O presente trabalho descreve o desenvolvimento e aplicação de metodologias para glicoconjugação utilizando o átomo de selênio como conexão entre uma porção derivada de carboidrato e uma biomolécula quiral. Para tal foram realizadas modificações em D-carboidratos disponíveis comercialmente (D-galactose, D-xilose, D-ribose e D-manose) para a reação com dicalcogenetos de organoíla levando à obtenção de produtos arilcalcogenocarboidratos não glicosídicos, moléculas que apresentaram atividade biológica promissora. No âmbito da obtenção de produtos de maior complexidade estrutural, foram sintetizados disselenetos derivados de carboidratos e sua posterior aplicação como espécies para a glicoconjugação. Foi possível realizar a subtituição nucleofílica em carboidratos ou ainda em aziridinas preparadas a partir de L-aminoácidos, levando à obtenção de pseudodissacarídeos e neoglicoconjugados. Foi desenvolvida uma estratégia de introdução do selenocarboidrato em esteroides em diferentes posições a partir da abertura nucleofílica de 5,6--epóxidos e ainda por substituição na posição 3, levando à estruturas análogas à de produtos naturais glicoconjugados. A caracterização espectroscópica das novas moléculas foi realizada através de ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono, as quais foram úteis para a observação de efeitos estereoeletrônicos no caso dos arilcalcogenocarboidratos. Para os derivados esteroidais, técnicas bidimensionais foram aplicadas para a comprovação da estereosseletividade das reações de abertura de epóxido e substituição nucleofílica, que corroboram com o mecanismo proposto para a obtenção dos derivados 6B- e 3x- selenoesteroides glicoconjugados. / The present work describes the development and application of methodologies for glycoconjugation by using selenuim atom as a linker between a carbohydrate moiety and a chiral biomolecule. Thus it was performed modifications on commercially available D-carbohydrates (D-galactose, D-xylose, D-ribose and D-mannose) by reaction with organoyl dichalcogenides leading to non-glycosidic arylchalcogenocarbohydrates, molecules that have shown promising biological activity. In the context of achievement of products with higher structural complexity, carbohydrate-derived diselenides were synthesized and its prior application as glycoconjugation species. It was possible to perform nucleophilic substitution on carbohydrates or even in aziridines prepared from Laminoacids, leading to pseudodisacharides and neoglycoconjugates. A strategy of introducing selenocarbohydrates into different position of steroids was developed from nucleophilic 5,6--epoxides opening and also from substitution at position 3, affording structures analogous to glycoconjugated natural products. Spectroscopyc characterization of the novel molecules was made by nuclear magnetig ressonance of hydrogen and carbon, which were useful for observing stereoelectronic effects in the case of arylchalcogenocarbohydrates. For steroid derivatives, bidimensional techniques were employed to prove the stereoselectivity of epoxide opening and nucleophilic substitution reactions, which supports the proposed mechanism of obtention of glycoconjugated 6B- and 3x-selenosteroids.

O presente trabalho descreve o desenvolvimento e aplicação de metodologias para glicoconjugação utilizando o átomo de selênio como conexão entre uma porção derivada de carboidrato e uma biomolécula quiral. Para tal foram realizadas modificações em D-carboidratos disponíveis comercialmente (D-galactose, D-xilose, D-ribose e D-manose) para a reação com dicalcogenetos de organoíla levando à obtenção de produtos arilcalcogenocarboidratos não glicosídicos, moléculas que apresentaram atividade biológica promissora. No âmbito da obtenção de produtos de maior complexidade estrutural, foram sintetizados disselenetos derivados de carboidratos e sua posterior aplicação como espécies para a glicoconjugação. Foi possível realizar a subtituição nucleofílica em carboidratos ou ainda em aziridinas preparadas a partir de L-aminoácidos, levando à obtenção de pseudodissacarídeos e neoglicoconjugados. Foi desenvolvida uma estratégia de introdução do selenocarboidrato em esteroides em diferentes posições a partir da abertura nucleofílica de 5,6--epóxidos e ainda por substituição na posição 3, levando à estruturas análogas à de produtos naturais glicoconjugados. A caracterização espectroscópica das novas moléculas foi realizada através de ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono, as quais foram úteis para a observação de efeitos estereoeletrônicos no caso dos arilcalcogenocarboidratos. Para os derivados esteroidais, técnicas bidimensionais foram aplicadas para a comprovação da estereosseletividade das reações de abertura de epóxido e substituição nucleofílica, que corroboram com o mecanismo proposto para a obtenção dos derivados 6B- e 3x- selenoesteroides glicoconjugados. / The present work describes the development and application of methodologies for glycoconjugation by using selenuim atom as a linker between a carbohydrate moiety and a chiral biomolecule. Thus it was performed modifications on commercially available D-carbohydrates (D-galactose, D-xylose, D-ribose and D-mannose) by reaction with organoyl dichalcogenides leading to non-glycosidic arylchalcogenocarbohydrates, molecules that have shown promising biological activity. In the context of achievement of products with higher structural complexity, carbohydrate-derived diselenides were synthesized and its prior application as glycoconjugation species. It was possible to perform nucleophilic substitution on carbohydrates or even in aziridines prepared from Laminoacids, leading to pseudodisacharides and neoglycoconjugates. A strategy of introducing selenocarbohydrates into different position of steroids was developed from nucleophilic 5,6--epoxides opening and also from substitution at position 3, affording structures analogous to glycoconjugated natural products. Spectroscopyc characterization of the novel molecules was made by nuclear magnetig ressonance of hydrogen and carbon, which were useful for observing stereoelectronic effects in the case of arylchalcogenocarbohydrates. For steroid derivatives, bidimensional techniques were employed to prove the stereoselectivity of epoxide opening and nucleophilic substitution reactions, which supports the proposed mechanism of obtention of glycoconjugated 6B- and 3x-selenosteroids.

O presente trabalho descreve o desenvolvimento e aplicação de metodologias para glicoconjugação utilizando o átomo de selênio como conexão entre uma porção derivada de carboidrato e uma biomolécula quiral. Para tal foram realizadas modificações em D-carboidratos disponíveis comercialmente (D-galactose, D-xilose, D-ribose e D-manose) para a reação com dicalcogenetos de organoíla levando à obtenção de produtos arilcalcogenocarboidratos não glicosídicos, moléculas que apresentaram atividade biológica promissora. No âmbito da obtenção de produtos de maior complexidade estrutural, foram sintetizados disselenetos derivados de carboidratos e sua posterior aplicação como espécies para a glicoconjugação. Foi possível realizar a subtituição nucleofílica em carboidratos ou ainda em aziridinas preparadas a partir de L-aminoácidos, levando à obtenção de pseudodissacarídeos e neoglicoconjugados. Foi desenvolvida uma estratégia de introdução do selenocarboidrato em esteroides em diferentes posições a partir da abertura nucleofílica de 5,6--epóxidos e ainda por substituição na posição 3, levando à estruturas análogas à de produtos naturais glicoconjugados. A caracterização espectroscópica das novas moléculas foi realizada através de ressonância magnética nuclear de hidrogênio e carbono, as quais foram úteis para a observação de efeitos estereoeletrônicos no caso dos arilcalcogenocarboidratos. Para os derivados esteroidais, técnicas bidimensionais foram aplicadas para a comprovação da estereosseletividade das reações de abertura de epóxido e substituição nucleofílica, que corroboram com o mecanismo proposto para a obtenção dos derivados 6B- e 3x- selenoesteroides glicoconjugados. / The present work describes the development and application of methodologies for glycoconjugation by using selenuim atom as a linker between a carbohydrate moiety and a chiral biomolecule. Thus it was performed modifications on commercially available D-carbohydrates (D-galactose, D-xylose, D-ribose and D-mannose) by reaction with organoyl dichalcogenides leading to non-glycosidic arylchalcogenocarbohydrates, molecules that have shown promising biological activity. In the context of achievement of products with higher structural complexity, carbohydrate-derived diselenides were synthesized and its prior application as glycoconjugation species. It was possible to perform nucleophilic substitution on carbohydrates or even in aziridines prepared from Laminoacids, leading to pseudodisacharides and neoglycoconjugates. A strategy of introducing selenocarbohydrates into different position of steroids was developed from nucleophilic 5,6--epoxides opening and also from substitution at position 3, affording structures analogous to glycoconjugated natural products. Spectroscopyc characterization of the novel molecules was made by nuclear magnetig ressonance of hydrogen and carbon, which were useful for observing stereoelectronic effects in the case of arylchalcogenocarbohydrates. For steroid derivatives, bidimensional techniques were employed to prove the stereoselectivity of epoxide opening and nucleophilic substitution reactions, which supports the proposed mechanism of obtention of glycoconjugated 6B- and 3x-selenosteroids.

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:15:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo9208_1.pdf: 8786128 bytes, checksum: 7d2ebcf00fe9894bad271194691fea95 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A reação de tri-O-acetil-D-glucal 1 com vários álcoois na presença de NbCl5/CH2Cl2/t.a. ou NbCl5/THF/refluxo, ou montmorillonite K-10/ CH2Cl2/refluxo leva a formação de alquil α-glicosídeos insaturados 4a-j em altos rendimentos. A estes glicosídeos aplicamos as reações de hidrólise, proteção seletiva no C-6, desproteção, oxidação e carbonatação na síntese de diversos intermediários. Os alquil 4,6-di-O-acetil-2,3-didesoxi-α-D-eritro-hex-2-enopiranosídeo 4a-c foram submetidos a reação de azidação via complexo de paládio, fornecendo uma mistura de azidoaçúcares com predominância de 2-azidoaçúcares quando utilizamos Pd(PPh3)4. Esta reação de azidação tornou-se régioe estereosseletiva quando adicionamos o ligante dppb. A utilização dos carbonatos alílicos 31a-c, usando Pd2(dba)3/PPh3 como catalítico, nesta reação, forneceu exclusivamente os 4-azidoaçúcares 47a-c de configuração eritro. Os 4-azidoaçúcares e 2-azidoaçúcares sintetizados foram submetidos à reação de bis-hidroxilação e acetilação seguida de hidrogenação, fornecendo respectivamente os 4-amino-α-D-manopiranosídeo 100 e o 2-amino-α-D-altropiranosídeo 102. Dando continuidade à reação de substituição alílica, usamos o sistema de Pd(PPh3)4/dppb na síntese de uma série de glicosídeos insaturados contendo várias aminas heterocíclicas, por exemplo benzatriazol, benzaimidazol, tio-benzatiazol e uracilas. Este método mostrou ser extremamente importante com respeito a preparação clássica destes compostos. Por esse método, foram preparados os produtos 54, 55, 61-66 com interesse de no futuro testar suas atividades biológicas. Na funcionalização de açúcares insaturados por catálise organometálica, aplicamos a catálise com Cu(I) na reação de 4-azidoaçúcares 43a e 47a com diversos alcinos funcionalizados contendo funções do tipo álcool, ácido, éster, cetona, fitalimida e NHBoc; isto nos permitiu de obter açúcares insaturados substituídos na posição 4 por 1,2,3-triazóis em ótimos rendimentos. Este método também foi empregado na síntese de neoglicoconjugados. A estrutura e configuração destes novos e interessantes açúcares foram estabelecidas

Submitted by Hiolanda Rêgo (hiolandar@gmail.com) on 2013-07-12T18:11:30Z No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Patricia Oliveira Santos.pdf: 1373839 bytes, checksum: 29a4da7d68cc1c212a78497b9ae8ec0d (MD5) / Made available in DSpace on 2013-07-12T18:11:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_ICS_ Patricia Oliveira Santos.pdf: 1373839 bytes, checksum: 29a4da7d68cc1c212a78497b9ae8ec0d (MD5) / O protozoário Toxoplasma gondii tem os felídeos como seus hospedeiros definitivos e diversos outros animais como hospedeiros intermediários. Em ovinos e humanos, a toxoplasmose é responsável por abortamentos e doença neonatal quando a primoinfecção ocorre durante a gestação. Apesar da resposta imunológica desenvolvida pelos hospedeiros, o protozoário persiste no organismo parasitado, e a ingestão de carne ovina (crua ou mal cozida) contaminada constitui importante fonte de infecção humana. Recentemente, proteínas ligadas a glicosilfosfatidilinositol (GlyC) têm sido apontadas como importantes na ativação da resposta imune inata e constituem grande parte das proteínas de superfície de taquizoítos de T. gondii, além de serem reconhecidas por soros humanos na fase aguda da toxoplasmose. O presente estudo objetivou estudar a cinética da resposta imunológica humoral e celular na fase aguda da infecção pelo T. gondii em ovinos, e após imunização com GlyC, e desenvolver teste sorológico baseado em GlyC. O ELISA para detecção de IgG anti-lisado antigênico (LA) e anti-GlyC apresentou 100% e 30% de sensibilidade, e 96% e 94% de especificidade, respectivamente. Os ovinos infectados produziram IgM anti-LA e GlyC, e IgG anti-GlyC (p < 0.05); e os imunizados, IgM anti-LA e IgG anti-LA e GlyC (p < 0.05). A imunização com GlyC induziu aumento de células CD8+ e redução de células expressando MHC de classe II na circulação 60 dias após a injeção. O ELISA baseado em GlyC apresenta alta especificidade. GlyC é imunogênico para a espécie ovina e deve ser melhor avaliado como ferramenta diagnóstica e profilática na referida espécie. / Salvador

GONZAGA, M.L.C. Agaricus blazei Murill: isolamento, caracterização estrutural e atividades biológicas dos polissacarídeos e/ou glicoconjugados presentes 2006. 133 f. Tese (Doutorado em Química Inorgânica) – Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2006 / Submitted by irlana araujo (irlanaaraujo@gmail.com) on 2011-12-29T16:30:56Z No. of bitstreams: 1 2006_Tes_Mar Gonzaga.pdf: 1934966 bytes, checksum: c4c74d30ddf56de048887ba407f5619e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Nascimento(vieiraaline@yahoo.com.br) on 2012-02-14T14:55:47Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Tes_Mar Gonzaga.pdf: 1934966 bytes, checksum: c4c74d30ddf56de048887ba407f5619e (MD5) / Made available in DSpace on 2012-02-14T14:55:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Tes_Mar Gonzaga.pdf: 1934966 bytes, checksum: c4c74d30ddf56de048887ba407f5619e (MD5) Previous issue date: 2006-11-09 / The use of mushrooms as nutritional and medicinal through the milenar culture in oriental has arrived progressively in the Occident, take by the necessity of the population to search of a more healthy nutrition. Further more, the scientific community has revealed through publications, important findings in relation to the nutritional values and the therapeutic activities of mushrooms. As a contribution for a better knowledge of the properties of this fungus, studies are being tackled with Agaricus blazei Murill cultivated in Brazil in two distinct regions: Piedade, in the state of São Paulo and Guaramiranga, in the state of Ceará. In the first stage, the studies were devoted to the cultivated mushrooms in Ceará (Cog-Ce). The results of the spectroscopy analysis (FTIR and NMR) demonstrated that the purified polysaccharides and fractions (F1 and F4) showed characteristics of the presence of carbohydrates and proteins. After the fractionation was completed, through successive precipitations in ethanol, it was observed by the FTIR spectrum, a reduction of the carbohydrate content and an increase in the protein content. Molecular absorption of the samples indicated the absence of free protein in the purificated polysaccharides and its fractions, which point to the existence of the effective link between carbohydrate and protein, characteristics of the proteoglucans. The analyses revealed the presence of glucans of configuration b(1®6) and a(1®4), with the first having the most representative content. The glucose monosaccharides were predominant between the sugars present and the mineral phosphorus element was the major constituent between the elements analysed. The study of the purified polysaccharides and the isolated fractions of the Agaricus blazei Murill, cultivated in São Paulo (Cog-SP) were carried out in a second stage of the research. The isolated purified polysaccharides, after analyses of the constituents, were characterized and its properties in solutions were investigated, taking into consideration physical-chemical parameters and rheological properties. Furthermore, biological assays were also carried out for evaluation in the case of therapeutic activities. The analyses by 1H and 13C NMR made evident the presence of b glucans (1®6) and a(1®4), which the glucana b(1®6) was predominant. The presence of glucans a(1®4) were greater in relation to the presented content by Cog- Ce. The glucose monosaccharides and the mineral phosphorus element were also predominants in Cog-SP, in relation to the sugars and the minerals present respectively. The greater protein content and the smallest carbohydrate content were found for the purified polysaccharides of Cog-SP when compared to the Cog-Ce. Glucans b(1®6) were isolated through the specific purification procedure with the use of Timol. FTIR and 1H, 13C NMR and the bidimensional COSY and HMQC, confirmed the purity of the material in the b(1®6) configuration, with indication of the link to protein group. The study of purified polysaccharides in solutions showed compounds with high molecular weight. The confirmation of random coils was strongly suggested by light scattering, which was, probably, due to the presence of protein and mineral elements. Low viscosities were observed in the polysaccharides when compared to those of the glucans traditionally used in foods. Rheological measurements demonstrated a Newtonian behavior of the materials. Physical-chemical parameters, such as surface tension and critical micelle concentration (cmc), as well as others, demonstrated similar characteristics to those found for polymers with tensoactive properties. Due to these characteristics, the purified polysaccharides were tested in relation to the solubilizing capacity using the poorly water soluble drug griseofulvin as a model solubilizate. The preliminary test suggest that these polysaccharides, in the gluco-protein form, in solution, are potentially useful to act as a solubilizer for aromatic drugs. The biological test carried out with the purified polysaccharides and/or proteoglucans, demonstrated that they present anti-tumoral activities in vitro, through inhibition of the replication of poliovirus and anti-tumoral in vivo against the Sarcoma 180. / cultura milenar do uso dos cogumelos pelos orientais como alimento funcional e medicinal tem chegado progressivamente ao ocidente, levada pelo anseio da população na busca de uma alimentação mais saudável. Além disso, a comunidade científica tem revelado por meio de publicações, descobertas importantes em relação ao valor nutritivo e às atividades terapêuticas dos cogumelos. Como uma contribuição para um melhor conhecimento das propriedades destes fungos, neste trabalho, estão sendo abordados os estudos realizados com o cogumelo Agaricus blazei Murill cultivado no Brasil em duas regiões distintas: Piedade, no Estado de São Paulo e Guaramiranga, no Estado do Ceará. Na primeira etapa, os estudos foram voltados para o cogumelo cultivado no Ceará (Cog-Ce). Os resultados das análises espectroscópicas (FTIR e RMN) mostraram que os polissacarídeos purificados e frações (F1 a F4) apresentam características da presença de carboidratos e proteínas. Na seqüência em que o fracionamento foi realizado, através de precipitações sucessivas em etanol, observou-se nos espectros FTIR uma redução do teor de carboidratos e aumento no conteúdo protéico. Espectros de absorção molecular das amostras indicaram a ausência de proteína livre nos polissacarídeos purificados e suas frações, o que aponta para a existência de ligação efetiva entre carboidrato e proteína, característica dos proteoglucanos. As análises revelaram a presença de glucanas de configurações 1®6) e a(1®4), sendo a primeira de conteúdo mais representativo. O monossacarídeo glicose foi predominante entre os açúcares presentes e o elemento mineral fósforo foi o maior constituinte entre os elementos analisados. O estudo dos polissacarídeos purificados e frações isolados do Agaricus blazei Murill cultivado em São Paulo (Cog-SP) foi realizado em uma segunda etapa do trabalho. Os polissacarídeos purificados isolados, após análise dos constituintes, foram caracterizados e suas propriedades em solução investigadas, considerando-se parâmetros físico-químicos e propriedades reológicas. Além disso, foram realizados ensaios biológicos para avaliação quanto a atividades terapêuticas. As análises por RMN 1H e 13C evidenciaram a presença de glucanas (1®6) e a(1®4), sendo predominante a glucana (1®6). A presença de glucanas a(1®4) foi maior em relação ao teor apresentado pelo Cog-Ce. O monossacarídeo glicose e o elemento mineral fósforo também foram predominantes no Cog-SP, entre os açúcares e os minerais presentes, espectivamente. Maior teor de proteína e menor conteúdo de carboidratos foram encontrados para os polissacarídeos purificados do Cog-SP quando comparados ao Cog-Ce. Glucanas de configuração (1®6) foram isoladas através de procedimentos específicos de purificação com uso de Timol. Análises de FTIR e RMN 1H, 13C e os bidimensionais COSY e HMQC confirmaram a pureza do material na configuração (1®6) com indícios de ligação com grupo protéico (proteoglucano). O estudo dos polissacarídeos purificados em solução mostrou materiais de elevadas massas molares. Uma conformação de novelo aleatório foi fortemente sugerida pelas medidas de Espalhamento de Luz, sendo, provavelmente, devida à presença da proteína e elementos minerais. Baixas viscosidades foram observadas nos polissacarídeos quando comparadas às das glucanas tradicionalmente usadas na alimentação. Medidas reológicas mostraram o comportamento Newtoniano dos materiais. Parâmetros físico-químicos, tais como, tensão superficial e concentração micelar crítica (cmc), entre outros, apresentaram-se semelhantes àqueles encontrados para polímeros com propriedades tensoativas. Em razão destas características, os polissacarídeos purificados foram testados em relação à capacidade de solubilizar o fármaco modelo griseofulvina. Os testes preliminares sugerem que esses polissacarídeos, na forma de proteoglucanos, em solução, são potencialmente úteis para atuar como meio solubilizante para drogas aromáticas. Os testes biológicos realizados com os polissacarídeos e/ou proteoglucanos purificados mostraram que estes apresentam atividades antiviral in vitro, pela inibição da replicação do poliovírus e antitumoral in vivo contra o Sarcoma 180.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A cultura milenar do uso dos cogumelos pelos orientais como alimento funcional e medicinal tem chegado progressivamente ao ocidente, levada pelo anseio da populaÃÃo na busca de uma alimentaÃÃo mais saudÃvel. AlÃm disso, a comunidade cientÃfica tem revelado por meio de publicaÃÃes, descobertas importantes em relaÃÃo ao valor nutritivo e Ãs atividades terapÃuticas dos cogumelos. Como uma contribuiÃÃo para um melhor conhecimento das propriedades destes fungos, neste trabalho, estÃo sendo abordados os estudos realizados com o cogumelo Agaricus blazei Murill cultivado no Brasil em duas regiÃes distintas: Piedade, no Estado de SÃo Paulo e Guaramiranga, no Estado do CearÃ. Na primeira etapa, os estudos foram voltados para o cogumelo cultivado no Cearà (Cog-Ce). Os resultados das anÃlises espectroscÃpicas (FTIR e RMN) mostraram que os polissacarÃdeos purificados e fraÃÃes (F1 a F4) apresentam caracterÃsticas da presenÃa de carboidratos e proteÃnas. Na seqÃÃncia em que o fracionamento foi realizado, atravÃs de precipitaÃÃes sucessivas em etanol, observou-se nos espectros FTIR uma reduÃÃo do teor de carboidratos e aumento no conteÃdo protÃico. Espectros de absorÃÃo molecular das amostras indicaram a ausÃncia de proteÃna livre nos polissacarÃdeos purificados e suas fraÃÃes, o que aponta para a existÃncia de ligaÃÃo efetiva entre carboidrato e proteÃna, caracterÃstica dos proteoglucanos. As anÃlises revelaram a presenÃa de glucanas de configuraÃÃes 1Â6) e a(1Â4), sendo a primeira de conteÃdo mais representativo. O monossacarÃdeo glicose foi predominante entre os aÃÃcares presentes e o elemento mineral fÃsforo foi o maior constituinte entre os elementos analisados. O estudo dos polissacarÃdeos purificados e fraÃÃes isolados do Agaricus blazei Murill cultivado em SÃo Paulo (Cog-SP) foi realizado em uma segunda etapa do trabalho. Os polissacarÃdeos purificados isolados, apÃs anÃlise dos constituintes, foram caracterizados e suas propriedades em soluÃÃo investigadas, considerando-se parÃmetros fÃsico-quÃmicos e propriedades reolÃgicas. AlÃm disso, foram realizados ensaios biolÃgicos para avaliaÃÃo quanto a atividades terapÃuticas. As anÃlises por RMN 1H e 13C evidenciaram a presenÃa de glucanas (1Â6) e a(1Â4), sendo predominante a glucana (1Â6). A presenÃa de glucanas a(1Â4) foi maior em relaÃÃo ao teor apresentado pelo Cog-Ce. O monossacarÃdeo glicose e o elemento mineral fÃsforo tambÃm foram predominantes no Cog-SP, entre os aÃÃcares e os minerais presentes, espectivamente. Maior teor de proteÃna e menor conteÃdo de carboidratos foram encontrados para os polissacarÃdeos purificados do Cog-SP quando comparados ao Cog-Ce. Glucanas de configuraÃÃo (1Â6) foram isoladas atravÃs de procedimentos especÃficos de purificaÃÃo com uso de Timol. AnÃlises de FTIR e RMN 1H, 13C e os bidimensionais COSY e HMQC confirmaram a pureza do material na configuraÃÃo (1Â6) com indÃcios de ligaÃÃo com grupo protÃico (proteoglucano). O estudo dos polissacarÃdeos purificados em soluÃÃo mostrou materiais de elevadas massas molares. Uma conformaÃÃo de novelo aleatÃrio foi fortemente sugerida pelas medidas de Espalhamento de Luz, sendo, provavelmente, devida à presenÃa da proteÃna e elementos minerais. Baixas viscosidades foram observadas nos polissacarÃdeos quando comparadas Ãs das glucanas tradicionalmente usadas na alimentaÃÃo. Medidas reolÃgicas mostraram o comportamento Newtoniano dos materiais. ParÃmetros fÃsico-quÃmicos, tais como, tensÃo superficial e concentraÃÃo micelar crÃtica (cmc), entre outros, apresentaram-se semelhantes Ãqueles encontrados para polÃmeros com propriedades tensoativas. Em razÃo destas caracterÃsticas, os polissacarÃdeos purificados foram testados em relaÃÃo à capacidade de solubilizar o fÃrmaco modelo griseofulvina. Os testes preliminares sugerem que esses polissacarÃdeos, na forma de proteoglucanos, em soluÃÃo, sÃo potencialmente Ãteis para atuar como meio solubilizante para drogas aromÃticas. Os testes biolÃgicos realizados com os polissacarÃdeos e/ou proteoglucanos purificados mostraram que estes apresentam atividades antiviral in vitro, pela inibiÃÃo da replicaÃÃo do poliovÃrus e antitumoral in vivo contra o Sarcoma 180. / The use of mushrooms as nutritional and medicinal through the milenar culture in oriental has arrived progressively in the Occident, take by the necessity of the population to search of a more healthy nutrition. Further more, the scientific community has revealed through publications, important findings in relation to the nutritional values and the therapeutic activities of mushrooms. As a contribution for a better knowledge of the properties of this fungus, studies are being tackled with Agaricus blazei Murill cultivated in Brazil in two distinct regions: Piedade, in the state of SÃo Paulo and Guaramiranga, in the state of CearÃ. In the first stage, the studies were devoted to the cultivated mushrooms in Cearà (Cog-Ce). The results of the spectroscopy analysis (FTIR and NMR) demonstrated that the purified polysaccharides and fractions (F1 and F4) showed characteristics of the presence of carbohydrates and proteins. After the fractionation was completed, through successive precipitations in ethanol, it was observed by the FTIR spectrum, a reduction of the carbohydrate content and an increase in the protein content. Molecular absorption of the samples indicated the absence of free protein in the purificated polysaccharides and its fractions, which point to the existence of the effective link between carbohydrate and protein, characteristics of the proteoglucans. The analyses revealed the presence of glucans of configuration b(1Â6) and a(1Â4), with the first having the most representative content. The glucose monosaccharides were predominant between the sugars present and the mineral phosphorus element was the major constituent between the elements analysed. The study of the purified polysaccharides and the isolated fractions of the Agaricus blazei Murill, cultivated in SÃo Paulo (Cog-SP) were carried out in a second stage of the research. The isolated purified polysaccharides, after analyses of the constituents, were characterized and its properties in solutions were investigated, taking into consideration physical-chemical parameters and rheological properties. Furthermore, biological assays were also carried out for evaluation in the case of therapeutic activities. The analyses by 1H and 13C NMR made evident the presence of b glucans (1Â6) and a(1Â4), which the glucana b(1Â6) was predominant. The presence of glucans a(1Â4) were greater in relation to the presented content by Cog- Ce. The glucose monosaccharides and the mineral phosphorus element were also predominants in Cog-SP, in relation to the sugars and the minerals present respectively. The greater protein content and the smallest carbohydrate content were found for the purified polysaccharides of Cog-SP when compared to the Cog-Ce. Glucans b(1Â6) were isolated through the specific purification procedure with the use of Timol. FTIR and 1H, 13C NMR and the bidimensional COSY and HMQC, confirmed the purity of the material in the b(1Â6) configuration, with indication of the link to protein group. The study of purified polysaccharides in solutions showed compounds with high molecular weight. The confirmation of random coils was strongly suggested by light scattering, which was, probably, due to the presence of protein and mineral elements. Low viscosities were observed in the polysaccharides when compared to those of the glucans traditionally used in foods. Rheological measurements demonstrated a Newtonian behavior of the materials. Physical-chemical parameters, such as surface tension and critical micelle concentration (cmc), as well as others, demonstrated similar characteristics to those found for polymers with tensoactive properties. Due to these characteristics, the purified polysaccharides were tested in relation to the solubilizing capacity using the poorly water soluble drug griseofulvin as a model solubilizate. The preliminary test suggest that these polysaccharides, in the gluco-protein form, in solution, are potentially useful to act as a solubilizer for aromatic drugs. The biological test carried out with the purified polysaccharides and/or proteoglucans, demonstrated that they present anti-tumoral activities in vitro, through inhibition of the replication of poliovirus and anti-tumoral in vivo against the Sarcoma 180.

Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-06-03T12:50:25Z No. of bitstreams: 1 Tese-Rafael Assis.pdf: 16998488 bytes, checksum: 138dc6a874eb36a1c66935f3dfab1da4 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-06-03T12:50:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese-Rafael Assis.pdf: 16998488 bytes, checksum: 138dc6a874eb36a1c66935f3dfab1da4 (MD5) Previous issue date: 2012 / Os glicoconjugados de Leishmaniatem sido extensivamente estudados, mas ainda pouco se sabe sobre o quanto polimorfismos intra e interespecíficos contribuem com o desenvolvimento das diferentes imunopatologias das leishmanioses. Por este motivo, duas espécies de importância epidemiológica foram examinadas, L. braziliensise L. infantum, agentes causadores das leishmanioses cutânea e visceral, respectivamente. O LPG de L. braziliensisnão possui cadeias laterais enquanto o LPG de L. infantumcarrega em sua estrutura oligômeros de até três β-glicoses como cadeias laterais. Por outro lado a estrutura dos GIPLs destas espécies era desconhecida e foi objeto de estudo deste trabalho. A análise estrutural dos GIPLs mostrou que L. infantumpossui GIPLs pequenos e ricos em manose, sugerindo predominância de GIPLs do tipoI e híbridos enquanto L. braziliensis apresenta GIPLs grandes e ricos em galactose, sugestivo do tipo II. Para analisar o papel destas moléculas na interação com o hospedeiro, macrófagosperitoneais murinos foram tratados com LPG ou GIPLs e a produção de nitrito, citocinas, bem como a ativação de MAPKs foram avaliados. De forma geral, macrófagos estimulados com LPG de L. braziliensis, demonstraram uma produção maior de TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO do que os estimulados com LPG de L. infantum, adicionalmente, células tratadas com LPG de ambas as espécies mostraram uma resposta pro inflamatória mais proeminente. Além disto, os GIPLsmostraram a capacidade de inibir a produção de IL-12 e NO em macrófagos estimulados com IFN-γe LPS. Finalmente, os glicoconjugados destas duas espécies resultaram em uma cinética diferencial na ativação de MAPKs. O LPG de L. braziliensis mostrou uma ativação transiente enquanto o de L. infantum uma ativação gradual. Os GIPLs de ambas espécies falharam em ativar MAPKs / Leismania LPG has being extensively studied but little is known about in what extent interspecies variations contribute to the differentimmunopathologies of leishmaniases. Similarly, for GIPLs, a relatively neglected molecule, little is known about its polymorphisms among Leishmania species and its role during infection. To address this issue, two epidemiologically important South American species of Leishmania were examined, L. braziliensis and L. infantum, causative agents of cutaneous and visceral leishmaniasis, respectively. The LPG from these two species differ in structure, being L. braziliensis LPG devoid of side chains while L. infantum LPG carries one to three β-glucoses on its side chains. In the other hand the structure of the GIPLs from these two species is still unknown and was addressed in this present work. A structural analysis of the GIPLs showed that L. infantum has small, mannose rich GIPLs, suggestive of type I and Hybrid GIPLs while L. braziliensis has larger and galactose rich GIPLs, suggestive of Type II GIPLs. To address the role of these molecules upon macrophage invasion, mouse peritoneal macrophages were treatedwith either LPG or GIPLs and Nitrite and cytokine production, as well as MAPKs activation were evaluated. Overall, macrophages stimulated with L. braziliensis LPG, had a higher TNF-α, IL-1β, IL-6 e NO production than those stimulated with that of L. infantum, also, IFN-γprimed macrophages stimulated with LPG, had a higher production of NO and TNF-αthan GIPLs stimulated cells. Additionally, GIPLs showed the capacity of inhibit IL-12 and NO production in IFN-γand LPS stimulated macrophages. Furthermore, the glycoconjugates from the two species resulted in differential kinetics of signaling via MAPK activation. L. infantum LPG exhibited a gradual activation profile, whereas L. braziliensisLPG showed a sharp but transient activation, while GIPLs failed to activate MAPKs

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:14:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4310_1.pdf: 9058889 bytes, checksum: 523800767050929b4eae4629c71c3980 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Neo-glicoconjugados constituem uma classe de compostos em que os carboidratos estão conjugados a outras moléculas de interesse biológico. Os 1,2,4-oxadiazóis são heterociclos bastante conhecidos em química medicinal, apresentando várias atividades farmacológicas e tendo sido considerados bioisósteros de ésteres e amidas. Este trabalho descreve a síntese de oxadiazóis enantiomericamente enriquecidos através de biocatálise com Daucus carota, a fim de preparar compostos glico-heterocíclicos; a síntese de novos neo-glicoconjugados contendo heterociclos e aminoácidos através de catálise mediada por Pd(0) e click chemistry e a avaliação da atividade biológica de alguns dos produtos sintetizados. A biorredução de oxadiazóis-cetona com D. carota forneceu oxadiazóis enriquecidos enantiomericamente com excessos enantioméricos variando de 52 a 72%. Os álcoois obtidos têm configuração absoluta S, o que está de acordo com a regra de Prelog para as biorreduções utilizando este sistema enzimático. A seguir, oxadiazóis com uma função fenol foram anexados na posição C-4 de um carboidrato insaturado através de alquilação alílica mediada por Pd(0), de maneira regiosseletiva. Estes glicosídeos insaturados foram transformados em manopiranosídeos através de bis-hidroxilação seguida de bis-acetilação. Em outro momento, vários oxadiazóis, derivados da uracila e aminoácidos foram anexados a carboidratos diversos através da cicloadição 1,3-dipolar catalisada por Cu(I), fornecendo diversos glicoconjugados com um espaçador 1,2,3-triazol. Os produtos foram obtidos de maneira regiosseletiva e os glicoconjugados com a porção carboidrato insaturada foram bis-hidroxilados e bis-acetilados, formando os respectivos manopiranosídeos. Alguns dos glicoconjugados tiveram suas propriedades biológicas avaliadas. Nenhum dos compostos avaliados demonstrou atividade antimicrobiana contra os microorganismos testados. Alguns produtos demonstraram ter atividade citotóxica em linhagens de células cancerígenas HEp-2 e NCI-H292, com valores de CI50 menores que 10 ug/mL. Estudos de microscopia eletrônica de varredura (MEV) foram realizados nas células cancerígenas da linhagem HEp-2 e forneceram fortes indícios de que estas substâncias ativariam a apoptose nas células estudadas

Submitted by Edisangela Bastos (edisangela@ufpa.br) on 2015-05-19T19:59:59Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AcumuloColesterolMycobacterium.pdf: 1572903 bytes, checksum: 457e2b33249b8d202ab48fe3a91ebeca (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Rosa Silva (arosa@ufpa.br) on 2015-05-20T17:42:45Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AcumuloColesterolMycobacterium.pdf: 1572903 bytes, checksum: 457e2b33249b8d202ab48fe3a91ebeca (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-20T17:42:45Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 22974 bytes, checksum: 99c771d9f0b9c46790009b9874d49253 (MD5) Dissertacao_AcumuloColesterolMycobacterium.pdf: 1572903 bytes, checksum: 457e2b33249b8d202ab48fe3a91ebeca (MD5) Previous issue date: 2015 / A parede celular micobacteriana é uma característica marcante do gênero Mycobacterium, apresentando lipídios e glicoconjugados bioativos, como fosfatidilinositol manosídeos (PIMs), lipomanana (LM) e lipoarabinomanana (LAM). A infecção crônica no interior de macrófagos pulmonares é relacionada com o acúmulo de colesterol na célula hospedeira, conferindo uma fonte alternativa de energia e carbono para o bacilo manter suas funções fisiológicas. Com base na atividade imunomoduladora desses glicoconjugados e na adaptação em outro ambiente no interior da célula hospedeira infectada, propomos investigar a possível modulação da biossíntese de LM/LAM em Mycobacterium smegmatis (saprofítico), após o cultivo em meio mínimo (MM) suplementado com glicerol e/ou colesterol. Como resultados, obtivemos que o bacilo, mesmo sendo saprofítico, foi capaz de acumular colesterol e influenciar na fisiologia bacteriana por apresentar um crescimento lento com densidade bacteriana comprometida. Além disso, o colesterol diminuiu o acúmulo de PIMs e promoveu mudanças morfológicas e de agregação bacteriana, mesmo mantendo a parede celular com sua característica físico-química específica (resistência a descoloração por álcool e ácido). A mudança mais marcante induzida pelo consumo do colesterol foi na biossíntese de LAM, que apresentou migração eletroforética diferenciada, compatível às massas moleculares maiores, assemelhando-se a de bacilos não saprofíticos (de 25 – 30 KDa para 30 – 50 KDa). Estes resultados mostram que o colesterol, quando utilizado como principal alternativa de fonte de energia e carbono, pode induzir mudanças fisiológicas em micobactérias, principalmente na biossíntese de LAM, uma das principais moléculas imunoreguladoras presente na parede celular. Estes dados sugerem que micobactérias podem sofrer mudanças semelhantes no interior de granulomas, e que estas mudanças podem ajudar na evolução da tuberculose para a forma crônica multibacilar, marcada por um aspecto imunodeficiente contra o bacilo. / Mycobacterial cell wall is a hallmark of Mycobacterium genus, constituted of bioactive lipids and glycoconjugates: phosphatidylinositol mannoside (PIMs), lipomannan (LM) and lipoarabinomannan (LAM). The chronic infection inside lung macrophages is related with cholesterol accumulation into host cells as an alternative source of carbon and energy to maintain the bacilli with its physiological functions. To understand the activity of these immunomodulatory glycoconjugates during adaptation under the unusual environment inside the host infected cells, the present work propose to investigate the possible modulation of LM/LAM biosynthesis in Mycobacterium smegmatis (saprophytic) after culture in minimal medium (MM), supplemented with glycerol and/or cholesterol. Our results showed that saprophytic bacilli are able to accumulate the cholesterol and change the bacterial physiology due to slow growth and restrict cell density. Furthermore, the cholesterol consumption decreased the accumulation of PIMs and promoted morphological changes and bacterial aggregates, even maintaining the cell wall with its specific physic-chemistry characteristic (alcohol-acid resistance). The most impressive change after cholesterol consumption was the LAM biosynthesis, which showed distinct electrophoresis migration, compatible to high molecular weight of LAM from non-saprophytic bacilli (from 25 – 30 KDa to 30 – 50 KDa). These results showed that cholesterol consumption, when utilized as principal alternative of carbon and energy source, is able to induce physiological changes in mycobacteria, mainly in LAM biosynthesis, one of the most immunoregulatory molecules of cell wall. Ours data suggest that similar changes in mycobacteria may occur inside the granuloma, and that changes may help the evolution of tuberculosis to chronic and multibacillary form, hallmarked by immunodeficient aspect against the bacilli.