The Parapiptadenia rigida (Bentham) Brenan is a native forest specie that can be used in the restoration of gallery forests and degraded areas. This work has the objective to develop the regeneration in vitro of P. rigida using explants of aseptic seedlings. In experiment 1, seeds of P. rigida were disinfected in 0.0, 2.5 and 5.0% of sodium hypochlorite during 5, 10, 15 and 30 minutes. A design completely randomized was used with 12 treatments and four repetitions by treatment, each repetitions had five seeds. It was evaluated the percentage of seeds sprouted at 10, 20 and 30 days, and the percentage of seeds aseptic in 30 days. In experiment 2, shoots of cotyledonal nodal segment and nodal segment were induced using 0.0, 0.25, 0.50 and 1.0 mg.L-1 of BAP or KIN. The design was completely randomized and 16 treatments were used, each treatment was constituted by five repetitions with six bottles each. The percentage of explants with shoots, the size of shoots, the number of leaves per shoots, the morphologic appearance of shoots, the percentage of callus on the base of explants and the size of callus were availed at 60 days. In experiment 3, named by rooting of explants, two tests were performed. Test 1 used cotyledonal nodal segment and nodal segments, both from shoots induction phase, and test 2 used shoots from cotyledonal nodal segment. At experiment 3, it was used IBA with concentration of 0, 0.25, 1.0 and 1.75 mg.L-1 and a design completely randomized, with 8 treatments. Test 1 was constituted by four repetitions with three bottles per repetition and test 2 was constituted by four treatments, each treatments constituted by four repetitions with five bottles per repetition. The percentage of rooting, the number of roots per explants, the length of the longest root, the percentage of explants with callus on the base and the average size of callus were availed at 60 days. In experiment 4, the plants were transferred to the substrate composed by Plantmax® and vermiculite, and the percentage of survival was availed at 60 days. The analysis of variance, the Tukey test and the regression analyzes were applied on data obtained from all experiments. In experiment 1, the highest percentages of germinations (76%) were found in the treatment with water and Tween 20 during 20 minutes. The second higher was the treatment with 2.5% of sodium hypochlorite during 30 minutes (70%). The highest percentage of disinfected seeds (81%) occurred in treatment with 2.5% of sodium hypochlorite during 30 minutes. In experiment 2, the dose of 0.50 mg.L-1 formed the largest size sprouts (0.50 cm) and the biggest number of leaves for sprout (3.60 leaves), independent of kind of phytoregulators. Experiment 3 presented the biggest number of roots was observed in segments cotyledonal nodal cotyledonary inoculated in medium containing 1.0 mg.L-1 of IBA (2.35 roots). In experiment 4, the highest percentage of survival was in plants derived from cotyledonal nodal segment in medium of rooting containing 1.0 mg.L-1 AIB. The segment cotyledonal nodal is better kind of explant for regeneration in vitro of the P. rigida than nodal segment. / A Parapiptadenia rigida (Benthan) Brenam é uma espécie florestal nativa que pode ser utilizada na restauração de matas ciliares e recuperação de áreas degradadas. Este trabalho visa ao desenvolvimento da regeneração in vitro da P. rigida utilizando explantes de plântulas assépticas. No experimento 1, sementes de P. rígida foram desinfestadas em 0; 2,5 e 5,0% de hipoclorito de sódio, durante 5, 10, 15 e 30 min. O delineamento foi inteiramente casualizado, com 12 tratamentos, sendo quatro repetições por tratamento, cada repetição com cinco sementes. Avaliou-se a porcentagem de sementes germinadas aos 10, 20 e 30 dias, e a porcentagem de sementes desinfestadas aos 30 dias. No experimento 2, realizou-se a indução de brotos em segmentos nodal cotiledonar e nodal utilizando 0; 0,25; 0,50 e 1,0 mg.L-1 de BAP ou KIN. O delineamento foi inteiramente casualisado, com 16 tratamentos, com cada tratamento constituído de cinco repetições, cada repetição com seis frascos. Aos 60 dias avaliou-se a porcentagem de explantes com broto, o comprimento dos brotos, o número de folhas por broto, o aspecto morfológico dos brotos, a porcentagem de explantes com calo na base e o tamanho dos calos. O experimento 3, enraizamento de explantes, foi dividido em dois testes. No teste 1 utilizaram-se segmentos nodal cotiledonar e nodal advindos da fase de indução de brotos e, no teste 2, brotos provenientes de segmento nodal cotiledonar. Para indução rizogênica foram utilizadas as doses de 0; 0,25; 1,0; 1,75 mg.L-1 de AIB. O delineamento foi inteiramente casualizado, com oito tratamentos, sendo, no teste 1, cada tratamento composto por quatro repetições, com três tubos por repetição e, no teste 2, por quatro tratamentos, cada tratamento constituído de quatro repetições, com cinco tubos por repetição. Aos 60 dias foi avaliada a porcentagem de enraizamento, o número de raízes por explante, o comprimento da raiz mais longa, a porcentagem de explantes com calo na base e o tamanho médio dos calos. No experimento 4, as plantas regeneradas a partir dos diferentes tipos de explantes foram transferidas para substrato composto por Plantmax® e vermiculita e, aos 60 dias, avaliadas quanto a porcentagem de sobrevivência. Os dados obtidos, nos diferentes experimentos, foram submetidos à análise de variância, análise de regressão e ao teste de Tukey. No experimento 1, a maior porcentagem de germinação ocorreu em sementes embebidas em água com tween 20, durante 30 min., seguido do tratamento utilizando 2,5% de hipoclorito de sódio, por 30 min., com 76 e 70% de sementes germinadas respectivamente. A maior porcentagem de sementes desinfestadas (81%) ocorreu no tratamento com 2,5% de hipoclorito de sódio, durante 30 min. No experimento 2, foi verificado que a dose de 0,50 mg.L-1, independente do tipo de fitorregulador, promoveu maior tamanho dos brotos (0,50 cm) e maior número de folhas por broto (3,60 folhas). No experimento 3, o maior número de raízes foi observado em segmentos nodal cotiledonar inoculados em meio contendo 1,0 mg.L-1 de AIB (2,35 raízes). No experimento 4, a maior sobrevivência durante o processo de aclimatização (68%) ocorreu em plantas regeneradas a partir de segmento nodal cotiledonar em meio contendo 1,0 mg.L-1 AIB. O segmento nodal cotiledonar é o melhor tipo de explante para a regeneração in vitro de P.rigida se comparado ao segmento nodal.

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:25:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ Tania_Regina_Pelizza.pdf: 1759590 bytes, checksum: b5a9c36983f13efd79f7249a3d65731b (MD5) Previous issue date: 2009-12-14 / The present study aimed to group several aspects related to blueberry propagation (Vaccinium spp). Therefore, the trial was separated into five chapters. The first chapter investigated the ex vitro rooting of blueberry cultivars (Bluebelle, Woodard and Georgiagem) in the substrates (Plantmax®; Plantmax® + old saw (1:1); old saw; Plantmax® + vermiculite (1:1) and vermiculite. It was evaluated the percentage of rooting, callus formation, surviving explants, length and number of roots, length of the largest root, height of explants, number of shoots and total fresh mass. In the second chapter it was studied the process of acclimatization and growth of micropropagated blueberry plants cultivar Climax by using different substrates (carbonized rice hull + Húmus Fértil®, Plantmax® + vermiculite and soil + young saw of pinus) and two covering systems (with or without plastic covering on plants). The trial was assessed during 210 days. In this work it was evaluated the surviving percentage, increment of height, fresh and dry biomass of the aerial part and root of the plants. The third chapter investigates the microcuttings process of the blueberry Climax by comparing different substrates (Plantmax® + carbonized rice rusks (1:1); Húmus Fértil® and Vermicompound of cattle) and two types of microcuttings (median and apical). It was evaluated the rooting percentage, surviving, callus formation, number and length of roots, length of the largest root, number of leaves and shoots. The effect of phytorregulators Benzylaminopurine (BAP) and gibberellins (GA3) in different concentrations (control, 250mg/L of BAP, 250mg/L of BAP + 250mg/L of GA3) on growth of minicuttings O neal at five evaluations (0, 30, 60, 90 and 120 days) is assessed in the fourth chapter. It was measured: minicuttings height, number of leaves, number and mean length of lateral shoots. And, the fifth chapter evaluated the growth of micropropagated blueberry plants cultivar Georgiagem, using different concentrations of GA3 (0, 50, 100 and 150 mg/L) regarding period (0, 30 and 60 days). It was measured: plant height, number and mean length of shoots, fresh and dry biomass of aerial part and root. The best substrates for ex vitro rooting of blueberry explants were vermiculite and old saw. Among cultivars, Bluebelle and Woodard showed the greatest results. The substrate and covering system indicated for acclimatization and growth of blueberry plants Climax are Plantmax® + carbonized rice hull without plastic covering. Median microcuttings promoted better results for rooting of the blueberry Climax . The combination of Plantmax® + carbonized rice rusks is the best substrate for microcutting rooting of blueberry. The phytoregulators BAP + GA3 showed similar behavior to the control treatment regarding mean length of shoot and number of leaves. The growth in height and shoots number of the blueberry minicuttings O Neal increased by time and are independent of the use of phytoregulator. Blueberry plants Georgiagem positively responds to gibberellins action, mainly the aerial part of the plant. The concentration at 50mg L-1 de GA3 is sufficient to obtain blueberry plant response regarding growth. / presente estudo teve por objetivo abordar vários aspectos relacionados à propagação do mirtileiro (Vaccinium spp). Para isso, os trabalhos foram divididos em cinco capítulos, sendo no primeiro capítulo abordado o enraizamento ex vitro de (três) cultivares de mirtileiro (Bluebelle, Woodard e Georgiagem) (em cinco diferentes) nos substratos Plantmax®; Plantmax® + serragem curtida (1:1); serragem curtida; Plantmax® + vermiculita (1:1) e vermiculita. Foi avaliada a percentagem de enraizamento, formação de calo, explantes sobreviventes, comprimento e número de raízes, comprimento da maior raiz, altura dos explantes, número de brotações e massa fresca total. No segundo capítulo é abordado o processo de aclimatização e crescimento de plantas micropropagadas de mirtileiro da cultivar Climax com o uso de diferentes substratos (casca de arroz carbonizada + Húmus Fértil®, Plantmax® + vermiculita e solo + serragem jovem de pinus) com o uso de dois sistemas de cobertura (com e sem cobertura plástica sobre as plantas) avaliado ao longo de 210 dias. Neste trabalho foi avaliada a percentagem de sobrevivência, o incremento de altura, a biomassa fresca e seca da parte aérea e do sistema radicular das plantas. O terceiro capítulo aborda o processo da microestaquia de mirtileiro Climax comparando substratos (Plantmax® + casca de arroz carbonizada (1:1); Húmus Fértil® e Vermicomposto Bovino) e duas porções do ramo (mediana e apical). Foi avaliada a percentagem de enraizamento, sobrevivência, formação de calo, número e comprimento médio de raízes, comprimento da maior raiz, número médio de folhas e de brotações. O uso de fitorreguladores benzilaminopurina (BAP) e giberelina (GA3) em diferentes concentrações (testemunha sem reguladores, 250 mg/L de BAP, 250 mg L-1 de BAP + 250 mg L-1 de GA3), no crescimento de miniestacas de O Neal em cinco tempos de avaliação (0, 30, 60, 90 e 120 dias) é abordado no quarto capítulo. Foi avaliada a altura das miniestacas, número de folhas, número e comprimento médio de brotações laterais. A seguir aborda-se o crescimento de plantas micropropagadas de mirtileiro Georgiagem com o uso de diferentes concentrações de GA3 (0, 50, 100 e 150 mg L-1) em função do tempo (0, 30 e 60 dias) onde foi avaliada a altura de planta, número e comprimento médio de brotações, biomassa verde e seca da parte aérea e da raiz. Os melhores substratos para enraizamento ex vitro de explantes de mirtileiro foram vermiculita e serragem curtida. Dentre as cultivares, Bluebelle e Woodard apresentaram melhores resultados. O substrato e sistema de cobertura indicados para a aclimatização e o crescimento de plantas de mirtileiro Climax são Plantmax® + vermiculita sem cobertura plástica. Microestacas medianas proporcionaram melhores resultados para o enraizamento de mirtileiro Climax . A combinação de Plantmax® + casca de arroz carbonizada é (mostrou ser) o melhor substrato para enraizamento de microestacas de mirtileiro. Os fitorreguladores BAP + GA3 apresentaram respostas iguais à testemunha quanto ao comprimento médio de brotações e número de folhas. O crescimento em altura e o número de brotações das miniestacas de mirtileiro O Neal aumentaram com o tempo e foram independentes do uso de fitorregulador. Plantas de mirtileiro Georgiagem respondem positivamente à ação da giberelina, sendo que está se dá principalmente sobre a parte aérea da planta. A concentração de 50 mg L-1 de GA3 é suficiente para obter resposta das plantas de mirtileiro quanto ao seu crescimento.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The advance of biotechnology in forestry has favored techniques of in vitro propagation of species that present difficulties in reproduction by sexual seeds. Luehea divaricata Mart. & Zucc, a member of the Malvaceae family, is a species that has suffered in recent decades, a large reduction in the areas occupied by natural populations, because of its use in the manufacture of furniture. Additionally, it presents slow and irregular germination and seed viability is very uneven, characteristics that contribute to a reduced ability to recover natural populations. Considering the potential for the application of techniques of tissue culture in the mass propagation of this species, this study aimed to: develop a methodology to promote an efficient surface disinfestation of seed germination in order to in vitro evaluate the ability of two types of explants of seminal in performing the in vitro establishment; evaluate the nodal segments isolated from of plants grown in vitro germination depending on the addition of BAP and NAA in different concentrations, in the WPM nutrient medium, and, finally, analyze the calli seetings responses of leave fragments to different concentrations of BAP and NAA in WPM. The project was developed at the Laboratory of Tissue Culture at the Center for Biotechnology and Breeding of the Federal University of Santa Maria. The seeds used were collected by Fepagro/Forests and the plants obtained were used as source of explants for the experiments in tissue culture. We tested the effect of different concentrations and immersion times of seeds in mercuric chloride, and also the influence of fungicides Dicarboximida and Benzimidazole in the surface disinfestations. To in vitro establish were evaluated apical and nodal segments isolated from plants after 60 days in vitro culture. The surface disinfestation of L. divaricata seeds with mercuric chloride was efficient, promoting a satisfactory germination and lack of phytotoxicity. Moreover, the use of fungicides, after disinfestation procedure with mercuric chloride, showed toxic effect on plants, failed to control contamination by microorganisms. The L. divaricata in vitro establishment was successful from both the apical and nodal segments, especially those that result in higher leaf development. Concentrations of BAP and NAA tested dont not result in a hormonal balance appropriate to promote optimal responses in vitro multiplication of L. divaricata from the culture of nodes segments and the presence of BAP influence significantly the calli induction, unlike NAA which dont not affect the calli formation on leaf fragments. Further studies should be performed to optimize the in vitro surface desinfestation, multiplication and callus induction capable of producing a larger number of aseptic cultures to continue to other steps in tissue culture. Finally, studies that aim to contribute to the L. divaricata micropropagation should continue, since the species presents barriers to the spread by seeds that can be overcome by tissue culture. / O avanço da biotecnologia na área florestal tem favorecido as técnicas de propagação in vitro de espécies que apresentam dificuldades na reprodução via sementes. Luehea divaricata Mart. & Zucc (açoita-cavalo), integrante da família Malvaceae, é uma espécie florestal que sofreu, nas últimas décadas, grande redução das áreas ocupadas por populações naturais, em função do interesse de seu uso na fabricação de móveis vergados. Adicionalmente, apresenta germinação lenta e irregular e a viabilidade das sementes é muito desuniforme, características que contribuem para uma reduzida capacidade de recuperação natural das populações. Considerando-se a potencialidade da aplicação de técnicas de cultura de tecidos na propagação massal dessa espécie, o presente trabalho teve como objetivos: desenvolver uma metodologia que promova uma eficiente desinfestação superficial de sementes, visando à germinação in vitro; avaliar a capacidade de dois tipos de explantes de origem seminal em realizar o estabelecimento in vitro; avaliar a regeneração de segmentos uninodais isolados de plantas oriundas da germinação in vitro em função da adição da citocinina BAP e da auxina ANA, em diferentes concentrações, ao meio nutritivo WPM; e, por fim, analisar as respostas calogênicas de fragmentos foliares, face às diferentes concentrações de BAP e ANA em meio nutritivo WPM. Os trabalhos foram desenvolvidos no Laboratório de Cultura de Tecidos, do Núcleo de Biotecnologia e Melhoramento do da Universidade Federal de Santa Maria. Foram utilizadas sementes coletadas pela Fepagro/Florestas e, as plantas obtidas, foram utilizadas como fonte de explantes para os experimentos de cultura de tecidos. Foram testados o efeito de diferentes concentrações e de tempos de imersão das sementes em bicloreto de mercúrio, e, também, a influência de fungicidas Dicarboximida e Benzimidazol na desinfestação superficial. Para o estabelecimento in vitro, foram avaliados segmentos nodais e apicais caulinares isolados de plantas, após 60 dias de cultivo in vitro. A desinfestação superficial das sementes de açoitacavalo com bicloreto de mercúrio foi eficiente, promovendo uma germinação satisfatória e ausência de fitotoxicidade. Por outro lado, o uso de fungicidas, após procedimento de desinfestação com bicloreto de mercúrio, além de apresentar efeito tóxico para as plantas, não controlaram a contaminação por microrganismos. O estabelecimento in vitro de açoitacavalo foi efetuado com sucesso, tanto a partir de segmentos apicais, como segmentos nodais, com destaque para estes pelo maior desenvolvimento foliar. As concentrações de BAP e ANA testadas, não resultam em um balanço hormonal adequado à promoção de respostas otimizadas na multiplicação in vitro de açoita-cavalo, a partir do cultivo de segmentos nodais; a presença de BAP influencia, significativamente, a calogênese, ao contrário de ANA, que não afeta a formação de calos em fragmentos foliares de açoitacavalo. Estudos adicionais devem ser realizados no sentido de otimizar a desinfestação superficial, a multiplicação e a calogênese in vitro, permitindo a obtenção de um número maior de culturas assépticas para dar continuidade a outras etapas da cultura de tecidos. Finalmente, os estudos que visam contribuir para a micropropagação em açoita-cavalo devem prosseguir, já que a espécie apresenta entraves para a propagação por sementes que podem ser superados pela cultura de tecidos.