Introdução. As Repetições Palindrômicas Curtas Agrupadas e Regularmente Interespaçadas (CRISPRs) são DNAs que consistem de repetições de nucleotídeos. Existem 3 tipos: CRISPR1-CAS, CRISPR3-CAS e CRISPR2. Os bacteriófagos são partículas virais que infectam bactérias. Os bacteriófagos SAP6, IME-EF1, BC-611, VD-13 e F4 são encontrados em E. faecalis assim como FL1ABC, FL2AB, FL3AB e FL4A. Objetivo. Identificar e caracterizar as classes de CRISPRs e bacteriófagos de E. faecalis e E. faecium isoaldos de amostras alimentares, clínicas e fezes de animais. Materiais e métodos. Foram usadas DNA de 153 isolados, sendo 98 de E. faecalis e 55 de E. faecium. A técnica de detecção foi a PCR utilizando iniciadores para os genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas e bacteriófagos, seguido por electroforese em gel de agarose. Resultados. Para E. faecalis foram detectadas 58 isolados que amplifacaram para o gene CRISPR1-Cas; 87 para CRISPR2 e 13 para CRISPR3-Cas. Para E. faecium foram detectadas 4 isolados positivos para o gene CRISPR1-Cas; 18 para CRISPR2 e 1 para CRISPR3-CAS. O bacteriófago FL2ABfoi detectado em 13 isolados de E. faecalis; o bacteriófago FL3AB em 13 isolados de E. faecalis e o FL4A em 28 isolados de E. faecalis. Conclusão. Neste estudo nos encontramos diferentes proporções e distribuições dos genes CRISPRs em E. faecalis e E. faecium. O bacteriófago FL4A apresentou-se como o mais frequente entre os bacteriófagos avalados. / Introduction. The CRISPR are small portions of DNA consisting of nucleotide repeats. There are three types of CRISPRs recognized: CRISPR-associated genes cas: CRISPR1-CAS and CRISPR3-CAS and a orphan locus lacking cas genes: CRISPR2. Bacteriophages are viral particles that infect bacterial. The bacteriophages SAP6, IME-EF1, BC-611 and F4 are found in E. faecalis as well as FL1ABC, FL2AB, FL3AB, FL4A. Objectivy: To Identify and to characterize CRISPRs genes and bacteriophage genes in E. faecalis and E. faecium isolated from food, clinical and animal fecal samples. Materials and methods. A total of 153 DNA samples were used, 98 from E. faecalis and 55 from E. faecium. The PCR technique using primers was used to detect the genes CRISPR1-Cas, CRISPR2, CRISPR3-cas and bacteriophages, followed the agarose gel electrophoresis. Results. To E. faecalis was detected 58 isolates that amplified the CRISPR1-Cas genes, 87 to CRISPR2 and 13 to CRISPR3-Cas. To E. faecium was detected 4 isolates positive to CRISPR1-Cas gene, 18 to CRISPR2 e 1 to CRISPR3-CAS. The FL2AB bacteriophage was detected in 13 isolates of E. faecalis; the FL3AB bacteriophage in 13 isolates of E. faecalis and the FL4A in 28 isolates of E. faecalis. Conclusion. In this work, we found out different proportions and distributions of CRISPRs genes in E. faecalis e E. faecium. The FL4A bacteriophage showed a high frequency among the bacteriophages tested.

Este trabalho teve o objetivo de avaliar a capacidade da bactéria Enterococcus faecalis em induzir periodontite apical no modelo experimental canino; verificar se o preparo químico-mecânico afeta a sobrevivência dessa bactéria no sistema de canais radiculares e avaliar o reparo desses dentes por meio de radiografia periapical e tomografia computadorizada cone beam. Dentes com e sem tratamento endodôntico foram avaliados por meio de microscopia confocal de varredura a laser. Para tal, foram utilizados 2 cães. A bactéria Enterococcus faecalis foi inoculada nos canais de 4 pré-molares superiores, 11 prémolares inferiores e 9 incisivos superiores. As câmaras pulpares foram seladas e, após 60 dias, os canais das raízes distais dos pré-molares e de 7 incisivos superiores foram submetidos a tratamento endodôntico em sessão única e os canais das raízes mesiais dos pré-molares e 2 incisivos superiores foram deixados sem tratamento (controle). Amostras microbiológicas foram feitas antes e após o preparo químico-mecânico. O reparo foi avaliado após 6 meses do tratamento mediante radiografias periapicais e por tomografia computadorizada cone beam. A comparação entre as imagens obtidas após o período experimental pelos 2 métodos foi feita por medições da área em mm2 de cada lesão encontrada, utilizando o software ImageTool Os resultados mostraram que a presença de periodontite apical crônica foi verificada em todos os dentes inoculados, independentemente da colonização pela bactéria Enterococcus faecalis ou pela flora mista. O preparo químico-mecânico reduziu significativamente o número de bactérias no interior dos canais radiculares (p<0.05). Os resultados radiográficos e tomográficos demonstraram lesões de menor diâmetro nos dentes tratados endodonticamente em comparação ao grupo controle (p<0.05). A comparação entre os métodos demonstrou diferença estatística entre eles sendo evidenciada áreas radiolúcidas maiores utilizando a tomografia cone beam em comparação com a radiografia periapical (p<0.05). Concluiu-se que a bactéria Enterococcus faecalis induziu periodontite apical crônica similarmente à flora mista; o tratamento endodôntico reduziu o número de bactérias cultiváveis significativamente embora sem relação com o reparo radiográfico. Os dentes tratados em sessão única apresentavam lesões menores em comparação aos não-tratados e as áreas das lesões observadas na TC cone beam foram maiores do que as áreas encontradas nas radiografias periapicais. A microscopia confocal e o método proposto neste estudo se mostraram eficazes para determinar, qualitativamente, a viabilidade bacteriana e a distribuição de ácidos nucléicos bacterianos dentro dos túbulos dentinários. Houve diferença entre a dentina infectada in vitro com o padrão de infecção in vivo, caracterizada pela presença de biofilmes aderidos à parede do canal radicular. / The aims of this study were to evaluate the Enterococcus faecalis ability to induce apical periodontitis in dogs root canals, to verify the bacterias ability to survive to the cleaning and shaping procedures and to assess the healing of the induced apical periodontitis by periapical radiograph and cone beam computed tomography. Also, endodontically treated and non-treated teeth were evaluated by confocal laser scanning microscope. Two mongrel dogs were used in the experiment. Enterococcus faecalis strain was inoculated into the root canals of 4 maxillary premolars, 11 mandibular premolars and 9 maxillary incisors. After 60 days the root canals of the distal roots of the mandibular and maxillary pre-molars and 7 maxillary incisors were endodontically treated. The premolars mesial root canal and 2 maxillary incisors were used as control (no treatment). Microbiologic samples were done after and before the cleaning and shaping procedure. The healing was evaluated after 6 months by periapical radiographs and cone beam computed tomography. The comparison between obtained images after the experimental period by the two methods was done using measures of the lesion area in mm2 with ImageTool software. The results showed the presence of chronic apical periodontitis in every inoculated teeth, with Enterococcus faecalis or mixed infection. The cleaning and shaping procedures reduced the number of bacteria of the root canals (p<0.05). The radiographic and tomographic results showed the lower diameter lesion in endodontically treated teeth than in the control group (p<0.05). The comparison between the methods showed statistical difference and greater radiolucent areas were evident in cone beam computed tomography images (p<0.05). It is possible to conclude that the bacteria Enterococcus faecalis induced chronic apical periodontitis as well as the mixed microflora; the endodontic treatment reduced the number of cultivable bacteria in a significant way, but with no relation to the radiographic healing. The treated teeth in only one session presented smaller lesions in comparison to the non-treated teeth and the lesions area in cone beam computed tomography were bigger than the areas found in periapical radiograph. The confocal microscopy and the proposed method of this study showed to be efficient to determine the bacterial ability and the distribution of bacterial nucleic acids inside the dentin tubules. There was difference between in vitro infected dentin with the in vivo infection pattern, which presents biofilm attached to the root canal walls.

O objetivo deste estudo consiste em avaliar a efetividade de diferentes sistemas empregados no preparo biomecânico, dentre eles: Self-adjusting file (SAF), TiLOS Anatomic Endodontic Technology System (TiLOS) e Mtwo sobre a eliminação de Enterococcus faecalis cultivados em canais radiculares. Para isso, foram selecionados 47 prés-molares inferiores humanos, os quais foram contaminados por Enterococcus faecalis (ATCC 29212) durante 21 dias e divididos em três grupos: GI - SAF com irrigação contínua; GII - EndoEze Tilos e irrigação com auxílio de agulhas NaviTip; GIII - MTwo e irrigação com NaviTip a cada troca de instrumento. A irrigação foi realizada com solução de NaOCl a 2,5%. Coletas bacterianas foram realizadas em três tempos experimentais: coleta da contaminação (S1), posterior ao preparo dos canais radiculares (S2) e após sete dias do preparo biomecânico (S3). Os dados em UFC foram submetidos aos testes ANOVA e Tukey ou Kruskal-Wallis e Dunn com P<0.05. Na análise dos resultados, foi observada redução de E.faecalis após preparo (P < .05) em todos os grupos, sem diferença significante entre os grupos (P > .05). A coleta final demonstrou aumento bacteriano similar em todos os grupos, esclarecendo a viabilidade das bactérias incubadas. Dessa forma, conclui-se que o preparo dos canais radiculares realizado com SAF, EndoEze Tilos e Mtwo contribuem na desinfecção do canal radicular, sem, todavia, eliminar o E. faecalis do sistema de canais radiculares. / The aim of this study was to evaluate the effectiveness of different chemo-mechanical systems for root canal preparation Self-adjusting File (SAF), TiLOS Anatomic Endodontic Technology System (TiLOS), and Mtwo against Enterococcus faecalis in the canal. Forty seven human mandibular bicuspids were contaminated with E. faecalis (ATCC 29212) for 21 days and divided into groups according to preparation methodÇ SAF group with continuous irrigationç TiLOS;Endo-Eze group and irrigation with a NaviTip needle Mtwo group and irrigation eith NaviTip. The irrigant used was 2.5% NaOCl. Bacterial harvests were performed after the contamination period (initial harvest), immediately post-preparation, and seven days after chemo-mechanical preparation. Data were expressed as CFU and subjected to ANOVA and Tukey or Kruskal-Wallis and Dunn tests at P < 0.05. Reduction in E.faecalis was observed after preparation (P< .05), with no significant differences between the groups (P> .05). The final harvest demonstrated statistically similar increase in the bacterial counts in all groups. Root canal preparation using SAF, TiLOS;Endo-Eze, and Mtwo systems contribute for the disinfection of the root

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-19T11:13:21Z No. of bitstreams: 2 Tese - Denise Ramos Silveira Alves - 2016.pdf: 1503752 bytes, checksum: 84aa2ffe80e8b6013fb3b3cbdf580374 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-09-19T11:13:44Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Denise Ramos Silveira Alves - 2016.pdf: 1503752 bytes, checksum: 84aa2ffe80e8b6013fb3b3cbdf580374 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-19T11:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Denise Ramos Silveira Alves - 2016.pdf: 1503752 bytes, checksum: 84aa2ffe80e8b6013fb3b3cbdf580374 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-05-05 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / Objective: Evaluate the effect of photodynamic therapy (PDT) on Enterococcus faecalis biofilm in infected root canals and on dentin structure. Methods: Twenty-one root canals of a sample of 24 extracted single-rooted human teeth were infected by E. faecalis for 60 days to form biofilm. The antimicrobial strategies tested were (n=3 in each group): root canal preparation using NiTi rotary instruments, 2.5% NaOCl and 17% EDTA irrigation, and PDT with 0.01% methylene blue (group I) or 0.01% malachite green (group II); root canal preparation using NiTi rotary instruments, 2.5% NaOCl and 17% EDTA irrigation, and PDT with 0.01% methylene blue (group III); PDT with 0.01% methylene blue without root canal preparation (group IV); root canal preparation using NiTi rotary instruments, 22.5% NaOCl and 17% EDTA irrigation, and no PDT (group V); 2.5% NaOCl irrigation with no root canal preparation, and 17% EDTA irrigation (group VI); positive control (group VII). Three roots were not infected and were used as negative controls (group VIII). Samples for microbiological tests were collected using three sterile paper points, later stored in BHI and incubated at 37o C for 48 hours at three time points: before (S1) and after (S2) root canal preparation, and after PDT application (S3). Bacterial growth was analyzed according to turbidity of culture medium, presence of bacteria, and spectrophotometric optical density (nm). Specimens were sectioned and prepared for SEM analysis of dentin structure. Results: Bacteria were found at S1, S2 and S3 in all experimental groups. Optical density of culture media at S2 and S3 in groups I, II and III were lower than at S1, but not statistically different. Optical density of culture media at S2 was 28.70% and 24.67% lower than at S1 in groups I and II; after PDT, optical density was 90.00% (group I) and 37.30% (group II) lower. In group III, it was 97.70% lower at S2 and an additional 92.00% lower after PDT. In group IV, optical density increase 3.2%. Dentin analysis after PDT revealed areas of melting and recrystallization, peritubular dentin projections, intertubular dentin erosion and fusion of dentinal tubule openings, which made dentin surface irregular. Some dentinal tubules were obliterated, and there were changes in the shape of their openings. Conclusion: PDT applied after root canal preparation using manual or rotary files was not effective in eliminating E. faecalis completely. PDT changed dentin structure and resulted in dentin melting and recrystallization, as well as in dentinal tubule erosion and obliteration. / Objetivo: Avaliar o efeito da terapia fotodinâmica sobre biofilme de Enterococcus faecalis em canais radiculares infectados e sobre a estrutura dentinária. Metodologia: O estudo foi desenvolvido em vinte e quatro dentes humanos unirradiculares extraídos, dos quais vinte e um canais radiculares foram infectados com E. faecalis por 60 dias para formação de biofilme. As estratégias antimicrobianas testadas foram (n=3): preparo do canal radicular com instrumentos rotatórios de NiTi/ NaOCl 2,5%/ irrigação final EDTA 17%, e TFD com azul de metileno 0,01% (Grupo I) ou verde malaquita 0,01% (Grupo II); preparo do canal radicular com instrumentos manuais de aço inox/ NaOCl 2,5%/ irrigação final EDTA 17% e TFD com azul de metileno 0,01% (Grupo III); TFD com azul de metileno 0,01% sem preparo prévio do canal radicular (Grupo IV); preparo do canal radicular com instrumentos rotatórios de NiTi/ NaOCl 2,5%/ irrigação final EDTA 17% sem emprego da TFD (Grupo V); irrigação com hipoclorito de sódio 2,5% sem preparo do canal radicular/ irrigação final EDTA 17% (Grupo VI); controle positivo (Grupo VII). Três espécimes não foram contaminados, sendo utilizados como controle negativo (Grupo VIII). Coletas microbiológicas foram realizadas, antes (CM1) e após (CM2) o preparo do canal radicular, e depois da aplicação da TFD (CM3), utilizando três pontas de papel absorventes esterilizadas, posteriormente armazenadas em BHI e a seguir , incubadas a 37o C por 48 horas. O crescimento bacteriano foi analisado pela turbidez do meio de cultura, sendo determinada a presença ou ausência de bactérias, e pela densidade óptica do meio de cultura, interpretada por espectrofotometria (nm). A seguir, os espécimes foram seccionados e preparados para análise da estrutura dentinária por meio de imagens de MEV. Resultados: A presença de bactérias foi verificada na CM1 , CM2 e CM3 de todos os grupos experimentais. As medidas da densidade óptica dos meios de cultura das CM2 e CM3 nos grupos experimentais I, II e III apresentaram redução quando comparada a CM1, porém não significativa estatisticamente. Nos Grupos I e II a densidade óptica do meio de cultura foi reduzida em 28.70% e 24,67% em CM2, respectivamente. Após a TFD, a redução da densidade óptica foi 90,00% (Grupo I) e 37,70% (Grupo II). No Grupo III, a redução da densidade óptica do meio de cultura foi de 97,70% na CM2, com redução adicional de 92,00% após TFD. No Grupo IV foi verificado aumento da densidade óptica do meio de cultura em 3,2%. A análise da dentina evidenciou, nos grupos submetidos à TFD, áreas de derretimento e recristalização, projeção da dentina peritubular, e regiões com erosão da dentina intertubular e união das entradas dos túbulos dentinários, tornando a superfície dentinária irregular. Obliteração de túbulos dentinários com alteração do contorno de suas entradas também foi verificada. Conclusão: A TFD, após preparo do canal radicular com sistema rotatório ou manual, não foi efetiva na eliminação completa de E. faecalis, e alterou a estrutura dentinária, determinando derretimento e recristalização de dentina, erosão e obliteração de túbulos dentinários.

Submitted by JÚLIO HEBER SILVA (julioheber@yahoo.com.br) on 2016-11-25T16:25:06Z No. of bitstreams: 2 Tese - Helder Fernandes de Oliveira - 2016.pdf: 15364016 bytes, checksum: 5f02981d26eeeb064647328615e844cc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2016-11-28T17:41:29Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Helder Fernandes de Oliveira - 2016.pdf: 15364016 bytes, checksum: 5f02981d26eeeb064647328615e844cc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-11-28T17:41:29Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Helder Fernandes de Oliveira - 2016.pdf: 15364016 bytes, checksum: 5f02981d26eeeb064647328615e844cc (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2016-11-17 / Objetive: Evaluate the antibacterial effect of reciprocating systems associated with sodium hypochlorite 2.5% and apple vinegar in infected root canals. Methods: Fifty human anterior teeth uniradicular were prepared, inoculated with E. faecalis and examined after sixty days. The teeth were randomly assigned to five groups: (1. WaveOne® 40.08; 2. Reciproc® 40.06; 3. Unicorne® 40.06; 4 and 5 positive and negative controls. For each experimental group (n = 10), five specimens were irrigated with sodium hypochlorite 2.5%, and five with apple vinegar. Bacterial growth was analyzed using turbidity of culture medium followed by UV spectrophotometry. The cleaning of dentinal walls was analyzed by scanning electronic microscopy (SEM). Results: All groups showed a significant reduction of the optimal density of the culture medium after the root canal preparation (p<0,05). No sanitizing strategy promoted the complete elimination of E. faecalis. In the analysis of cleaning the root surface, it was found that in none of the groups showed complete removal of debris, not being verified significant differences indifferent to analyzed thirds (p> 0.05). Conclusion: The reciprocating instruments (WaveOne®, Reciproc® and Unicorne®) and irrigating sodium hypochlorite solution 2.5% and apple cider vinegar have not been effective in eliminating E. faecalis complete in infected root canals. / Objetivo: Avaliar o efeito antibacteriano de sistemas reciprocantes associados ao hipoclorito de sódio 2,5% e ao vinagre de maça em canais radiculares infectados. Materiais e métodos: Cinquenta dentes humanos unirradiculares extraídos foram preparados, inoculados com Enterococcus faecalis e incubados a 37°C por sessenta dias. Os espécimes foram aleatoriamente divididos em 05 grupos sendo três experimentais e dois controles (1. WaveOne® 40.08; 2. Reciproc® 40.06; 3. Unicone® 40.06; 4. Controle positivo; Controle negativo). Para cada grupo experimental, cinco espécimes foram irrigados com hipoclorito de sódio 2,5% e cinco com vinagre de maçã. O crescimento bacteriano foi analisado pela turbidez do meio de cultura e espectrofotometria UV. A limpeza das paredes dentinárias foi analisada por microscopia eletrônica de varredura. Resultados: Todos os grupos mostraram redução significativa da densidade óptica do meio de cultura após o preparo do canal radicular (p<0,05). Nenhuma estratégia de sanificação promoveu a eliminação completa do E. faecalis. Na análise da limpeza da superfície radicular, foi verificado que, em nenhum dos grupos houve a remoção completa dos debris, não sendo verificadas diferenças significativas indiferente aos terços analisados (p>0,05). Conclusão: Os instrumentos reciprocantes (WaveOne®, Reciproc® e Unicorne®) e as soluções irrigadoras hipoclorito de sódio 2,5% e vinagre de maça não foram efetivos na completa eliminação do E. faecalis em canais radiculares infectados.

Objetivo: Considerando que a precisão na adaptação do implante ao intermediário transmucoso é fator importante para a longevidade da prótese e que os sistemas de implantes possuem origens diversas na sua fabricação, nos propusemos a verificar a infiltração da bactéria Enterococcus faecalis na interface entre intermediário transmucoso e implantes do tipo Cone Morse e Hexágono Interno no sistema Neodent . Material e Método: A amostra foi composta por 20 implantes do tipo Cone Morse com Index Protético, 20 implantes Titamax Cone Morse e 20 implantes de Hexágono Interno e 20 intermediários transmucosos do tipo Munhão Universal CM Exact, 20 Munhão Universal em corpo único de 3,3 x 5,5 mm e 20 Munhão Universal II Plus com Parafuso. Com o auxílio da Micropipeta o Inóculo foi aspirado, imediatamente após, inserido no interior do implante que se encontrava estático na placa do Dispositivo desenvolvido para este experimento. Os intermediários foram então conectados e apertados com chave digital própria, em seguida, foi dado o torque ao parafuso do intermediário de acordo com as recomendações do fabricante. Após o torque o conjunto, implante-intermediário foi removido da placa do Dispositivo com pinça de titânio e inserido dentro do tubo de ensaio que continha o meio de cultura estéril. Diante do conhecimento da área interna de cada implante, o volume do Inóculo a ser utilizado foi determinado em 1L. Todos os tubos contendo os conjuntos foram numerados e incubados a 37oC por um período de 14 dias. Foi realizado acompanhamento diário para verificação da possível passagem de bactérias do interior do implante para o caldo. O indicativo da passagem de bactéria para o meio foi a turvação do meio de cultura (caldo BHI). Decorrido os 14 dias de observação, os dados foram tabulados e submetidos à Análise de Variância (ANOVA) com nível de significância de 5%, quando detectada diferença estatística, os valores foram submetidos ao Teste de Tuckey para comparações múltiplas. Resultados: O Teste de Tukey evidenciou que houve diferença estatisticamente significante entre o grupo de implantes Cone Morse, Cone Morse Índex e Hexágono Interno, onde o grupo de implantes Cone Morse diferiu estatisticamente do grupo Cone Morse Índex e também do grupo de implantes de Hexágono Interno. O grupo de implantes Cone Morse Índex não diferiu estatisticamente do grupo de implantes de Hexágono Interno, porém o grupo Cone Morse Índex presentou os melhores resultados. / Objective: Whereas the accuracy adaptation of the implant abutment is an important factor for the longevity of the prosthesis, and implant systems have diverse backgrounds in its manufacture, we set out to verify the infiltration of Enterococcus faecalis bacteria at the interface between the abutment and transmucosal implants of Morse Taper and Internal Hex of Neodent system. Material and Methods: The sample consisted of 20 Morse Taper implants, 20 Titamax Morse Taper implants, 20 Internal Hexagon implants and 20 transmucosal Exact CM Universal Post abutment, 20 Universal Post 3 in one body , 3 x 5.5mm and 20 Universal Post II Plus with Screw . With the aid of a micropipette the inoculum was aspirated, immediately thereafter, inserted into the implant that was in the static device board developed for this experiment. The abutments were then connected and tightened to own digital key, then the torque was given to the screw of the abutment according to the manufacturer\'s recommendations. After the torque, deploy abutment was removed from the plate clamp device of titanium and inserted into a test tube containing sterile culture. According to the internal area of each implant, the inoculum size was determined to be 1L. All the tubes were numbered and incubated at 37 ° C for a period of 14 days. Daily monitoring to check the possible passage of bacteria into the interior of the implant broth was carried out. The indication of the passage of bacteria was turbidity of the culture (BHI). Upon expiry of the 14 days of observation, the data were tabulated and an analysis of variance (ANOVA) with a significance level of 5 % was done. The values were submitted to Tukey test for multiple comparisons. Results: The Tukey test showed a statistically significant difference between the group of Morse Taper implants, Cone Morse Index and Internal Hex, where the group of implants differed from Morse Taper, Morse Taper Index group and also the group of Internal Hexagon implants. The group of Morse Taper implants Index did not differ statistically from the group of Internal hexagon implants, but Morse Taper Index group showed the best results

Objetivo: Avaliar se a adição de nanopartículas de prata ao cimento MTA branco irá melhorar a ação antimicrobiana sobre Enterococcus faecalis e prevenir a aderência deste microrganismo ao material. Método: Teste de contato direto utilizando corpos de prova dos materiais: MTA branco (n=10) grupo B, MTA cinza (n=10) grupo C, MTA branco + NPAg em pó a 1% em peso (n=10) grupo P, MTA branco + solução de NPAg 50ppm (n=10) grupo L, que foram mantidos a 35&#730;C por 72 horas na suspensão de Enterococcus faecalis em SBF (0.085 UA; 660nm). Alíquotas de 100&#956;L foram tomadas da suspensão a cada 24 horas, realizadas as diluições seriadas e semeadas em triplicata em placa de Petri contendo meio Nutriente acrescido de azul de bromotimol a 0,001%. As placas foram incubadas a 35&#730;C por 48 horas e então realizadas as contagens de UFC. Ao final de 72 horas, corpos de prova em resina (n=10), que haviam sido mantidos na mesma suspensão juntamente com os demais grupos, tiveram a suspensão renovada, tendo sido ajustada para 0.1 UA (660nm). Permaneceram por mais 72 horas em estufa a 35&#730;C e então foram submetidos ao teste de aderência. Resultados: Para a comparação intergrupos considerando a variação do número de UFC em dois períodos houve diferença significante entre o grupo P e demais grupos no intervalo (T0-24h) e no intervalo (48-72h) para o grupo C comparado ao grupo L e P (Teste Anova teste t; &#945;=0.01). Conclusões: Os cimentos MTA cinza e branco, com ou sem nanopartículas, apresentaram ação antimicrobiana sobre Enterococcus faecalis em todos os períodos do teste de contato direto; A adição da nanopartícula de prata em pó promoveu um efeito antimicrobiano em menor tempo sobre o Enterococcus faecalis, no teste de contato direto; O MTA branco, com nanopartículas não permitiu a aderência bacteriana ao final de 72 horas em contato com a suspensão bacteriana de Enterococcus faecalis. / Aim: To evaluate if the addition of silver nanoparticles to white MTA cement will improve the antimicrobial action of Enterococcus faecalis and prevent adherence of this microorganism to the material. Method: Direct contact test using samples of materials: white MTA (n=10) B group, gray MTA (n=10) C group, white MTA + NPAG powder to 1wt% (n=10) P group, white MTA + solution NPAG of 50ppm (n=10) L group were kept at 35&#730;C for 72 hours in Enterococcus faecalis in SBF(0.085AU; 660nm). Aliquots of the suspension were taken every 24 hours, serial dilutions carried out in triplicate and plated on Petri dishes containing nutrient medium plus bromothymol blue 0.001%. The plates were incubated at 35&#730;C for 48 hours and then the CFU counts performed. At the end of 72 hours resin specimens (n=10) which had been kept at the same suspension together with the remaining groups all had renewed suspension having been adjusted to 0.1AU (660nm). Lasted for over 72 hours in an oven at 35&#730;C and then were tested for adhesion. Results: Comparing between those groups consider the variation of numbers of CFU in two periods there was significant differente between the P group and other groups in the interval (T0-24h) and range (48-72h) for group C compared with group L and P (Anova test - t test; &#945;=00:01). Conclusions: The gray and white MTA, with or without nanoparticles showed antimicrobial activity on Enterococcus faecalis at all periods of direct contact test; the silver nanoparticle powder addition promoted an antimicrobial effect in less time on the Enterococcus faecalis in test direct contact; white MTA with nanoparticles prevented bacterial adherence at the end of 72 hours in contact with the bacterial suspension of Enterococcus faecalis.

Orientador: Juliane Maria Guerreiro Tanomaru / Resumo: Os cimentos reparadores endodônticos à base de silicato de cálcio apresentam biocompatibilidade e bioatividade. Porém, sua ação antimicrobiana é limitada. O acréscimo de óleos essencias pode favorecer as propriedades antimicrobianas de materiais. Os óleos essenciais são substâncias de origem vegetal com propriedades antimicrobiana, antiviral, antifúngica, antitoxigênica, antiparasitária e inseticida. Este estudo teve como objetivo avaliar a associação de diferentes óleos essenciais nas propriedades físico-químicas, citocompatibilida, potencial bioativo e atividade antibiofilme dos cimentos reparadores à base de silicato de cálcio, MTA Repair HP (MTA HP) e Biodentine (BIO). Publicação 1: avaliou a associação de 1,5% de Farnesol (FAR). Publicação 2: analisou o acréscimo de 1% de Thyme Essential Oil (TEO). Publicação 3: associou 1% de lemongrass oil (LEO). As propriedades físico-químicas de tempo de presa, solubilidade após 7 dias de imersão em água destilada e pH em 1, 3, 7, 14 e 21 dias foram avaliadas. A citocompatibilidade foi avaliada por meio dos testes de methyltetrazolium (MTT) e Vermelho Neutro (VN) após exposição das células Saos-2 às diferentes diluições dos eluídos dos materiais por 24h. A bioatividade foi avaliada pela atividade enzimática da fosfatase alcalina (ALP) nos períodos de 1, 3 e 7 dias. Nódulos de mineralização foram também quantificados após 21 dias pela coloração com vermelho de Alizarina (ARS). A capacidade de inibição de Metaloproteinase de Matriz (MM... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Indiana University-Purdue University Indianapolis (IUPUI) / Introduction: Nonsurgical root canal therapy procedures aim to reduce the total microbial load within an infected root canal system through chemomechanical debridement of the root canal system via instrumentation in conjunction with an antibacterial irrigating solution. The most commonly used irrigant is sodium hypochlorite, often at concentrations toxic to human cells. Electromagnetic wave irradiation is a novel method of disinfection that has been shown to be bactericidal against planktonic microorganisms in solution, but its efficacy against an established biofilm is unknown. Pilot studies have demonstrated a synergistic killing effect with sodium hypochlorite through a process termed electromagnetic stimulation (EMS). If confirmed, lower concentrations of the current gold standard of 6.0-percent sodium hypochlorite could be used to irrigate infected root canals during endodontic treatment, resulting in less toxicity to human cells. There are also regenerative implications as EMS could be used to disinfect the root canals of immature teeth using 1.5-percent sodium hypochlorite, as recommended by the American Association of Endodontists. Objectives: The purpose of this in-vitro study was to evaluate the anti-biofilm effect of EMS against an established biofilm of Enterococcus faecalis. Materials and Methods: Single rooted teeth were cut to a standardized length (12 mm) and instrumented with a 45.05 Wave One Gold reciprocating file. Specimens were sterilized and inoculated with E. faecalis, which grew for two weeks to form an established biofilm. There were five treatment groups: 1) 6.0-percent sodium hypochlorite; 2) 1.5-percent sodium hypochlorite; 3) 1.5-percent sodium hypochlorite with EMS; 4) 0.9-percent saline with EMS and 5) 0.9-percent saline. Samples were collected, plated, and incubated for two days. The number of CFUs/mL was determined and converted to log10. The effect of treatment group on bacterial counts was made using Wilcoxon Rank Sums Test. One sample per group was scored and split for confocal imaging. Null Hypothesis: Teeth treated with EMS in combination with 1.5-percent sodium hypochlorite or 0.9-percent saline will not demonstrate a significant anti-biofilm effect in comparison to those treated with 6.0-percent sodium hypochlorite alone. Results: 0.9-percent saline and 0.9-percent saline with EMS were significantly higher than 6.0-percent NaOCl, 1.5-percent NaOCl, and 1.5-percent NaOCl with EMS. 0.9-percent saline was significantly higher than 0.9-percent saline with EMS. The three groups that included treatment with NaOCl were not significantly different from each other. Confocal imaging confirmed the CFU findings. Conclusion: Because there was no growth in any of the NaOCl groups, the null hypothesis cannot be rejected. However, there was an antibiofilm effect when comparing the two saline groups, demonstrating that EMS has an antibiofilm effect. Future studies should focus on determining what concentration of NaOCl is most effective in combination with EMS.

Doctor of Philosophy / Department of Biology / Lynn E. Hancock / The enterococci are gaining much notoriety as common nosocomial pathogens. One aspect of their pathogenesis, especially characteristic to infectious endocarditis and urinary tract infections, involves their ability to transition from the sessile state of existence to surface adherent structured communities called biofilms. Existence as biofilms, affords enterococci protection against a number of growth limiting challenges including antibiotic therapy and host immunity. In the current study a mechanistic role for two Fsr quorum-regulated extracellular proteases- gelatinase (GelE) and its cotranscribed serine protease (SprE), were explored in biofilm development of E. faecalis V583. Confocal imaging of biofilms suggested that GelE[superscript]– mutants were significantly reduced in biofilm biomass compared to V583, whereas the absence of SprE appeared to accelerate the progression of biofilm development. Culture supernatant and biofilm analysis confirmed that decreased biofilms observed in GelE[superscript]– mutants resulted from their inability to undergo autolysis and release extracellular DNA (eDNA) in planktonic and biofilm cultures, whereas SprE[superscript]– mutants produced significantly more eDNA as components of the biofilm matrix. The governing principle behind GelE mediated autolysis and eDNA release in E. faecalis V583 was demonstrated to be fratricide. GFP reporter assays of V583 populations confirmed that GBAP (gelatinase biosynthesis-activating pheromone encoded by fsrD) quorum non-responders (GelE[superscript]–SprE[superscript]–) were a minority subpopulation of prey cells susceptible to the targeted fratricidal action of the quorum responsive predatorial majority (GelE[superscript]+SprE[superscript]+). The killing action is dependent on GelE, and the GelE producer population is protected from self-destruction by the co-production of SprE as an immunity protein. Targeted gene inactivation and protein interaction studies demonstrate that extracellular proteases execute their characteristic effects following downstream interactions with the primary autolysin, AtlA. Finally, comparison of virulence effects of isogenic extracellular protease mutants (∆gelE, ∆sprE and ∆gelEsprE) relative to parental strain (V583) in a rabbit model of enterococcal endocarditis confirmed a critical role for GelE in the infection process. In conclusion, the data presented in this thesis are consistent with significant roles for GelE and SprE in biofilm mediated pathogenesis of enterococcal infections.