Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The aim of this study were to evaluate the effect of different concentrations of Concanavalin A (Con A) and FSH on activation, and survival in vitro growth of goat primordial follicles, as well as investigating the effects of Con A and FSH on the expression of mRNA for PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 and GDF-9. For this, ovarian cortex fragments were in vitro cultured for 1 to 6 days in &#945;-MEM+ supplemented with 0, 5, 10, 20 or 40 &#956;g/mL of Con A lectin (experiment 1). At the end of the growing period, the fragments of ovarian cortex were fixed for histology. Next, we evaluated the percentage of primordial follicles or under development. After determination of the concentration of Con A more efficient (10 &#956;g/mL), fragments of ovarian cortex were cultured in situ for 6 days in &#945;-MEM+ alone or supplemented with 50 ng/mL of FSH, 10 &#956;g/mL of Con A or both (experiment 2). Tissues from the control uncultured or after culture in different treatments were fixed for histology or stored at -80ÂC to assess the expression profile of mRNA for PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 and GDF-9. The results of Experiment 1 demonstrated that after 6 days of culture, the percentage of developing follicles was significantly higher in samples cultured with &#945;-MEM+ supplemented with 10 and 40 &#956;g/mL Con A, when compared to the other treatments (P <0.05). In experiment 2, the presence of FSH, or both Con A promoted a reduction in the percentage of primordial follicles and increase developing follicles compared to control medium (&#945;-MEM+). After 6 days of culture, the presence of FSH promoted an increase in mRNA levels for PCNA, but this effect was blocked by Con A. Moreover, the Con A increased mRNA levels for c-KIT compared to the control not grown, but Con A or Con A and FSH both reduced the levels of mRNA for KL. Furthermore, a reduction of BMP-15 mRNA was observed in follicles cultured in control medium, but the presence of FSH inhibited this reduction. Furthermore, Con A promoted an increase in levels of GDF-9 mRNA after in vitro culture. In conclusion, the Con A alone or in combination with FSH promote activation of primordial follicles goat after 6 days of in vitro culture and regulate the expression of mRNA for PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 and GDF-9 / Os objetivos deste estudo foram avaliar o efeito de diferentes concentraÃÃes de Concanavalina A (Con A) e do FSH sobre a ativaÃÃo, sobrevivÃncia e crescimento in vitro de folÃculos primordiais caprinos, bem como investigar os efeitos da Con A e do FSH sobre a expressÃo de RNAm para PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 e GDF-9. Para isto, fragmentos de cÃrtex ovariano foram cultivados in vitro por 1 ou 6 dias em &#945;-MEM+ suplementado com 0, 5, 10, 20 ou 40 &#956;g/mL da lectina Con A (experimento 1). No final do perÃodo de cultivo, os fragmentos de cÃrtex ovariano foram fixados para histologia clÃssica. Em seguida, avaliou-se a percentagem de folÃculos primordiais ou em desenvolvimento. ApÃs a determinaÃÃo da concentraÃÃo de Con A mais eficiente (10 &#956;g/mL), os fragmentos do cÃrtex ovariano foram cultivados in situ por 6 dias em &#945;-MEM+ sozinho ou suplementado com 50 ng/mL de FSH, 10 &#956;g/mL de Con A ou ambos (experimento 2). Os tecidos provenientes do controle nÃo cultivado ou apÃs cultivo nos diferentes tratamentos foram fixados para histologia clÃssica ou armazenados a -800C para avaliar o perfil de expressÃo de RNAs mensageiros para PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 e GDF-9. Os resultados do experimento 1 demonstraram que apÃs 6 dias de cultivo, a percentagem de folÃculos em desenvolvimento foi significativamente maior nos fragmentos cultivados com &#945;-MEM+ suplementado com 10 e 40 &#956;g/mL de Con A, quando comparado aos demais tratamentos (P <0,05). No experimento 2, a presenÃa de FSH, Con A ou ambos promoveram uma reduÃÃo na percentagem de folÃculos primordiais e aumento de folÃculos em desenvolvimento em relaÃÃo ao meio controle (&#945;-MEM+). ApÃs 6 dias de cultivo, a presenÃa de FSH promoveu um aumento nos nÃveis de RNAm para PCNA, mas este efeito foi bloqueado pela Con A. Por outro lado, a Con A aumentou os nÃveis de RNAm para c-kit em comparaÃÃo ao controle nÃo cultivado, mas Con-A ou ambos Con A e FSH reduziram os nÃveis de RNAm para KL. AlÃm disso, uma reduÃÃo dos RNAm para BMP-15 foi observado em folÃculos cultivados no meio controle, mas a presenÃa de FSH inibiu esta reduÃÃo. AlÃm disso, a Con A promoveu um aumento nos nÃveis de RNAm para GDF-9 apÃs cultivo in vitro. Em conclusÃo, a Con A sozinha ou em combinaÃÃo com FSH promovem a ativaÃÃo de folÃculos primordiais caprinos apÃs 6 dias de cultivo in vitro e regulam a expressÃo de RNAm para PCNA, KL, c-Kit, BMP-15 e GDF-9.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / Os objetivos deste estudo foram investigar o efeito de diferentes concentraÃÃes de jacalina e da interaÃÃo de jacalina e FSH sobre a sobrevivÃncia, ativaÃÃo e expressÃo gÃnica em folÃculos primordiais caprinos cultivados in vitro. Para isto, os fragmentos do cÃrtex ovariano foram cultivados em Meio Essencial MÃnimo (MEM) suplementado com diferentes concentraÃÃes de jacalina (0, 10, 25, 50 e 100 &#956;g/mL - experimento I), por um e seis dias. ApÃs o tÃrmino do perÃodo de cultivo, os fragmentos de cÃrtex ovariano foram fixados para histologia clÃssica. Em seguida, avaliou-se a percentagem de folÃculos primordiais ou em desenvolvimento no controle nÃo cultivado e no tecido ovariano cultivado nos diferentes tratamentos. ApÃs a determinaÃÃo da concentraÃÃo de jacalina mais eficiente (50 &#956;g/mL), realizou-se o cultivo de fragmentos de cÃrtex ovariano em MEM suplementado com a jacalina (50 &#956;g/mL), FSH (50 ng/mL) ou ambos (experimento II). ApÃs 6 dias de cultivo, os fragmentos ovarianos foram fixados para histologia clÃssica. AlÃm disso, para cada tratamento, foram coletadas amostras de tecido para avaliar o perfil de expressÃo de RNAs mensageiros para BMP-15, KL, c-kit, GDF-9 e PCNA em folÃculos ovarianos caprinos cultivado in vitro por 6 dias. Os resultados demonstraram que apÃs seis dias de cultivo, a presenÃa de 50 &#956;g/mL de jacalina no meio de cultivo promoveu um aumento de folÃculos morfologicamente normais, bem como uma reduÃÃo da percentagem de folÃculos primordiais e aumento de folÃculos em desenvolvimento, quando comparado ao meio controle. No experimento II, demonstrou-se que jacalina ou FSH estimulam a ativaÃÃo dos folÃculos e contribuem para a manutenÃÃo da viabilidade, mas nÃo foi observada uma interaÃÃo positiva entres essas duas substÃncias. A expressÃo de RNAm para a BMP-15 e KL apÃs o cultivo in vitro de fragmentos de ovÃrio nos diferentes tratamentos por 6 dias nÃo foi alterada. No entanto, a presenÃa de FSH aumentou os nÃveis de RNAm para o c-kit e para o PCNA, enquanto que o GDF-9 teve sua expressÃo reduzida em meio suplementado com jacalina. Em conclusÃo, jacalina e FSH foram capazes de promover a sobrevivÃncia e ativaÃÃo de folÃculos primordiais caprinos apÃs 6 dias de cultivo. A presenÃa de FSH aumentou a expressÃo do RNAm para PCNA e c-kit, enquanto que a presenÃa da jacalina reduziu a expressÃo do GDF-9. / The aims of this study were to investigate the effect of different concentrations of jacalin and the interaction of jacalin and FSH on survival, activation and gene expression of goat primordial follicles cultured in vitro. For this, fragments of ovarian cortex were cultured in Minimum Essential Medium (MEM) supplemented with different concentrations of jacalin (0, 10, 25, 50 and 100 mg/mL - experiment I) for one and six days. After the end of cultured period, the fragments of ovarian cortex were fixed for histology. Then, the percentage of primordial follicles in uncultured or cultured ovarian tissue in different treatments were evaluated. After determining the most effective concentration of jacalin (50 &#956;g/mL), ovarian cortex fragments were cultured in MEM supplemented with jacalin (50 &#956;g/ml), FSH (50 ng/ml) or both (experiment II). After 6 days of culture, the ovarian fragments were fixed for histology. Furthermore, for each treatment, tissue samples were collected to evaluate the expression profile of mRNA for c-kit, KL, GDF-9, BMP-15 and PCNA in goats ovarian follicles cultured in vitro for 6 days. The results showed that after six days of culture, the presence of 50 &#956;g/ml jacalin in culture medium increased the percentage of normal follicles, and promoted a reduction in the percentage of primordial follicles and increase of developing follicles, when compared to control medium. In experiment II, jacalin or FSH stimulated primordial follicle activation and contributed to maintain follicle viability, but there was no positive interaction between these two substances. The levels of mRNA for BMP-15 and KL after in vitro culture of ovarian fragments in different treatments was not altered. However, the presence of FSH increased levels of mRNA for c-kit and PCNA, while the GDF-9 expression was reduced in medium supplemented with jacalin. In conclusion, jacalin and FSH were able to promote the survival and activation of goat primordial follicles after 6 days of culture. The presence of FSH increased expression mRNA of PCNA and c-kit, while the presence of jacalin reduced the expression of GDF-9.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O objetivo deste estudo foi investigar a expressÃo do sistema interleucina 1 (proteÃnas e RNAm de ligantes e receptores) e sua distribuiÃÃo nos ovÃrios de vacas cÃclicas, bem como avaliar os efeitos da IL-1&#946; na sobrevivÃncia e ativaÃÃo de folÃculos primordiais in vitro. Os ovÃrios foram processados para a localizaÃÃo do sistema interleucina 1 em folÃculos prÃ-antrais e antrais utilizando as tÃcnicas de imunohistoquÃmica, qPCR e anÃlise de Western blot. Para os estudos in vitro, fragmentos ovarianos foram cultivados em &#945;-MEM+ suplementado com IL-1&#946; (0, 1, 10, 50 ou 100 ng/mL), e apÃs 6 dias foram processados para anÃlise histolÃgica. Os resultados de imunohistoquÃmica mostraram que a proteÃna para os integrantes do sistema interleucina I (IL-1&#946;, IL-1RA, IL-1RI e IL-1RII) foram detectados em diferentes compartimentos foliculares. Infelizmente, o anticorpo testado para localizaÃÃo de IL-1&#945; nÃo reagiu em ovÃrios bovinos. Todas as proteÃnas testadas foram observados no citoplasma dos oÃcitos e nas cÃlulas da granulosa de todas as categorias foliculares, e nas cÃlulas da teca de folÃculos antrais, com a exceÃÃo da IL-1&#945;, que nÃo foi encontrada em nenhuma das cÃlula analisados. Foram observados nÃveis variÃveis de RNAm para o sistema interleucina 1 nas diferentes categorias foliculares analisadas. ApÃs 6 dias de cultivo, a presenÃa de IL-1&#946; (10 ou 50 ng/mL) foi capaz de manter a percentagem de folÃculos normais e de promover a ativaÃÃo dos folÃculos primordiais. Em conclusÃo, os componentes do sistema de interleucina 1 sÃo expressos diferencialmente em cÃlulas ovarianas de acordo com a fase do desenvolvimento folicular. AlÃm disso, a IL-1&#946; promove o desenvolvimento de folÃculos primordiais in vitro. Estes resultados sugerem um importante papel do sistema interleucina 1 na regulaÃÃo da foliculogÃnese em bovinos. / This study aims to investigate the expression of interleukin 1 system (proteins and mRNA of ligands and receptors) and its distribution in ovaries of cyclic cows, as well as to evaluate the effects of IL-1&#946; on the survival and activation of primordial follicles in vitro. The ovaries were processed for localization of interleukin 1 system in preantral and antral follicles by immunohistochemical, qPCR and western blot analysis. For in vitro studies, ovarian fragments were cultured in &#945;-MEM+ supplemented with IL-1&#946; (0, 1, 10, 50 or 100 ng/mL), and aftes 6 days the tissues cultured were processed for histological analysis. Immunohistochemical results showed that the proteins for interleukin 1 system (IL-1&#946;, IL-1RA, IL-1RI and IL-1RII) were detected in the various follicular compartments. Unfortunately, IL-1&#945; antibodies tested did not react in bovine ovaries. All the proteins tested were observed in the cytoplasm of oocytes and granulosa cells from all follicular categories, and theca cells of antral follicles, with the exception that IL-1&#945; has not been found in any analyzed cell. Variable levels of mRNA for the interleukin 1 system in the follicular size and classes analysed. After 6 days of culture, the presence of IL-1&#946; (10 or 50 ng/mL) was effective in maintaining the percentage of normal follicles and in promoting primordial follicle activation. In conclusion, interleukin 1 system is differentially expressed in the ovarian cells according to the stage of follicular development. Moreover, IL-1&#946; promotes the development of primordial follicles. These results suggest an important role of the interleukin 1 system in the regulation of folliculogenesis in bovine species.