O objetivo deste estudo consiste em avaliar a efetividade de diferentes sistemas empregados no preparo biomecânico, dentre eles: Self-adjusting file (SAF), TiLOS Anatomic Endodontic Technology System (TiLOS) e Mtwo sobre a eliminação de Enterococcus faecalis cultivados em canais radiculares. Para isso, foram selecionados 47 prés-molares inferiores humanos, os quais foram contaminados por Enterococcus faecalis (ATCC 29212) durante 21 dias e divididos em três grupos: GI - SAF com irrigação contínua; GII - EndoEze Tilos e irrigação com auxílio de agulhas NaviTip; GIII - MTwo e irrigação com NaviTip a cada troca de instrumento. A irrigação foi realizada com solução de NaOCl a 2,5%. Coletas bacterianas foram realizadas em três tempos experimentais: coleta da contaminação (S1), posterior ao preparo dos canais radiculares (S2) e após sete dias do preparo biomecânico (S3). Os dados em UFC foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn com P<0.05. Na análise dos resultados, foi observada redução de E.faecalis após preparo (P < .05) em todos os grupos, sem diferença significante entre os grupos (P > .05). A coleta final demonstrou aumento bacteriano similar em todos os grupos, esclarecendo a viabilidade das bactérias incubadas. Dessa forma, conclui-se que o preparo dos canais radiculares realizado com SAF, EndoEze Tilos e Mtwo contribuem na desinfecção do canal radicular, sem, todavia, eliminar o E. faecalis do sistema de canais radiculares. / The aim of this study was to evaluate the effectiveness of different chemo-mechanical systems for root canal preparation Self-adjusting File (SAF), TiLOS Anatomic Endodontic Technology System (TiLOS), and Mtwo against Enterococcus faecalis in the canal. Forty seven human mandibular bicuspids were contaminated with E. faecalis (ATCC 29212) for 21 days and divided into groups according to preparation methodÇ SAF group with continuous irrigationç TiLOS;Endo-Eze group and irrigation with a NaviTip needle Mtwo group and irrigation eith NaviTip. The irrigant used was 2.5% NaOCl. Bacterial harvests were performed after the contamination period (initial harvest), immediately post-preparation, and seven days after chemo-mechanical preparation. Data were expressed as CFU and subjected to ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn tests at P < 0.05. Reduction in E.faecalis was observed after preparation (P< .05), with no significant differences between the groups (P> .05). The final harvest demonstrated statistically similar increase in the bacterial counts in all groups. Root canal preparation using SAF, TiLOS;Endo-Eze, and Mtwo systems contribute for the disinfection of the root

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria Enterococcus faecalis em induzir periodontite apical no modelo experimental canino; verificar se o preparo químico-mecânico afeta a sobrevivência dessa bactéria no sistema de canais radiculares e avaliar o reparo desses dentes por meio de radiografia periapical e tomografia computadorizada cone beam. Dentes com e sem tratamento endodôntico foram avaliados por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, foram utilizados 2 cães. A bactéria Enterococcus faecalis foi inoculada nos canais de 4 pré-molares superiores, 11 prémolares inferiores e 9 incisivos superiores. As câmaras pulpares foram seladas e, após 60 dias, os canais das raízes distais dos pré-molares e de 7 incisivos superiores foram submetidos a tratamento endodôntico em sessão única e os canais das raízes mesiais dos pré-molares e 2 incisivos superiores foram deixados sem tratamento (controle). Amostras microbiológicas foram feitas antes e após o preparo químico-mecânico. O reparo foi avaliado após 6 meses do tratamento mediante radiografias periapicais e por tomografia computadorizada cone beam. A comparação entre as imagens obtidas após o período experimental pelos 2 métodos foi feita por medições da área em mm2 de cada lesão encontrada, utilizando o software ImageTool Os resultados mostraram que a presença de periodontite apical crônica foi verificada em todos os dentes inoculados, independentemente da colonização pela bactéria Enterococcus faecalis ou pela flora mista. O preparo químico-mecânico reduziu significativamente o número de bactérias no interior dos canais radiculares (p<0.05). Os resultados radiográficos e tomográficos demonstraram lesões de menor diâmetro nos dentes tratados endodonticamente em comparação ao grupo controle (p<0.05). A comparação entre os métodos demonstrou diferença estatística entre eles sendo evidenciada áreas radiolúcidas maiores utilizando a tomografia cone beam em comparação com a radiografia periapical (p<0.05). Concluiu-se que a bactéria Enterococcus faecalis induziu periodontite apical crônica similarmente à flora mista; o tratamento endodôntico reduziu o número de bactérias cultiváveis significativamente embora sem relação com o reparo radiográfico. Os dentes tratados em sessão única apresentavam lesões menores em comparação aos não-tratados e as áreas das lesões observadas na TC cone beam foram maiores do que as áreas encontradas nas radiografias periapicais. A microscopia confocal e o método proposto neste estudo se mostraram eficazes para determinar, qualitativamente, a viabilidade bacteriana e a distribuição de ácidos nucléicos bacterianos dentro dos túbulos dentinários. Houve diferença entre a dentina infectada in vitro com o padrão de infecção in vivo, caracterizada pela presença de biofilmes aderidos à parede do canal radicular. / The aims of this study were to evaluate the Enterococcus faecalis ability to induce apical periodontitis in dogs root canals, to verify the bacterias ability to survive to the cleaning and shaping procedures and to assess the healing of the induced apical periodontitis by periapical radiograph and cone beam computed tomography. Also, endodontically treated and non-treated teeth were evaluated by confocal laser scanning microscope. Two mongrel dogs were used in the experiment. Enterococcus faecalis strain was inoculated into the root canals of 4 maxillary premolars, 11 mandibular premolars and 9 maxillary incisors. After 60 days the root canals of the distal roots of the mandibular and maxillary pre-molars and 7 maxillary incisors were endodontically treated. The premolars mesial root canal and 2 maxillary incisors were used as control (no treatment). Microbiologic samples were done after and before the cleaning and shaping procedure. The healing was evaluated after 6 months by periapical radiographs and cone beam computed tomography. The comparison between obtained images after the experimental period by the two methods was done using measures of the lesion area in mm2 with ImageTool software. The results showed the presence of chronic apical periodontitis in every inoculated teeth, with Enterococcus faecalis or mixed infection. The cleaning and shaping procedures reduced the number of bacteria of the root canals (p<0.05). The radiographic and tomographic results showed the lower diameter lesion in endodontically treated teeth than in the control group (p<0.05). The comparison between the methods showed statistical difference and greater radiolucent areas were evident in cone beam computed tomography images (p<0.05). It is possible to conclude that the bacteria Enterococcus faecalis induced chronic apical periodontitis as well as the mixed microflora; the endodontic treatment reduced the number of cultivable bacteria in a significant way, but with no relation to the radiographic healing. The treated teeth in only one session presented smaller lesions in comparison to the non-treated teeth and the lesions area in cone beam computed tomography were bigger than the areas found in periapical radiograph. The confocal microscopy and the proposed method of this study showed to be efficient to determine the bacterial ability and the distribution of bacterial nucleic acids inside the dentin tubules. There was difference between in vitro infected dentin with the in vivo infection pattern, which presents biofilm attached to the root canal walls.

Atualmente, define-se como translocação bacteriana o deslocamento de bactérias e/ou seus produtos, como as endotoxinas, da luz do TGI para sítios estéreis. A ocorrência de translocação bacteriana tem sido sugerida em diversos estudos experimentais e clínicos. Apesar de todos estes estudos sustentarem a hipótese da ocorrência de translocação bacteriana, eles não demonstram que a bactéria detectada no sangue e em sítios estéreis tem efetivamente origem no TGI do animal ou paciente. Portanto, o objetivo da primeira fase deste trabalho, consistiu no desenvolvimento de um modelo experimental que comprovasse que bactérias isoladas em sítios estéreis são realmente de origem intestinal e que pudesse posteriormente viabilizar o estudo da translocação bacteriana. Para isto, realizou-se a colonização de ratos através da inoculação, via gavagem, de solução de Enterococcus faecalis resistente a vancomicina (ERV) e E. coli produtora de Beta-lactamase de espectro estendido (ESBL). O perfil de resistência destas cepas foi utilizado como marcador. Posteriormente, este estudo avaliou a translocação bacteriana em ratos submetidos a isquemia-reperfusão hepática com e sem estase venosa intestinal, utilizando o modelo de colonização. Quarenta e seis animais foram divididos nos seguintes grupos: Grupo I (n=15) ratos submetidos a isquemia hepática e estase intestinal por 30 minutos, e 1h de reperfusão; Grupo II (n=15) ratos submetidos a 30 minutos de isquemia hepática parcial sem estase intestinal, e 1h de reperfusão;Grupo III (n=8) ratos controle que apenas sofreraam manipulação cirúrgica e Grupo IV (n=8) ratos controle não cirúrgico. Os grupos foram analisados em relação: a ocorrência de translocação bacteriana; proporção de animais com crescimento da cepa pré-definida de ERV e E. coli ESBL, por órgão ou tecido; Concentração de LPS no sangue portal e sistêmico. Os resultados obtidos evidenciaram presença marcante de crescimento microbiológico positivo para cepas inoculadas na maioria dos órgãos ou tecidos analisados nos diferentes grupos. Desta forma, conseguimos comprovar que a bactéria detectada em sítios estéreis tem efetivamente origem no TGI daquele animal. A translocação de bactérias, para os órgãos sólidos, ocorreu com maior freqüência nos ratos submetidos a isquemia e reperfusão com estase intestinal. A translocação bacteriana para o pulmão ocorreu com maior freqüência nos grupos cirúrgicos, inclusive controle, do que no controle não cirúrgico. A translocação de endotoxinas, medida pela concentração sangüínea sistêmica, ocorreu com maior intensidade nos ratos submetidos a isquemia e reperfusão hepática com estase intestinal. Não houve diferenças entre os grupos quanto a proporção de animais com cultura positiva no sangue sistêmico e porta e concentração de endotoxinas no sangue porta. / Bacterial translocation is defined as the passage of viable bacteria and/or their products, such as endotoxins, from inside the gastrointestinal tract (GIT) to normally sterile sites. Experimental studies demonstrate that increase of the permeability of the intestinal mucosa and other conditions such as intestinal bacterial overgrowth or host immune deficiency may be associated with this phenomenon. The occurrence of bacterial translocation has been suggested in some experimental and clinical studies. Although all these studies sustained the occurrence of the bacterial translocation but they did not demonstrate that it has effectively origin in the TGI of the animal or patient. The first objective of this study was to develop a GIT colonization experimental model in rats with resistant Enterococcus faecalis (E.faecalis) and E.coli, to be used in further studies of bacterial translocation intending, The resistance profile of these strains is used as a marker. Afterwards, this study evaluated the bacterial translocation in rats submitted to hepatic ischemic-reperfusion with or without intestinal vein stasis. Forty six animals were used as follows: Group I (n=15) mice submitted to ischemic hepatica and intestinal stasis for 30 minutes, and 1h of reperfusion; Group II (n=15) mice submitted to partial ischemic hepatica for 30 minutes without intestinal stasis, and 1h of reperfusion; Group III (n=8) control of mice which only suffered surgical manipulation and Group IV (n=8) Group of mice without surgical control. The groups were analyzed concerning: the occurrence of bacterial translocation; proportion of animals with predefined ERV and E.Coli ESBL growth increase per organ or tissue; LPS concentration in the portal and systemic blood. The results demonstrated remarkable appearance of positive microbiological growth for inoculated stains mostly in the analyzed tissues within the different groups. By this way, we were able to prove that the bacteria present in sterile sites have effectively their origin in the TGI of that animal. The bacteria translocation in solid organs occurred frequently in group I submitted to the ischemia-reperfusion with intestinal stasis. The bacterial translocation in lung occurred more frequently in the surgical groups including chirurgical control. The endotoxin in systemic blood concentration occurred more intensively in group I submitted to the ischemia-reperfusion with intestinal stasis.

Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

Objetivo: Considerando que a precisão na adaptação do implante ao intermediário transmucoso é fator importante para a longevidade da prótese e que os sistemas de implantes possuem origens diversas na sua fabricação, nos propusemos a verificar a infiltração da bactéria Enterococcus faecalis na interface entre intermediário transmucoso e implantes do tipo Cone Morse e Hexágono Interno no sistema Neodent . Material e Método: A amostra foi composta por 20 implantes do tipo Cone Morse com Index Protético, 20 implantes Titamax Cone Morse e 20 implantes de Hexágono Interno e 20 intermediários transmucosos do tipo Munhão Universal CM Exact, 20 Munhão Universal em corpo único de 3,3 x 5,5 mm e 20 Munhão Universal II Plus com Parafuso. Com o auxílio da Micropipeta o Inóculo foi aspirado, imediatamente após, inserido no interior do implante que se encontrava estático na placa do Dispositivo desenvolvido para este experimento. Os intermediários foram então conectados e apertados com chave digital própria, em seguida, foi dado o torque ao parafuso do intermediário de acordo com as recomendações do fabricante. Após o torque o conjunto, implante-intermediário foi removido da placa do Dispositivo com pinça de titânio e inserido dentro do tubo de ensaio que continha o meio de cultura estéril. Diante do conhecimento da área interna de cada implante, o volume do Inóculo a ser utilizado foi determinado em 1L. Todos os tubos contendo os conjuntos foram numerados e incubados a 37oC por um período de 14 dias. Foi realizado acompanhamento diário para verificação da possível passagem de bactérias do interior do implante para o caldo. O indicativo da passagem de bactéria para o meio foi a turvação do meio de cultura (caldo BHI). Decorrido os 14 dias de observação, os dados foram tabulados e submetidos à Análise de Variância (ANOVA) com nível de significância de 5%, quando detectada diferença estatística, os valores foram submetidos ao Teste de Tuckey para comparações múltiplas. Resultados: O Teste de Tukey evidenciou que houve diferença estatisticamente significante entre o grupo de implantes Cone Morse, Cone Morse Índex e Hexágono Interno, onde o grupo de implantes Cone Morse diferiu estatisticamente do grupo Cone Morse Índex e também do grupo de implantes de Hexágono Interno. O grupo de implantes Cone Morse Índex não diferiu estatisticamente do grupo de implantes de Hexágono Interno, porém o grupo Cone Morse Índex presentou os melhores resultados. / Objective: Whereas the accuracy adaptation of the implant abutment is an important factor for the longevity of the prosthesis, and implant systems have diverse backgrounds in its manufacture, we set out to verify the infiltration of Enterococcus faecalis bacteria at the interface between the abutment and transmucosal implants of Morse Taper and Internal Hex of Neodent system. Material and Methods: The sample consisted of 20 Morse Taper implants, 20 Titamax Morse Taper implants, 20 Internal Hexagon implants and 20 transmucosal Exact CM Universal Post abutment, 20 Universal Post 3 in one body , 3 x 5.5mm and 20 Universal Post II Plus with Screw . With the aid of a micropipette the inoculum was aspirated, immediately thereafter, inserted into the implant that was in the static device board developed for this experiment. The abutments were then connected and tightened to own digital key, then the torque was given to the screw of the abutment according to the manufacturer\'s recommendations. After the torque, deploy abutment was removed from the plate clamp device of titanium and inserted into a test tube containing sterile culture. According to the internal area of each implant, the inoculum size was determined to be 1L. All the tubes were numbered and incubated at 37 ° C for a period of 14 days. Daily monitoring to check the possible passage of bacteria into the interior of the implant broth was carried out. The indication of the passage of bacteria was turbidity of the culture (BHI). Upon expiry of the 14 days of observation, the data were tabulated and an analysis of variance (ANOVA) with a significance level of 5 % was done. The values were submitted to Tukey test for multiple comparisons. Results: The Tukey test showed a statistically significant difference between the group of Morse Taper implants, Cone Morse Index and Internal Hex, where the group of implants differed from Morse Taper, Morse Taper Index group and also the group of Internal Hexagon implants. The group of Morse Taper implants Index did not differ statistically from the group of Internal hexagon implants, but Morse Taper Index group showed the best results

Diss. (sammanfattning) Linköping : Linköpings universitet, 2005. / Härtill 4 uppsatser.

Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

The persistence of microorganisms in the root canal system after chemical-mechanical preparation plays an important role in the success rate of endodontic treatment. Photodynamic Therapy in endodontics appeared to be a supplement to the disinfection of root canals aiming resolve this persistence. When questioning what the actual antibacterial effect of this treatment in clinical endodontics, we face numerous formulations and concentrations of the photosensitizer used, as well as numerous methodologies to test its antimicrobial activity, offering confusing and inconclusive results. The aim of this study was to evaluate the in vitro antibacterial activity against two strains of Enterococcus faecalis ATCCs 29212 and 51299, of the methylene blue photosensitizer (PS) in different formulations and concentrations cited in the literature. The method used to evaluate the antibacterial activity of the photosensitizer was the microdilution to determine the minimum inhibitory concentration. The 18 test substances, in the literature, were left in contact for five minutes in each well and then followed by the application of the laser (660 nm, Kondortech®, São Carlos, SP, Brazil) for three minutes. The tests were performed according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2013). After the incubation period at 35 ± 2 ° C 18-24hs, read visually observing the bacterial growth and is considered where the inhibitory substances were wells without turbidity and / or deposition of sediments at the bottom was carried out. Dissolved in a mixture of 2% chlorhexidine and H₂O₂ (substance 15), and a mixture of glycerol, ethanol, water, hydrogen peroxide and Triton X100 detergent (substance 10) PS inhibited the growth of Enterococcus faecalis resistant microorganism 29212. For the addition of these the mixture PS glycerol, ethanol, and water (substance 13) also showed an inhibitory power. No concentration of methylene blue dissolved in water (300 to 7.5 μmol / L) had able to inhibit the growth of the strains analyzed. Given the literature reviewed and the results of the study to predict the efficacy of PDT against microorganism problem in endodontics, a standardization of the optimal formulation of PS, its contact time and also of important laser parameters is still necessary, as full power , creep and irradiation time. / A permanência dos microrganismos no sistema de canais radiculares após o preparo químico-mecânico desempenha um importante papel na taxa de sucesso do tratamento endodôntico. A Terapia Fotodinâmica surgiu na endodontia para ser um suplemento à desinfecção dos canais radiculares visando dirimir essa persistência. Ao questionarmos qual o real efeito antibacteriano desse tratamento na clínica de endodontia, nos deparamos com inúmeras formulações e concentrações usadas do fotossensibilizador, bem como inúmeras metodologias para testar sua atividade antimicrobiana, oferecendo resultados confusos e não conclusivos. O objetivo deste estudo foi avaliar in vitro a atividade antibacteriana, frente a duas cepas de Enterococcus faecalis ATCCs 29212 e 51299, do agente fotossensibilizador (FS) azul de metileno em diferentes concentrações e formulações citadas na literatura. O método empregado para avaliar a atividade antibacteriana do fotossensibilizador foi a microdiluição em caldo com a determinação da concentração inibitória mínima. As 18 substâncias-teste, citadas na literatura, foram deixadas em contato por cinco minutos em cada poço e então, seguiu-se a aplicação do laser (660nm, Kondortech®, São Carlos, SP, Brazil) por três minutos. Os testes foram realizados de acordo com o Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI 2013). Após o período de incubação de 18-24hs a 35±2ºC, foi realizada a leitura visual observando o crescimento bacteriano, sendo consideradas inibitórias as substâncias onde os poços estavam sem turbidez e/ou depósito de sedimentos no fundo. O FS dissolvido numa mistura de H₂O₂ e clorexidina 2% (substância 15) e numa mistura de glicerol, etanol, água, peróxido de hidrogênio e detergente Triton X100 (substância 10) inibiram o crescimento do Enterococcus faecalis 29212. Para o microrganismo resistente além destas, a mistura do FS em glicerol, etanol e água (substância 13) também apresentou poder inibitório. Nenhuma concentração de azul de metileno dissolvido em água (300 a 7,5 μmol/L) apresentou poder de inibir o crescimento das cepas estudadas. Diante da literatura pesquisada e dos resultados do estudo, para predizer a eficácia da TFD frente ao microrganismo problema na endodontia, ainda é necessário uma padronização da formulação ideal do FS, seu tempo de contato e ainda, de parâmetros importantes do laser, como potência total, fluência e tempo de irradiação.

The objective of this study was to evaluate the dissolution of bovine pulp tissue by NaOCl solutions in different concentrations for a similar period to the time of root canal preparation, and chemical and antimicrobial properties of the resulting solution after this dissolution. Fragments of bovine dental pulp were exposed to different solutions (0.5, 1.0, 2.5 and 5.25%) for 10 minutes. Each one minute, the solution was renewed. The reduction of weight of fragment of pulp was measured. The antimicrobial activity of the solutions was evaluated against Enterococcus faecalis by agar diffusion test. Fresh NaOCl solution and the resulting solution of dissolution test were placed into wells prepared agar plates. After the incubation period, the inhibition zones of bacterial growth were measured with the aid of a digital caliper. The concentration of active chlorine initial and final was measured by iodometric titration. The hydrogen potential of the solutions was measured by digital pHmeter. Statistical analysis was performed by ANOVA, test and post hoc Tukey test for paired samples when appropriate (α <0.05). To check the correlation between concentration and rate of dissolution of pulp or percentage of weight reduction of pulp fragments, we employed the Pearson linear correlation. We found a significant association between concentration and dissolution rate of pulp (rPearson=0.9698, p=0.03). There was also a strong correlation between concentration and percentage of weight reduction of the fragments (rPearson=0.9843, p = 0.01). The hypochlorite solution with 5.25% showed the highest inhibition zones, followed by 2.5% NaOCl (p <0.01). There was no statistically significant difference between the concentrations of 0.5% and 1.0%. The inhibition zones reduced after dissolving pulp is not significant for the solution to 1.0% (p=0.1). After dissolving bovine pulp tissue, there was a significant reduction of the pH of the solutions at 0.5%, 1.0% and 5.25%, which kept the concentration of active chlorine dissolution. It is concluded that the higher the concentration of NaOCl, the greater its antimicrobial action against the E.faecalis and its effectiveness in dissolving pulp tissue. Can also be stated that the process of dissolving pulp reduces the antimicrobial effectiveness of sodium hypochlorite, probably due to the consumption of sodium hydroxide during the test. / O objetivo deste estudo foi avaliar a dissolução de tecido pulpar bovino por soluções de NaOCl, em diferentes concentrações, durante período similar ao tempo de preparo do canal radicular; e as propriedades químicas e antimicrobianas da solução resultante após esta dissolução. Fragmentos de polpa dental bovina foram expostos às diferentes soluções de NaOCl (0,5; 1,0; 2,5 e 5,25%) por 10 minutos. A cada 1 minuto, a solução foi renovada. Registrou-se a redução do peso dos fragmentos de polpa. A ação antimicrobiana das soluções foi avaliada frente ao Enterococcus faecalis através do teste de difusão em ágar. Soluções de NaOCl recém manipuladas e as resultantes do teste de dissolução foram colocadas no interior de poços preparados em placas de ágar. Após o período de incubação, os halos de inibição de crescimento bacteriano formados ao redor dos poços foram mensurados com auxílio de paquímetro digital. A concentração de cloro ativo inicial e final foi aferida por titulometria iodométrica. O potencial hidrogeniônico das soluções foi mensurado por pHmetro digital. A análise estatística foi realizada através de ANOVA, teste post hoc de Tukey e teste para amostras pareadas quando apropriado (α<0.05). Para verificação de correlação entre concentração da solução e velocidade de dissolução pulpar ou percentual de redução de peso dos fragmentos pulpares, foi empregado o teste de correlação linear de Pearson. Constatou-se associação significativa entre concentração da solução e velocidade de dissolução pulpar (rPearson=0.9698, p=0,03). Houve, também, forte correlação entre concentração da solução e percentual de redução de peso dos fragmentos (rPearson=0,9843, p=0,01). A solução de hipoclorito a 5,25% apresentou maiores halos de inibição, seguida por NaOCl a 2,5% (p<0,01). Não houve diferença estatisticamente significante entre as concentrações de 0,5% e 1,0%. Os halos reduziram após a dissolução pulpar, não sendo estatisticamente significante para a solução a 1,0% (p=0,1). Após dissolver tecido pulpar bovino, houve redução significativa do pH das soluções a 0,5%; 1,0% e 5,25%, as quais mantiveram a concentração de cloro ativo após dissolução. Conclui-se que, quanto maior a concentração do NaOCl, maior sua ação antimicrobiana frente ao E.faecalis e sua eficácia em dissolver tecido pulpar. Pode-se afirmar também que o processo de dissolução pulpar reduz a eficácia antimicrobiana do hipoclorito de sódio, provavelmente devido ao consumo de hidróxido de sódio durante o período do teste.

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A maior tolerância aos antibióticos observada nos biofilmes baseia-se principalmente na proteção das bactérias pela matriz polimérica extracelular autoproduzida, e nos diversos fenótipos de crescimento encontrados na estrutura, que podem ser refratários à ação os fármacos convencionais. Nesse cenário de crescente e disseminada resistência a antimicrobianos, a busca por novos fármacos e terapias alternativas se tornou crucial, especialmente aqueles que sejam capazes de eliminar os microrganismos resistentes, impedir o desenvolvimento de novas formas de resistência, e serem ativos contra biofilmes. A terapia fotodinâmica antimicrobiana (aPDT, do inglês antimicrobial photodynamic therapy) e os peptídeos antimicrobianos (PAM) ganham destaque nesse contexto, em especial para o tratamento de infecções localizadas. Entretanto, ambas as abordagens apresentam limitações terapêuticas quando empregadas individualmente. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo estudar os efeitos e mecanismos da combinação dos PAMs aureína 1.2 (AU) e seu dímero (AU)2K com a aPDT mediada pelos fotossensibilizadores (FS) azul de metileno (AM), clorina-e6 (Ce6) ou curcumina (CUR), usando como modelo a bactéria Enterococcus faecalis, em fase planctônica e biofilme. O dímero (AU)2K não apresentou atividade antibacteriana em fase planctônica, sendo a parte inicial do estudo conduzida, então, apenas com o monômero. Os resultados mostram que a combinação da aPDT com AU se provou capaz de eliminar E. faecalis, in vitro, com baixas concentrações de FS e peptídeo e menores doses de luz, em comparação às monoterapias. O efeito sinérgico foi observado apenas quando a AU foi associada à aPDT mediada por AM ou Ce6, não sendo encontrada vantagem na terapia combinada quando o FS era CUR, revelando um mecanismo dependente do FS. O efeito sinérgico entre AU e AM-PDT foi resultado de uma maior penetração do FS na bactéria em presença do peptídeo, ao passo que o efeito sinérgico entre AU e Ce6-PDT se deu por uma interação entre as moléculas que levou a uma maior instabilidade da membrana plasmática. O tratamento combinado também foi eficaz contra diferentes cepas, incluindo a eliminação completa de uma cepa de Enterococcus faecium resistente à vancomicina, um resultado sem precedentes. O protocolo de terapia combinada foi testado quanto à sua capacidade de inibir a formação de biofilme de E. faecalis. Embora não apresente atividade contra bactérias em fase planctônica, o dímero (AU)2K foi incluído nos estudos com biofilmes, mostrando alta capacidade de impedir a fase inicial do desenvolvimento dos biofilmes, tanto sozinho quanto combinado à aPDT. O monômero (AU) também apresentou atividade significativa para impedir que E. faecalis forme biofilme, particularmente quando combinado à Ce6-PDT. Outras espécies bacterianas também foram avaliadas, sendo os protocolos de combinação capazes de impedir a formação de biofilme por todas elas de forma significativa. Tomados em conjunto, os resultados obtidos neste estudo revelam que a combinação de aPDT com um PAM pode provocar a morte bacteriana com concentrações mínimas de FS e PAM e baixas doses de luz, o que, por sua vez, minimizaria os efeitos adversos no tecido do hospedeiro. Além disso, a capacidade de inibir a formação de biofilme por parte dessa abordagem demonstra seu potencial para impedir o estabelecimento de infecções crônicas, fortemente relacionadas a biofilmes microbianos. Essa abordagem sinérgica tem o potencial de eliminar infecções localizadas e, ao mesmo tempo, minimizar o uso de antimicrobianos sistêmicos e impedir o desenvolvimento de novos perfis de resistência. / In the past few years, the World Health Organization has been warning that the post-antibiotic era is an increasingly real threat. In addition to the individual resistance of bacterial cells, they may be even more tolerant to antimicrobial agents by growing in biofilms. The higher tolerance to antibiotics observed in biofilms is mainly based on the protection of bacteria by the self-produced extracellular polymeric matrix, and in the various growth phenotypes found in the structure, which may be refractory to the action of conventional drugs. In this scenario of increasing and widespread antimicrobial resistance, the search for new drugs and alternative therapies has become crucial, especially for those that are capable of eliminating resistant microorganisms, preventing the development of new forms of resistance, and are active against biofilms. Antimicrobial photodynamic therapy (aPDT) and antimicrobial peptides (AMP) are highlighted in this context, especially for the treatment of localized infections. However, both approaches have therapeutic limitations when used individually. Therefore, the aim of this study was to evaluate the effects and mechanisms of the combination of the AMPs aurein 1.2 (AU) and its dimer (AU)2K with aPDT mediated by the photosensitizers (PS) methylene blue (MB), chlorine-e6 (Ce6) or curcumin CUR), using the bacteria Enterococcus faecalis as a model, in planktonic phase and biofilm. The dimer (AU)2K did not present antibacterial activity in planktonic phase, so the initial part of the study was conducted only with the monomer. The results show that the combination of aPDT with AU proved to be able to eliminate E. faecalis, in vitro, with low concentrations of PS and peptide and lower light doses, compared to the monotherapies. The synergistic effect was observed only when AU was associated with MB or Ce6-mediated aPDT, and no advantage was found in the combination therapy when the PS was CUR, revealing a PS-dependent mechanism. The synergistic effect between AU and MB-PDT was a result of a greater penetration of the PS in the bacterium in the presence of the peptide, whereas the synergistic effect between AU and Ce6-PDT was due to an interaction between the molecules that led to greater instability of the plasmatic membrane. The combination treatment was also effective against different strains, including a complete elimination of a strain of vancomycin-resistant Enterococcus faecium, an unprecedented result. The combination therapy protocol was tested for its ability to inhibit E. faecalis biofilm formation. Although it did not present activity against planktonic bacteria, the (AU)2K dimer was included in the biofilm studies, showing high capacity to prevent the initial phase of biofilm development, both alone and combined with aPDT. The monomer AU also showed significant activity to prevent E. faecalis from forming biofilm, particularly when combined with Ce6-PDT. Other bacterial species were also evaluated, and the combination protocols were able to prevent biofilm formation by all of them in a significant way. Taken together, the results obtained in this study reveal that the combination of aPDT with an AMP can lead to bacterial death with minimal concentrations of PS and AMP and low light doses, which in turn would minimize adverse effects on host tissue. In addition, the ability of this approach in inhibiting the formation of biofilms reveals its potential to prevent the establishment of chronic infections, strongly related to microbial biofilms. This synergistic approach has the potential to resolve localized infections while minimizing the use of systemic antimicrobials and preventing the development of new resistance profiles. / 2014/24581-5 / 2016/18378-8