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La détermination précise du jour de l'ovulation est considérée par la plupart des auteurs comme l'un des facteurs les plus importants pour fixer le moment optimal d'insémination artificielle chez la chienne. Ceci est particulièrement important lors d'utilisation de semence congelée en raison de la faible durée de survie de la semence congelée/décongelée dans l'appareil génital femelle. Notre étude a tout d'abord tenté de déterminer la technique la plus précise pour identifier la survenue de l'ovulation chez la chienne. Notamment, nous avons souhaité savoir si l'examen échographique des ovaires pouvait être un moyen fiable et précis pour déterminer l'ovulation chez la chienne. Notre but a été de détecter l'ovulation par échographie dans différentes races et d'évaluer les intérêts et la précision de cette technique, en comparaison avec les taux hormonaux autour de l'ovulation. Nos résultats ont confirmé que l'échographie ovarienne était une technique précise de détermination de l'ovulation chez la chienne. Nous avons également démontré que cette technique n'améliorait la détection de l'ovulation que chez 15,3% des chiennes en comparaison des dosages de progestérone sanguine. Au bilan, les concentrations de progestérone plasmatique sont extrêmement constantes au moment de l'ovulation quelle que soit la race et, de ce fait, les dosages de progestérone apparaissent être une méthode suffisamment précise pour déterminer le moment de l'ovulation. Utilisant les échographies ovariennes pour la détection du moment de l'ovulation chez la chienne, nous avons ensuite essayé d'évaluer le déroulement exact de la maturation ovocytaire in vivo chez la chienne, ainsi que le développement embryonnaire précoce. De plus, nous avons cherché à vérifier si, in vivo, les spermatozoïdes canins étaient capables de pénétrer des ovocytes encore à un stade immature. Nous avons démontré que le stade de la vésicule germinative (VG) était le seul présent jusqu'à 44h après l'ovulation. Le premier stade métaphase II n'est observé qu'à partir de 54h. Plusieurs stades de maturation ovcytaire différents sont observés au même moment pour une même chienne. In vivo, la fécondation se produit dans la plupart des cas à partir de 90h post ovulation dans des ovocytes ayant complété leur maturation (métaphase II). La pénétration in vivo d'ovocytes immatures par des spermatozoïdes apparaît extrêmement rare. Ces résultats devraient permettre une amélioration ou une simplification de la pratique vétérinaire quotidienne, notamment lors d'utilisation d'insémination artificielle en semence congelée. De plus une meilleure connaissance des processus impliqués dans la maturation ovocytaire in vivo, la fécondation, et le développement embryonnaire précoce sont des étapes importantes pour améliorer le développement des biotechnologies de la reproduction dans l'espèce canine.

The aim The aim of my study was to determine whether the selected endocrine disruptors (EDs) affect reproductive parameters of sperm. Due to two experimental models, in which was tested the influence of selected Eds, my work is divided into two parts: A) On the boar model (Sus scrofa) was tested effect of selected EDs (zearalenone (ZEN), di(2-ethylhexyl) phthalate (DEHP), vinclozolin (VIN) on the course of capacitation, acrosome responses in vitro and changes in the detection and localization of selected proteins. B) On the fish model (Perca fluviatilis L.) was tested the influence of the selected ED- bisphenol A (BPA) on the motility and velocity of fish sperm movement. Results Mammalian model In mammalian model the course of capacitation and acrosome reaction was significantly influencing by the examined EDs in comparision with control samples. The increase of the number of marked cells during capacitation and reduce of the number of marked cells after AR compared with the differences between experimental and control samples was confirmed by the flow cytometry method. At higher concentrations EDs clearly inhibited acrosome response and thus reduce the number of sperm capable of fertilization. The relevancy of the results of detection acrosome reaction was confirmed by using various methodological...

L’objectif de ce travail est d’améliorer la productivité du maïs fourrager (Zea mays L.) dans les sols calcaires tunisiens. En effet dans ces conditions édaphiques la plante se heurte à des problèmes d’ordre nutritionnel limitant l’absorption des 3 éléments essentiels. C’est pourquoi nous voulons mettre au point une nouvelle technologie capable de contourner ces contraintes. En effet la fertilisation par voie foliaire associé à un désherbage de pré émergence serait l’approche la plus logique, capable d’apporter les éléments en fonction des besoins de la plante et de constituer par conséquent une alternative à des apports traditionnels au sol qui présentent un faible coefficient d’efficacité. Pour cela nous voulons : - étudier l’effet de la dose, de la dilution de l’engrais et de son association à un herbicide de post émergence sur la biomasse et l’absorption des éléments nutritifs de la plante et comparer ces effets à ceux d’une application traditionnelle au sol. - Déterminer l’équilibre NPK permettant d’obtenir une croissance optimale de la plante et ceci par le biais d’une expérimentation de type factoriel. - Enfin transposer ce mode de fertilisation en conditions réelles au champ, en intégrant également un désherbage de post émergence. Enfin rechercher et doser, les deux molécules présentes dans l’herbicide, dans deux substrats (le sol et la plante) et étudier leur rétention à court terme : caractérisation des mécanismes d’adsorption et de désorption des deux molécules dans les deux types de sol utilisés. Les résultats obtenus en conditions contrôlées ont mis en évidence le fait que la biomasse de la plante ainsi que la quantité d’éléments exportés par celle-ci sont gouvernées par un effet variétal et un effet dose. De plus certaines associations herbicide-engrais favorisent mieux que d’autres la croissance de la plante ainsi que l’absorption des éléments appliqués. Les résultats de l’expérience de type factoriel ont montré qu’à doses égales, l’effet positif d’un apport foliaire est supérieur à celui de l’engrais apporté au sol. Ces effets positifs sont observés sur les différents paramètres étudiés (biomasse, absorption d’éléments, nutritifs, quantités exportés et coefficients apparents d’utilisation des 3 éléments appliqués). L’utilisation du logiciel SPSS montre que la relation de la biomasse (poids sec) et la quantité d’éléments apportée est de type polynomial. L’équation ainsi obtenue nous a permis de calculer la production de matière sèche et de représenter les différentes surfaces de réponse. Les résultats obtenus en conditions réelles, au champ ont montré également que l’engrais apporté sur le feuillage est le mode de fertilisation le plus efficient. Ces résultats ont montré également que pour tous les traitements, la quantité d’azote exporté par la plante, suit une courbe unimodale avec un maximum situé au prélèvement III, effectué 34 jours après le semis. Par contre les quantités de P et les quantités de K exportés augmentent de façon continue, depuis le prélèvement I (26 jours après le semis) jusqu’à la récolte finale (97 jours après le semis). C’est (l’épi +tige) qui exporte la plus grande quantité (pratiquement le double). Un effet pompe dû au traitement foliaire a été également observé. Cet effet stimule l’absorption des éléments nutritifs par les racines et permet une meilleure valorisation des réserves du sol. En plus le désherbage de post émergence associé à l’engrais a montré une plus grande efficacité à l’égard de la flore adventice présente, en comparaison à l’application de l’herbicide seul ou associé à l’engrais appliqué au sol. Le dosage des deux molécules herbicides en HPLC a montré que les teneurs des 2 molécules dans la plante et dans le sol sont inférieures à la limite de détermination. (les limites de détection et de détermination ont été estimées respectivement à de valeurs de 0,02 et de 0,05 mg/kg de sol). Les coefficients de corrélation des droites d’étalonnage obtenues, sont supérieurs à 0,99 et le pourcentage de recouvrement se situe entre 84 et 104% (intervalle de confiance est de plus ou moins 18%). Les isothermes d’adsorption obtenues dans le cas du 2,4-D sont respectivement de type L avec Kf = 0,9 et n inférieur (sol A) et de type C, avec Kf = 0,8 et n voisin de 1 (sol B). Ces résultas montrent qu’en présence d’un pH (alcalin), la molécule entant qu’acide faible est dissociée. Cette forme est peu retenue par les colloïdes du sol ce qui favorise son transfert ainsi que sa dégradation. La normalisation, du coefficient de distribution Kd, à la teneur en matière organique et à la teneur en carbone organique montre que pour des horizons de 0-30, 30 – 60 et 60 -120 cm, les valeurs de KOM et KOC dans le sol A, restent pratiquement identiques dans les 3 horizons. Par contre dans le sol B ces coefficients sont plus faibles dans l’horizon supérieur (0-30 cm). Par contre les isothermes d’adsorption de la carfentrazone ont mis en évidence l’absence de celle-ci et par conséquent la conversion de molécule en ses métabolites.

The structure and function of microbial communities are critical to the maintenance and sustainability of terrestrial ecosystem processes. Consequently, there is substantial interest in assessing how microbial communities respond to various land management practices, and if alterations to the characteristics of microbial communities has the potential to disrupt ecosystem processes. This thesis was conducted to identify the long term effects of fertilisation and different levels of post-harvest organic matter removal on the characteristics of the FH litter and soil microbial communities in six, second rotation Pinus radiata plantation forests located around New Zealand. The six sites, established between 1986 and 1994, were sampled in 2002 and 2003. Various physical and chemical properties of the sites were measured, and litterfall production was determined. The microbial biomass in the FH litter layer and soil was determined by chloroform fumigation-extraction, and Biolog plates were used to assess the relative differences in microbial community diversity, based on patterns of substrate utilisation. Fertilisation substantially altered the physical and chemical properties of the forest floor, including FH litter moisture content, mass, carbon content, nitrogen content and carbon: nitrogen ratio and soil pH, nitrogen content and carbon: nitrogen ratio. The same range of FH litter and soil properties were also significantly changed by different levels of organic matter removal. The biomass and diversity of the FH litter and soil microbial communities were significantly altered by fertilisation and organic matter removal, and the differences in the microbial community characteristics were significantly correlated to the effects of the fertilisation and organic matter removal treatments on the physical and chemical environment in the majority of cases. The physical and chemical properties of the sites were significantly correlated to estimates of wood production, and it was also found that the characteristics of the microbial community were strongly related to productivity at several sites. The results demonstrated that fertilisation and organic matter removal regimes have had long term effects on the microbial communities at the sites. The persistence of the effects of the organic matter removal treatments were particularly noteworthy, as these treatments were applied at site establishment, and despite no subsequent reinforcement over the life of the trials, were still substantially influencing the physical, chemical and microbiological properties of the FH litter and soil up to 17 years later. The results of this thesis also emphasised the value of long-term experiments in assessing the effects of disturbance on the physical, chemical and microbiological characteristics of forest ecosystems. Further research into the specific nature of the relationship between site productivity and microbial community characteristics was suggested as an important focus for future studies.

In the UK, nearly half of the plants short listed for high conservation priority in the UK Biodiversity Action Plan are found in taxonomically complex groups. It is thought that a shift from species- to process-based conservation strategies, aimed at conserving the processes that generate diversity as opposed to simply the end product of these dynamic interactions, may benefit these groups. One group for which this strategy has been proposed is tetraploid Euphrasia. The underlying taxonomic complexity in this group is hypothesised to arise via breeding systems, hybridisation and local ecotypic adaptation. The goal of this thesis is to use morphological, ecological and molecular marker data to examine taxon limits and evolutionary processes in order to further understand the mechanisms involved in maintaining species boundaries and generating taxonomic complexity in tetraploid Euphrasia. This will not only make conservation in this group more effective, but will also provide a broader insight into some of the processes involved in plant speciation. A detailed study of two widespread, small flowered, tetraploid taxa, E. micrantha and E. scottica, showed that offspring are almost exclusively the result of self-fertilization. These taxa maintain distinctive morphologies, habitat preferences and chloroplast DNA variation throughout their range, suggesting that they represent coherent lineages within Scotland. As in other widespread inbreeding species, there are high levels of microsatellite differentiation among different populations of the same species. In northwest Scotland three complex populations of tetraploid Euphrasia were identified which comprised an array of many different morphs (recognised species, and putative hybrids). Analysis of chloroplast and microsatellite markers suggests that these different morphs represent distinct genetic groups. Within each site there is evidence both for habitat heterogeneity, and for association of morphs with this habitat variation. Intermediate morphs were not simple F1 hybrids, but are likely to have originated via hybridisation and subsequent selfing, surviving as independent recombinant lines, perhaps specialised for habitat types different from that of their progenitor parents. These stable morphs of hybrid origin could represent groups with adaptive potential that may result in the origin of a novel Euphrasia species. It will be important to further examine the processes involved in generating novel diversity in Euphrasia. For the time being, these complex populations must be recognised as sites requiring special protection within the context of a process-based conservation strategy.

The structure and function of microbial communities are critical to the maintenance and sustainability of terrestrial ecosystem processes. Consequently, there is substantial interest in assessing how microbial communities respond to various land management practices, and if alterations to the characteristics of microbial communities has the potential to disrupt ecosystem processes. This thesis was conducted to identify the long term effects of fertilisation and different levels of post-harvest organic matter removal on the characteristics of the FH litter and soil microbial communities in six, second rotation Pinus radiata plantation forests located around New Zealand. The six sites, established between 1986 and 1994, were sampled in 2002 and 2003. Various physical and chemical properties of the sites were measured, and litterfall production was determined. The microbial biomass in the FH litter layer and soil was determined by chloroform fumigation-extraction, and Biolog plates were used to assess the relative differences in microbial community diversity, based on patterns of substrate utilisation. Fertilisation substantially altered the physical and chemical properties of the forest floor, including FH litter moisture content, mass, carbon content, nitrogen content and carbon: nitrogen ratio and soil pH, nitrogen content and carbon: nitrogen ratio. The same range of FH litter and soil properties were also significantly changed by different levels of organic matter removal. The biomass and diversity of the FH litter and soil microbial communities were significantly altered by fertilisation and organic matter removal, and the differences in the microbial community characteristics were significantly correlated to the effects of the fertilisation and organic matter removal treatments on the physical and chemical environment in the majority of cases. The physical and chemical properties of the sites were significantly correlated to estimates of wood production, and it was also found that the characteristics of the microbial community were strongly related to productivity at several sites. The results demonstrated that fertilisation and organic matter removal regimes have had long term effects on the microbial communities at the sites. The persistence of the effects of the organic matter removal treatments were particularly noteworthy, as these treatments were applied at site establishment, and despite no subsequent reinforcement over the life of the trials, were still substantially influencing the physical, chemical and microbiological properties of the FH litter and soil up to 17 years later. The results of this thesis also emphasised the value of long-term experiments in assessing the effects of disturbance on the physical, chemical and microbiological characteristics of forest ecosystems. Further research into the specific nature of the relationship between site productivity and microbial community characteristics was suggested as an important focus for future studies.

Le dessèchement précoce du tournesol résulte d'une infection de bas de tige par Phoma macdonaldii qui provoque une nécrose encerclante et un rétrécissement du diamètre du collet. Cette attaque entraine une sénescence foliaire brutale occasionnant des pertes dommageables pour la culture. Des contaminations artificielles par des spores ou du mycélium de P. macdonaldii ont permis de reproduire artificiellement des pieds secs et confortent l'implication de ce champignon dans ce syndrome. Dans un contexte où la protection chimique et la résistance variétale sont limitées, la maîtrise de P. macdonaldii par le contrôle cultural pourrait constituer une alternative efficace. Des essais au champ et en serre menés de 2006 à 2009 à l'INRA et au Cetiom ont permis de mettre en évidence l'importance de la conduite de culture du tournesol sur la fréquence et la gravité du dessèchement précoce et de mieux comprendre l'étiologie de ce syndrome. Une alimentation azotée importante, un peuplement dense et à un régime hydrique limitant en post floraison forment trois facteurs particulièrement favorables au développement du syndrome de desséchement précoce attribué à P. macdonaldii. L'alimentation azotée, au travers de la fertilisation, est le principal facteur favorisant la maladie ; le régime hydrique limitant et la densité de peuplement amplifient la maladie. Le faible diamètre de bas de tige (sous de fortes densités) associé à la prolifération du champignon dans le xylème (azote), occasionnerait une réduction de la conductance hydraulique par obstruction des vaisseaux. Amplifiée lorsque la disponibilité en eau du sol est limitante, cet arrêt de la transpiration se traduit par une sénescence anticipée de 40 jours par rapport à la maturité physiologique de peuplement sains. / Sunflower premature ripening results from an infection by Phoma macdonaldii causing lesions girdling the stem base and narrowing the diameter of the collar. This attack induces a sudden leaf senescence damaging for the culture. Artificial inoculations with spores or mycelium of P. macdonaldii aimed to reproduce the disease and confirm the involvement of this fungus in this syndrome. In a context where chemical protection and plant resistance are limited, control of P. macdonaldii by cultural control could be an effective alternative. Field and greenhouse trials conducted from 2006 to 2009 at INRA and Cetiom showed the importance of sunflower crop management on the frequency and severity of early drying, and better understand the etiology of this syndrome. A significant nitrogen supply, a dense population and a limited water regime postflowering are particularly conducive to premature ripening. Nitrogen supply is the main factor favoring the disease; limited water regime and density amplify the disease. The small stem base diameter (under high densities) associated with the proliferation of the fungus in the xylem (nitrogen), may reduce hydraulic conductance by vessel blockage. Amplified when soil water availability is limiting, this stop of the transpiration leads to early senescence 40 days before physiological maturity of healthy plants.