scaffold containing CIP at 25 wt.% showed maximum bactéria (E.faecalis) elimination, differing statistically from the control (PDS) and from PDS scaffold containing CIP at 5 wt.% (p < 0.05). SEM images showed similar results when compared to CFU/mL data (Article 1). Fibers characterization displayed scaffolds with submicron mean fiber diameter. Overall, TAP-mimic scaffolds showed significantly (p ≤ 0.040) lower mechanical properties than PDS. Within the first 24 hours, a burst release of all drugs was seen. A sustained maintenance of MET and CIP release was observed over 4 weeks, but not for MINO. CLSM demonstrated complete elimination of all viable bacteria exposed to the TAP solution. Meanwhile, TAP-mimic scaffolds led to a significant (p < 0.05) reduction in the percentage of viable bacteria compared to the negative control and PDS (Article 2). Regard P.gingivalis, TAP-mimic PDS-based electrospun scaffolds and the positive control (TAP solution) led to complete bacteria elimination, differing statistically (p<0.05) from the negative control (bacteria only). No statistical differences were observed for CFU/mL data between PDS and the negative control (Article 3). Conclusions: This study suggests that scaffolds containing drug-release system present a great clinical potential to combat biofilms composed by endodontic pathogens with promising sucess for endodontic regenerative standpoint.

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-21Bitstream added on 2015-03-03T12:07:38Z : No. of bitstreams: 1 000797448.pdf: 1448139 bytes, checksum: 48dfe16fa3be080667b00a8cda3a288e (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Na busca por fontes alternativas de antimicrobianos, diversos autores tem explorado o uso de plantas medicinais para o tratamento de várias doenças. A atividade antimicrobiana de várias espécies de plantas como, Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker e Psidium cattleianum, popularmente chamadas de erva-baleeira, guaco e de araçá, respectivamente, tem sido relatada contra diversos microrganismos orais. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito antimicrobiano dos extratos hidroetanólico bruto e as suas respectivas frações aquosa, butanol, hexano e acetato de etila de Cordia verbenacea (CV) e Mikania laevigata (ML) e extratos aquoso e hidroetanólico de Psidium cattleianum (PC) contra Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii e Candida albicans, sob condições planctônicas e de biofilme. Os microrganismos foram analisados em condições planctônicas por meio de ensaios para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração letal mínima (CLM), pelo método de microdiluição em caldo. Posteriormente, foram selecionados somente os extratos capazes de eliminar completamente cada microrganismo (CLM 100%), para a análise da atividade antimicrobiana em ensaios de biofilme. Os resultados mostraram que os valores de CIM e CLM variaram de 250 à 4000?g/ml. O biofilme formado por E. faecalis foi eliminado frente à ação dos extratos aquoso e hidroetanólico de PC e à fração acetato de etila de ML. A mesma fração de ML e o extrato hidroetanólico de PC também foram capazes de eliminar biofilme de P. aeruginosa. O mesmo ocorreu com as frações hexânicas de CV e ML e o extrato hidroetanólico de ML frente ao biofilme de A. israelii. Nenhum extrato/fração foi capaz de eliminar biofilme de C. albicans. Este estudo demonstrou o potencial antimicrobiano de extratos ou frações de Cordia verbenacea, Mikania laevigata... / Seeking for alternative sources of the antimicrobials, several authors have explored the use of herbal medicines for the treatment of diseases. The antimicrobial activity of various species of plants, such as Cordia verbenacea DC, Mikania laevigata Schultz Bip. Ex Baker and Psidium cattleianum, known as erva-baleeira, guaco and araçá, respectively, has been reported against several oral microorganisms. The present study aimed to evaluate the antimicrobial effect of Cordia verbenacea (CV) and Mikania laevigata (ML) hydroethanolic crude extracts and their fractions aqueous, butanol, hexane and ethyl acetate and aqueous and hydroethanolic extracts of Psidium cattleianum (PC) against Enterococcus faecalis, Pseudomonas aeruginosa, Actinomyces israelii and Candida albicans, under planktonic and biofilm conditions. The microorganisms in planktonic conditions were analyzed by determination of minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum lethal concentration (MLC) assays using the microdilution broth method. Posteriorly, only the extracts that were able to totally eliminate each microorganism (MLC 100%) were selected for the antimicrobial activity analysis in the biofilm assay. The results showed that the MIC and MLC values ranged between 250 and 4000?g/ml. E. faecalis biofilm was eliminated by PC aqueous and hydroethanolic extracts and the ML ethyl acetate fraction. The same ML fraction and PC hydroethanolic extract were also able to eliminate the P. aeruginosa biofilm. The same occurred with the CV and ML hexane fractions and ML hydroethanolic extract against the A. israelii biofilm. None of the extracts/fractions were able to eliminate the C. albicans biofilm. This study confirmed the antimicrobial activity potential of Cordia verbenacea, Mikania laevigata and Psidium cattleianum, suggesting their use for endodontic purposes due to their effectiveness against pathogens associated with persistent or se...

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-03-25Bitstream added on 2014-06-13T18:31:52Z : No. of bitstreams: 1 morgental_rd_me_arafo.pdf: 512893 bytes, checksum: 060c4ca765b0497f8f431913321f1ded (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Este estudo objetivou avaliar o pH, o teor de cloro disponível e a atividade antibacteriana de soluções irrigadoras endodônticas isoladas e associadas frente ao Enterococcus faecalis pelo teste de contato direto (in vitro) e em canais radiculares contaminados (ex vivo). A análise de pH foi realizada por meio de pHmetro digital e o teor de cloro pelo método da iodometria. Na metodologia de contato direto, uma suspensão de E. faecalis foi exposta aos seguintes irrigantes: GI- Solução de hipoclorito de sódio (NaOCl) a 2,5%; GII- NaOCl a 2,5% + ácido cítrico a 10% 7:3 (em volume); GIII- NaOCl a 2,5% + vinagre de maça 5:5 (em volume); GIV- Ácido cítrico a 10%; GV- Vinagre de maça. Os períodos de contato foram 30 segundos, 1, 3 e 10 minutos. O número de unidades formadoras de colônia por mililitro de solução (UFC/mL) foi determinado após diluições decimais seriadas e semeadura em placas de Tryptic Soy Agar (TSa). Como controle negativo foi utilizado solução fisiológica esterilizada. Em outro experimento, 110 dentes humanos unirradiculados tiveram seus canais radiculares contaminados com E. faecalis e incubados a 37°C por 21 dias. As substâncias analisadas foram: GI- NaOCl a 2,5%; GII- NaOCl a 2,5% + ácido cítrico a 10% 7:3 (em volume); GIII- NaOCl a 2,5% + vinagre de maça 5:5 (em volume); GIV- Vinagre de maçã; GV- Solução de clorexidina a 2%; GVIÁcido peracético a 1%; GVII- Solução salina fisiológica. Coletas microbiológicas foram realizadas imediatamente após preparo biomecânico e decorrido o período de sete dias. Após diluições decimais seriadas, alíquotas foram semeadas em placas de TSa e a contagem de UFC/mL determinada. Os resultados foram submetidos aos testes ANOVA, Tukey e Bonferroni, com nível de significância de 0,05. A associação do NaOCl a 2,5% com ácido cítrico ou vinagre de maça promoveu redução de pH e teor de... (Resumo completo, clicar acesso / This study aimed to evaluate the pH, the available chlorine content and the antibacterial activity of endodontic irrigants and associations against Enterococcus faecalis by direct exposure test (in vitro) and within infected root canals (ex vivo). The pH was recorded using a digital pH meter and the chlorine content was measured by a standard iodine/thiosulfate titration method. In the direct exposure test, a bacterial suspension was mixed with the following irrigants: GI- 2,5% sodium hypochlorite solution (NaOCl); GII- 2,5% NaOCl + 10% citric acid 7:3 (at volume); GIII- 2,5% NaOCl + apple vinegar 5:5 (at volume); GIV- 10% citric acid; GV- apple vinegar. The contact times were 30 seconds, 1, 3 and 10 minutes. The number of colony-forming units per millilitre (UFC/mL) was calculated after serial 10-fold dilutions and culture in Tryptic Soy Agar (TSa) plates. Sterilized physiologic solution was used as negative control. In another experiment, the root canals of 110 human single-rooted teeth were infected with E. faecalis and incubated at 37°C for 21 days. The analysed substances were: GI- 2,5% NaOCl; GII- 2,5% NaOCl + 10% citric acid 7:3 (at volume); GIII- 2,5% NaOCl + apple vinegar 5:5 (at volume); GIV- apple vinegar; GV- 2% chlorhexidine solution; GVI- 1% peracetic acid; GVIIphysiologic saline solution. Microbiological samples were collected immediately after the biomechanical preparation and after 7 days. After serial 10-fold dilutions and culture in TSa plates, UFC/mL counts were determined. The results were submitted to ANOVA, Tukey and Bonferroni test, with a level of significance established at 0.05. The pH and the chlorine content reduced at associations of 2,5% NaOCl with citric acid or apple vinegar. In the direct exposure test, pure and associated NaOCl were capable of killing E. faecalis after 30 seconds. Citric acid did the same... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002Bitstream added on 2014-06-13T19:49:31Z : No. of bitstreams: 1 genaro_a_me_botfm.pdf: 377043 bytes, checksum: 72c1832d7ec88dfecbd5ba14344427c1 (MD5) / O Enterococcus faecalis é considerado, atualmente, um dos grandes agentes responsáveis pelas infecções hospitalares, onde sua resistência a diversas drogas tem sido motivo de preocupação das autoridades. Neste contexto, o trabalho teve como objetivo determinar a suscetibilidade antimicrobiana e a presença de linhagens mutantes em E. faecalis. Foram obtidas 74 linhagens provenientes de hemoculturas e de secreções purulentas de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP, no período de 1995 a 2001. Foram analisadas “in vitro”, quanto à sua suscetibilidade, a vancomicina e a ciprofloxacina através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), da concentração bactericida mínima (CBM) e a presença de linhagens mutantes através da determinação da taxa de mutação espontânea à ciprofloxacina. Os resultados demonstraram uma maior efetividade da vancomicina, que inibiu 98,6% das linhagens de E. faecalis (CIM 0,06 a 1mg/ml). Entretanto, quando da análise bactericida, o perfil de sensibilidade desta droga apresentou-se elevado, onde 73% das linhagens tiveram a CBM igual ou maior que 64mg/ml. Para a ciprofloxacina, o perfil de sensibilidade ficou distribuído entre as classes de CIM e CBM. Nesse estudo, não foi encontrada a presença de linhagens mutantes. Há probabilidade de algumas linhagens serem tolerantes à vancomicina, sendo necessário então, a realização de testes mais apurados, no sentido de confirmar esta característica. / Enterococcus faecalis has been considered one of the major agents of nosocomial infection; its resistance to several drugs has been the concern of health authorities. The objective of this study was to determine antimicrobial susceptibility and the presence of mutant strains in E. faecalis. Seventy-four strains were obtained from hemocultures and purulent secretions of patients hospitalized at the Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu – UNESP between 1995 and 2001. They were analyzed in vitro for their susceptibility to vancomycin and ciprofloxacin by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), minimum bactericidal concentration (MBC), and the presence of mutant strains through determination of the spontaneous mutation rate to ciprofloxacin. Our results showed vancomycin higher efficacy, inhibiting 98.6% of E. faecalis strains (MIC 0.06 1μg/ml). The bactericidal analysis, however, showed vancomycin high susceptibility profile, with 73% of strains, presenting MBC equal or higher than 64μ/ml. Ciprofloxacin sensitivity profile was found in MIC and MBC classes. No mutant strains were found in this study. It is probable that some strains are resistant to vancomycin, which requires that further tests be performed.

Orientador: Marcia Carneiro Valera / Resumo: O presente trabalho teve como objetivos: analisar a ação antimicrobiana de scaffolds contendo ciprofloxacina (CIP) sobre biofilme de Enterococcus faecalis (E. faecalis) (Artigo 1); Sintetizar, caracterizar e analisar a ação antimicrobiana do TAP-scaffold (Polidioxanona [PDS] + CIP, metronidazol [MET] e minociclina [MINO] ) contra biofilme de Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) (Artigo 2); Avaliar os efeitos do TAP-scaffold contra biofilme de Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) (Artigo 3). Material e Métodos: Utilizando a técnica de electrospinning scaffolds foram desenvolvidos a partir de soluções de PDS puro e associadas a antibióticos para produzir CIP-scaffold e TAP-scaffold. (Artigos 1, 2 e 3). Espécimes de dentina foram inoculados com E. faecalis para formação de biofilme e expostos ao PDS (controle); PDS + CIP 25wt.% e PDS + CIP 5wt.%. A ação antimicrobiana foi avaliada por contagem das unidades formadoras de colônia (UFC / mL) (n = 10) e microscopia eletrônica de varredura (MEV) (n = 2) (Artigo 1). TAP-scaffolds foram caracterizados quanto a morfologia das fibras, propriedades mecânicas, e mecanismo de liberação do fármaco. Espécimes de dentina foram inoculados com A. naeslundii para formação de biofilme e foram expostos à TAP-scaffold, solução de TAP, PDS puro e espécimes de dentina infectada com biofilme (7 dias) sem medicação. A viabilidade bacteriana foi determinada por microscópio de varredura a laser confocal (CLSM) (Artigo 2). Espécimes de dentina inocul... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The present study aimed to: Evaluate the antimicrobial effects of scaffolds containing ciprofloxacin (CIP) into the fibers against Enterococcus faecalis (E. faecalis) biofilm (Article 1); Synthesize, characterize, and analyse the antimicrobial action TAP-scaffold containing CIP, metronidazole (MET) and minocycline (MINO) against Actinomyces naeslundii (A. naeslundii) biofilm (Article 2); Evaluate the effects of TAP-scaffold to combat Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) biofilm (Article 3). Material e Methods: Scaffolds were developed from pure polidioxanone (PDS) solution alone or incorporated with antibiotics: MET, CIP and MINO (TAPscaffold and CIP-scaffold by electrospinning technique (Articles 1, 2, 3). E. faecalis solution was inoculated in dentin to induce biofilm formation that were exposed to PDS (control); PDS + CIP 25wt.% and PDS + CIP 5wt.%. The antimicrobial action were analysed by counting the colony units formation (CFU/mL) and through Scanning Electron Microscopy (SEM) (Article 1). Fiber morphology, mechanical properties, and drug release of TAP-scaffolds were investigated. Dentin specimens were inoculated with A. naeslundii for biofilm formation. The dentin specimens were exposed to TAP-mimic scaffolds, TAP solution (positive control), and pure PDS. Infected dentin (7-days biofilm) specimens were used for comparison. CLSM was performed to determine bacteria viability (Article 2). Dentin specimens were inoculated with P. gingivalis to allow biofilm formatio... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Óleos essenciais são produtos naturais produzidos no metabolismo secundário de certos vegetais, com propriedades, entre outras, de defesa contra agentes nocivos. No sul do Brasil, destacam-se duas espécies da família Asteraceae, Heterothalamus alienus e Heterothalamus psiadioides, cujas substâncias bioativas ainda são pouco estudadas quanto as suas propriedades. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana desses óleos essenciais e a atividade antibiofilme do óleo essencial de H. psiadioides. Os óleos foram obtidos a partir da hidrodestilação das folhas e caracterizados por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas. O espectro de ação foi avaliado contra bactérias e fungos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para cocos Gram-positivos resistentes a agentes antimicrobianos, como Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV), e a ação antibiofilme foi avaliada tanto pela interferência dos componentes dos óleos sobre a aderência microbiana quanto por sua ação sobre biofilme estabelecido. Os óleos essenciais de Heterothalamus sp. são constituídos por compostos terpênicos, sendo o β-pineno o componente majoritário. Ambos foram eficazes contra as bactérias Gram-positivas e fungos avaliados, porém não inibiram as bactérias Gram-negativas. A CIM variou entre 4 – 16%, sendo que isolados ERV foram também inibidos. A ação do óleo essencial de H. psiadioides diminuiu a aderência microbiana e, em menor escala, causou disrupção do biofilme pré-formado; no entanto, não foi verificada completa inibição do biofilme. Os resultados fornecem informações importantes sobre de ação antimicrobiana desses óleos essenciais e indicam o uso potencial dessas espécies como medicinais. / Essential oils are natural substances produced on secondary metabolism of some plants, with properties, among others, of defense against harmful agents. In southern Brazil, Heterothalamus alienus and Heterothalamus psiadioides (Asteraceae) are recognized by bioactive substances that are still little studied by their properties. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils from Heterothalamus sp. and the antibiofilm action of H. psiadioides essential oils. The oils were obtained from the hydrodistillation of the leaves and characterized by gas chromatography coupled mass spectrometry. The spectrum of action was determinate against bacteria and fungi. The minimal inhibitory concentration (MIC) was evaluated for Gram-positive cocci with antimicrobial resistance, as vancomycin-resistent Enterococcus faecalis (VRE) and the antibiofim action was assessed both by interference of the components of the oils on microbial adherence and by its action on established biofilm. The essential oils consist in terpene compounds, and the β-pinene was the major component. The essential oils were effective against Gram-positive bacteria and fungi, but did not inhibit Gram-negative bacteria. The MIC range 4 to 16% and the VRE isolates were also inhibit. The action of essential oils reduced microbial adherence and disrupted de pre-formed biofilm. However, the biofilm was not completely inhibited. These findings provide important information about the antimicrobial activity of these essential oils and indicated the potential use of this species as medicinal.

Óleos essenciais são produtos naturais produzidos no metabolismo secundário de certos vegetais, com propriedades, entre outras, de defesa contra agentes nocivos. No sul do Brasil, destacam-se duas espécies da família Asteraceae, Heterothalamus alienus e Heterothalamus psiadioides, cujas substâncias bioativas ainda são pouco estudadas quanto as suas propriedades. O objetivo do estudo foi avaliar a ação antimicrobiana desses óleos essenciais e a atividade antibiofilme do óleo essencial de H. psiadioides. Os óleos foram obtidos a partir da hidrodestilação das folhas e caracterizados por cromatografia em fase gasosa acoplada a espectrometria de massas. O espectro de ação foi avaliado contra bactérias e fungos. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para cocos Gram-positivos resistentes a agentes antimicrobianos, como Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV), e a ação antibiofilme foi avaliada tanto pela interferência dos componentes dos óleos sobre a aderência microbiana quanto por sua ação sobre biofilme estabelecido. Os óleos essenciais de Heterothalamus sp. são constituídos por compostos terpênicos, sendo o β-pineno o componente majoritário. Ambos foram eficazes contra as bactérias Gram-positivas e fungos avaliados, porém não inibiram as bactérias Gram-negativas. A CIM variou entre 4 – 16%, sendo que isolados ERV foram também inibidos. A ação do óleo essencial de H. psiadioides diminuiu a aderência microbiana e, em menor escala, causou disrupção do biofilme pré-formado; no entanto, não foi verificada completa inibição do biofilme. Os resultados fornecem informações importantes sobre de ação antimicrobiana desses óleos essenciais e indicam o uso potencial dessas espécies como medicinais. / Essential oils are natural substances produced on secondary metabolism of some plants, with properties, among others, of defense against harmful agents. In southern Brazil, Heterothalamus alienus and Heterothalamus psiadioides (Asteraceae) are recognized by bioactive substances that are still little studied by their properties. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of essential oils from Heterothalamus sp. and the antibiofilm action of H. psiadioides essential oils. The oils were obtained from the hydrodistillation of the leaves and characterized by gas chromatography coupled mass spectrometry. The spectrum of action was determinate against bacteria and fungi. The minimal inhibitory concentration (MIC) was evaluated for Gram-positive cocci with antimicrobial resistance, as vancomycin-resistent Enterococcus faecalis (VRE) and the antibiofim action was assessed both by interference of the components of the oils on microbial adherence and by its action on established biofilm. The essential oils consist in terpene compounds, and the β-pinene was the major component. The essential oils were effective against Gram-positive bacteria and fungi, but did not inhibit Gram-negative bacteria. The MIC range 4 to 16% and the VRE isolates were also inhibit. The action of essential oils reduced microbial adherence and disrupted de pre-formed biofilm. However, the biofilm was not completely inhibited. These findings provide important information about the antimicrobial activity of these essential oils and indicated the potential use of this species as medicinal.

Orientador: Arnaldo Yoshiteru Kuaye / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-16T12:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fernandes_MegdaSilva_M.pdf: 3935080 bytes, checksum: 25bc1e5988870cf168c5403b4c8d2aba (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A ricota é um tipo de queijo fresco de origem italiana, obtido pela precipitação das proteínas do soro do queijo por acidificação associada ao calor. Por suas características nutricionais, físico-químicas e bioquímicas apresenta-se propícia ao desenvolvimento microbiano. No processamento deste produto destacam-se o Bacillus cereus, pela sua capacidade de esporular e ser um contaminante potencial do leite e do ambiente e as bactérias do gênero Enterococcus, pela característica ubíqua, habilidade de sobrevivência à condições diversas de pH, temperatura e salinidade e ocorrência em casos de infecções hospitalares. Os objetivos deste trabalho foram: a) verificar as possíveis fontes de contaminação de ricota por B. cereus e Enterococcus spp. ao longo do processamento; b) identificar as espécies de enterococos, avaliar o potencial de patogenicidade e o perfil de resistência destas espécies a antibióticos de uso clínico; e, c) avaliar a conformidade das amostras de ricota aos padrões microbiológicos legais. Amostras de leite cru e pasteurizado, soro de queijo, ricotas antes e após embalagem, superfícies diversas do ambiente e do ar obtidas em três coletas de laticínio da região Sul de Minas Gerais foram submetidas à determinação de B. cereus e Enterococcus spp. As contagens de B. cereus em leite cru, pasteurizado e soro de queijo, foram de 1,4 x104, 1,2 x103 e 1,0 x103 UFC/ml, respectivamente, e, apenas uma amostra de ricota final apresentou valor maior que 102 UFC/g. Dentre as 60 amostras ambientais, destaca-se a forma de moldagem da ricota, que apresentou contaminação persistente e contagem de até 1,7x107 UFC/unidade de B. cereus. Enterococcus spp. foram encontradas em todas as amostras de ricota, com contagens entre 103 e 107 UFC/g, e em todas de leite cru, com contagens de até 1,9 x106 UFC/ml. Nas superfícies de forma e tela, vassoura, parede e ralo foram encontrados valores superiores a 105 UFC/unidade; já para tanques, bancada da área de embalagem e caixa de recolhimento do soro os números foram superiores a 102 UFC/unidade. De um total de 136 isolados, confirmados para o gênero Enterococcus, 71,3% (97/136) foram confirmados para a espécie E. faecium e 20,6% (28/136) para E. faecalis, pela técnica de PCR. Os isolados (66) de E. faecium e E. faecalis das amostras de produto final submetidas aos testes fenotípicos resultaram em 89,4% (59/66) positivos para hemólise, nenhum para gelatinase (0/66) e 98,5% (65/66) positivos para termonuclease. A maioria dos isolados de E. faecium e E. faecalis mostrou resistência a pelo menos três dos 5 antimicrobianos testados, destacando-se que 100% deles apresentaram resistência à vancomicina. De 15 amostras de ricota avaliadas após 21 dias de armazenamento sob refrigeração, 13,3% (2/15) estavam em desacordo com o padrão legal para estafilococos coagulase positiva e em nenhuma delas foi detectada a presença de Salmonella, Listeria monocytogenes e coliformes termotolerantes. A natural e inevitável contaminação da matéria-prima e do ambiente de processamento de ricota por B. cereus e Enterococcus spp., bactérias estas potencialmente patogênicas, tem na eficiência dos programas de higienização um fator indispensável para o seu controle / Abstract: The ricotta is a type of fresh cheese of Italian origin, obtained by precipitation of proteins from cheese whey by acidification associated with the heat. Because of its nutritional, physicochemical and biochemical characteristics it is conducive to microbial growth. On the processing of this product it can be emphasized the Bacillus cereus, due to its ability to sporulate and be a potential contaminant of milk and the environment, and the bacteria of the genus Enterococcus, due its ubiquitous characteristic, ability to survive the various conditions of pH, temperature and salinity and appearance in cases of hospital infections. The objectives of the present work were: (a) to verify the possible sources of ricotta contamination by B. cereus and Enterococcus spp. during processing; (b) to identify the species of enterococci, evaluate the pathogenic potential and the resistance profile of these species to antibiotics of clinical use; and (c) to assess the conformity of samples of ricotta under legal microbiological standards. Samples of raw and pasteurized milk, cheese whey, ricotta before and after packaging, various surfaces of the environment and of air obtained from three collections on a dairy industry located in southern Minas Gerais were subjected to the determination of B. cereus and Enterococcus spp. The counts of B. cereus in raw and pasteurized milk and in cheese whey were 1,4 x104, 1,2 x103 and 1,0 x103 CFU/ml, respectively, and only one sample of final ricotta had levels of B. cereus higher than 1,7x107 CFU/unity. Among the 60 environmental samples, it can be highlighted the mold where the ricotta is shaped, which showed persistent contamination and count up to 1,7x107 CFU/unity for B. cereus. All the samples of ricotta and raw milk showed the presence of Enterococcus spp. with counts between 103 and 107 CFU/g and up to 1,9 x106 CFU/ml, respectively. On the surfaces of the mold, mesh, broom, wall and drain it were found counts higher than 105 CFU/unity; for the tank, stand in the area of packaging and box for the collection of serum the counts were higher than 102 CFU/unity. Over 136 isolated of the genus Enterococcus, 71,3% (97/136) were confirmed for the species E. faecium and 20,6% (28/136) for E. faecalis by PCR technique. The isolates (66) of E. faecium and E. faecalis taken from the samples of the final product submitted to phenotypic tests resulted in 89,4% (59/66) positive for hemolysis, none for gelatinase (0 / 66) and 98,5% (65/66) positive for thermonuclease. Most of the isolates of E. faecium and E. faecalis showed resistance to at least three of the 5 antimicrobials, highlighting that 100% of them were resistant to vancomycin. From 15 samples of ricotta evaluated after 21 days of refrigerated storage, 13,3% (2/15) were in disagreement with the legal standard for coagulase-positive staphylococci and none were detected the presence of Salmonella, Listeria monocytogenes and thermotolerant coliforms. The natural and inevitable contamination of raw-materials and of the processing environment of ricotta by B. cereus and Enterococcus spp., which are potentially pathogenic bacteria, have in the efficiency of the hygiene programs a essential factor for its control / Mestrado / Mestre em Tecnologia de Alimentos

Master of Science / Department of Biology / Helmut Hirt / Enterococcus faecalis is one of the most frequently encountered enterococcal isolates and accounts for about 80% of enterococcal infections. Treatment of enterococcal infections has become increasingly difficult as this organism has a high incidence of antibiotic resistance. Lipoteichoic acid (LTA) is an essential amphiphilic polymer on the surface of most Gram positive bacteria. While the molecule's exact role is not yet fully understood, a role in cell-cell contact during conjugation enabling the spread of extra chromosomal elements has been discussed. LTA also has implications in regulating autolysis, sequestering cations to the cell surface, adhesion, biofilm formation, antibiotic resistance, UV sensitivity, acid tolerance, and virulence. The gene ebsG was identified in a mutant of E. faecalis with major alterations in LTA structure and decreased ability to act as a recipient in conjugative mating. ebsG codes for a 119 kDa protein with only weak homology to other surface proteins of Gram positive bacteria. Transcriptional linkage analysis indicated ebsG and its downstream genes are organized in an operon. LTA analysis reveals a higher glycosyl content of the molecule in the mutant during stationary phase. Compared to wild type OG1RF, the mutant is more sensitive to nisin, shows higher autolysis activity during stationary phase, and is better able to serve as a recipient in plasmid transfer. Our data indicate ebsG and the members of the operon play a role in LTA structure and may act to degrade LTA.