Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12054_Dissertação_Carina Knidel.pdf: 1789575 bytes, checksum: b6160bdd2d62dd644152668b80effd0b (MD5) Previous issue date: 2018-03-06 / As infecções bacterianas estão entre os principais problemas para a saúde pública e o surgimento de bactérias resistentes aos antimicrobianos se torna cada vez mais comum. Staphylococcus aureus é um patógeno oportunista, que pode causar uma variedade de infecções, tanto hospitalares como comunitárias. A epigalocatequina galato (EGCG), flavonoide presente nas folhas da planta Camelia sinensis, vem sendo estudada por apresentar diferentes atividades biológicas, incluindo potencial atividade antimicrobiana. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano, in vitro e in vivo, e antibiofilme da EGCG em isolados clínicos de S. aureus com diferente background genético. Foram utilizadas nove amostras isoladas de diferentes infecções, com distinta susceptibilidade aos antimicrobianos. A atividade antimicrobiana foi realizada por teste de microdiluição em caldo para a determinação da concentração mínima inibitória (CMI) e pelo ensaio de curva tempo-morte. Os resultados das CMIs variaram de 7,81 a 62,5 μg/mL e uma atividade bactericida foi observada com o tratamento de 4x a CMI. A atividade antibiofilme foi avaliada após a incubação dos isolados na presença e ausência da EGCG. Concentrações sub-inibitórias foram capazes de inibir de forma significativa a produção de biofilme de S. aureus. Com o tratamento, a maior redução na produção de biofilme foi de 100% e as menores entre 50 a 60%. Ensaios de citotoxicidade mostraram que concentrações ≤ 62,5 μg/mL da EGCG não foram citotóxicas para macrófagos murinos. Em relação ao teste in vivo utilizando larvas de G. mellonella, a EGCG reduziu a mortalidade das larvas infectadas por este patógeno de forma significativa (P=0,0005) frente a apenas um isolado. De forma geral, a EGCG mostrou eficácia em inibir o crescimento de diferentes isolados clínicos de S. aureus e apresentou relevante propriedade antibiofilme. O tratamento in vivo com larvas de G. mellonella mostrou efeito variável. Portanto, a EGCG é uma substância promissora para o tratamento de infecções causadas por S. aureus.

Tese de doutoramento. Engenharia Química e Biológica. Universidade do Porto. Faculdade de Engenharia. 2011

Made available in DSpace on 2018-08-01T21:35:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_12334_Dissertação_Gisele Pereira Diniz Schuenck.pdf: 3345641 bytes, checksum: 72a76070052bd5a46fdb845951b416b3 (MD5) Previous issue date: 2018-04-19 / As nanopartículas de ouro (AuNPs) tem se mostrado uma plataforma atraente para combinar uma variedade de propriedades biofisicoquímicas em um nanodispositivo unificado com grande potencial terapêutico. Neste estudo investigamos a capacidade do polifenol natural, epigalocatequina-3-galato (EGCG), de permitir a redução química de sais de ouro em nanopartículas de ouro e a estabilização em uma única etapa. As nanopartículas de ouro foram sintetizadas por oxirredução, com base em um Planejamento Fatorial Fracionado (triagem) e em seguida um Planejamento Composto Central (otimização) com o objetivo de determinar os pontos ótimos para a síntese. A caracterização do coloide sintetizado foi realizada com análises de UV-Vis, Infravermelho, Raman, Potencial Zeta, ICP-MS e Microscopia Eletrônica de Transmissão. Além disso, foi examinada a atividade citotóxica em modelo de macrófagos de camundongos. O pico de absorbância ocorreu em 533 nm e o diâmetro médio das nanopartículas foi de 14,54 nm. A nanoformulação apresentou boa estabilidade in vitro ao longo de mais de 6 meses e seu potencial zeta foi de -34,89 mV, sugerindo que o revestimento da EGCG previne a agregação. A análise de ICP-MS mostrou que a concentração de ouro reduzida com a síntese verde foi de 29,05 mg/L. Os dados obtidos pela espectroscopia do Infravermelho e Raman confirmaram a presença da EGCG nas nanopartículas de ouro. O coloide não apresentou efeito citotóxico para o modelo testado. A concentração inibitória referente a 50% de sobrevivência das células (IC50) para AuNPs-EGCG foi de 156,9 mg/L. Não foram utilizados produtos químicos, com exceção dos sais de ouro, neste processo verde de nanotecnologia biogênica, abrindo excelentes oportunidades para aplicações biomédicas.

O chá verde vem sendo utilizado na prevenção e tratamento de variadas doenças infecciosas e imunoinflamatórias, por apresentar efeitos benéficos decorrentes da presença de Epigalocatequina-3-galato (EGCG). Esta catequina apresenta papel antiinflamatório, anti-oxidante, anti-microbiano e mineralizador e poderia ser utilizado no tratamento da doença periapical. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito uma pasta à base de EGCG utilizada como curativo de demora em lesões periapicais experimentalmente induzidas em cães. Um total de 80 raízes de pré-molares de cão com rizogênese completa e lesões periapicais experimentalmente induzidas, foram aleatoriamente divididos em 4 grupos submetidos à diferentes protocolos de tratamento endodôntico: 1) curativo de demora com pasta à base de EGCG; 2) curativo de demora com EGCG em veículo aquoso; 3) curativo de demora com pasta à base hidróxido de cálcio (Pasta Calen); 4) tratamento endodôntico em sessão única. Para avaliação da resposta tecidual, os dentes foram avaliados radiograficamente e histopatologicamente. As imagens radiográficas obtidas antes e 120 dias após o tratamento, foram fotografadas e digitalizadas para o programa Image J 1.28 para mensuração das áreas (mm&sup2;) radiolúcidas periapicais. Aos 120 dias após a obturação doa canais radiculares os animais foram eutanasiados e os espécimes foram processados histotecnicamente, corados com HE e avaliados com microscopia de luz convencional e de fluorescência (infiltrado inflamatório, espessamento do ligamento periodontal e reabsorção de tecidos mineralizados). Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente utilizando os testes quiquadrado, Fisher, Anova e pós teste de Tukey, com nível de significância de 5% em todos os testes. De acordo com os resultados radiográficos, o percentual médio de redução da área radiolúcida (± erro padrão da média) foi semelhante (p>0,05) nos grupos EGCG em veículo aquoso (64,57%; ±7,514); pasta à base de EGCG (59,95%; ±8,023) e pasta à base de hidróxido de cálcio (58,65%; ±6,192). Todos foram superiores ao grupo tratado em sessão única (19,49%; ±2,881) (p<0,01). A análise histopatológica mostrou que os grupos que receberam aplicação de curativo de demora com EGCG ou hidróxido de cálcio, apresentaram reaparação da lesão periapical com semelhança em todos os parâmetros avaliados. Por outro lado, o tratamento em sessão única resultou em manutenção da lesão periapical, com maior espessura do ligamento periodontal (p<0,001), persistência de infiltrado inflamatório moderado ou severo (p<0,01) e presença de reabsorção óssea e cementária (p<0,0001). Foi possível concluir que a pasta à base de EGCG proporcionou o reparo de lesões periapicais, constituindo possível medicação intracanal alternativa / Green tea has been used in the prevention and treatment of various infectious and immunoinflammatory diseases, since it has beneficial effects due to the presence of Epigallocatechin-3-gallate (EGCG). This catequin present anti-inflammatory, antimicrobial, antioxidant and mineralizing role that could be usefull in the treatment of periapical disease. The aim of the present study was to evaluate the effect of the intracanal dressing with an EGCG paste-based im periapical lesions experimentaly induced in dogs. A total of 80 dog premolar roots with complete rhizogenesis and experimentally induced periapical lesions were randomly divided into 4 groups submitted to different endodontic treatment protocols:1) intracanal dressing with EGCG based paste; 2) intracanal dressing with EGCG in aqueous vehicle; 3) intracanal dressing with based paste on calcium hydroxide (Calen paste); 4) single session endodontic treatment. To evaluate the tissue response, the teeth were evaluated radiographically and histopathologically. Radiographic images are selected before 120 days after treatment, were photographed and scanned for the program Image J 1.28 for the measurement of periapical radiolucent areas (mm2). To 120 days after the root canal filling animals were euthanasied and the specimens processed, stained in the rotin HE and evaluated under conventional and fluorescence microscopy (inflammatory infiltrate, periodontal ligament space and mineralized tissue resorption). The results were compared statistically using chisquare, Fisher, Anova and Tukey post-test, with a significance level of 5% in all tests. According to the radiographic results, the mean percentage reduction of the radiolucent area (standard pattern of the mean) was similar (p> 0.05) in the EGCG groups in aqueous vehicle (64.57%; ± 7.514); EGCG based paste (59.95%, ± 8.023) and calcium hydroxide based paste (58.65%, ± 6.192). All groups were higher for the group treated in single session (19.49%, ± 2.881) (p <0.01). The histopathological analysis showed that the groups that received the prescription of intracanal dressings with EGCG or calcium hydroxide, resulted in periapical lesion repair and were similar in all the evaluated parameters. However, treatment in single session did not repair the periapical lesion resulting in greatest measure of the periodontal ligament (p <0.001), persistence of moderate or severe inflammatory infiltrate (p <0.01) and presence of bone and cementum resorption (p <0.0001). It is possible to conclude that EGCG paste-based allows the periapical lesions repair, constituting possible alternative intracanal medication

Submitted by PPG Biologia Celular e Molecular (bcm@pucrs.br) on 2018-04-17T11:40:30Z No. of bitstreams: 1 KELLY_GOULART_LIMA_TES.pdf: 13016256 bytes, checksum: b2a78492cbc6e285501d0eed5538a8ee (MD5) / Approved for entry into archive by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2018-05-04T16:48:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KELLY_GOULART_LIMA_TES.pdf: 13016256 bytes, checksum: b2a78492cbc6e285501d0eed5538a8ee (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-04T16:56:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 KELLY_GOULART_LIMA_TES.pdf: 13016256 bytes, checksum: b2a78492cbc6e285501d0eed5538a8ee (MD5) Previous issue date: 2018-03-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Octyl gallate (OG) is an antioxidant used in the food, cosmetic and medications industries that has shown antitumor effect on cell lineage of leukemia, melanoma and B cell lymphoma, as well as on animal model of pulmonary metastasis. Hepatocellular carcinoma (HC) is the main primary liver cancer affecting the world's population. Although surgical resection, ablation and liver transplantation are curative options, few patients are eligible for these therapies. The application of these therapeutic options is indicated only in the early stages of the disease and unfortunately most patients are diagnosed at advanced stage. In addition, there are reports in the literature of resistance to the only drug approved for systemic treatment, sorafenibe. In this study, we investigated the effect of OG on cell proliferation and lipidic metabolism in hepatocellular carcinoma HepG2 cells. Moreover, we developed a protocol for the quantitative evaluation of lipid droplets. We report, for the first time, that treatment with OG for 24 h inhibited HepG2 cell growth by decreasing mitochondrial activity and mass, which led to the reduction of ATP levels. This reduction in the energy supply triggered a decrease in Ki67 protein expression, leading to cycle arrest in S phase. In addition, the use of two treatments with OG with interval 24 hours induced loss of mitochondrial functionality and apoptosis without inducing resistance. These results showed that OG targets the mitochondria and is a candidate for new research on therapies for CH. We also report, for the first time, the effect of OG on lipidic metabolism, since our results showed that OG was able to increase the amount of lipids, triglyceride levels and the area of lipid droplets without involving the mTOR/SREBP-1c signaling pathway or modification of PPAR-? and PPAR-? gene expression. As the ability of OG to inhibit mitochondrial activity and induce apoptosis is known, it is strongly suggested that reduction of mitochondrial fatty acid b-oxidation is involved in the OG mechanism in the accumulation of lipids. We also describe, for the first time, a protocol for the quantitative evaluation of lipid droplets using confocal laser scanning microscopy that compared to conventional fluorescence microscopy, provided great gain in the quality of the images. / O galato de octila (GO) ? um antioxidante utilizado na ind?stria de alimentos, cosm?ticos e de medicamentos que tem mostrado efeito antitumoral em linhagem celular de leucemia, melanoma e linfoma de c?lulas B, assim como em modelo animal de met?stase pulmonar. O Carcinoma hepatocelular (CH) ? o principal c?ncer prim?rio hep?tico que afeta a popula??o mundial. Embora a ressec??o cir?rgica, a abla??o e o transplante hep?tico sejam considerados terapias curativas, poucos pacientes s?o eleg?veis. A aplica??o dessas op??es terap?uticas ? indicada somente para est?gios iniciais da doen?a e infelizmente a maioria dos pacientes ? diagnosticado em est?gio avan?ado. Al?m disso, existem relatos na literatura de resist?ncia ? ?nica droga aprovada para tratamento sist?mico, o sorafenibe. Nesse estudo, n?s investigamos o efeito do GO sobre a prolifera??o celular e metabolismo lip?dico nas c?lulas de carcinoma hepatocelular HepG2. Al?m disso, desenvolvemos um protocolo para avalia??o quantitativa de gotas lip?dicas. N?s reportamos, pela primeira vez, que o tratamento com GO por 24 horas inibiu a prolifera??o das c?lulas HepG2 por reduzir a atividade e massa mitocondrial, que levou ? redu??o dos n?veis de ATP. Essa redu??o no fornecimento de energia desencadeou a diminui??o na express?o da prote?na Ki67, levando ? parada do ciclo celular em fase S. Al?m disso, o uso de dois tratamentos com GO com intervalo de 24 horas induziu perda da funcionalidade mitocondrial e apoptose, sem induzir resist?ncia. Esses resultados mostraram que o GO tem como alvo a mitoc?ndria, sendo um candidato para novas pesquisas sobre terapias para o CH. Reportamos tamb?m, pela primeira vez, o efeito do GO sobre o metabolismo lip?dico, visto que nossos resultados mostraram que o composto foi capaz de aumentar a quantidade de lip?deos, os n?veis de triglicer?deos e a ?rea de gotas lip?dicas, sem envolver a via de sinaliza??o mTOR/SREBP-1c ou a modifica??o da express?o dos genes PPAR-? e PPAR-?. Uma vez que a capacidade do GO em inibir a atividade mitocondrial e induzir a apoptose ? conhecida, ? fortemente sugerido que a redu??o da ?-oxida??o mitocondrial de ?cidos graxos esteja envolvida no mecanismo do GO no ac?mulo de lip?deos. Descrevemos tamb?m, pela primeira vez, um protocolo para avalia??o quantitativa de gotas lip?dicas usando microscopia confocal de varredura a laser que comparado ? microscopia de fluoresc?ncia convencional, proporcionou grande ganho na qualidade das imagens.

Hoje há um grande interesse em componentes da dieta, como os polifenóis do chá verde, os quais podem exercer efeitos de proteção contra várias doenças neurológicas, incluindo Alzheimer, isquemia e acidente vascular cerebral. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da (-) epicatequina 3-galato (ECG), um dos principais antioxidantes do chá verde, em células da linhagem C6. Avaliamos morfologia e integridade celular, captação de glutamato e secreção de S100B e o efeito sobre a genotoxicidade induzida por H2O2, na presença de 0,1; 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h de incubação, houve alteração morfológica somente com 10 μM de ECG. Entretanto, após 24 h, todas as concentrações de ECG induziram formação de processos ao redor do corpo celular. Houve perda da integridade celular (~ 6%) somente após 24 h, apenas na presença de 10 μM de ECG. Houve diminuição (~36%) na captação de glutamato após 1 h com 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h, houve aumento na captação de glutamato (~70%) a partir de 0,1 μM. Também se observou aumento significativo na secreção de S100B com 1 μM de ECG (~ 36%) e com 10 μM (69%) após 1 h, enquanto após 6 h, todas concentrações induziram um aumento na secreção de S100B (~60%). Curiosamente, na presença de 10 μM de ECG houve efeito genotóxico, dependente do tempo de exposição. Já com doses mais baixas (0,1 e 1 μM), a ECG foi capaz de prevenir completamente a genotoxicidade induzida pelo H2O2. Em suma, demonstramos que a ECG pode modular captação de glutamato e secreção de S100B. Além disso, pode exercer efeitos genoprotetores ou genotóxicos em células C6, dependendo da concentração e do tempo de incubação. Estes resultados sugerem que a ECG pode contribuir para o papel neuroprotetor das células gliais e contrapor-se a patologias neurológicas associadas ao estresse oxidativo. / There is a current interest in dietary compounds, such as green tea polyphenols, that can favor protection against a variety of brain disorders, including Alzheimer’s disease, ischemia and stroke. The objective of the present study was to investigate the effects of (-)-epicatechin-3-gallate (ECG), one of three major green tea antioxidants, on C6 lineage cells. We evaluated cell morphology and integrity; specific astrocyte activities; glutamate uptake; S100B secretion and the effect on genotoxicity induced by H2O2 in the presence of 0.1, 1 and 10 μM ECG. During 6 h of incubation, cell morphology was altered only at 10 μM ECG; After 24 h, cells become stellate (process-bearing cells), in the presence of all concentrations of ECG. Loss of cell integrity (~ 6%) was observed after 24 h with 10 μM ECG. ECG (1–10 μM) induced a decrease (~ 36%) in glutamate uptake after 1 h, however, after 6 h, occurred a sustained increase in glutamate uptake (~ 70%) from 0.1 μM. A significant increase in S100B secretion was observed at 1 μM ECG (36%) and 10 μM ECG (69%) after 1 h, in contrast to 6 h, when all doses induced a significant increase (~ 60%). Interestingly, ECG 10 μM showed genotoxic effects depending on time of incubation. In contrast, smaller doses of ECG (0.1 and 1 μM) were able to almost completelly prevent genotoxicity induced by H2O2. In summary, this study demonstrates that ECG can induce a significant improvement in glutamate uptake and S100B secretion. Also, ECG can exert genoprotective or genotoxic effects in C6 cells depending on concentration and time of incubation. These results suggest that ECG could contribute to the neuroprotective role of astroglial cells to counteract brain pathologies associated with oxidative stress.

Hoje há um grande interesse em componentes da dieta, como os polifenóis do chá verde, os quais podem exercer efeitos de proteção contra várias doenças neurológicas, incluindo Alzheimer, isquemia e acidente vascular cerebral. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da (-) epicatequina 3-galato (ECG), um dos principais antioxidantes do chá verde, em células da linhagem C6. Avaliamos morfologia e integridade celular, captação de glutamato e secreção de S100B e o efeito sobre a genotoxicidade induzida por H2O2, na presença de 0,1; 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h de incubação, houve alteração morfológica somente com 10 μM de ECG. Entretanto, após 24 h, todas as concentrações de ECG induziram formação de processos ao redor do corpo celular. Houve perda da integridade celular (~ 6%) somente após 24 h, apenas na presença de 10 μM de ECG. Houve diminuição (~36%) na captação de glutamato após 1 h com 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h, houve aumento na captação de glutamato (~70%) a partir de 0,1 μM. Também se observou aumento significativo na secreção de S100B com 1 μM de ECG (~ 36%) e com 10 μM (69%) após 1 h, enquanto após 6 h, todas concentrações induziram um aumento na secreção de S100B (~60%). Curiosamente, na presença de 10 μM de ECG houve efeito genotóxico, dependente do tempo de exposição. Já com doses mais baixas (0,1 e 1 μM), a ECG foi capaz de prevenir completamente a genotoxicidade induzida pelo H2O2. Em suma, demonstramos que a ECG pode modular captação de glutamato e secreção de S100B. Além disso, pode exercer efeitos genoprotetores ou genotóxicos em células C6, dependendo da concentração e do tempo de incubação. Estes resultados sugerem que a ECG pode contribuir para o papel neuroprotetor das células gliais e contrapor-se a patologias neurológicas associadas ao estresse oxidativo. / There is a current interest in dietary compounds, such as green tea polyphenols, that can favor protection against a variety of brain disorders, including Alzheimer’s disease, ischemia and stroke. The objective of the present study was to investigate the effects of (-)-epicatechin-3-gallate (ECG), one of three major green tea antioxidants, on C6 lineage cells. We evaluated cell morphology and integrity; specific astrocyte activities; glutamate uptake; S100B secretion and the effect on genotoxicity induced by H2O2 in the presence of 0.1, 1 and 10 μM ECG. During 6 h of incubation, cell morphology was altered only at 10 μM ECG; After 24 h, cells become stellate (process-bearing cells), in the presence of all concentrations of ECG. Loss of cell integrity (~ 6%) was observed after 24 h with 10 μM ECG. ECG (1–10 μM) induced a decrease (~ 36%) in glutamate uptake after 1 h, however, after 6 h, occurred a sustained increase in glutamate uptake (~ 70%) from 0.1 μM. A significant increase in S100B secretion was observed at 1 μM ECG (36%) and 10 μM ECG (69%) after 1 h, in contrast to 6 h, when all doses induced a significant increase (~ 60%). Interestingly, ECG 10 μM showed genotoxic effects depending on time of incubation. In contrast, smaller doses of ECG (0.1 and 1 μM) were able to almost completelly prevent genotoxicity induced by H2O2. In summary, this study demonstrates that ECG can induce a significant improvement in glutamate uptake and S100B secretion. Also, ECG can exert genoprotective or genotoxic effects in C6 cells depending on concentration and time of incubation. These results suggest that ECG could contribute to the neuroprotective role of astroglial cells to counteract brain pathologies associated with oxidative stress.

Hoje há um grande interesse em componentes da dieta, como os polifenóis do chá verde, os quais podem exercer efeitos de proteção contra várias doenças neurológicas, incluindo Alzheimer, isquemia e acidente vascular cerebral. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito da (-) epicatequina 3-galato (ECG), um dos principais antioxidantes do chá verde, em células da linhagem C6. Avaliamos morfologia e integridade celular, captação de glutamato e secreção de S100B e o efeito sobre a genotoxicidade induzida por H2O2, na presença de 0,1; 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h de incubação, houve alteração morfológica somente com 10 μM de ECG. Entretanto, após 24 h, todas as concentrações de ECG induziram formação de processos ao redor do corpo celular. Houve perda da integridade celular (~ 6%) somente após 24 h, apenas na presença de 10 μM de ECG. Houve diminuição (~36%) na captação de glutamato após 1 h com 1 e 10 μM de ECG. Após 6 h, houve aumento na captação de glutamato (~70%) a partir de 0,1 μM. Também se observou aumento significativo na secreção de S100B com 1 μM de ECG (~ 36%) e com 10 μM (69%) após 1 h, enquanto após 6 h, todas concentrações induziram um aumento na secreção de S100B (~60%). Curiosamente, na presença de 10 μM de ECG houve efeito genotóxico, dependente do tempo de exposição. Já com doses mais baixas (0,1 e 1 μM), a ECG foi capaz de prevenir completamente a genotoxicidade induzida pelo H2O2. Em suma, demonstramos que a ECG pode modular captação de glutamato e secreção de S100B. Além disso, pode exercer efeitos genoprotetores ou genotóxicos em células C6, dependendo da concentração e do tempo de incubação. Estes resultados sugerem que a ECG pode contribuir para o papel neuroprotetor das células gliais e contrapor-se a patologias neurológicas associadas ao estresse oxidativo. / There is a current interest in dietary compounds, such as green tea polyphenols, that can favor protection against a variety of brain disorders, including Alzheimer’s disease, ischemia and stroke. The objective of the present study was to investigate the effects of (-)-epicatechin-3-gallate (ECG), one of three major green tea antioxidants, on C6 lineage cells. We evaluated cell morphology and integrity; specific astrocyte activities; glutamate uptake; S100B secretion and the effect on genotoxicity induced by H2O2 in the presence of 0.1, 1 and 10 μM ECG. During 6 h of incubation, cell morphology was altered only at 10 μM ECG; After 24 h, cells become stellate (process-bearing cells), in the presence of all concentrations of ECG. Loss of cell integrity (~ 6%) was observed after 24 h with 10 μM ECG. ECG (1–10 μM) induced a decrease (~ 36%) in glutamate uptake after 1 h, however, after 6 h, occurred a sustained increase in glutamate uptake (~ 70%) from 0.1 μM. A significant increase in S100B secretion was observed at 1 μM ECG (36%) and 10 μM ECG (69%) after 1 h, in contrast to 6 h, when all doses induced a significant increase (~ 60%). Interestingly, ECG 10 μM showed genotoxic effects depending on time of incubation. In contrast, smaller doses of ECG (0.1 and 1 μM) were able to almost completelly prevent genotoxicity induced by H2O2. In summary, this study demonstrates that ECG can induce a significant improvement in glutamate uptake and S100B secretion. Also, ECG can exert genoprotective or genotoxic effects in C6 cells depending on concentration and time of incubation. These results suggest that ECG could contribute to the neuroprotective role of astroglial cells to counteract brain pathologies associated with oxidative stress.

Atualmente o digluconato de clorexidina (CHX) constitui o agente antimicrobiano de uso bucal mais utilizado na Odontologia devido ao seu amplo espectro de ação contra bactérias, fungos e vírus e efeito residual. No entanto, este agente apresenta efeitos colaterais quando utilizado por longo período, podendo causar coloração extrínseca nos dentes e restaurações, alteração no paladar, sensibilidade na língua e descamação das mucosas. Estes efeitos adversos conduzem à pesquisa de novas formulações. Entretanto, até o momento, nenhum agente antimicrobiano substituiu a clorexidina. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver uma nova formulação antimicrobiana à base de um extrato de planta derivado do chá verde, a epigalocatequina-3-galato (EGCG), avaliar sua ação antimicrobiana contra microrganismos cariogênicos, in vitro e in vivo, e a possibilidade de alteração de cor dental, in vitro. A atividade antimicrobiana in vitro contra S. mutans, S. sobrinus e L. casei foi avaliada por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM), e, posteriormente sua concentração antimicrobiana de uso clínico foi determinada in vivo, após seu uso por crianças com alto risco e atividade da doença cárie. A concentração de microrganismos cariogênicos foi determinada na saliva das crianças, antes e após a realização do bochecho em diferentes concentrações, até se obter a máxima ação antimicrobiana. A clorexidina a 0,12% (Periogard®) e a água destilada foram utilizadas como controle positivo e negativo, respectivamente. A possível alteração de cor dental foi avaliada na coroa de dentes decíduos e permanentes humanos anteriores recém-extraídos, por meio de espectrofotometria (Easy Shade) e obtenção dos valores absolutos de L*, a* e b* (Sistema CIELab). Foi determinada a cor inicial e após a realização de 1, 5, 10 e 30 simulações de bochechos com cada solução testada durante 1 minuto. Os resultados dos ensaios de CIM e CBM in vitro mostraram que a formulação de EGCG inibiu o crescimento de todos os microrganismos cariogênicos avaliados. A CIM de EGCG contra S. mutans, S. sobrinus e para o L. casei foi obtida nas concentrações de 125, 750 e 750 &mu;g/mL, respectivamente. A CBM de EGCG contra o S. mutans, S. sobrinus e para o L. casei foi verificada nas concentrações de 250, 1000 e 1000 &mu;g/mL, respectivamente. A CBM em comum entre os 3 microrganimos foi utilizada como concentração inicial para a avaliação da atividade antimicrobiana in vivo. A partir desse valor a concentração foi sendo dobrada até atingir o valor de 4000 &mu;g/mL, que foi considerada a concentração de EGCG de uso clínico que causou redução da microbiota salivar cariogênica (86,48%) que mais se assemelhou à clorexidina (89,89%). A simulação de bochechos com a formulação de EGCG desenvolvida (4000 &mu;g/mL) causou alteração no valor absoluto das coordenadas L*, a* e b* em dentes decíduos e permanentes, de forma semelhante à causada pela solução de clorexidina. A alteração dos valores absolutos de L* e b* foram reversíveis após a realização de profilaxia dental. Com base nas metodologias e nos resultados obtidos no presente estudo pode-se concluir que a formulação desenvolvida, à base de EGCG, apresenta efeito antimicrobiano contra microrganismos cariogênicos, in vitro e in vivo, e causa alteração de cor dental reversível. / Currently the digluconate of chlorhexidine (CHX) is the antimicrobial agent for oral use most often used in dentistry due to its broad spectrum of activity against bacteria, fungi and viruses, and residual effect. However, this agent has side effects when used for long periods, and may cause extrinsic staining on teeth and restorations, change in taste, tenderness in the language and peeling of the mucous membranes. These adverse events lead to research into new formulations. However, to date, no antimicrobial agent has replaced the chlorhexidine. The objective of this study was to develop a new antimicrobial formulation based of green tea extract, epigallocatechin-3-gallate (EGCG), evaluate their antimicrobial activity against cariogenic microorganisms in vitro and in vivo, and possibility of dental color change in vitro. The in vitro antimicrobial activity against S. mutans, S. sobrinus e L. casei was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC), and subsequently its antimicrobial concentration was determined in clinical use, after its use for children at high risk and activity of caries. The concentration of cariogenic microorganisms was determined in the saliva of children before and after performing the mouthwash at different concentrations to obtain maximum antimicrobial activity. The chlorhexidine 0.12% (Periogard®) and distilled water were used as positive and negative controls, respectively. The possible dental color change was evaluated on the crown of deciduous and permanent teeth freshly extracted human anterior by means of spectrophotometry (Easy Shade) and obtaining the absolute values of L *, a * and b * (CIELab system). The color was determined in the beginning and after the completion of 1, 5, 10 and 30 mouthwash simulations for 1 minute of each solution tested. In vitro results of MIC and CBM tests showed that formulation EGCG inhibited the growth of all cariogenic microorganisms evaluated similarly to chlorhexidine. The MIC of EGCG against S. mutans, S. sobrinus and L. casei was observed at concentrations of 125, 750 and 750 &mu;g/ml, respectively. EGCG MBC against S. mutans, S. sobrinus and L. casei was observed at concentrations of 250, 1000 and 1000 &mu;g/ml, respectively. The common CBM between the three microbes was used as initial concentration for the evaluation of the antimicrobial activity in vivo. From this value the concentration was being folded up to the value of 4000 &mu;g/mL, which was considered the concentration of EGCG clinical use which caused reduction in salivary microbiota cariogenic (86.48%) that most resembled the chlorhexidine (89.89%). The simulation of mouthwash with the developed formulation EGCG (4000 &mu;g/ml) caused change in the absolute value of the coordinates L *, a * and b * in deciduous and permanent teeth, similar to that caused by chlorhexidine . The changes of the absolute values of L* and b* were reversible after performing dental prophylaxis. Accordance with the procedures and the results obtained in this study it can be concluded that the formulation developed, based on EGCG, has antimicrobial effect against cariogenic microorganisms in vitro and in vivo, and causes reversible change dental color.

Atualmente o digluconato de clorexidina (CHX) constitui o agente antimicrobiano de uso bucal mais utilizado na Odontologia devido ao seu amplo espectro de ação contra bactérias, fungos e vírus e efeito residual. No entanto, este agente apresenta efeitos colaterais quando utilizado por longo período, podendo causar coloração extrínseca nos dentes e restaurações, alteração no paladar, sensibilidade na língua e descamação das mucosas. Estes efeitos adversos conduzem à pesquisa de novas formulações. Entretanto, até o momento, nenhum agente antimicrobiano substituiu a clorexidina. Assim, o objetivo deste estudo foi desenvolver uma nova formulação antimicrobiana à base de um extrato de planta derivado do chá verde, a epigalocatequina-3-galato (EGCG), avaliar sua ação antimicrobiana contra microrganismos cariogênicos, in vitro e in vivo, e a possibilidade de alteração de cor dental, in vitro. A atividade antimicrobiana in vitro contra S. mutans, S. sobrinus e L. casei foi avaliada por meio da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM), e, posteriormente sua concentração antimicrobiana de uso clínico foi determinada in vivo, após seu uso por crianças com alto risco e atividade da doença cárie. A concentração de microrganismos cariogênicos foi determinada na saliva das crianças, antes e após a realização do bochecho em diferentes concentrações, até se obter a máxima ação antimicrobiana. A clorexidina a 0,12% (Periogard®) e a água destilada foram utilizadas como controle positivo e negativo, respectivamente. A possível alteração de cor dental foi avaliada na coroa de dentes decíduos e permanentes humanos anteriores recém-extraídos, por meio de espectrofotometria (Easy Shade) e obtenção dos valores absolutos de L*, a* e b* (Sistema CIELab). Foi determinada a cor inicial e após a realização de 1, 5, 10 e 30 simulações de bochechos com cada solução testada durante 1 minuto. Os resultados dos ensaios de CIM e CBM in vitro mostraram que a formulação de EGCG inibiu o crescimento de todos os microrganismos cariogênicos avaliados. A CIM de EGCG contra S. mutans, S. sobrinus e para o L. casei foi obtida nas concentrações de 125, 750 e 750 &mu;g/mL, respectivamente. A CBM de EGCG contra o S. mutans, S. sobrinus e para o L. casei foi verificada nas concentrações de 250, 1000 e 1000 &mu;g/mL, respectivamente. A CBM em comum entre os 3 microrganimos foi utilizada como concentração inicial para a avaliação da atividade antimicrobiana in vivo. A partir desse valor a concentração foi sendo dobrada até atingir o valor de 4000 &mu;g/mL, que foi considerada a concentração de EGCG de uso clínico que causou redução da microbiota salivar cariogênica (86,48%) que mais se assemelhou à clorexidina (89,89%). A simulação de bochechos com a formulação de EGCG desenvolvida (4000 &mu;g/mL) causou alteração no valor absoluto das coordenadas L*, a* e b* em dentes decíduos e permanentes, de forma semelhante à causada pela solução de clorexidina. A alteração dos valores absolutos de L* e b* foram reversíveis após a realização de profilaxia dental. Com base nas metodologias e nos resultados obtidos no presente estudo pode-se concluir que a formulação desenvolvida, à base de EGCG, apresenta efeito antimicrobiano contra microrganismos cariogênicos, in vitro e in vivo, e causa alteração de cor dental reversível. / Currently the digluconate of chlorhexidine (CHX) is the antimicrobial agent for oral use most often used in dentistry due to its broad spectrum of activity against bacteria, fungi and viruses, and residual effect. However, this agent has side effects when used for long periods, and may cause extrinsic staining on teeth and restorations, change in taste, tenderness in the language and peeling of the mucous membranes. These adverse events lead to research into new formulations. However, to date, no antimicrobial agent has replaced the chlorhexidine. The objective of this study was to develop a new antimicrobial formulation based of green tea extract, epigallocatechin-3-gallate (EGCG), evaluate their antimicrobial activity against cariogenic microorganisms in vitro and in vivo, and possibility of dental color change in vitro. The in vitro antimicrobial activity against S. mutans, S. sobrinus e L. casei was evaluated by determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC), and subsequently its antimicrobial concentration was determined in clinical use, after its use for children at high risk and activity of caries. The concentration of cariogenic microorganisms was determined in the saliva of children before and after performing the mouthwash at different concentrations to obtain maximum antimicrobial activity. The chlorhexidine 0.12% (Periogard®) and distilled water were used as positive and negative controls, respectively. The possible dental color change was evaluated on the crown of deciduous and permanent teeth freshly extracted human anterior by means of spectrophotometry (Easy Shade) and obtaining the absolute values of L *, a * and b * (CIELab system). The color was determined in the beginning and after the completion of 1, 5, 10 and 30 mouthwash simulations for 1 minute of each solution tested. In vitro results of MIC and CBM tests showed that formulation EGCG inhibited the growth of all cariogenic microorganisms evaluated similarly to chlorhexidine. The MIC of EGCG against S. mutans, S. sobrinus and L. casei was observed at concentrations of 125, 750 and 750 &mu;g/ml, respectively. EGCG MBC against S. mutans, S. sobrinus and L. casei was observed at concentrations of 250, 1000 and 1000 &mu;g/ml, respectively. The common CBM between the three microbes was used as initial concentration for the evaluation of the antimicrobial activity in vivo. From this value the concentration was being folded up to the value of 4000 &mu;g/mL, which was considered the concentration of EGCG clinical use which caused reduction in salivary microbiota cariogenic (86.48%) that most resembled the chlorhexidine (89.89%). The simulation of mouthwash with the developed formulation EGCG (4000 &mu;g/ml) caused change in the absolute value of the coordinates L *, a * and b * in deciduous and permanent teeth, similar to that caused by chlorhexidine . The changes of the absolute values of L* and b* were reversible after performing dental prophylaxis. Accordance with the procedures and the results obtained in this study it can be concluded that the formulation developed, based on EGCG, has antimicrobial effect against cariogenic microorganisms in vitro and in vivo, and causes reversible change dental color.