Echinacea purpurea belongs to adaptogenic plants containig pharmacologically active compounds. The most important parts of the plants for medical use are roots, but also aboveground parts are processed. The plants were grown in triennial precise small-parcel experiment using acetylsalicylic acid as an in vivo elicitor to increase the content of bioactive substances. The contents of cichoric acid, caffeic acid, chlorogenic acid and caftaric acid were assayed in roots, tops and flowers. Repeated application elicitors on leaves were conducted with three different concentrations in fortnightly intervals. Ethanol extracts from the plant samples were analysed by high performance liquid chromatography. The effect of the elicitor on the content of bioactive substances was statistically significant. The optimal concentration of the elicitor considering the content of bioactive substances in roots is the middle one. The effect of elicitor is year-dependent.

Silybum marianum has been a plant known for millenniums thanks to its pharmacological effects especially in fields of liver, gallbladder or even colon cancer treatment. A complex of effective components is called silymarin. Its amount and structure in milk thistle seeds are very important. That{\crq}s why there{\crq}s a tendency to develop methods which could increase silymarin quantity together with silymarin quality in this herb. This was also the aim of this thesis. One of the possibilities to level up the content of effective components in drugs is to bring this plant in stress. There were realized two ground-plot experiments. The stress agens was acetatonsalicylic acid (ASA) of different concentrations applicated on leaves of these plants, concretely in the concentrations of 10-5 mol.l-1, 10-4 mol.l-1, 10-3 mol.l-1. In the case of the application ASA concentration 10-3 mol.l-1 there was proved an effective action. The increase of effective components in seeds reached approximately 116,5 % ratio compared with control application of distilled water on the Silybum marianum leaves. The silymarin complex was determined by High Performance Liquid Chromatography. The preparation of the extract was practised in different ways {--} using ethyl alcohol extract and distilled water in combination with various temperatures of extracts storage. These methods were compared one another. As the best one has been turned out to be using 60% ethanol concentration for the duration of 96 hours in the storage temperature 20°C.

Orientador: Delia Rodriguez-Amaya / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-05T17:12:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribani_RosemaryHoffmann_D.pdf: 594684 bytes, checksum: 21a6d1bcc7111e6b7565998243867631 (MD5) Previous issue date: 2006 / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Ronilson Agnaldo Moreno / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-06T23:39:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Rigato_HamiltonModesto_M.pdf: 3336408 bytes, checksum: 6361b337850dbff27073d971e3c03509 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Objetivo: Neste estudo a biodisponibilidade de duas formulações de meloxicam (comprimidos de 15mg) foram comparadas. Uma dose de cada formulação foi administrada em 24 voluntários sadios de ambos os sexos. Materiais e métodos: O estudo foi do tipo aberto, aleatório, cruzado, em dois períodos. As amostras de sangue foram colhidas em intervalos de até 96 horas e as concentrações de meloxicam foram analisadas em cromatografia líquida de alta performance (Agilent), acoplada ao espectrômetro de massa (API 2000) equipadas com fonte de ionização do tipo electrospray operando no modo positivo (ES+) com monitorização de reações múltiplas (MRM). O precipitado plasmático protéico foi reconstituído com uma solução de acetonitrila/água + ácido acético 10mM (20/80; vv) e injetados na coluna analítica {(prevail Cs 5µm (150mm x 4.6 mm i.d.)} do cromatógrafo de fase líquida. O tempo de retenção observado para o meloxicam e tenoxicam (padrão interno) foi de 1.8 e 1.4 min respectivamente. A média de recuperação do meloxicam foi 95.9% e o limite de quantificação foi de 0.02lµg/mL. Resultados: As razões geométricas para o Meloxicam/Movatec@ 15 mg foram 101.3% para a ASCúltimo;9.9% para a ASCinfe 107.7% para a Cmax. Os intervalos de confiança de 90% foram 97.3-105.4%; 96.0 - 104.0% e 98.8 - 117.4% respectivamente. Conclusão: Considerando que 90% dos intervalos de confiança das razões de ASC último, ASCinf e Cmax se encontram dentro de 80-125% do intervalo proposto pela Agência Americana de Alimentos e Medicamentos (US FDA) e aceita pela ANVISA (Agência Nacional de Vigilância Sanitária), concluiu-se que a formulação de meloxicam elaborado pela Merk S.A. Indústrias Químicas é bioequivalente a formulação do Movatec@ em relação à taxa e extensão de absorção. Esse método de ensaio é o mais rápido, simples, específico, preciso e com acurácia, para os estudos de bioequivalência, que os previamente descritos / Abstract: Objective: In this study, the bioavailability of 2 meloxicam 15 mg tablet formulations was compared. A single dose of each formulation was administered to 24 healthy volunteers (12 males and 12 femates). Material and Methods: The study was conducted using an opeo, randomized and crossover design with a 2-week washout interval. The Plasma samples were obtained over 96-hour interval and meloxicam concentrations were analyzed by high performance liquid chromatography (an Agilent) coupled to a API 2000 turboionspray tandem mass spectrometry (LC-MS-MS) equipped with an electrospray ionization (ESI) source operating in the positive ion mode using a cross flow counter electrode and set for the multiple reaction monitoring (MRM). The plasma protein precipitated was reconstituted with acetonitrile/water + 10mM acetic acid (20/80; v/v), and inject in a Prevail Cs 5J/m (150mm x 4.6 mm i.d.) analytical column reverse phase liquid chromatography. The retention time observed for meloxicam and tenoxicam (Internal Standard) was 1.8 and 1.4 mio, respectively. The mean recovery of meloxicam was 95.9% and the Limit of Quantification was 0.02 J-lg/mL. Results: Geometric mean of MeloxicamlMovatec@ 15 mg individual percent ratio was 101.3% for AVCIast,99.9% for AVCo-ooand 107.7% for Crnax.The 90% confidence interval was 97.3-105.4%; 96.0 - 1O4.00/Óand 98.8 - 117.4%, respectively. Conclusion: Since the 90% CI for both AVCIast,AVCo-ooand Cmax,ratios were all inside the 80-125% interval proposed by the VS Food and Drug Administration Agency and accept by Brazilian ANVISA (Sanitary Surveillance Agency), it was concluded that meloxicam formulation elaborated by Merck S.A. Indústrias Químicas is bioequivalent to Movateca formulation for both the rate and the extent of absorption. This assay method was a fast, simple, specific, precise and accurate for the bioequivalence study of meloxicam than has previously been described. / Mestrado / Mestre em Farmacologia

Orientador: Cesar Costapinto Santana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Quimica / Made available in DSpace on 2018-08-07T06:42:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sartor_JoaoPaulo_M.pdf: 1114989 bytes, checksum: a9fb0b877c769f86e9c6ed9edfffee27 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: O rolipram é um fármaco que possui ação inibidora sobre uma enzima relacionada a processos inflamatórios e tem demonstrado atividade antidepressiva. Ele é comercializado na forma racêmica, isto é, na proporção 1:1 dos seus enantiômeros R e S. No entanto, testes clínicos indicam que o enantiômero R apresenta maior potencial biológico que o enantiômero S. Sendo assim, a separação dos enantiômeros é importante para testes biológicos comparativos de efeitos colaterais. Inserindo-se neste contexto, foi desenvolvido este trabalho de pesquisa com o intuito de estudar a separação deste fármaco pela técnica de cromatografia líquida utilizando coluna empacotada com fase estacionária quiral. Foram determinados os parâmetros analíticos de separação e os dados de equilíbrio e transferência de massa em diferentes condições experimentais. Os resultados mostraram alta eficiência, com número de pratos superando 9000 e fatores de separação na ordem de 1,40. Valores de km superiores a 220 min-1 revelaram baixo efeito dos fenômenos de transferência de massa e conseqüente predomínio dos efeitos termodinâmicos, em destaque à energia entálpica (próxima a -10 kJ/mol para os enantiômeros). Para concentração da mistura até 3,00 mg/mL as isotermas mostraram equilíbrio de adsorção com comportamento linear. Oito colunas cromatográficas foram posteriormente caracterizadas e, a partir dos seus parâmetros analíticos, determinaram-se regiões de separação dos enantiômeros para um sistema cromatográfico contínuo do tipo Leito Móvel Simulado, atendendo diferentes critérios de pureza. Com isso, avaliaram-se as variáveis de desempenho na região de mais alta pureza e o melhor resultado foi simulado a partir de um modelo transiente. Isso possibilitou a determinação do perfil transiente de eluição das correntes de saída e do perfil interno da unidade. As purezas alcançadas para as correntes de extrato e refinado foram 99,99% e 96,74%, respectivamente / Abstract: Rolipram is an enzyme inhibiting anti-inflammatory drug which has also demonstrated antidepressant activity. It is marketed in the racemic form, that is, proportion 1:1 of their R and S-enantiomers. However, clinical tests indicate that the R-enantiomer presents a greater biological potential than S-enantiomer. For this reason their separation is important for comparative biological tests of collateral effects. It is in this context that this research was developed in order to studying the separation of this drug via liquid chromatography using columns packed with chiral stationary phase. Analytical separation parameters, equilibrium and mass transfer data were determined in different experimental conditions. The results revealed high efficiency, with number of plates overcoming 9000 and selectivities in the order of 1.40 for both enantiomers. km values higher than 220 min-1 demonstrated low effect of mass transfer rates and consequently a prevalence of thermodynamic effects; in particular enthalpy energy (next to -10 kJ/mol for both enantiomers). For mixture concentration up to 3.00 mg/mL the isotherms showed adsorption equilibrium with lineal behavior. Next eight chromatographic columns were characterized. Starting with their analytic parameters, the separation regions of the enantiomers were determined for a chromatographic continuous system like Simulated Moving-Bed, with respect to different purity criteria. With that, the performance parameters were evaluated in the highest region of purity and the best result was simulated using a transient model. This permitted the determination of the transient profile of elution in the exit lines and the internal profile of the unit. The purities reached for the extract and raffinate lines were 99.99% and 96.74%, respectively / Mestrado / Desenvolvimento de Processos Biotecnologicos / Mestre em Engenharia Química

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:44:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:57:09Z (GMT). No. of bitstreams: 1 06866.pdf: 7359127 bytes, checksum: 1cbe4a8ebc4462e23ff8a89a820eddab (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:36:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:59:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / A prolactina humana (hPRL) é um hormônio polipeptídico secretado pela hipófise anterior sob regulação do hipotálamo, envolvido em uma variedade de processos biológicos como o desenvolvimento da glândula mamária e lactação. O produto recombinante é importante no diagnóstico médico e no tratamento de insuficiência da lactação. Este hormônio pode ocorrer sob a forma de proteína não glicosilada (NG-hPRL) e glicosilada (G-hPRL), com pesos moleculares de aproximadamente 23 e 25 kilodalton (kDa), respectivamente; possui um único sítio de N-glicosilação localizado na asparagina (Asn) posição 31, que é parcialmente ocupado, representando assim um modelo particularmente interessante de glicosilação. A atividade biológica da G-hPRL é muito menor comparada à NG-hPRL (~4 vezes) e sua função fisiológica ainda não é bem definida: a porção de carboidrato parece ter um importante papel na biossíntese, secreção, atividade biológica, e sobrevivência plasmática do hormônio. O objetivo principal desse trabalho foi comparar as estruturas dos N-glicanos presentes na prolactina glicosilada hipofisária (G-hPRL-NHPP) com a recombinante. Para obter a G-hPRL recombinante foi realizada uma produção em escala laboratorial a partir de células de ovário de hamster chinês (CHO) geneticamente modificadas e adaptadas ao crescimento em suspensão. Foi adicionada, ao meio de cultura cicloheximida (CHX), cujo efeito principal foi aumentar a relação G-hPRL/NGhPRL que passou de 5% para 38%, facilitando assim a purificação da G-hPRL. A G-hPRL foi purificada em duas etapas, uma troca catiônica seguida de purificação por cromatografia liquida de alta eficiência de fase reversa (RP-HPLC) que se demonstrou eficiente na separação das duas isoformas de hPRL. A G-hPRL recombinante IPEN foi assim analisada por diversas técnicas confirmando a sua pureza e atividade biológica, incluindo comparações com outras amostras de referências de origem hipofisária adquirida junto ao National Hormone & Peptide Program (NHPP-E.U.A.) . Foi realizada também a determinação inédita de Nglicanos presentes na G-hPRL produzida por células CHO e na G-hPRL nativa, produzida pela hipófise humana, possibilitando comparar as duas estruturas de carboidratos e alcançando assim uma das principais metas desse projeto. Entre as principais diferenças encontradas nas estruturas dos dois N-glicanos, destacam-se a baixa quantidade de ácido siálico (NeuAc), a alta porcentagem de glicanos sulfatos (74,0%) e com fucose (Fuc) (93,3%) presentes na amostra hipofisária e a tendência da preparação recombinante de apresentar glicanos com maior peso molecular e com uma menor variação nas isoformas. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:48:54Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:01:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 09617.pdf: 5595560 bytes, checksum: 5a054c653d88ec87b2d3c979b79b00b5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Dissertacao [Mestrado] / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN/CNEN-SP / FAPESP:00/09008-4

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:26:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:04:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Radiofármacos são compostos, sem ação farmacológica, que têm na sua composição um radioisótopo e são utilizados em Medicina Nuclear para diagnóstico e terapia de várias doenças. No presente trabalho, foi feito o desenvolvimento e a validação de método analítico para análise dos radiofármacos SAH-99mTc, EC-99mTc, ECD-99mTc e Sestamibi-99mTc e algumas matérias-primas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). As análises foram realizadas em equipamento CLAE Shimadzu, modelo LC-20AT Prominence. Algumas impurezas foram identificadas pela adição de substância de referência. A validação do método foi realizada segundo os critérios da norma RE no 899/ 2003 da Agência Nacional de Vigilância Sanitária ANVISA. Os resultados dos ensaios de robustez dos métodos demonstraram que são necessários o controle das condições de fluxo, volume de amostra, pH da fase móvel e temperatura do forno. As curvas analíticas foram lineares nas faixas de concentrações analisadas, com coeficientes de correlações lineares (r2) maiores que 0,9995. Os resultados de precisão, exatidão e recuperação apresentaram valores na faixa de 0,07- 4,78%, 95,38- 106,50% e 94,40- 100,95%, respectivamente. Os limites de deteção (LD) e os limites de quantificação (LQ) variaram de 0,27 a 5,77 g mL-1 e 0,90 a 19,23 g mL-1, respectivamente. Os valores encontrados para SAH, EC, ECD e MIBI nos RL (reagente liofilizado) foram 8,95; 0,485; 0,986 e 0,974 mg L-1, respectivamente. A pureza radioquímica média para SAH-99mTc, EC-99mTc, ECD-99mTc e Sestamibi-99mTc foi (97,28 ± 0,09)%, (98,96 ± 0,03)%, (98,96 ± 0,03)% e (98,07 ± 0,01)%, respectivamente. Todos os parâmetros recomendados pela ANVISA foram avaliados e os resultados estão abaixo dos limites estabelecidos. / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:55:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:06:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Neste trabalho é descrito um método prático e eficiente para dissociar, em subunidades &alpha; e &beta;, quantidades pequenas (da ordem de microgramas) dos hormônios foliculotrofina (hFSH), luteotrofina (hLH) e tireotrofina (hTSH) humana, nativos e recombinantes. A dissociação destes hormônios foi conseguida incubando-os, durante 16 horas, a 37ºC, com diferentes concentrações de ácido acético: 3M, 5M e 0,4M respectivamente para o hFSH, hLH e hTSH. Nestas condições, uma eficiência de dissociação acima de 98% foi obtida. Esta eficiência foi calculada com base nas determinações de massa dos heterodímeros e das subunidades, realizadas por MALDI-TOF-MS. Uma separação rápida e quantitativa das subunidades, com rendimentos da ordem de 80-90%, foi conseguida por cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (RP-HPLC) em uma coluna C4. As subunidades foram caracterizadas quanto à pureza, hidrofobicidade, massa molecular e distribuição de carga por HPLC de exclusão molecular e fase reversa, SDS-PAGE e focalização isoelétrica. Quando analisadas quanto à hidrofobicidade, as subunidades mostraram-se aproximadamente iguais, enquanto as subunidades &beta; dos três heterodímeros apresentaram a seguinte escala de hidrofobicidade: &beta;-hFSH < &beta;-hTSH < &beta;-hLH. Com relação à massa molecular relativa (Mr), as subunidades &alpha; e &beta; do hFSH apresentaram as maiores Mr enquanto as subunidades do hLH as menores. A distribuição dos isômeros de carga das subunidades dos três hormônios ocorreu em uma região ácida, para o hFSH, em uma região básica, para o hLH e em uma região intermediária, para o hTSH. As subunidades &alpha; dos três hormônios, quando analisadas via SDS-PAGE, apresentaram praticamente a mesma mobilidade eletroforética, enquanto as subunidades &beta; apresentaram diferentes taxas de migração (mR), sendo mR &beta;-hFSH < mR &beta;-hTSH < mR &beta;-hLH. Diferenças relativas à massa molecular, hidrofobicidade, migração eletroforética e distribuição de carga foram encontradas entre as preparações recombinantes e hipofisárias dos três hormônios. O método descrito é suave, prático e flexível e pode ser adaptado à dissociação de outras glicoproteínas heterodiméricas recombinantes ou nativas. Permite não só estudos e caracterização direta de cada subunidade, como também detectar a presença de subunidades livres em preparações farmacêuticas, que são contaminantes indesejáveis, sendo, portanto, uma ferramenta extremamente útil para o controle de qualidade de produtos farmacêuticos. / Dissertação (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP