O estudo da recuperação de lesões nervosas periféricas do isquiático, fibular e tibial, com base nos métodos (De Medinaceli; Freed; Wyatt, 1982), (De Medinaceli; Derenzo; Hunter, 1984), (Carlton; Goldberg, 1986) e (Bain; Mackinnon; Hunter, 1989), obtidos por meio da análise motora, é considerado um bom critério de avaliação para a quantificação do grau de avaliação nervosa. Elas podem ser estudadas através de uma ampla variedade de técnicas que incluem a eletrofisiologia muscular e a morfologia. Porém nem mesmo em condições experimentais controladas, uma correlação da regeneração dos nervos periféricos é completa, porque não provêem informações precisas do estado funcional do nervo. A avaliação da função sensorial é imprecisa e usualmente indireta devido a causas de enervações sobrepostas. Sendo assim, há explicação para os diferentes métodos de avaliação funcional propostos com os avanços tecnológicos, e o aprimoramento dos métodos de captação, armazenamento e processamento dos dados obtidos. O sistema de análise funcional dos nervos periféricos - AFNP, nome dado ao software devido a sua funcionalidade que é de análise funcional de nervos periféricos, apresenta uma interface de fácil interação, emprego e de apresentação das informações ao usuário, através de auxílio de informações de cada contexto do sistema de como utilizá-lo. Sua precisão e a uniformidade das avaliações proporcionaram resultados confiáveis. O uso de recursos gráficos e de relatórios pode disponibilizar os resultados obtidos, por meio de gráficos das médias e de desvios-padrão. A informatização deste processo, além de fornecer ao usuário uma maior agilidade na avaliação, permite ao pesquisador a utilização de um número maior de animais nos grupos experimentais, facilitando não só a captação, bem como o armazenamento e o processamento dos dados. A flexibilidade foi um resultado muito importante a ser ressaltado, pois mais de um usuário tem a possibilidade de interagir no sistema. / The study of the nervous recuperation of peripheral lesions of the sciatic, fibular and tibial, with base in the methods of (De Medinaceli; Freed; Wyatt, 1982), (De Medinaceli; Derenzo; Hunter, 1984), (Carlton; Goldberg, 1986) and (Bain; Mackinnon; Hunter, 1989), obtained through the motive analysis, is considered a good evaluation criterion for the quantification of the degree of nervous evaluation. They can be studied through a wide variety of techniques including the muscular electrophysiology and the morphology. However not even in controlled experimental conditions, a correlation of the regeneration of the peripheral nerves is complete, because they don\'t provide necessary information of the functional state of the nerve. The evaluation of the sensorial function is imprecise and usually indirect due to causes of overlap enervations. Being like this, the explanation for the different functional evaluation methods proposed with the technological progresses and the improvement of the reception methods, storage and processing of the obtained data. The system of functional analysis of the peripheral nerves - AFNP, name given to the software due to its functionality that is of functional analysis of outlying nerves, it presents an interface of easy interaction, work and of presentation of the information to the user, through help information of each context of the system of how to use it. Its precision and the uniformity of the evaluations provided reliable results. The use of graphic resources and reports they can make available the obtained results, through graphs of the averages and of deviations pattern. With the computerization of this process, besides supplying the user a larger agility in the evaluation, it provides the researcher the use of a larger number of animals in the experimental groups, facilitating not only the reception, as well as the storage and the processing of the data. The flexibility was a very important result to be stood out, therefore more than one user has the possibility to interact with the system.

O estudo da recuperação de lesões nervosas periféricas do isquiático, fibular e tibial, com base nos métodos (De Medinaceli; Freed; Wyatt, 1982), (De Medinaceli; Derenzo; Hunter, 1984), (Carlton; Goldberg, 1986) e (Bain; Mackinnon; Hunter, 1989), obtidos por meio da análise motora, é considerado um bom critério de avaliação para a quantificação do grau de avaliação nervosa. Elas podem ser estudadas através de uma ampla variedade de técnicas que incluem a eletrofisiologia muscular e a morfologia. Porém nem mesmo em condições experimentais controladas, uma correlação da regeneração dos nervos periféricos é completa, porque não provêem informações precisas do estado funcional do nervo. A avaliação da função sensorial é imprecisa e usualmente indireta devido a causas de enervações sobrepostas. Sendo assim, há explicação para os diferentes métodos de avaliação funcional propostos com os avanços tecnológicos, e o aprimoramento dos métodos de captação, armazenamento e processamento dos dados obtidos. O sistema de análise funcional dos nervos periféricos - AFNP, nome dado ao software devido a sua funcionalidade que é de análise funcional de nervos periféricos, apresenta uma interface de fácil interação, emprego e de apresentação das informações ao usuário, através de auxílio de informações de cada contexto do sistema de como utilizá-lo. Sua precisão e a uniformidade das avaliações proporcionaram resultados confiáveis. O uso de recursos gráficos e de relatórios pode disponibilizar os resultados obtidos, por meio de gráficos das médias e de desvios-padrão. A informatização deste processo, além de fornecer ao usuário uma maior agilidade na avaliação, permite ao pesquisador a utilização de um número maior de animais nos grupos experimentais, facilitando não só a captação, bem como o armazenamento e o processamento dos dados. A flexibilidade foi um resultado muito importante a ser ressaltado, pois mais de um usuário tem a possibilidade de interagir no sistema. / The study of the nervous recuperation of peripheral lesions of the sciatic, fibular and tibial, with base in the methods of (De Medinaceli; Freed; Wyatt, 1982), (De Medinaceli; Derenzo; Hunter, 1984), (Carlton; Goldberg, 1986) and (Bain; Mackinnon; Hunter, 1989), obtained through the motive analysis, is considered a good evaluation criterion for the quantification of the degree of nervous evaluation. They can be studied through a wide variety of techniques including the muscular electrophysiology and the morphology. However not even in controlled experimental conditions, a correlation of the regeneration of the peripheral nerves is complete, because they don\'t provide necessary information of the functional state of the nerve. The evaluation of the sensorial function is imprecise and usually indirect due to causes of overlap enervations. Being like this, the explanation for the different functional evaluation methods proposed with the technological progresses and the improvement of the reception methods, storage and processing of the obtained data. The system of functional analysis of the peripheral nerves - AFNP, name given to the software due to its functionality that is of functional analysis of outlying nerves, it presents an interface of easy interaction, work and of presentation of the information to the user, through help information of each context of the system of how to use it. Its precision and the uniformity of the evaluations provided reliable results. The use of graphic resources and reports they can make available the obtained results, through graphs of the averages and of deviations pattern. With the computerization of this process, besides supplying the user a larger agility in the evaluation, it provides the researcher the use of a larger number of animals in the experimental groups, facilitating not only the reception, as well as the storage and the processing of the data. The flexibility was a very important result to be stood out, therefore more than one user has the possibility to interact with the system.

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Orientador: Fausto Viterbo / Resumo: INTRODUÇÃO: Os nervos periféricos, assim como os demais tecidos do organismo, estão sujeitos a doenças inflamatórias, traumáticas, metabólicas, tóxicas, genéticas e neoplásicas. Estas doenças levam a diferentes tipos e graus de lesões. As lesões nervosas são bem conhecidas pela redução da capacidade funcional e diminuição da qualidade de vida dos pacientes, essas lesões induzem altos gastos socioeconômicos devido à reabilitação prolongada e absenteísmo dos jovens vítimas de trauma. Questiona-se se a Estimulação Elétrica (EE) e a terapia por Laser de Baixa Potência (LBP) teriam capacidade de melhorar a recuperação muscular e nervosa pós - neurorrafia látero - terminal (NLT). OBJETIVO: Analisar a eficiência da EE e da terapia por LBP na manutenção do músculo tibial cranial (MTC) e regeneração do nervo fibular comum pós NLT. MÉTODO: Trabalho aprovado pelo CEUA FMB - UNESP Nº 1154/2015. Foram utilizados 100 ratos da linhagem Wistar, machos, com massa média de 384,33 g e aproximadamente 9 semanas de vida. Os animais foram divididos em seis grupos experimentais. Grupo Controle, Grupo Desnervado, Grupo com Neurorrafia Látero -Terminal (NLT), Grupo com NLT e Estimulação Elétrica (EE), Grupo com NLT e LASER de baixa potência (LBP) e Grupo com NLT e combinação de EE e LBP (LBP+EE). O tratamento foi realizado durante 180 dias. Foram realizados testes funcionais e histológicos. Análise Estatística: Quando comparados os grupos, foi utilizado predominantemente teste Kruskal Wallis e método... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: INTRODUCTION: Peripheral nerves, as well as other tissues of the body, are subject to inflammatory, traumatic, metabolic, toxic, genetic and neoplastic diseases. These diseases lead to different types and degrees of injury. Nerve injuries are well known for reducing functional capacity and decreasing patients' quality of life. These injuries induce high socioeconomic costs due to prolonged rehabilitation and absenteeism of young trauma victims.It is questioned whether Electric Stimulation (ES) and Low Power Laser Therapy (LPLT) would have the capacity to improve muscle and nerve recovery after end to side neurorrhaphy (SEN). OBJECTIVE: To analyze the efficiency of ES and LPLT in the maintenance of cranial tibial muscle (CTM) and regeneration of the common fibular nerve post SEN. METHOD: Work approved by certificate No. 1154/2015 CEUA FMB - UNESP. One hundred Wistar rats, male, with a mean mass of 384.33 g and approximately 9 weeks of life, were used. The animals were divided into six experimental groups. Control group, denervated group, group with neurorrhaphy. Grupo Controle, Grupo Desnervado, Group with SEN, Group with SEN and Electrical Stimulation (ES), Group with SEN and low power LASER (LPL) and Group with SEN and combination of ES and LPL (LPL + ES). The treatment was performed for 180 days. Functional and histological tests were performed. Statistical analysis: When comparing the groups, were used predominantly, the Kruskal Wallis test followed by Dunn´s method and AN... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

A regeneração dos nervos periféricos é um processo natural, que demanda um período longo para se completar, havendo algumas evidências de que agentes físicos, inclusive o laser, podem acelerá-lo. O objetivo primordial deste estudo foi analisar a influência da irradiação com o laser de baixa potência (AsGaAL) sobre a regeneração nervosa, num modelo de lesão por esmagamento do nervo fibular comum de ratos. O objetivo secundário foi avaliar a concordância entre os índices funcionais do nervo fibular (PFI) e o dos nervos ciático (SFI) e tibial (TFI), segundo os métodos propostos por dois autores diferentes. Foram utilizados 35 ratos Wistar (130 dias de idade, massa corporal média de 240 gramas), divididos em quatro grupos no total, sendo três grupos de dez animais cada, conforme o procedimento realizado (1: esmagamento, sem tratamento; 2: esmagamento e tratamento simulado; 3: esmagamento e tratamento efetivo) e num grupo de cinco animais intactos, para controle. A lesão por esmagamento do nervo fibular comum foi obtida pela aplicação de uma carga de 5 Kgf por dez minutos, com uma pinça especialmente confeccionada para esse fim. A irradiação com o laser foi iniciada no primeiro dia pós-operatório, empregando um equipamento de laser AsGaAL de baixa potência (potência de 100 mW, comprimento de onda de 830 nm, dose de 140 J/cm2) de emissão contínua, pelo método transcutâneo pontual de contato, e continuada por 21 dias consecutivos. Os resultados foram avaliados pela medida da velocidade de marcha do animal e do índice funcional do fibular (PFI, de peroneal functional index). A massa corporal, a velocidade de marcha e o PFI foram medidos antes da operação e no 21º dia pós-operatório, o PFI foi obtido por meio de um programa de computador específico para esse fim, utilizando duas fórmulas diferentes. Os resultados mostraram que a massa corporal aumentou em todos os grupos, sem diferença estatística entre os períodos. A velocidade de marcha diminuiu, com diferença estatística em todos os grupos. O PFI aumentou em todos os grupos e com as duas fórmulas utilizadas na sua medida, mas no Grupo 3, embora sem diferença estatística nos períodos pré e pós-operatórios, evidenciando que a irradiação com o laser interferiu na regeneração do nervo fibular esmagado. Houve uma concordância moderada entre o PFI e o SFI, maior no período pós-operatório, demonstrando que o SFI pode ser empregado para a avaliação do nervo fibular, o que, entretanto, não é recomendável. Concluímos que a irradiação do laser de baixa potência influenciou na regeneração do nervo fibular comum esmagado de ratos, pela medida do índice funcional do fibular. / Peripheral nerve regeneration is a natural process, which requires a long period to complete, with a few evidences that physical agents including laser, can speed it up. The main objective of this investigation was to analyze the influence of low power laser (AsGaAL) irradiation on nerve regeneration, in a model of crush injury of the common fibular nerve of rats. A secondary objective was to evaluate the concordance between the fibular (PFI) and sciatic (SFI) nerves functional indexes, according to the methods proposed by two different research groups. Thirty-five Wistar rats (130 days of age, 240 g average body mass) were used and divided into four groups in total, be three groups of ten animals each, according to the procedure carried out (1: crush injury, no treatment; 2: crush injury, sham irradiation; 3: crush injury, effective irradiation), and a group of five untouched animals, for normal control. The crush injury was obtained by the application of a 5 kgf load for 10 minutes, using a spring forceps especially built for this purpose. Laser irradiation was started on the first postoperative day and continued for 21 consecutive days, using a commercially available continuous emission equipment (100 mW intensity, 830 nm wave length, 140 J/cm2 dose) and the transcutaneous punctual contact method. The results were appraised for the measure of the speed of the gait of the animal and of the functional index of the fibular (PFI, de peroneal functional index). Body mass, walking speed and the functional indexes were measured before the operation and on the 21st postoperative day, the functional indexes using a specific software especially developed for this purpose and the two different methods mentioned above. The results showed that the body mass increased while speed decreased with time for all groups, but without statistical significance. The PFI increased in all groups according to the two methods of evaluation used and more markedly in Group 3, although without statistical significance, period pre and post-operative. Moderate concordance was showed between PFI and SFI, higher in the post-treatment than in the preoperative evaluation, meaning that, although not recommendable, the SFI can be used to evaluate the fibular nerve. We concludes that low power laser irradiation influence the regeneration of the crush fibular nerve of rats, as measured by the peroneal functional index.

No presente trabalho foram desenvolvidos estudos genético-moleculares em três famílias com três síndromes distintas de defeitos dos membros. A ectrodactilia ou SHFM (split-hand/split-foot malformation) é uma malformação congênita da extremidade dos membros caracterizada por fenda mediana profunda das mãos e/ou pés devido à ausência dos raios centrais. A hemimelia tibial é um defeito caracterizado por hipoplasia, aplasia ou agenesia de tíbia, em que a fíbula permanece intacta. A síndrome da hemimelia tibial associada à ectrodactilia é uma condição rara de herança dominante. Em uma publicação do nosso grupo foi mapeado um novo loco (SHFLD3 OMIM #612576) de hemimelia tibial associada à ectrodactilia (Lezirovitz e col. 2008. Am J Hum Genet 123:625-31) na região 17q13.1-17p13.3 em uma família com nove indivíduos afetados por essa síndrome. Nesse estudo foram sequenciados seis genes localizados na região candidata, mas nenhuma mutação patogênica foi encontrada. Em pesquisa colaborativa com grupo no exterior identificou-se uma duplicação de cerca de 114 Kb nessa região cromossômica. Ela estava presente em todos os indivíduos afetados e por meio de PCR de longo alcance e seqüenciamento foi possível identificar os pontos de quebra da duplicação. Os resultados indicaram que essa é a provável causa da síndrome na família. A agenesia/hipoplasia fibular é um defeito que ocorre ao longo do desenvolvimento e extensão da fíbula. Ela é encontrada isolada ou associada com outros sinais clínicos como malformações em membros superiores, como a ectrodactilia, e defeitos na ulna e fêmur. Em uma família em que segrega uma nova síndrome, uma forma de agenesia ou hipoplasia fibular associada à ectrodactilia de aparente herança autossômica dominante (Santos e col. 2008. Am J Med Genet A. 146A: 3126-31) foram realizados estudos de mapeamento por meio de marcadores de microssatélites e sequenciamento dos genes nas regiões candidatas. Após a exclusão de ligação com algumas regiões já conhecidas associadas a defeitos de membros, foram sequenciados alguns genes candidatos selecionados a partir da literatura sobre defeitos de membros (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Dado que mutações não foram identificadas nesses genes, foi realizada a varredura genômica com o kit Affymetrix GeneChip® Human Mapping 50K Array. Foi observado que em quatro cromossomos (5, 6, 10 e 11) não foi possível a exclusão completa de ligação. Nesses cromossomos foram utilizados marcadores de microssatélites próximos às regiões que apresentaram lod score sugestivo de ligação. As análises dos cromossomos 6 e 10 não confirmaram evidências de ligação. No cromossomo 5 e no cromossomo 11 não foi possível a exclusão completa de ligação. A terceira família é composta por três indivíduos afetados por um quadro variável de defeitos de membros, entre eles, polissindactilia, sindactilia, camptodactilia e defeitos ungueais. O heredograma sugere um padrão de herança do defeito compatível com herança autossômica dominante e penetrância completa. Realizaram-se estudos preliminares de ligação com microssatélites próximos as regiões cromossômicas já conhecidas associadas a malformações de membros. Na região candidata 17p13.1-17p13.3 não foi possível a exclusão completa de ligação, já que os lod scores chegaram a mostrar valores positivos e sugestivos. Também foram sequenciados alguns genes candidatos (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Dado que mutações não foram identificadas, foi realizada a varredura genômica com o kit Affymetrix GeneChip® Human Mapping 50K Array. A análise dos SNPs dos cromossomos 19, 20 e 21 permitiu a exclusão completa de ligação com esses cromossomos. Já em relação aos demais cromossomos, não se pode excluir completamente a ligação, já que vários deles apresentaram lod scores muito próximos do lod máximo possível calculado para a família. A dificuldade decorre do fato da família ser pequena e possuir somente duas gerações com indivíduos afetados. As regiões mais interessantes para aprofundar a investigação seriam as do cromossomo 17, pois houve sugestão de ligação também na análise de microssatélites. O gene YWHAE no cromossomo 17 foi sequenciado por se mostrar um bom candidato. No entanto, nenhuma mutação foi encontrada. / Here we report our genetic and molecular studies performed on three different families affected by three different syndromes with limb defects. Ectrodactyly or SHFM (Split Hand/Foot Malformation) is a congenital limb malformation characterized by median cleft of hands or feet (absence of the central rays). Tibial Hemimelia is a malformation characterized by tibial hypoplasia, aplasia or agenesis without fibular involvement. Ectrodactyly associated with tibial hemimelia is a rare autosomal dominant condition. In a previous publication of our team, we reported the mapping of a novel locus (SHFLD3 OMIM #612576) for ectrodactyly associated with tibial hemimelia (Lezirovitz e col. 2008. Am J Hum Genet 123:625-31) to chromosome region 17q13.1-17p13.3 in a large family with nine affected individuals. Six genes in the candidate region were sequenced, but no pathogenic mutation was found. In a collaborative study with another Center, a 114 Kb duplication, detected in all affected individuals, was found in this same region. Duplication breakpoints were identified after long range PCR and sequencing. Our results indicated indicating that this is the causative mutation in the family. Fibular agenesis/hypoplasia is a fibular developmental defect, occurring either as an isolated defect or associated with other clinical signs, such as hand ectrodactyly, ulnar and femoral defects. Mapping studies with microsatellite markers were performed on a family with some affected individuals presenting fibular agenesis or fibular hypoplasia associated with ectrodactyly, a novel defect that segregates with a possible autosomal dominant mode of inheritance (Santos e col. 2008. Am J Med Genet A. 146A:3126-31). Linkage with markers mapped to some well known chromosome regions related with limb malformations was excluded. Some candidates genes possibly related to limb malformations were selected from the literature for sequencing (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Since no mutation was found, we proceeded to genomic scanning with Affymetrix GeneChip Human Mapping 50k Array. Linkage with markers from four chromosomes (5, 6, 10 and 11) could not be completely excluded. Microsatellite markers were used to confirm linkage to regions presenting the higher lod scores and markers on chromosomes 6 and 10 did not confirm linkage. Analyses with markers on chromosomes 5 and 11 (in which there are no good candidate genes reported in the literature) were inconclusive and linkage could not be completely ruled out. There are three affected individuals in the third family here reported, each one of them presenting with a different set of distal limb defects (such as syndactyly, polysyndactyly, camptodactyly, or nail malformation); the defect is transmitted with an autosomal dominant mode and complete penetrance. Linkage studies with microsatellite markers close to well-known limb malformation related regions were performed. Linkage with region 17p13.1-17p.13.3 could not be ruled out since some of the lod scores were positive and suggestive. Some candidates genes have been selected for sequencing (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Since no mutation was found, genomic scanning was performed with the Afflymetrix GeneChip Human Mapping 50k Array. SNP analysis of chromosomes 19, 20 and 21 allowed us to rule out linkage completely. However, linkage could not be excluded for some regions on other chromosomes, since their lod scores were close to the maximum possible score estimated for this small-sized family. The most interesting regions are located in chromosome 17, in which the gene YWHAE, which seemed to be a good candidate, was sequenced, but no mutation was found.

No presente trabalho foram desenvolvidos estudos genético-moleculares em três famílias com três síndromes distintas de defeitos dos membros. A ectrodactilia ou SHFM (split-hand/split-foot malformation) é uma malformação congênita da extremidade dos membros caracterizada por fenda mediana profunda das mãos e/ou pés devido à ausência dos raios centrais. A hemimelia tibial é um defeito caracterizado por hipoplasia, aplasia ou agenesia de tíbia, em que a fíbula permanece intacta. A síndrome da hemimelia tibial associada à ectrodactilia é uma condição rara de herança dominante. Em uma publicação do nosso grupo foi mapeado um novo loco (SHFLD3 OMIM #612576) de hemimelia tibial associada à ectrodactilia (Lezirovitz e col. 2008. Am J Hum Genet 123:625-31) na região 17q13.1-17p13.3 em uma família com nove indivíduos afetados por essa síndrome. Nesse estudo foram sequenciados seis genes localizados na região candidata, mas nenhuma mutação patogênica foi encontrada. Em pesquisa colaborativa com grupo no exterior identificou-se uma duplicação de cerca de 114 Kb nessa região cromossômica. Ela estava presente em todos os indivíduos afetados e por meio de PCR de longo alcance e seqüenciamento foi possível identificar os pontos de quebra da duplicação. Os resultados indicaram que essa é a provável causa da síndrome na família. A agenesia/hipoplasia fibular é um defeito que ocorre ao longo do desenvolvimento e extensão da fíbula. Ela é encontrada isolada ou associada com outros sinais clínicos como malformações em membros superiores, como a ectrodactilia, e defeitos na ulna e fêmur. Em uma família em que segrega uma nova síndrome, uma forma de agenesia ou hipoplasia fibular associada à ectrodactilia de aparente herança autossômica dominante (Santos e col. 2008. Am J Med Genet A. 146A: 3126-31) foram realizados estudos de mapeamento por meio de marcadores de microssatélites e sequenciamento dos genes nas regiões candidatas. Após a exclusão de ligação com algumas regiões já conhecidas associadas a defeitos de membros, foram sequenciados alguns genes candidatos selecionados a partir da literatura sobre defeitos de membros (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Dado que mutações não foram identificadas nesses genes, foi realizada a varredura genômica com o kit Affymetrix GeneChip® Human Mapping 50K Array. Foi observado que em quatro cromossomos (5, 6, 10 e 11) não foi possível a exclusão completa de ligação. Nesses cromossomos foram utilizados marcadores de microssatélites próximos às regiões que apresentaram lod score sugestivo de ligação. As análises dos cromossomos 6 e 10 não confirmaram evidências de ligação. No cromossomo 5 e no cromossomo 11 não foi possível a exclusão completa de ligação. A terceira família é composta por três indivíduos afetados por um quadro variável de defeitos de membros, entre eles, polissindactilia, sindactilia, camptodactilia e defeitos ungueais. O heredograma sugere um padrão de herança do defeito compatível com herança autossômica dominante e penetrância completa. Realizaram-se estudos preliminares de ligação com microssatélites próximos as regiões cromossômicas já conhecidas associadas a malformações de membros. Na região candidata 17p13.1-17p13.3 não foi possível a exclusão completa de ligação, já que os lod scores chegaram a mostrar valores positivos e sugestivos. Também foram sequenciados alguns genes candidatos (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Dado que mutações não foram identificadas, foi realizada a varredura genômica com o kit Affymetrix GeneChip® Human Mapping 50K Array. A análise dos SNPs dos cromossomos 19, 20 e 21 permitiu a exclusão completa de ligação com esses cromossomos. Já em relação aos demais cromossomos, não se pode excluir completamente a ligação, já que vários deles apresentaram lod scores muito próximos do lod máximo possível calculado para a família. A dificuldade decorre do fato da família ser pequena e possuir somente duas gerações com indivíduos afetados. As regiões mais interessantes para aprofundar a investigação seriam as do cromossomo 17, pois houve sugestão de ligação também na análise de microssatélites. O gene YWHAE no cromossomo 17 foi sequenciado por se mostrar um bom candidato. No entanto, nenhuma mutação foi encontrada. / Here we report our genetic and molecular studies performed on three different families affected by three different syndromes with limb defects. Ectrodactyly or SHFM (Split Hand/Foot Malformation) is a congenital limb malformation characterized by median cleft of hands or feet (absence of the central rays). Tibial Hemimelia is a malformation characterized by tibial hypoplasia, aplasia or agenesis without fibular involvement. Ectrodactyly associated with tibial hemimelia is a rare autosomal dominant condition. In a previous publication of our team, we reported the mapping of a novel locus (SHFLD3 OMIM #612576) for ectrodactyly associated with tibial hemimelia (Lezirovitz e col. 2008. Am J Hum Genet 123:625-31) to chromosome region 17q13.1-17p13.3 in a large family with nine affected individuals. Six genes in the candidate region were sequenced, but no pathogenic mutation was found. In a collaborative study with another Center, a 114 Kb duplication, detected in all affected individuals, was found in this same region. Duplication breakpoints were identified after long range PCR and sequencing. Our results indicated indicating that this is the causative mutation in the family. Fibular agenesis/hypoplasia is a fibular developmental defect, occurring either as an isolated defect or associated with other clinical signs, such as hand ectrodactyly, ulnar and femoral defects. Mapping studies with microsatellite markers were performed on a family with some affected individuals presenting fibular agenesis or fibular hypoplasia associated with ectrodactyly, a novel defect that segregates with a possible autosomal dominant mode of inheritance (Santos e col. 2008. Am J Med Genet A. 146A:3126-31). Linkage with markers mapped to some well known chromosome regions related with limb malformations was excluded. Some candidates genes possibly related to limb malformations were selected from the literature for sequencing (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Since no mutation was found, we proceeded to genomic scanning with Affymetrix GeneChip Human Mapping 50k Array. Linkage with markers from four chromosomes (5, 6, 10 and 11) could not be completely excluded. Microsatellite markers were used to confirm linkage to regions presenting the higher lod scores and markers on chromosomes 6 and 10 did not confirm linkage. Analyses with markers on chromosomes 5 and 11 (in which there are no good candidate genes reported in the literature) were inconclusive and linkage could not be completely ruled out. There are three affected individuals in the third family here reported, each one of them presenting with a different set of distal limb defects (such as syndactyly, polysyndactyly, camptodactyly, or nail malformation); the defect is transmitted with an autosomal dominant mode and complete penetrance. Linkage studies with microsatellite markers close to well-known limb malformation related regions were performed. Linkage with region 17p13.1-17p.13.3 could not be ruled out since some of the lod scores were positive and suggestive. Some candidates genes have been selected for sequencing (SHH, ZRS, WNT7a, WNT10b, GREM1). Since no mutation was found, genomic scanning was performed with the Afflymetrix GeneChip Human Mapping 50k Array. SNP analysis of chromosomes 19, 20 and 21 allowed us to rule out linkage completely. However, linkage could not be excluded for some regions on other chromosomes, since their lod scores were close to the maximum possible score estimated for this small-sized family. The most interesting regions are located in chromosome 17, in which the gene YWHAE, which seemed to be a good candidate, was sequenced, but no mutation was found.

A regeneração dos nervos periféricos é um processo natural, que demanda um período longo para se completar, havendo algumas evidências de que agentes físicos, inclusive o laser, podem acelerá-lo. O objetivo primordial deste estudo foi analisar a influência da irradiação com o laser de baixa potência (AsGaAL) sobre a regeneração nervosa, num modelo de lesão por esmagamento do nervo fibular comum de ratos. O objetivo secundário foi avaliar a concordância entre os índices funcionais do nervo fibular (PFI) e o dos nervos ciático (SFI) e tibial (TFI), segundo os métodos propostos por dois autores diferentes. Foram utilizados 35 ratos Wistar (130 dias de idade, massa corporal média de 240 gramas), divididos em quatro grupos no total, sendo três grupos de dez animais cada, conforme o procedimento realizado (1: esmagamento, sem tratamento; 2: esmagamento e tratamento simulado; 3: esmagamento e tratamento efetivo) e num grupo de cinco animais intactos, para controle. A lesão por esmagamento do nervo fibular comum foi obtida pela aplicação de uma carga de 5 Kgf por dez minutos, com uma pinça especialmente confeccionada para esse fim. A irradiação com o laser foi iniciada no primeiro dia pós-operatório, empregando um equipamento de laser AsGaAL de baixa potência (potência de 100 mW, comprimento de onda de 830 nm, dose de 140 J/cm2) de emissão contínua, pelo método transcutâneo pontual de contato, e continuada por 21 dias consecutivos. Os resultados foram avaliados pela medida da velocidade de marcha do animal e do índice funcional do fibular (PFI, de peroneal functional index). A massa corporal, a velocidade de marcha e o PFI foram medidos antes da operação e no 21º dia pós-operatório, o PFI foi obtido por meio de um programa de computador específico para esse fim, utilizando duas fórmulas diferentes. Os resultados mostraram que a massa corporal aumentou em todos os grupos, sem diferença estatística entre os períodos. A velocidade de marcha diminuiu, com diferença estatística em todos os grupos. O PFI aumentou em todos os grupos e com as duas fórmulas utilizadas na sua medida, mas no Grupo 3, embora sem diferença estatística nos períodos pré e pós-operatórios, evidenciando que a irradiação com o laser interferiu na regeneração do nervo fibular esmagado. Houve uma concordância moderada entre o PFI e o SFI, maior no período pós-operatório, demonstrando que o SFI pode ser empregado para a avaliação do nervo fibular, o que, entretanto, não é recomendável. Concluímos que a irradiação do laser de baixa potência influenciou na regeneração do nervo fibular comum esmagado de ratos, pela medida do índice funcional do fibular. / Peripheral nerve regeneration is a natural process, which requires a long period to complete, with a few evidences that physical agents including laser, can speed it up. The main objective of this investigation was to analyze the influence of low power laser (AsGaAL) irradiation on nerve regeneration, in a model of crush injury of the common fibular nerve of rats. A secondary objective was to evaluate the concordance between the fibular (PFI) and sciatic (SFI) nerves functional indexes, according to the methods proposed by two different research groups. Thirty-five Wistar rats (130 days of age, 240 g average body mass) were used and divided into four groups in total, be three groups of ten animals each, according to the procedure carried out (1: crush injury, no treatment; 2: crush injury, sham irradiation; 3: crush injury, effective irradiation), and a group of five untouched animals, for normal control. The crush injury was obtained by the application of a 5 kgf load for 10 minutes, using a spring forceps especially built for this purpose. Laser irradiation was started on the first postoperative day and continued for 21 consecutive days, using a commercially available continuous emission equipment (100 mW intensity, 830 nm wave length, 140 J/cm2 dose) and the transcutaneous punctual contact method. The results were appraised for the measure of the speed of the gait of the animal and of the functional index of the fibular (PFI, de peroneal functional index). Body mass, walking speed and the functional indexes were measured before the operation and on the 21st postoperative day, the functional indexes using a specific software especially developed for this purpose and the two different methods mentioned above. The results showed that the body mass increased while speed decreased with time for all groups, but without statistical significance. The PFI increased in all groups according to the two methods of evaluation used and more markedly in Group 3, although without statistical significance, period pre and post-operative. Moderate concordance was showed between PFI and SFI, higher in the post-treatment than in the preoperative evaluation, meaning that, although not recommendable, the SFI can be used to evaluate the fibular nerve. We concludes that low power laser irradiation influence the regeneration of the crush fibular nerve of rats, as measured by the peroneal functional index.

Este estudo teve como objetivo investigar uma provável função mecânica da fíbula no complexo tíbio-fibular de ratos. Para tanto, os complexos tíbio-fibulares de 20 ratos da raça Norvegicus Albinus, variedade Wistar, foram submetidos a esforços de compressão axial e flexão em três pontos. Os animais eram adultos jovens, todos machos com peso corporal médio de 350 g. Foram utilizados 20 pares de tíbias para cada ensaio, sendo que, de um dos lados de cada par, a fíbula foi mantida e, do outro lado, removida. Foi utilizado uma máquina universal de ensaio para a realização de ambos os ensaios mecânicos. Os valores foram obtidos na forma de carga versus deformação (ensaio de compressão), e carga versus deflexão (ensaio de flexão). Os seguintes parâmetros foram analisados: carga máxima, deformação máxima e rigidez. Da análise dos resultados foi concluído que a fíbula, no rato, não aumenta a resistência do complexo tíbio-fibular. Assim, a presença da fíbula parece estar mais relacionada com função de inserções musculares do que fortalecimento tíbio-fibular. / This study was conducted to investigate the contribution of the fibula to the mechanical resistance of the tibiofibular complex in the rat (both banes are fused distally). Twenty adult wistar rats were used as donor animals of twenty paired tibias. For each pair of bones in one side the fibula was excited and in the other side it was maintained. In a test machine the mechanical tests were done in three flexion and axial compression. The results were plotted either in load x deformation or load x deflection graphs the following parameters were analysed: ultimate load, ultimate deformation and rigidity. It was concluded that the fibula does not increase the mechanical strength of the tibiofibular complex, but it may play a role as an anchorage for the muscles that act on the foot.