Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-01-15T13:51:53Z No. of bitstreams: 2 Tese - Kele Amaral Alves - 2014.pdf: 3078200 bytes, checksum: a734ef24de50dd8371530cfbd9e5c3d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-18T08:47:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Kele Amaral Alves - 2014.pdf: 3078200 bytes, checksum: a734ef24de50dd8371530cfbd9e5c3d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-18T08:47:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Kele Amaral Alves - 2014.pdf: 3078200 bytes, checksum: a734ef24de50dd8371530cfbd9e5c3d4 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-12-17 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Studies with equine preantral follicles are scarce and the follicular dynamics features remain unclear. The mare’s ovarian function (e.g., folliculogenesis) has similarities with woman’s cycle and based on these aspects, this species can be considered an animal model for comparative studies and techniques with preantral follicles to preserve female fertility. The purpose of the first project was to determine methodologies that might speed up the process of histological evaluation of preantral follicle population. On the second project, we evaluated the follicular population features considering the follicular density factor by means of a mathematical model, to determine the appropriate experimental design to estimate the follicular density in ovarian fragments. The third project, analyzed the effects of reproductive phases, ovary, and ovarian structures on the quality, classification, follicular and cellular densities in ovarian fragments. The results allowed an establishment of the best thickness of histological sections and the ideal number of fragments and sections to estimate the equine preantral follicle density. Furthermore, it was observed a low follicular density associated with a high heterogeneity within and among animals. Moreover, we demonstrated the best scenario (diestrous phase with the presence of a functional corpus luteum) to collect ovarian fragments with higher follicular and cellular densities. In summary, this study demonstrated: (i) advance on the knowledge of equine follicular dynamic on the preantral phase; (ii) the concept of the mare as an animal model to study the reproductive challenges on woman; and (iii) provided basic information for future biotechnology research with the aim to preserve or improve the reproductive capability as cryopreservation, in vitro culture, and transplants of ovarian tissue. / Estudos com folículos pré-antrais equinos são escassos e as características da dinâmica folicular pré-antral permanecem pouco elucidadas. A função ovariana (ex. foliculogênese) da égua possui diversas similaridades com a mulher e, baseado nestes aspectos, podemos considerá-la como modelo animal para estudos comparativos e técnicas que utilizam folículos pré-antrais na preservação da fertilidade feminina. O primeiro projeto teve a proposta de definir metodologias para agilizar o processo de avaliação histológica da população folicular pré-antral. No segundo projeto, avaliou-se as características da população folicular considerando o fator densidade folicular, determinando por meio de modelo matemático, o apropriado desenho experimental para estimar a densidade em fragmentos ovarianos. No terceiro projeto, analisou-se os efeitos da fase reprodutiva, ovário e estruturas ovarianas sobre a qualidade, classificação, densidade folicular e celular em fragmentos ovarianos. Os resultados permitiram estabelecer a melhor espessura de secção histológica e o número de fragmentos e de secções suficientes para estimar a densidade de folículos pré-antrais equinos. Adicionalmente, observou-se uma baixa densidade folicular associada a alta heterogeneidade dentre e entre os animais. Além disso, determinou-se afase de diestro com a presença de corpo lúteo ativo como o melhor cenáriopara a coleta de fragmentos ovarianos com maior densidade folicular e celular. Finalmente, dos resultados originados deste trabalho, pode-se concluir: (i) obteve-se avanço no conhecimento da dinâmica folicular pré-antral equina; (ii) o conceito da égua como modelo animal para estudos de desafios reprodutivos na mulher foi reforçado; e (iii) ocorreu a geração de informações básicas para futuras pesquisas com biotecnologias que visam preservar ou implementar a capacidade reprodutiva como a criopreservação, cultivo in vitro e transplantes de tecido ovariano.

Made available in DSpace on 2016-05-02T13:55:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Humberto Luis Del Hoyo NeriDissertacao.pdf: 1155571 bytes, checksum: 3a98af31a9aa3f9225c0359f68b2db8e (MD5) Previous issue date: 2013-06-27 / Progesterone (P4) is an important steroid hormone in FTAI programs. Hormonal protocols used in FTAI programs involve considerable financial values, in which P4 represents 43% of the total cost. The P4 release process from vaginal implants occurs by passive diffusion, i.e., the drug release is driven by concentration gradient and enhanced by the contact area between the implant and vaginal epithelium. Given the importance of P4 in the protocols and the significance of this steroid in the treatment costs, several studies described the reutilization of P4 vaginal implants as an alternative to make this technology feasible. However, the results are controversial and the pattern of P4 releasing from vaginal implants used in cows with different luteal activity (amount of endogenous P4 synthesis) is not yet described. The aim of the present study was to evaluate the P4 profile in cows with different luteal activity treated with a new vaginal implant (1g of P4) for 8 days; evaluate and compare to each other and to a new vaginal implant the P4 releasing from implant previously used in females with different endogenous progesterone conditions; and correlate progesterone releasing from new and used (second use) implants with follicular dynamics. For this purpose, two experiments were performed. Experiment 1: Group 1(G1a) with corpus luteum during all treatment period; Group 2 (G2a) with corpus luteum during half of treatment period; Group 3 (G3a) without corpus luteum. At the beginning of treatment (D0), G1a and G2a animals had a functional corpus luteum which was formed eight days prior to implant insertion. Three day after implant insertion (D3), 0.15 mg of D-cloprostenol were administered in G2a animals. The G3a animals (n=10) started the treatment without ovarian luteal activity. Blood samples were collected on D0 in the morning and afternoon, D3, D5 and D8. P4 concentrations were determined by radioimmunoassay (RIA). Average P4 concentrations in each collection were compared by Tukey s test. G1a and G2a was different from G3a on D0 (5,3+3,1a; 5,3+1,4a and 0,6+0,3b ng/mL, respectively (p<0,05)) and on D3 (5,7+2,6a; 5,4+1,95a and 3,6+0,8b ng/mL, respectively (p<0,05)). On D5, 36 hours after PGF administration, P4 concentration of G2a became similar to G3a and both were different from G1a (G1a=3,3+1,6a, G2a=2,4+0,9b and G3a=2,1+0,7b ng/mL (p<0,05)). On D8, the groups maintained the same characteristics (G1a=3,1+1,3a, G2a=1,8+0,8b and G3a=1,6+0,6b ng/mL (p<0,05)). Furthermore, the difference in the P4 serum concentration between D3 and D0 were lower in G1a and G2a than in G3a (G1a=0,4+1,8a; G2=0,2+1,4a e G3=2,8+0,9b ng/mL (p<0,05)). In experiment 2, the same animals were reallocated into 4 groups without CL. Group 1(G1b) implants from G1a of Exp1; Group 2 (G2b) implants from G2a of Exp1; Group 3 (G3b) implants from G3a of Exp1; and Group 4 (G4b) new implants. There is no difference in the number of animals with P4 lower than 1 ng/mL (G1b = 16.7%, G2b = 66%, G3b = 50% and, G4b = 0; P=0,14) and in the number of times that this occurred in relation to the amount of samples evaluated (G1b = 12.5 %, G2b = 22.9 %, G3b = 12.5 % and, G4b = 0; P=0,07), i.e., there were no P4 releasing pattern from used implants and only new implants properly maintained the concentration of this hormone. The average follicular growth rate (G1b = 1,0+0,5; G2b = 1,0+0,3; G3b = 0,7+0,5 e G4b = 0,8+0,3) mm/day) and the diameter of the largest follicle on D8 (G1b = 13,0+3,3; G2b = 12,0+2,3; G3b = 10,5+2,9 e G4b = 11,4+0,6 mm) were also not affected by the releasing pattern of the implants. In conclusion, animals with CL and endogenous P4 during FTAI protocols consumed less P4 from the implants when compare to animals without CL; new P4 vaginal implants maintained adequate levels of P4 for TFAI, regardless the physiological condition of the treated animal; implants previously used by animals with different ovarian activity did not maintain the P4 profile similar to that observed with new implants; follicular dynamics was not changed by the lack of P4 releasing pattern from the used implants when compared to new implants; despite the greater progesterone release, did not affect follicular development pattern in heifers. / A progesterona (P4) é imprescindível para a aplicação da técnica de Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF). Os protocolos hormonais utilizados para a IATF movimentam importante valor financeiro, em que a P4 representa 43 % do custo total. A liberação da P4 pelos dispositivos vaginais ocorre por difusão passiva, ou seja, a droga é liberada obedecendo gradiente de concentração, potencializado pela área de superfície de contato entre o dispositivo e o epitélio vaginal. Dada a importância desse esteroide nos protocolos, vários estudos descrevem a reutilização dos dispositivos como uma alternativa de viabilizar a técnica. No entanto, os resultados são controversos e não há uma descrição sobre o padrão de liberação da P4 de implantes utilizados em vacas em diferentes etapas do ciclo estral. Os objetivos foram: 1) avaliar o perfil de P4, de implantes novos contendo 1g de P4, utilizados por 8 dias, em fêmeas com diferentes condições de atividade ovariana luteal; 2) avaliar e comparar entre si e em relação a um dispositivo novo, a liberação de P4 de implantes previamente usados em fêmeas com diferentes condições de progesterona endógena e 3) correlacionar a liberação de progesterona de implantes de 1º e 2º uso com a dinâmica de desenvolvimento folicular. Para isso, foram realizados dois experimentos. Exp. 1: Grupo 1 (G1a): com corpo lúteo durante todo o tratamento; Grupo 2 (G2a): com corpo lúteo a metade do tratamento e Grupo 3 (G3a): sem corpo lúteo. Os animais dos Grupos G1a e G2a iniciaram o tratamento (D0) com um corpo lúteo funcional, formado oito dias antes da inserção do implante. No G2a, foi aplicada , três dias após a inserção do implante, D3, (0,15 mg de D-cloprostenol) visando luteólise. Os 10 animais do G3a iniciaram o tratamento sem atividade ovariana luteal. Duas amostras de sangue foram coletadas no D0, pela manhã e à tarde, e no D3, no D5 e no D8, à tarde. O nível de P4 foi obtido por radioimunoensaio (RIA). As médias de P4 das amostras foram comparadas pelo teste de tukey. G1a e G2a diferenciaram de G3a no D0 (5,3+3,1a; 5,3+1,4a e 0,6+0,3b ng/mL, respec. (p<0,05)) e no D3 (5,7+2,6a; 5,4+1,95a e 3,6+0,8b ng/mL, respec. (p<0,05)). Em D5, 36 horas após a PGF do G2a, este passou a níveis semelhantes a G3a e ambos se diferenciaram de G1a (G1a=3,3+1,6a, G2a=2,4+0,9b e G3a=2,1+0,7b ng/mL (p<0,05)) e no D8 os grupos mantiveram as mesmas características (G1a=3,1+1,3a, G2a=1,8+0,8b e G3a=1,6+0,6b ng/mL (p<0,05)). Além disso, a diferença entre o nível sérico de D3 e D0 também foi diferente de G1a e G2a quando comparadas com G3a (G1a=0,4+1,8a; G2=0,2+1,4a e G3=2,8+0,9b ng/mL (p<0,05)). Exp. 2: Os mesmos animais foram redistribuídos e, desta vez, divididos em quatro grupos sem a presença de CL. Grupo 1 (G1b): implantes do G1a, Exp. 01; Grupo 2 (G2b): implantes do G2a, Exp. 01; Grupo 3(G3b): dispositivos de G3a, Exp. 1 e Grupo 4(G4b): implantes novos. Não houve diferença no percentual de animais que apresentaram P4 abaixo de 1 ng/mL durante o tratamento (G1b = 16,7%; G2b = 66%; G3b = 50% e G4b = 0; (p=0,14)) e no número de vezes que isso ocorreu em relação à quantidade de amostras avaliadas (G1b = 12,5 %; G2b = 22,9 %; G3b = 12,5 % e G4b = 0; (p=0,07)), ou seja, não houve padrão na liberação de P4 de implantes reutilizados e somente os implantes novos mantiveram níveis adequados desse hormônio. A média das taxas de crescimento folicular (mm/dia) (G1b = 1,0+0,5; G2b = 1,0+0,3; G3b = 0,7+0,5 e G4b = 0,8+0,3) e o diâmetro (mm) do maior folículo em D8 (G1b = 13,0+3,3; G2b = 12,0+2,3; G3b = 10,5+2,9 e G4b = 11,4+0,6) também não foram alterada pelo perfil de liberação a partir dos dispositivos. Diante desses resultados, conclui-se que animais com a presença de CL e P4 endógena durante o protocolo de IATF consomem menor quantidade de P4 dos implantes que animais sem CL; implantes de P4 novos mantêm níveis satisfatórios de P4 para a IATF, independentemente da condição fisiológica da fêmea tratada; dispositivos reutilizados oriundos de animais em diferentes condições de ciclicidade não mantêm perfis de progesterona semelhantes àqueles do uso prévio (1º uso); a dinâmica folicular não foi alterada em função da ausência de padrão na liberação de P4 dos implantes reutilizados quando comparados a implantes novos e que Implantes novos, a despeito da maior liberação de progesterona, não interferem no padrão de desenvolvimento folicular em novilhas.

Apesar da acumulada experiência e tecnologia da reprodução assistida, ainda é comum a ocorrência de má resposta (MR) à estimulação ovariana (EOC). Alguns dos mecanismos que prejudicam a resposta ovariana são conhecidos, como a obesidade e a redução de reserva funcional ovariana com o avançar da idade. No entanto, também se observa má resposta à estimulação ovariana controlada em pacientes jovens e sem comprometimento dessa reserva ovariana. Apesar do desenvolvimento de marcadores para predizer a má resposta, como o hormônio folículo estimulante (FSH), o hormônio antimulleriano (AMH) ou a contagem de folículos antrais (CFA), ainda não há disponibilidade de mecanismos amplamente confiáveis para este fim. Há controvérsias quanto a qual destes preditores apresenta maior acurácia. Esta incerteza é ainda maior quando se analisa a população infértil de aparente bom prognóstico, ou seja, jovens, não obesas e com boa reserva ovariana. Predizer a má resposta neste grupo permitiria importante incremento na qualidade do tratamento destas pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar a acurácia dos marcadores de resposta ovariana como idade, FSH, AMH e CFA e comparar a acurácia destes entre si e combinados em uma fórmula para predizer má resposta à estimulação ovariana controlada em pacientes de bom prognóstico. Foram avaliadas 141 mulheres com idade <40 anos, FSH <10 mUI/ml e índice de massa corpórea (IMC) <30 Kg/m2,, consecutivamente submetidas à injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), a partir de espermatozoides obtidos através de ejaculado. Destas, 45 (32%) obtiveram <3 oócitos e, portanto, tiveram má resposta ovariana. Avaliou-se a acurácia dos marcadores citados em predizer a má resposta através da área sob a curva ROC (AUC). A fórmula obteve AUC = 0.82, valor significativamente superior aos marcadores isolados (idade=0.67, CFA=0.74, AMH=0.75 e FSH=0,61). Também foram definidos os valores de corte para se obter a taxa de detecção de 50% e 80% e analisadas as taxas de verossimilhança dos marcadores. Concluiu-se que a fórmula é mais acurada em predizer má resposta ovariana à EOC do que qualquer dos marcadores isoladamente. / Age, antral follicle count (AFC), antimullerian hormone (AMH) and follicle stimulating hormone (FSH) are frequently used for the prediction of the ovarian response to controlled ovarian stimulation (COS). The objective of this study is to assess the accuracy of a formula combining all these parameters in predicting poor ovarian response (POR) to COS in good prognosis women. We included all good prognosis women submitted to COS for intracitoplasmatic sperm injection (ICSI) between n Feb-2008 and Jan-2009 who accepted to participate. We defined good prognosis as: age <40 years, basal FSH <10 mIU/ml, and body mass index (BMI) <30 Kg/m2; in which the ICSI was performed with sperm obtained by ejaculation. POR was defined as 3 oocytes retrieved or cycle cancelation before oocyte retrieval due to a poor ovarian response. We performed a linear regression to determine a formula to predict POR using age and the logarithm regression of AFC, AMH and FSH. We assessed the predictive accuracy by the area under ROC curve (AUC). Additionally, we determined the cut-off values and false positive rate (FPR) for predicting POR with a detection rate of 50% and 80%. We evaluated 141 women who were submitted to COS and oocyte retrieval; 45 (32%) had POR. The formula to predict poor ovarian response was 0.024 + 0.017*Age - 0.403*LogAFC - 0.339*LogAMH + 0.204*LogFSH. The AUC observed for the formula (0.82) was significantly higher than for the isolated markers (age = 0.67, AFC = 0.74, AMH = 0.75, FSH = 0.61). We also determined the cut-off values and false positive rates for obtaining detection rates of 50% and 80%. We conclude that the formula combining age, FSH, AMH, and AFC is more accurate in predicting POR than individual markers.

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:27:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioCLC_TESE.pdf: 1302444 bytes, checksum: e465e8b76dbdec077ba3f1534f5d9898 (MD5) Previous issue date: 2015-04-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Gossypol is a polyphenol compound produced by the pigment glands of cotton plants (Gossypium spp.) and presents proven deleterious action on spermatogenesis, rodent´s estrous cycle, granulosa cells steroidogenesis in pigs, early termination of pregnancy and embryonic development. However, the effects on sheep ovaries were not yet studied. This study was divided into two stages and aimed to determine in vitro and in vivo effect of gossypol on sheep ovarian follicles. In the first stage, eight ovarian fragments from each ewe were cultured in &#945;-MEM supplemented culture and subjected to three concentrations of gossypol-acetic acid (5, 10 and 20 µg/mL) for periods of 24 hours and seven days. In vitro action of gossypol resulted in a significant reduction in the number of viable ovarian follicles of all development stages, and a significant increase in the number of atretic follicles after 24 hours and seven days of cultivation (p < 0,01). In the latter it was remarkable the absence of viable antral follicles and the primordial follicles presented less than 50% of viability. In the second stage, we used twelve crossbred ewes, which were randomly divided into two groups and fed diets containing cottonseed cake or not (control group). Concentrate feed was offered at a rate of 1.5% of body weight of the animal for 63 days. Concentrations of total and free gossypol in cottonseed cake was 3.28 mg/g and 0.11 mg/g, respectively. Throughout the trial period no animal showed clinical signs of toxicosis. There was no interference on progesterone concentrations, weight, weight gain and ovaries measurements. Only occasional changes on vaginal cytology, hematological and biochemical parameters were noted. However, treatment with gossypol was responsible for significant reduction in the number of viable ovarian follicles (20.6% in treated sheep and 65.1% the control group) and significant increase in the number of atretic follicles (79.4% in treated sheep and 34.9% in control group), interfering at all stages of follicular development (p < 0,01). In conclusion, the gossypol promotes direct damage to the ovarian follicles of sheep, resulting in an increase on the proportion of atretic follicles and reduction of viable follicles both in vitro and in vivo / O gossipol é um composto polifenólico produzido pelas glândulas de pigmento do algodoeiro (Gossypium spp.); apresentando ação deletéria comprovada sobre a espermatogênese, ciclo estral de roedores, esteroidogênese nas células da granulosa em suínos, interrupção precoce da gestação e desenvolvimento embrionário inicial. No entanto, os efeitos sobre os ovários de ovelhas ainda não havia sido estudado. O presente estudo foi dividido em duas etapas: determinar o efeito in vitro e in vivo do gossipol sobre folículos ovarianos de ovelhas. Na primeira etapa, oito fragmentos ovarianos de cada animal foram cultivados em Meio &#945;-MEM suplementado e submetidas a cultivo em três concentrações de gossipol-ácido acético (5, 10 e 20 &#956;g/mL) por períodos de 24h e sete dias. A ação do gossipol in vitro proporcionou redução significativa no número de folículos viáveis em todos os estágios de desenvolvimento folicular; e aumento significativo no número de folículos atrésicos após 24h e sete dias de cultivo (p < 0,01). Neste último também foi notório a ausência de folículos antrais viáveis, e, os folículos primordiais apresentaram viabilidade inferior a 50%. Na segunda etapa, foram utilizadas doze ovelhas mestiças, que foram aleatoriamente separadas em dois grupos e alimentadas com rações contendo torta de algodão ou não (grupo controle). A ração foi oferecida na proporção de 1,5% do peso vivo do animal por 63 dias. As concentrações de gossipol total e livre na torta de algodão foram 3,28 mg/g e 0,11 mg/g, respectivamente. Durante todo o período experimental, nenhum animal apresentou qualquer sinal clínico de intoxicação. Não houve interferência sobre as concentrações de progesterona, peso, ganho em peso e medidas ovarianas. Apenas alterações ocasionais sobre a citologia vaginal, parâmetros hematológicos e bioquímicos foram evidenciadas. Entretanto, o tratamento com gossipol foi responsável por redução significante no número de folículos ovarianos viáveis (20,6% nas ovelhas tratadas e 65,1% no grupo controle) e aumento significante no número de folículos atrésicos (79,4% nas ovelhas tratadas e 34,9% no grupo controle), com interferência em todas as fases de desenvolvimento folicular (p < 0,01). Em conclusão, o gossipol promove danos diretos aos folículos ovarianos de ovelhas, resultando em aumento na proporção de folículos atrésicos e redução dos folículos viáveis tanto in vitro como in vivo

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:30:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GabrielaLL_DISSERT.pdf: 3154281 bytes, checksum: e51e3f107ffe738761818a96584d12a8 (MD5) Previous issue date: 2011-01-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / It were done the estimative of the follicular population of the collared peccaries ovaries and the short term preservation of it using PBS or ACP. Pair of ovaries from 6 females were collected. A half of one ovary was designated to the estimative and characterization of the follicle population, and it was immediately submitted to histology and transmission electron microscopy (TEM). The other ovary was divided into 9 fragments and one of it was immediately submitted to histology procedures, the other fragments were stored either in phosphate-buffered saline (PBS; control group) or ACP medium in isothermal Styrofoam boxes containing biological ice packs. The boxes were sealed and opened only after 12, 24, or 36 h. After opening each box, the ovarian fragments were submitted to histological analysis and TEM. The temperature into the boxes and pH of the medium were checked. A total of 33273.45 ± 3019.30 preantral follicles (PF) were estimated for each ovary. Most of them was morphologically normal (94.4%) and just a few was atretic (5.6%). At histological analysis, a lot of lipids droplets was observed at oocyte cytoplasm, which was confirmed by TEM. About short term storage, it was observed that the follicular integrity was kept until 4 h, using ACP medium. The medium pH was kept constant. This work shows, for the first time, the estimative of the PF population of the ovary, totally and in each follicle category, and it´s characterization in collared peccaries (Tayassu tajacu). It could be concluded that the ACP medium may be used as an alternative medium for the short term preservation of PF in that specie. / Foram realizados a estimativa da população folicular ovariana de catetos, e ainda a refrigeração dos mesmos utilizando PBS ou ACP por curtos períodos. Os pares de ovários de 6 catetos foram coletados. Metade de um dos ovários foi destinada a estimativa e caracterização da população folicular, sendo imediatamente submetida ao processamento para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão (MET). O outro ovário foi dividido em 9 fragmentos e um deles foi imediatamente destinado à histologia, os demais foram colocados em tubos com solução salina fosfatada tamponada (PBS) ou em solução à base de água de coco em pó (ACP) e acondicionados em caixas isotérmicas de 5L. As caixas foram lacradas e abertas 4h,12h, 24h e 36h após, e os fragmentos ovarianos foram submetidos à histologia e processamento para MET. A temperatura das caixas e o pH do meio foram aferidos. Um total de 33273.45 ± 3019.30 folículos pré antrais (FOPA) foram estimados para a população em cada ovário. A maioria dos FOPA apresentava-se como morfologicamente normal (94.4%) e apenas poucos deles eram atrésicos (5.6%). Na análise histológica, uma grande quantidade de gotas de lipídios foi observada no citoplasma oocitário, os quais foram confirmados através da análise ultraestrutural. Quanto à refrigeração, verificou-se que a integridade folicular foi mantida até as 4 h utilizando-se ACP. O pH dos meios de conservação permaneceu constante. Este trabalho mostra pela primeira vez a estimativa da população de FOPA do ovário, total e por categoria, e também a caracterização destes folículos em catetos (Tayassu tajacu). E pôde-se concluir que a ACP® pode ser utilizada como um meio alternativo para conservação de folículos pré-antrais.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:07:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ubirajara_Bilego.pdf: 525711 bytes, checksum: 92b1baad77eca0e7758c3f7bfe166098 (MD5) Previous issue date: 2009-02-26 / The aim of this study was to describe the physiological responses to the Ovsynch protocol in Girolando heifers breeding in extensive model on Centro-Oeste of Brazil region and to determine relationships with environments factors in two stations, dry and rain. This responses were describe through the characterization of ovarian structures how: (NTL) total number of follicles; (DFOLIPR) mean of follicular diameter on protocol s begin; (DFOLOV) ovulatory diameter follicles; (DCL) corpus luteum ovulatory diameter; (SCL) ovulatory corpus luteum brightness score; pregnancy rates and ovulation rate on day 9 obtained in two year stations. Were utilized 40 heifers 18-24 months age, split in two groups of 20 animals being G1 group of dry station and G2 group of rain station. During the evaluations were found differences for the total number of follicles 8,07±0,25 e 8,83±0,26 in two stations applied. The mean of follicular diameter on protocol s begin was not show differences, but the measure of the ovulatory follicle diameter, have differences for the year stations (P<0,01), being the diameter for the dry station 11,88 ± 0,4mm whereas the rain station was 10,13 ± 0,36mm. Have in this study, higher frequency of follicles that ovulate with 11 to 12 mm on dry station and 10 to 11mm on rain station. The mean of the corpus luteum diameter on the present study not differ among the stations (P>0,05), with10,46±0,41mm for the dry station and 10,49±0,34mm for the rain station, being the higher frequency of CL 11 to 12mm in both stages. The CL brightness score not have differ(P>0,05), being 2,6 ± 0,16 for the dry and 2,31 ± 0,11 for the rain. The pregnancy rate have differences on two stages (P<0,01) with values 45% and 11% on station dry and rain respectively. The THI values differ among the stations dry and rain (P<0,01). The ovulation rate on D9 do not differ (P>0,05) although to have numeric differences. It was possible to conclude that in two stations evaluated, dry and rain, have differences on follicular morfometry and pregnancy rates. / Objetivou-se com este estudo descrever a resposta fisiológica do protocolo Ovsynch em novilhas Girolando, criadas extensivamente na região Centro-Oeste do Brasil em duas estações do ano, seca e águas. Tais respostas foram descritas através da caracterização das estruturas ovarianas como: (NTF) Número total de folículos; (DFOLIPR) Diâmetro folicular médio no início do protocolo; (DFOLOV) Diâmetro do folículo ovulatório; (DCL) Diâmetro do corpo lúteo; (SCL) Escore de ecogenicidade do corpo lúteo; Taxa de gestação e Taxa de ovulação no D9 obtidas em duas estações do ano. Foram utilizadas 40 novilhas girolando com idades entre 18-24 meses, divididas em dois grupos de 20 animais, sendo (G1) de estação seca e (G2) grupo de estação de águas. Durante as avaliações foram encontradas diferenças quanto ao número total de folículos 8,07±0,25 e 8,83±0,26 nas duas estações avaliadas. O diâmetro folicular médio no início do protocolo não mostrou diferenças, porém, houve diferença entre as estações do ano (P< 0,01), quanto ao diâmetro folicular ovulatório sendo o diâmetro médio para a estação seca 11,88 ± 0,4mm enquanto para a estação das águas foi 10,13 ± 0,36mm. Houve nesse estudo maior freqüência de folículos que ovularam em torno de 11 a 12mm na estação seca e 10 a 11mm na estação das águas. O diâmetro médio do corpo lúteo no presente estudo não diferiu entre as estações (P>0,05), com 10,46±0,41mm para a estação seca e 10,49±0,34mm, com maior freqüência de CLs de 11 a 12mm em ambas as estações. Os escores de corpo lúteo também não mostraram diferenças (P>0,05) sendo 2,6 ± 0,16 para seca e 2,31 ± 0,11 para águas. A taxa de gestação também mostrou diferença entre as estações com valores de 45% e 11% nas estações seca e águas respectivamente. Taxa de ovulação no D9 não diferiu (P>0,05) entre as estações apesar de ser numericamente diferente entre os tratamentos. Os valores de THI diferiram entre as estações seca e águas (P<0,01). Foi possível concluir que as duas estações avaliadas, seca e águas, mostraram diferenças quanto morfometria folicular e taxas de gestação.

Apesar da acumulada experiência e tecnologia da reprodução assistida, ainda é comum a ocorrência de má resposta (MR) à estimulação ovariana (EOC). Alguns dos mecanismos que prejudicam a resposta ovariana são conhecidos, como a obesidade e a redução de reserva funcional ovariana com o avançar da idade. No entanto, também se observa má resposta à estimulação ovariana controlada em pacientes jovens e sem comprometimento dessa reserva ovariana. Apesar do desenvolvimento de marcadores para predizer a má resposta, como o hormônio folículo estimulante (FSH), o hormônio antimulleriano (AMH) ou a contagem de folículos antrais (CFA), ainda não há disponibilidade de mecanismos amplamente confiáveis para este fim. Há controvérsias quanto a qual destes preditores apresenta maior acurácia. Esta incerteza é ainda maior quando se analisa a população infértil de aparente bom prognóstico, ou seja, jovens, não obesas e com boa reserva ovariana. Predizer a má resposta neste grupo permitiria importante incremento na qualidade do tratamento destas pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar a acurácia dos marcadores de resposta ovariana como idade, FSH, AMH e CFA e comparar a acurácia destes entre si e combinados em uma fórmula para predizer má resposta à estimulação ovariana controlada em pacientes de bom prognóstico. Foram avaliadas 141 mulheres com idade <40 anos, FSH <10 mUI/ml e índice de massa corpórea (IMC) <30 Kg/m2,, consecutivamente submetidas à injeção intracitoplasmática de espermatozoides (ICSI), a partir de espermatozoides obtidos através de ejaculado. Destas, 45 (32%) obtiveram <3 oócitos e, portanto, tiveram má resposta ovariana. Avaliou-se a acurácia dos marcadores citados em predizer a má resposta através da área sob a curva ROC (AUC). A fórmula obteve AUC = 0.82, valor significativamente superior aos marcadores isolados (idade=0.67, CFA=0.74, AMH=0.75 e FSH=0,61). Também foram definidos os valores de corte para se obter a taxa de detecção de 50% e 80% e analisadas as taxas de verossimilhança dos marcadores. Concluiu-se que a fórmula é mais acurada em predizer má resposta ovariana à EOC do que qualquer dos marcadores isoladamente. / Age, antral follicle count (AFC), antimullerian hormone (AMH) and follicle stimulating hormone (FSH) are frequently used for the prediction of the ovarian response to controlled ovarian stimulation (COS). The objective of this study is to assess the accuracy of a formula combining all these parameters in predicting poor ovarian response (POR) to COS in good prognosis women. We included all good prognosis women submitted to COS for intracitoplasmatic sperm injection (ICSI) between n Feb-2008 and Jan-2009 who accepted to participate. We defined good prognosis as: age <40 years, basal FSH <10 mIU/ml, and body mass index (BMI) <30 Kg/m2; in which the ICSI was performed with sperm obtained by ejaculation. POR was defined as 3 oocytes retrieved or cycle cancelation before oocyte retrieval due to a poor ovarian response. We performed a linear regression to determine a formula to predict POR using age and the logarithm regression of AFC, AMH and FSH. We assessed the predictive accuracy by the area under ROC curve (AUC). Additionally, we determined the cut-off values and false positive rate (FPR) for predicting POR with a detection rate of 50% and 80%. We evaluated 141 women who were submitted to COS and oocyte retrieval; 45 (32%) had POR. The formula to predict poor ovarian response was 0.024 + 0.017*Age - 0.403*LogAFC - 0.339*LogAMH + 0.204*LogFSH. The AUC observed for the formula (0.82) was significantly higher than for the isolated markers (age = 0.67, AFC = 0.74, AMH = 0.75, FSH = 0.61). We also determined the cut-off values and false positive rates for obtaining detection rates of 50% and 80%. We conclude that the formula combining age, FSH, AMH, and AFC is more accurate in predicting POR than individual markers.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pre textuais.pdf: 419949 bytes, checksum: 16c33c78cc5fa05473d5d08f666f2827 (MD5) Previous issue date: 2009-08-21 / Bovine estrous cycle activates the pathways of MAPKs (mitogen activated protein) via oscillation of hypothalamus-pituitary-gonad axis hormones. The objective of this work was to evaluate in vivo the frequency of expression of active (phosphorylated) form, of p-MEK 1/2 and p-ERK1/2 in all types of ovarian follicles and corpora lutea in different phases of the estrous cycle of cattle. Bovine ovaries were harvested in a local slaughterhouse and the phase of the estrous cycle was determined, considering seven stages, defined as experimental groups: days 1-3 (n = 2), 4-6 (n = 5), 7-9 (n = 5), 10-12 (n = 3), 13-15 (n = 5), 16-18 (n = 5) and 19-21 (n = 5). After processing, the histological sections were subjected to immunohistochemistry using antibodies that specifically recognize the phosphorylated form of MEK 1/2 and ERK 1/2. Histological sections containing corpora lutea were also subjected to immunohistochemistry with antibodies that recognize p-BCL2 (B cell phospho lymphoma 2) and COX-2 (COX-2). The frequency of marked follicles was evaluated for the presence or absence of markup for the two cellular enzymes. The fragments of the corpus luteum were evaluated according to the scores of intensity for positive staining of the four antibodies. The frequencies of the markers studied in the follicles were compared using the chi-square. In preantral follicles, both MEK and ERK 1/2 showed high levels between 16 to 18 days. In the case of p-MEK, the greater activation of primordial follicles and primary held from 7 to 9. In secondary follicles, the less marked for p-MEK occurred in group 4 to 6. Levels of p-ERK began to rise from 13 to 15 days and subsequently decreased. Comparing the frequencies of MEK and ERK, there was statistic difference (p <0.0001) in antral follicles compared to other types of follicles. It was concluded that the intensity of activation of MAPKs MEK / ERK varies with the phases of the estrous cycle and follicular class studied. Since the corpora lutea were evaluated by analysis of variance after transforming the data, it was observed that the proteins studied showed variation in expression profile, in relation to the development, survival and death of the corpus luteum. Since COX-2, a precursor of prostaglandin, is capable of activating the pathways of MEK / ERK 1/2, it reduces the frequency of expression of cell survival factor BCL-2, leading to the corpus luteum at luteolysis. The in vivo evaluation of the activation profile of MAPKs without the use of hormonal protocols demonstrated the importance of this enzyme during the physiological reproductive process, raising new inquiries and providing opportunities to expand knowledge about the functioning of the hormone and its association with the cellular mechanisms activated by hormones / A ocorrência do ciclo estral bovino, a partir de variações dos hormônios do eixohipotálamo- hipófise-gônadas, ativa as vias das MAPKs (proteína ativada por mitógenos) O objetivo desta tese foi avaliar in vivo a freqüência de expressão da forma ativa (fosforilada), de todos os tipos foliculares ovarianos e corpo lúteo para p- MEK 1/2 e p-ERK1/2, em diferentes fases do ciclo estral de bovinos. Para tal, foram coletados em abatedouros locais ovários de bovinos e determinada a fase do ciclo estral, caracterizando sete fases, definidas como grupos experimentais: dias 1-3 (n=2), 4-6 (n=5), 7-9 (n=5), 10-12 (n=3), 13-15 (n=5), 16-18 (n=5) e 19-21 (n=5). Após o processamento histológico os cortes foram submetidos à imunoistoquímica, utilizando anticorpos que reconhecem especificamente a forma fosforilada da MEK 1/2 e ERK 1/2. Cortes histológico que apresentavam corpos lúteos foram submetidos ainda a imunoistoquímica com anticorpos que reconhecem p-BCL2 (fosfo células B de linfoma 2) e COX-2 (ciclooxigenase 2). As freqüências de folículos marcados foram avaliadas em relação à presença ou não de marcação celular para as duas enzimas. Já os fragmentos de corpo lúteo foram avaliados de acordo com escores de intensidade de marcação para os quatro anticorpos. As freqüências das marcações nos folículos estudados foram comparadas por meio do teste qui-quadrado. Em folículos pré-antrais, tanto a MEK quanto a ERK 1/2 apresentaram níveis elevados entre os dias 16 a 18. No caso da p-MEK, a maior ativação dos folículos primordiais e primários ocorreu entre os dias 7 a 9. Em folículos secundários, a menor presença de folículos marcados para p-MEK ocorreu no grupo 4 a 6. Os níveis de p-ERK começaram a se elevar a partir de 13 a 15 dias, e posteriormente diminuíram. Quando comparadas as freqüências de MEK e ERK, foram registradas diferenças (p<0,0001) nos folículos antrais em comparação aos demais tipos foliculares. Concluiu-se que a intensidade de ativação das MAPKs MEK/ERK varia de acordo com as fases do ciclo estral e com a classe folicular estudada. Já os corpos lúteos foram avaliados por meio de análise de variância, após transformação dos dados, na qual foi observada que as proteínas estudadas apresentam variação no perfil de expressão, estando relacionada com o desenvolvimento, sobrevivência e morte do corpo lúteo. Sendo que o COX-2, um precursor da prostaglandina, tem capacidade de ativar as vias das MEK/ERK 1/2, diminuindo a freqüência de expressão do fator de sobrevivência celular BCL-2, levando o corpo lúteo ao momento da luteólise. Assim a avaliação do perfil de ativação das MAPKs in vivo, sem a utilização de protocolos hormonais, demonstrou a importância desta via enzimática durante o processo fisiológico reprodutivo, abrindo espaço para futuras indagações e possibilidades de ampliação de conhecimento a cerca do funcionamento hormonal e sua associação com os mecanismos celulares ativados pelos hormônios