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Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is the main side effect of cyclophosphamide (CP) chemotherapy. This condition is characterized by the macro and microhaematuria, dysuria, suprapubic pain and increased urinary frequency. It is believed that acrolein, a CP metabolite, induces the generation of reactive oxygen species in the uroepithelial cell, resulting in peroxynitrite formation, which can cause damage to these cells. Mesna is the choice drug used to prophylactically treat HC, because it prevents the acrolein contact with the uroepithelium. Besides, antioxidant substances are thought to have a protective effect on HC, mainly because of the reduction of peroxynitrite formation through the inhibition of superoxide production. In this way, natural compounds or extracts with antioxidant and anti-inflammatory properties may possess potential to treat HC. Objectives: In the present study the effect of the ethanol extract of the inner bark of Caesalpinia pyramidalis (EECp) was investigated in the HC model in rats. Methods: In order to induce HC, animals received an i.p. injection of CP (200 mg/kg). A control group received only saline (0.9%) by the same route. One hour before this injection, animals were pre-treated with vehicle (Tween 80, 5%, p.o.) or EECP (100-400 mg/kg, p.o.). Mesna was used as a control and was administrated 5 min before and 4 and 8 h after the CP injection. In this manner, there were used 6 experimental groups: (i) Vehicle+Saline; (ii) Vehicle+CP; (iii) EECp (100 mg/kg)+CP; (iv) EECp (200 mg/kg)+CP; (v) EECp (400 mg/kg)+CP; (vi) Mesna+CP. After 24 h of CP or saline injection, animals were euthanized and the inflammatory/oxidative parameters were measured: (i) myeloperoxidase (MPO) activity in the urinary bladder and lung tissues; (ii) malondialdehyde (MDA) concentration in the urinary bladder and lung tissues; (iii) edema index in bladder; (iv) serum concentrations of nitrite and nitrate; (v) total and differential leukocyte counts in the peripheral blood; (vi) histological analyses of the urinary bladder. Results: The injection of CP increased the MPO activity in the urinary bladder (P<0.001) and significantly altered all the histological parameters evaluated, when compared with the saline+vehicle group. Besides, it augmented the bladder weight (P<0.01), when compared with the saline+vehicle group, without changing the MDA concentrations. Systemically, we observed higher serum concentration of nitrite and nitrate and lung MPO activity, as wells as a decrease in the total leukocyte and mononuclear counts, with a slight increase in the polymorphonuclear counts (P<0.05), when compared with saline+vehicle group. Pre-treatment with EECp reduced the leukocyte influx to the urinary bladder, evidenced by the reduction of the MPO activity (P<0.001 for 100 and 400 mg/kg and P<0.05 for 200 mg/kg) and the histological score (P<0.05 for 100 mg/kg), accompanied by the diminution of the total histological score (P<0.05 for 100 mg/kg) and the basal concentration of MDA (P<0.05 for 100 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. It was also observed an attenuation of the lung injury caused by CP administration, by the reduction of the MPO activity (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg) and basal MDA concentration (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. The pretreatment with EECp also reduced the serum concentration of the nitrate and nitrite (P<0.05 for 100 mg/kg and P<0.01 for 400 mg/kg), in addition to the polymorphonuclear cell counts (P<0.05 for all doses used), without any significant alteration in the total leukocyte and mononuclear counts. Conclusions: These results suggested that EECp possesses moderate anti-inflammatory and antioxidant effects on the HC and attenuates the CP-induced lung injury, being of interest for future studies involving therapeutical strategies to treat the effects associated with the chemotherapy with CP. / Introdução: A cistite hemorrágica (CH) é o principal efeito indesejado associado à quimioterapia com ciclofosfamida (CF). Esta condição é caracterizada pela presença de macro e micro hematúria, disúria, dor suprapúbica e aumento da frequência urinária. Acredita-se que a acroleína, metabólito da CF, induz a geração de espécies reativas de oxigênio no uroepitélio, resultando em CH. A prevenção desta patologia é feita com mesna, que atua impedindo o contato da acroleína com o uroepitélio. Entretanto, substâncias antioxidantes tem efeito protetor na CH e acredita-se que elas comprometam a produção de peroxinitrito por diminuir a produção de ânion superóxido e, desse modo, substâncias de origem natural com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias podem representar uma alternativa em potencial no tratamento da CH. O extrato etanólico de Caesalpinia pyramidalis (EECp) possui propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias e, portanto, acredita-se que o mesmo possa modular vias inflamatórias envolvidas na CH. Objetivo: O presente estudo investigou o efeito do EECp na prevenção da CH induzida por CF. Métodos: A CH foi induzida pela injeção i.p. de CF (200 mg/kg) em ratos Wistar. Outro grupo recebeu somente salina (0,9%) pela mesma via. Os animais foram pré-tratados 1 h antes da injeção de CF ou salina com veículo (Tween 80 a 0,5%; v.o.) ou EECp (100-400 mg/kg; v.o.). O mesna foi administrado 5 min. antes e 4 e 8 h depois da indução da CH. Foram utilizados 6 grupos experimentais: (i) Veículo+Salina; (ii) Veículo+CF; (iii) EECp (100 mg/kg)+CF; (iv) EECp (200 mg/kg)+CF; (v) EECp (400 mg/kg)+CF; (vi) Mesna+CF. Após 24 h da injeção de CF ou salina os animais foram eutanasiados e alguns parâmetros inflamatórios foram medidos: (i) atividade de mieloperoxidase (MPO) na bexiga e no pulmão; (ii) concentração de malondialdeído (MDA) na bexiga e no pulmão; (iii) índice de edema na bexiga; (iv) concentrações séricas de nitrito e nitrato; (v) contagem total e diferencial de leucócitos em sangue periférico e (vi) análise histológica da bexiga. Resultados: A injeção de CF aumentou a atividade de MPO na bexiga (P<0,001) e alterou significativamente todos os parâmetros histopatológicos analisados, além de provocar aumento da massa da bexiga (P<0,01), sem alterar a concentração de MDA neste tecido, quando comparado ao grupo Veículo+Salina. Sistemicamente, observou-se elevação dos níveis séricos de nitrito e nitrato e da atividade de MPO pulmonar, bem como diminuição da contagem total de leucócitos e mononucleares, com aumento no número de polimorfonucleares, em relação ao grupo Veículo+Salina. O EECp causou a redução do influxo de leucócitos para a bexiga induzido pela CF, evidenciado pela diminuição do escore histológico (P<0,05 para 100 mg/kg) e a da atividade de MPO (P<0,001 para 100 e 400 mg/kg e P<0,05 para 200 mg/kg) na bexiga, acompanhado da diminuição do escore histológico total (P<0,05 para 100 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 100 e 400 mg/kg), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Sistemicamente, a administração de EECp atenuou a lesão pulmonar induzida pela CF, demonstrada pela redução da atividade de MPO (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) neste tecido; reduziu as concentrações séricas de nitrito e nitrato (P<0,05 para 100 mg/kg e P<0,01 para 400 mg/kg) e diminuiu o número de leucócitos polimorfonucleares no sangue (P<0,05 para todas as doses usadas), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Conclusão: Estes resultados permitem concluir que o EECp tem efeito anti-inflamatório e antioxidante moderados na CH, bem como atenua a lesão pulmonar induzida pela CF, podendo ser utilizado em estudos envolvendo estratégias terapêuticas futuras para o tratamento de efeitos associados à quimioterapia com CF.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is the main side effect of cyclophosphamide (CP) chemotherapy. This condition is characterized by the macro and microhaematuria, dysuria, suprapubic pain and increased urinary frequency. It is believed that acrolein, a CP metabolite, induces the generation of reactive oxygen species in the uroepithelial cell, resulting in peroxynitrite formation, which can cause damage to these cells. Mesna is the choice drug used to prophylactically treat HC, because it prevents the acrolein contact with the uroepithelium. Besides, antioxidant substances are thought to have a protective effect on HC, mainly because of the reduction of peroxynitrite formation through the inhibition of superoxide production. In this way, natural compounds or extracts with antioxidant and anti-inflammatory properties may possess potential to treat HC. Objectives: In the present study the effect of the ethanol extract of the inner bark of Caesalpinia pyramidalis (EECp) was investigated in the HC model in rats. Methods: In order to induce HC, animals received an i.p. injection of CP (200 mg/kg). A control group received only saline (0.9%) by the same route. One hour before this injection, animals were pre-treated with vehicle (Tween 80, 5%, p.o.) or EECP (100-400 mg/kg, p.o.). Mesna was used as a control and was administrated 5 min before and 4 and 8 h after the CP injection. In this manner, there were used 6 experimental groups: (i) Vehicle+Saline; (ii) Vehicle+CP; (iii) EECp (100 mg/kg)+CP; (iv) EECp (200 mg/kg)+CP; (v) EECp (400 mg/kg)+CP; (vi) Mesna+CP. After 24 h of CP or saline injection, animals were euthanized and the inflammatory/oxidative parameters were measured: (i) myeloperoxidase (MPO) activity in the urinary bladder and lung tissues; (ii) malondialdehyde (MDA) concentration in the urinary bladder and lung tissues; (iii) edema index in bladder; (iv) serum concentrations of nitrite and nitrate; (v) total and differential leukocyte counts in the peripheral blood; (vi) histological analyses of the urinary bladder. Results: The injection of CP increased the MPO activity in the urinary bladder (P<0.001) and significantly altered all the histological parameters evaluated, when compared with the saline+vehicle group. Besides, it augmented the bladder weight (P<0.01), when compared with the saline+vehicle group, without changing the MDA concentrations. Systemically, we observed higher serum concentration of nitrite and nitrate and lung MPO activity, as wells as a decrease in the total leukocyte and mononuclear counts, with a slight increase in the polymorphonuclear counts (P<0.05), when compared with saline+vehicle group. Pre-treatment with EECp reduced the leukocyte influx to the urinary bladder, evidenced by the reduction of the MPO activity (P<0.001 for 100 and 400 mg/kg and P<0.05 for 200 mg/kg) and the histological score (P<0.05 for 100 mg/kg), accompanied by the diminution of the total histological score (P<0.05 for 100 mg/kg) and the basal concentration of MDA (P<0.05 for 100 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. It was also observed an attenuation of the lung injury caused by CP administration, by the reduction of the MPO activity (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg) and basal MDA concentration (P<0.05 for 200 and 400 mg/kg), when compared with the vehicle+CP group. The pretreatment with EECp also reduced the serum concentration of the nitrate and nitrite (P<0.05 for 100 mg/kg and P<0.01 for 400 mg/kg), in addition to the polymorphonuclear cell counts (P<0.05 for all doses used), without any significant alteration in the total leukocyte and mononuclear counts. Conclusions: These results suggested that EECp possesses moderate anti-inflammatory and antioxidant effects on the HC and attenuates the CP-induced lung injury, being of interest for future studies involving therapeutical strategies to treat the effects associated with the chemotherapy with CP. / Introdução: A cistite hemorrágica (CH) é o principal efeito indesejado associado à quimioterapia com ciclofosfamida (CF). Esta condição é caracterizada pela presença de macro e micro hematúria, disúria, dor suprapúbica e aumento da frequência urinária. Acredita-se que a acroleína, metabólito da CF, induz a geração de espécies reativas de oxigênio no uroepitélio, resultando em CH. A prevenção desta patologia é feita com mesna, que atua impedindo o contato da acroleína com o uroepitélio. Entretanto, substâncias antioxidantes tem efeito protetor na CH e acredita-se que elas comprometam a produção de peroxinitrito por diminuir a produção de ânion superóxido e, desse modo, substâncias de origem natural com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias podem representar uma alternativa em potencial no tratamento da CH. O extrato etanólico de Caesalpinia pyramidalis (EECp) possui propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias e, portanto, acredita-se que o mesmo possa modular vias inflamatórias envolvidas na CH. Objetivo: O presente estudo investigou o efeito do EECp na prevenção da CH induzida por CF. Métodos: A CH foi induzida pela injeção i.p. de CF (200 mg/kg) em ratos Wistar. Outro grupo recebeu somente salina (0,9%) pela mesma via. Os animais foram pré-tratados 1 h antes da injeção de CF ou salina com veículo (Tween 80 a 0,5%; v.o.) ou EECp (100-400 mg/kg; v.o.). O mesna foi administrado 5 min. antes e 4 e 8 h depois da indução da CH. Foram utilizados 6 grupos experimentais: (i) Veículo+Salina; (ii) Veículo+CF; (iii) EECp (100 mg/kg)+CF; (iv) EECp (200 mg/kg)+CF; (v) EECp (400 mg/kg)+CF; (vi) Mesna+CF. Após 24 h da injeção de CF ou salina os animais foram eutanasiados e alguns parâmetros inflamatórios foram medidos: (i) atividade de mieloperoxidase (MPO) na bexiga e no pulmão; (ii) concentração de malondialdeído (MDA) na bexiga e no pulmão; (iii) índice de edema na bexiga; (iv) concentrações séricas de nitrito e nitrato; (v) contagem total e diferencial de leucócitos em sangue periférico e (vi) análise histológica da bexiga. Resultados: A injeção de CF aumentou a atividade de MPO na bexiga (P<0,001) e alterou significativamente todos os parâmetros histopatológicos analisados, além de provocar aumento da massa da bexiga (P<0,01), sem alterar a concentração de MDA neste tecido, quando comparado ao grupo Veículo+Salina. Sistemicamente, observou-se elevação dos níveis séricos de nitrito e nitrato e da atividade de MPO pulmonar, bem como diminuição da contagem total de leucócitos e mononucleares, com aumento no número de polimorfonucleares, em relação ao grupo Veículo+Salina. O EECp causou a redução do influxo de leucócitos para a bexiga induzido pela CF, evidenciado pela diminuição do escore histológico (P<0,05 para 100 mg/kg) e a da atividade de MPO (P<0,001 para 100 e 400 mg/kg e P<0,05 para 200 mg/kg) na bexiga, acompanhado da diminuição do escore histológico total (P<0,05 para 100 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 100 e 400 mg/kg), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Sistemicamente, a administração de EECp atenuou a lesão pulmonar induzida pela CF, demonstrada pela redução da atividade de MPO (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) e da concentração basal de MDA (P<0,05 para 200 e 400 mg/kg) neste tecido; reduziu as concentrações séricas de nitrito e nitrato (P<0,05 para 100 mg/kg e P<0,01 para 400 mg/kg) e diminuiu o número de leucócitos polimorfonucleares no sangue (P<0,05 para todas as doses usadas), quando comparado ao grupo Veículo+CF. Conclusão: Estes resultados permitem concluir que o EECp tem efeito anti-inflamatório e antioxidante moderados na CH, bem como atenua a lesão pulmonar induzida pela CF, podendo ser utilizado em estudos envolvendo estratégias terapêuticas futuras para o tratamento de efeitos associados à quimioterapia com CF.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A cistite hemorrÃgica (CH) à um efeito indesejado limitante do uso clÃnico dos agentes quimioterÃpicos do grupo das oxazafosforinas, principalmente ciclofosfamida (CFS) e ifosfamida (IFS). Isto se deve à formaÃÃo de acroleÃna como subproduto do metabolismo dessas drogas. A partir de prÃvios trabalhos conduzidos no LaboratÃrio de Farmacologia da InflamaÃÃo e do CÃncer da Universidade Federal do CearÃ, sabe-se que o Ãxido nÃtrico (NO) atravÃs da ativaÃÃo de iNOS, o fator de ativaÃÃo plaquetÃria, citocinas, como o TNF-&#945; e IL-1&#946;, e prostaglandinas, pela ativaÃÃo da enzima ciclooxigenase-2 (COX-2), sÃo mediadores chave envolvidos nos eventos inflamatÃrios da CH, evidenciados pelo dano urotelial, edema e hemorragia. Sabendo-se que interleucina- 4 (IL- 4) à uma citocina antiinflamatÃria capaz de prevenir a produÃÃo de TNF-&#945;, IL-1&#946; e de atenuar a expressÃo de enzimas inflamatÃrias como iNOS e COX-2, foi investigado se IL- 4 à capaz de reduzir as alteraÃÃes inflamatÃrias vistas na CH induzida por IFS. Para tanto, camundongos Swiss (25-30 g; n=6 por grupo) foram tratados com salina ou IFS (400 mg/kg, ip), e foram analisados por alteraÃÃes no peso Ãmido vesical (PUV), mudanÃas macroscÃpicas e microscÃpicas, alÃm da quantificaÃÃo de edema e hemoglobina vesical. Em outros grupos experimentais, IL- 4 (0,4; 2 ou 10 ng) foi administrada ip uma hora antes à administraÃÃo de IFS. Em outro experimento, camundongos C57BL/6 selvagens e C57BL/6 nocaute para o gene da IL- 4 (-/-) foram tratados com IFS e analisados quanto a mudanÃas no PUV. ImunohistoquÃmica para IL-1&#946; e TNF-&#945;, bem como identificaÃÃo de proteÃnas pela tÃcnica de Western blot para iNOS e COX-2 foram conduzidos nos animais tratados com IL- 4. TambÃm avaliou-se a administraÃÃo de soro anti-IL- 4 (50 Âl/animal, ip) em animais selvagens meia hora antes IFS. Nos animais tratados com IL- 4 (2 e 10 ng), o PUV foi significativamente reduzido em 27% e 39% respectivamente quando comparados ao grupo tratado apenas com IFS. O extravasamento vascular foi reduzido em 29% e 24% e a hemorragia em 47% e 61% nos animais tratados com IL- 4 (2 e 10 ng respectivamente para ambos). A administraÃÃo de IL- 4 exÃgena tambÃm atenuou a expressÃo de TNF-&#945;, IL-1&#946; significativamente, e a expressÃo de iNOS em 27% (dose de 10 ng) e COX-2 em 80% e 76% (doses de 2 e 10 ng, respectivamente), sendo ambos resultados significantes estatisticamente. Em adiÃÃo, animais nocaute para IL- 4 (-/-) e camundongos tratados com soro anti-IL- 4 exibiram um grau de CH pior quando comparados aos camundongos tratados com IFS apenas, em torno de 44% e 28% respectivamente. IL- 4, uma citocina antiinflamatÃria, pode reduzir os fenÃmenos inflamatÃrios vistos na CH induzida por IFS. / Hemorrhagic cystitis (HC) is a limiting side effect from the clinic use of chemotherapy agents, mainly cyclophosphamide (CYP) and ifosfamide (IFS). This is due to the fact that acrolein is a urinary metabolite of CYP and IFS, which has been demonstrated to be the causative agent of hemorrhagic cystitis (HC) induced by these compounds. Based on previous experimental studies, most of them from the Laboratory of Pharmacology of Inflammation and Cancer of Federal University of CearÃ, it was demonstrated the participation of inflammatory cytokines such as TNF-&#945;, IL-1&#946;, and the expression of iNOS and COX-2 in ifosfamide-induced HC. Thus, knowing that interleukin-4 (IL- 4) is an anti-inflammatory cytokine able to prevent the production of TNF-&#945;, IL-1&#946;, and decrease the expression of inflammatory enzymes such as iNOS and COX-2, we investigated whether IL- 4 is capable of reducing inflammatory changes seen with ifosfamide-induced HC. For this, male Swiss mice (25-30 g; 6 per group) were treated with saline or ifosfamide (400 mg/kg, intraperitoneally (ip) and analyzed by changes in bladder wet weight (BWW), macroscopic and microscopic parameters, exudate, and hemoglobin quantification. In other groups, IL- 4 (0,4; 2 or 10 ng) was administered ip 1h before ifosfamide administration. In other experimental groups, C57BL/6 WT (wild type) and C57BL/6 WT IL- 4 (-/-) knockout animals were treated with ifosfamide and analyzed for changes in BWW. Immunohistochemistry to TNF-&#945; and IL-1&#946; as well as protein identification by Western blot assay for iNOS and COX-2 were carried out on ifosfamide and IL- 4 treated animals. In other experimental groups, anti-IL- 4 serum was given (50 ÂL/animal, ip) 30 min before ifosfamide. In IL- 4 treated animals, BWW change was significantly less in animals treated with ifosfamide administration only, being reduced by 27% and 39% (2 and 10 ng respectively). Vascular permeability was reduced by 29% and 24%, and hemorrhage by 47% and 61% in those animals treated with IL- 4 (2 and 10 ng respectively). Exogenous IL- 4 also attenuated TNF-&#945;, IL-1 &#946;, iNOS and COX-2 expression on ifosfamide treated bladders. Moreover, knockout animals for IL- 4 (-/-) and animals treated with anti-IL- 4 serum exhibit a more severe degree of inflammation when compared to the wild type mice (approximately 44% and 28% respectively). IL- 4, an anti-inflammatory cytokine, can attenuate the inflammation seen with ifosfamide-induced hemorrhagic cystitis.

Introdução: Cistite Hemorrágica (CH) é uma grave complicação do Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) Alogênico. Sua incidência varia de 12 a 25,5%. A forma precoce desenvolve-se devido aos efeitos tóxicos de certos quimioterápicos usados no regime de condicionamento, especialmente Ciclofosfamida. Já a CH tardia ocorre a partir do terceiro dia após o TCTH e sua etiologia é multifatorial. Vários fatores de risco para o desenvolvimento de CH tardia foram descritos, incluindo Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) aguda, doador não relacionado, infecções por vírus urotrópicos, sexo masculino e condicionamento mieloablativo. Materiais e Métodos: O presente estudo tem como objetivos descrever a incidência de CH em pacientes adultos e pediátricos submetidos a TCTH alogênico e identificar fatores de risco associados ao desenvolvimento de CH nesta população. Foram analisados dados de prontuário de 347 pacientes submetidos a TCTH Alogênico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período de Janeiro de 2001 a Dezembro de 2014. Resultados: CH ocorreu em 42 pacientes (12,1%, IC: 8,9 - 16%), em uma média de 53.4 dias após o procedimento (desvio padrão: 28.1 dias). Apenas 1 paciente (2,4%) desenvolveu CH precoce, com início dos sintomas no D+1. Entre os 41 pacientes que desenvolveram CH tardia, BK vírus foi o principal agente viral identificado. CH ocorreu em 12.8% dos pacientes que receberam condicionamento mieloablativo e em 10.5% dos restantes (P = 0,704). Dos 197 pacientes que apresentaram DECH aguda, 35 (17,8%) desenvolveram CH e somente 7 (4,9%) apresentaram CH na ausência de DECH aguda (P < 0,001). CH foi mais frequente também em pacientes do sexo masculino (P = 0,027). Conclusão: A incidência de CH em nossa amostra foi semelhante à encontrada em outros trabalhos. DECH aguda e sexo masculino estiveram associados a um maior risco de desenvolvimento de CH. / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is a serious complication of Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) afecting 12 to 25.5% of the patients. The early-onset form of HC develops during or until 72 hours after the conditioning regimen containing high doses of certain chemotherapy drugs such as Busulfan and especially Cyclophosphamide. Late-onset HC occurs from the third day on after HSCT and its etiology is multifactorial. Several risk factors for the late-onset form have been reported including graft-versus-host disease (GVHD), unrelated donor, urotropic infections, male gender and myeloblative conditioning regimen. Methods: This study aims to evaluate the incidence of HC in adult and pediatric patients undergoing Allogeneic HSCT and to identify risk factors associated with the development of HC in this population. Medical records of 347 patients who underwent Allogeneic HSCT at Hospital de Clínicas, Porto Alegre, Brazil, from January 2001 to December 2014 were analyzed. Results: HC occurred in 42 patients (12.1% CI: 8.9 - 16%) at an average of 53.4 days after the procedure (standard deviation: 28.1 days). Only one of them developed early-onset HC, with onset of symptoms on D+1. Among the 41 patients who developed late-onset HC, BKV was the main identified viral agent. HC developed in 12.8% of the patients treated with myeloablative conditioning and in 10.5% of the remaining patients (P = 0.704). Of the 197 patients with acute GVHD, 35 (17.8%) developed HC and only 7 (4.9%) showed HC in the absence of GVHD (P<0.001). HC was also more frequent in males than females (P = 0.027). Conclusion: The incidence of HC in our sample was similar to that found in other studies. In our cohort of patients being male and having acute GVHD increased the risk of developing HC.

Introdução: Cistite Hemorrágica (CH) é uma grave complicação do Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) Alogênico. Sua incidência varia de 12 a 25,5%. A forma precoce desenvolve-se devido aos efeitos tóxicos de certos quimioterápicos usados no regime de condicionamento, especialmente Ciclofosfamida. Já a CH tardia ocorre a partir do terceiro dia após o TCTH e sua etiologia é multifatorial. Vários fatores de risco para o desenvolvimento de CH tardia foram descritos, incluindo Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) aguda, doador não relacionado, infecções por vírus urotrópicos, sexo masculino e condicionamento mieloablativo. Materiais e Métodos: O presente estudo tem como objetivos descrever a incidência de CH em pacientes adultos e pediátricos submetidos a TCTH alogênico e identificar fatores de risco associados ao desenvolvimento de CH nesta população. Foram analisados dados de prontuário de 347 pacientes submetidos a TCTH Alogênico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período de Janeiro de 2001 a Dezembro de 2014. Resultados: CH ocorreu em 42 pacientes (12,1%, IC: 8,9 - 16%), em uma média de 53.4 dias após o procedimento (desvio padrão: 28.1 dias). Apenas 1 paciente (2,4%) desenvolveu CH precoce, com início dos sintomas no D+1. Entre os 41 pacientes que desenvolveram CH tardia, BK vírus foi o principal agente viral identificado. CH ocorreu em 12.8% dos pacientes que receberam condicionamento mieloablativo e em 10.5% dos restantes (P = 0,704). Dos 197 pacientes que apresentaram DECH aguda, 35 (17,8%) desenvolveram CH e somente 7 (4,9%) apresentaram CH na ausência de DECH aguda (P < 0,001). CH foi mais frequente também em pacientes do sexo masculino (P = 0,027). Conclusão: A incidência de CH em nossa amostra foi semelhante à encontrada em outros trabalhos. DECH aguda e sexo masculino estiveram associados a um maior risco de desenvolvimento de CH. / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is a serious complication of Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) afecting 12 to 25.5% of the patients. The early-onset form of HC develops during or until 72 hours after the conditioning regimen containing high doses of certain chemotherapy drugs such as Busulfan and especially Cyclophosphamide. Late-onset HC occurs from the third day on after HSCT and its etiology is multifactorial. Several risk factors for the late-onset form have been reported including graft-versus-host disease (GVHD), unrelated donor, urotropic infections, male gender and myeloblative conditioning regimen. Methods: This study aims to evaluate the incidence of HC in adult and pediatric patients undergoing Allogeneic HSCT and to identify risk factors associated with the development of HC in this population. Medical records of 347 patients who underwent Allogeneic HSCT at Hospital de Clínicas, Porto Alegre, Brazil, from January 2001 to December 2014 were analyzed. Results: HC occurred in 42 patients (12.1% CI: 8.9 - 16%) at an average of 53.4 days after the procedure (standard deviation: 28.1 days). Only one of them developed early-onset HC, with onset of symptoms on D+1. Among the 41 patients who developed late-onset HC, BKV was the main identified viral agent. HC developed in 12.8% of the patients treated with myeloablative conditioning and in 10.5% of the remaining patients (P = 0.704). Of the 197 patients with acute GVHD, 35 (17.8%) developed HC and only 7 (4.9%) showed HC in the absence of GVHD (P<0.001). HC was also more frequent in males than females (P = 0.027). Conclusion: The incidence of HC in our sample was similar to that found in other studies. In our cohort of patients being male and having acute GVHD increased the risk of developing HC.

Introdução: Cistite Hemorrágica (CH) é uma grave complicação do Transplante de Células-Tronco Hematopoiéticas (TCTH) Alogênico. Sua incidência varia de 12 a 25,5%. A forma precoce desenvolve-se devido aos efeitos tóxicos de certos quimioterápicos usados no regime de condicionamento, especialmente Ciclofosfamida. Já a CH tardia ocorre a partir do terceiro dia após o TCTH e sua etiologia é multifatorial. Vários fatores de risco para o desenvolvimento de CH tardia foram descritos, incluindo Doença do Enxerto Contra o Hospedeiro (DECH) aguda, doador não relacionado, infecções por vírus urotrópicos, sexo masculino e condicionamento mieloablativo. Materiais e Métodos: O presente estudo tem como objetivos descrever a incidência de CH em pacientes adultos e pediátricos submetidos a TCTH alogênico e identificar fatores de risco associados ao desenvolvimento de CH nesta população. Foram analisados dados de prontuário de 347 pacientes submetidos a TCTH Alogênico no Hospital de Clínicas de Porto Alegre no período de Janeiro de 2001 a Dezembro de 2014. Resultados: CH ocorreu em 42 pacientes (12,1%, IC: 8,9 - 16%), em uma média de 53.4 dias após o procedimento (desvio padrão: 28.1 dias). Apenas 1 paciente (2,4%) desenvolveu CH precoce, com início dos sintomas no D+1. Entre os 41 pacientes que desenvolveram CH tardia, BK vírus foi o principal agente viral identificado. CH ocorreu em 12.8% dos pacientes que receberam condicionamento mieloablativo e em 10.5% dos restantes (P = 0,704). Dos 197 pacientes que apresentaram DECH aguda, 35 (17,8%) desenvolveram CH e somente 7 (4,9%) apresentaram CH na ausência de DECH aguda (P < 0,001). CH foi mais frequente também em pacientes do sexo masculino (P = 0,027). Conclusão: A incidência de CH em nossa amostra foi semelhante à encontrada em outros trabalhos. DECH aguda e sexo masculino estiveram associados a um maior risco de desenvolvimento de CH. / Introduction: Hemorrhagic cystitis (HC) is a serious complication of Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation (HSCT) afecting 12 to 25.5% of the patients. The early-onset form of HC develops during or until 72 hours after the conditioning regimen containing high doses of certain chemotherapy drugs such as Busulfan and especially Cyclophosphamide. Late-onset HC occurs from the third day on after HSCT and its etiology is multifactorial. Several risk factors for the late-onset form have been reported including graft-versus-host disease (GVHD), unrelated donor, urotropic infections, male gender and myeloblative conditioning regimen. Methods: This study aims to evaluate the incidence of HC in adult and pediatric patients undergoing Allogeneic HSCT and to identify risk factors associated with the development of HC in this population. Medical records of 347 patients who underwent Allogeneic HSCT at Hospital de Clínicas, Porto Alegre, Brazil, from January 2001 to December 2014 were analyzed. Results: HC occurred in 42 patients (12.1% CI: 8.9 - 16%) at an average of 53.4 days after the procedure (standard deviation: 28.1 days). Only one of them developed early-onset HC, with onset of symptoms on D+1. Among the 41 patients who developed late-onset HC, BKV was the main identified viral agent. HC developed in 12.8% of the patients treated with myeloablative conditioning and in 10.5% of the remaining patients (P = 0.704). Of the 197 patients with acute GVHD, 35 (17.8%) developed HC and only 7 (4.9%) showed HC in the absence of GVHD (P<0.001). HC was also more frequent in males than females (P = 0.027). Conclusion: The incidence of HC in our sample was similar to that found in other studies. In our cohort of patients being male and having acute GVHD increased the risk of developing HC.

A famÃlia de receptores de potencial transitÃrio (TRP) incluindo o receptor de potencial transitÃrio anquirina, subtipo 1 (TRPA1) tem mostrado ser um alvo terapÃutico potencial para o tratamento da dor aguda e crÃnica. Alguns estudos tÃm demonstrado que a resposta nociceptiva somÃtica se deve à ativaÃÃo dos receptores TRPA1 e sÃo efetivamente modulados atravÃs da ferramenta experimental, HC-030031, um antagonista seletivo. Contudo, existem poucos estudos que avaliam o papel dos receptores TRPA1 na dor visceral. Portanto, investigamos o papel do TRPA1 em modelos animais de nocicepÃÃo visceral induzido por diferentes substÃncias e tambÃm exploramos os possÃveis mecanismos envolvidos. Camundongos Swiss, machos (N=6) receberam carboximetilcelulose 0,5% (veÃculo CMC 0,5%, 1 mL/Kg, v.o.), HC-030031 (75, 150 ou 300 mg/Kg, v.o.), ou L-NAME (10 e 40 mg/Kg, s.c.) ou somente L-Arginina (600 mg/Kg, i.p.), 1 h apÃs foi administrado uma Ãnica injeÃÃo de IFO (400 mg/Kg, i.p.). A nocicepÃÃo visceral foi avaliada atravÃs do teste de Von Frey eletrÃnico previamente (T0) e 12 h (T1) apÃs a injeÃÃo de IFO com estimulaÃÃo abdominal atravÃs de um analgesÃmetro digital. Os resultados foram obtidos em gramas (T0-T1) pela variaÃÃo da hiperalgesia. Em seguida as bexigas dos animais foram removidas para pesagem, anÃlise e foram atribuÃdos escores macro e microscopicamente. Investigou-se, tambÃm, o efeito antinociceptivo visceral do HC-030031 atravÃs do modelo de nocicepÃÃo visceral induzido por Ãleo de mostarda (OM). Os animais foram tratados com CMC 0,5%, HC-030031 (18,75; 37,5 ou 75 mg/kg, v.o.) ou Morfina (5 mg/Kg, s.c.) isoladamente ou receberam Naloxona (2 mg/Kg, i.p.) previamente a estas drogas. Em seguida, OM 0,75% (50 &#956;L/colon) foi instilado localmente no cÃlon. A nocicepÃÃo visceral foi verificada atravÃs do teste de Von Frey previamente (T0) e 10 min. (T1) apÃs a injeÃÃo do OM. Em outro protocolo experimental, os animais foram tratados com CMC 0,5% (10 mL/kg, v.o.) ou HC-030031 (18,75; 37,5 ou 75 mg/Kg, v.o.) previamente a uma injeÃÃo intraperitoneal com Ãcido acÃtico 0,6% (AA, 10 mL/Kg,), zymosan (Zym, 1 mg/cavidade) ou misoprostol (MPT, 1 Âg/cavidade, um anÃlogo estÃvel de prostaglandinas). Imediatamente apÃs a injeÃÃo desses algogÃnicos, contabilizaram-se as contorÃÃes abdominais por 30 min. Adicionalmente, para investigar o papel de cÃlulas peritoneais residentes sobre o efeito do HC-030031, a cavidade peritoneal dos camundongos foi lavada com uma soluÃÃo de 30 mL (PBS + heparina) e os estÃmulos AA, Zym e MPT foram injetados i.p. Um grupo Sham foi incluÃdo tambÃm neste protocolo. Ao final do experimento, as contorÃÃes abominais foram registradas por 30 mim. Utilizou-se para a anÃlise estatÃstica, ANOVA/Student e Newman/Keul, foi considerado significativo um p < 0,05 (CEPA: Protocolo: 92/10). A IFO induziu significativa (p<0,05) nocicepÃÃo visceral (6,25Â1,08) e resposta inflamatÃria [escores edema 2(1-3); hemorragia 3(1-3) e peso bexiga (42,78 3,10)] comparado com o grupo salina (1,97Â0,89),[ 0(0-0); 0(0-0) e 20,01 0,7749] respectivamente. AlÃm disso, HC-030031(75 mg/Kg) e L-NAME (10 e 40 mg/Kg) preveniram de maneira significativa (p<0,05) da resposta nociceptiva (2,30Â1,07; 1,58Â0,86 e 0,2500  0,73) respectivamente quando comparado com o grupo IFO. O prÃ-tratamento com L-Arginina (6,844Â1,235) reverteu o efeito antinociceptivo do L-NAME 10 mg/Kg, (6,84Â1,23), mas foi ineficaz sobre o efeito do L-NAME 40 mg/Kg (1,500Â0,7361) e HC-030031 75 mg/Kg (0,7200Â0,6953). Contudo, o prÃ-tratamento com HC-030031 nÃo apresentou efeito antiinflamatÃrio. Adicionalmente, verificou-se que o OM induziu significativo (p<0,05) comportamento nociceptivo (6,333Â0,9458) quando comparado ao grupo salina (1,250Â0,9204). AlÃm disso, o HC-030031 preveniu de maneira significativa da resposta nociceptiva provocada pelo OM (1,536 Â0,7653). Avaliou-se tambÃm o envolvimento do sistema opiÃide no efeito antinociceptivo do HC-030031. Verificou-se que a morfina apresentou uma importante atividade antinociceptiva (0,07143Â0,07143) contra a nocicepÃÃo induzida por OM a qual foi significativamente revertida pelo prÃ-tratamento com naloxona (3,125 1,302). Por outro lado, o efeito antinociceptivo do HC-030031 nÃo foi afetado pela naloxona (2,240Â1,263). Adicionalmente, AA, Zym e MPT induziram respostas de contorÃÃes abdominais significativas (43,71Â4,43; 11,00Â2,11 e 9,00Â2.30, respectivamente) as quais foram significativamente inibidas com HC-030031 (18,75, 37,5 ou 75 mg/kg, v.o.) em todas as doses utilizadas no teste com AA (29,07%; 53,35% e 41,59%), no teste com Zym (55,85%; 61,03% e 71,20%) e no teste com MPT (63,88%; 83,33% e 88,88%). Uma vez que a prostaglandina ativa o nociceptor diretamente, demonstrou-se que o HC-030031 possivelmente inibe a nocicepÃÃo visceral atravÃs da estabilizaÃÃo direta de nociceptores. O efeito antinociceptivo do HC-030031 parece ser independente da inibiÃÃo de cÃlulas residentes inflamatÃrias, do Ãxido nÃtrico ou do sistema opiÃide. Este estudo fornece perspectivas para o manuseio da dor visceral atravÃs da modulaÃÃo dos canais TRPA1. / The description of the TRP family of receptors including TRPA1 has provided potential therapeutic targets for treating acute and chronic pain. Some studies have shown a somatic nociceptive response due to the TRPA1 receptors activation which is effectively modulated with the experimental tool, HC-030031, a TRPA1 antagonist. However, there are a few studies evaluating the role of TRPA1 receptors in visceral pain. Then aimed to investigate the role of TRPA1 in the animal models of visceral nociception induced by different substances and to explore the possible mechanisms involved. Swiss male mice (n=6) were given only Carboxymethyl cellulose (vehicle CMC 0.5%, 1 mL/kg, p.o.), the compound HC-030031 (75, 150 or 300 mg/Kg, p.o.) or L-NAME (10 or 40 mg/Kg, s.c.) alone or with L-arginine (600mg/Kg, i.p.) 1h previously a alone injection of IFO (400 mg/kg, i.p.). Visceral nociception was assessed through the von Frey test previously (T0) and 12h (T1) later IFO injection by the abdominal stimulation with a pressure meter. The results were obtained in grams (T0-T1). The bladder of these animals were also removed to weighted (BWW), analyzed and after given scores macro and microscopically. We also investigated the antinociceptive effect of HC-030031 in the model of mustard oil-induced visceral nociception. The animals were treated with CMC 0.5% or HC-030031 (18.75, 37,5 or 75 mg/kg) or Morphine (5 mg/Kg, s.c.) alone or with Naloxone (2 mg/Kg, i.p.) 1h previously the injection of Mustard oil (MO) 0,75% (MO, 50 ul/colon). Visceral nociception was assessed through the von Frey test previously (T0) and 10 min (T1) after MO injection by the abdominal stimulation with a pressure meter. The results were obtained in grams (T0-T1). In another experimental setting, the animals were treated with CMC 0.5% (1 mL/kg, p.o) or HC-030031 (18.75; 37.5 or 75mg/Kg, p.o.) previously an intraperitoneal injection with acetic acid 0.6% (AA, 10 mL/kg), zymosan (Zym, 1 mg/cavity) or misoprostol (MPT, a stable prostaglandin analogous, 1&#956;g/cavity) and immediately had the writhing responses counted for 30 min. In order to investigate the role of resident peritoneal cells on the effect of HC-030031, we washed the peritoneal cavity of mice with heparin added PBS (30 mL) and then AA, Zym or MPT were injected i.p. A Sham group was included. Eventually, the writhing responses were recorded. Statistical analysis was performed with ANOVA/Student Newman Keul as appropriate. p<0.05 was accepted. (CEPA: Protocol 92/10). IFO induced significant (p<0.05) visceral nociception (6.25Â1.08) and inflammatory response [scores to edema 2(1-3); hemorrhage 3(1-3); and bladder wet weight (42.78  3.1)] in comparison with saline treated group (1.97Â0.89), [0(0-0); 0(0-0); 20.01 0.7749] respectively. Moreover, HC-030031(75) and L-NAME (10 or 40 mg/Kg) prevented in a significant manner (p<0.05) the nociceptive response (2.30Â1.07; 1.58Â0.860 and 2500Â0.7361) respectively when compared with IFO-treated group. Although the pretreatment with L-arginine (6.844Â1.235) was able to reverse the antinoceceptive effect of L-NAME 10 mg/Kg, (6.84Â1.23), it failed to do the same (p>0.05) with L-NAME 40 mg/Kg (1.500Â0.7361) and HC-0300031 75 mg/Kg (0.72Â0.69). The same reversible effect of L-Arginine was observed for the anti-inflammatory activity of L-NAME (p<0.05). However, HC-030031 presented no anti-inflammatory effect. The antinociceptive activity of HC-030031 was also assessed in the MO nociception model. We verified that MO induced a significant (p<0.05) nociceptive behavior (6.333Â0.9458) when compared to saline injected mice (1.250Â0.9204). Moreover, HC-030031 prevented in a significant manner the nociceptive response elicited by MO (1.536Â0.7653). Furthermore, the involvement of opioid system in the antinociceptive effect of HC-030031 as tested. We observed that morphine presented an important antinociceptive activity (0.07143Â0.07143) against MO-induced nociception which was significantly reverted by naloxone pre-treatment (3.125 1.302). On the other hand, the antinociceptive effect of HC-030031 remained in spite the injection of naloxone (2.240Â1.263). In addition to that, AA, Zym and MPT induced significant writhing responses (43.71Â4.43; 11.00Â2.11; 9.00Â2.30; respectively) which was significantly inhibited with HC-030031(18.75, 37.5 e 75 mg/kg, p.o.) treated mice in all the doses tested (29.07%, 53.35% and 41.59%, in the AA test, 55.85%, 61.03% and 71.20%, in the Zym test, 63.88%, 83.33% and 88.88%, in the MPT induced nociception, respectively to 18.75, 37.5 and 75 mg/kg doses. Eventually, the reduction of cell population in the peritoneal cavity prevented the development of writhing responses in both AA and Zym injected mice, with no effect was visualized on MPT treated mice. We the conclude that, since prostaglandin activates the nociceptor directly, it was shown that HC-030031 inhibits visceral nociception possibly through the stabilization of the neuronal ends. The antinociceptive effect of HC-030031 seems to be independent of the inhibition of inflammatory resident cells, opioid and nitric oxide pathways. This study provides perspective for the effective management of visceral pain through the modulation of TRPA1 channels.