Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T19:13:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Lucena_SilviaCarneirode_D.pdf: 2411404 bytes, checksum: 60623a707d801134f36a5179acd0d512 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: A adequada higienização das próteses dentais removíveis é fundamental para prevenir o acúmulo de biofilme, que funciona como reservatório de microorganismos que podem levar a infecções locais e sistêmicas. Apesar de a escovação constituir um método bem estabelecido para tal fim, limitações visual e motora de alguns pacientes reduzem sua eficácia. Assim, o uso de limpadores químicos (LQ) tem sido indicado como método complementar para remoção do biofilme. Frente ao exposto, os objetivos deste trabalho foram (i) avaliar in vitro o efeito da imersão diária em LQ sobre biofilmes multiespécies desenvolvidos em resina para base de próteses removíveis e (ii) avaliar in vivo o efeito do LQ no controle do biofilme de próteses parciais removíveis (PPR). Para o estudo in vitro, foram confeccionados discos de resina acrílica sobre os quais foram desenvolvidos biofilmes multiespécies (Candida albicans, Veillonella dispar, Streptococcus mutans, Streptococcus oralis, Fusubacterium nucleatum e Actinomyces naeslundii). Após 64,5 horas de desenvolvimento do biofilme, os espécimes foram aleatoriamente distribuídos em grupos controle e experimental. Os espécimes do grupo experimental foram submetidos a imersões diárias de 3 minutos na solução de LQ (Polident® 3 minute) por sete dias consecutivos; o biofilme do grupo controle foi desenvolvido durante o mesmo período sem tratamento. O biofilme de ambos os grupos foi coletado após 1, 4 e 7 dias experimentais (n=16) e analisados quanto ao número de células viáveis e concentração de polissacarídeos. Adicionalmente, a topografia superficial do biofilme e a morfologia celular foram analisadas através de microscopia eletrônica de varredura e confocal a laser. Para a avaliação in vivo, foram selecionados 25 voluntários usuários de PPR. Estes foram instruídos a complementar a higienização das próteses imergindo-as na solução do LQ (Polident® 3 minute) diariamente, por 3 minutos, durante 15 dias. O biofilme presente nas próteses foi coletado imediatamente antes e após o período experimental e o número de micro-organismos totais, estreptococos totais e Candida spp. foi quantificado. No estudo in vitro, foi observado que a imersão diária no LQ reduziu significativamente o número de micro-organismos totais quando comparado ao grupo controle nos três períodos avaliados (Análise de variância a dois fatores, p<0,05). Esta redução também foi observada para as bactérias individualmente e F. nucleatum e V. dispar não foram detectadas nos biofilmes expostos ao LQ. Observou-se um aumento gradativo na contagem de células de C. albicans no grupo experimental, comportamento inverso ao grupo controle no qual houve redução do número de células fúngicas viáveis. A concentração de polissacarídeos extracelulares no biofilme foi maior no grupo experimental após sete dias de limpeza quando comparado ao controle (Análise de variância a dois fatores, p<0,05). As imagens de microscopia revelaram elevada quantidade de hifas de C. albicans no grupo experimental. No estudo in vivo, observou-se uma redução significativa do número de micro-organismos totais e estreptococos totais após o período experimental (Teste-t pareado, p<0,05). Entretanto, não houve diferença para as contagens de Candida spp.. Conclui-se que a exposição diária ao limpador químico reduziu significativamente os micro-organismos totais viáveis em biofilmes multiespécies mas não apresentou eficácia sobre Candida / Abstract: The maintenance of adequate denture hygiene is of paramount importance to prevent biofilm accumulation which acts as a reservoir of microorganisms that can cause local and systemic infections. Although brushing is a well established method for denture cleaning, visual and manual limitations of some patients can reduce its efficacy. Therefore, the use of denture cleansers (DC) has been indicated as a complementary method for denture hygiene. Considering this, the aims of this study were to (i) evaluate, in an in vitro model, the effect of daily immersion in DC on a multispecies biofilm develop on denture-base acrylic resin and (ii) assess the effect of DC on controlling biofilm from removable partial dentures (RPD) surfaces. For the in vitro study, specimens were fabricated using acrylic resin on which it was develop a multispecies biofilm (Candida albicans, Veillonella dispar, Streptococcus mutans, Streptococcus oralis, Fusubacterium nucleatum e Actinomyces naeslundii). After 64.5 hours of biofilm growth, the specimens were randomized into control and experimental groups. The specimens of experimental group were submitted to 3-minutes immersions on DC solution daily for seven consecutive days; the biofilms of control group were developed for the same period without any treatment. The biofilms from both groups were collected after 1, 4 and 7 experimental days (n=16) and analyzed for viable cells and polysaccharides concentration. Additionally, the biofilms topography and cellular morphology were analysed by scanning electron microscopy ) and confocal microscopy. For in vivo evaluation of DC, 25 volunteers that used RPD were selected. They were instructed to complement their dentures hygiene by immersing them on DC solution, for 3 minutes, during 15 days. The biofilm present on RPD was collected immediately before and after the experimental period and the number of total microorganisms, total streptococci and Candida spp. were quantified. In the in vitro study, it was observed that daily immersion on DC significantly reduced the total microorganisms in comparison to control group, in all periods evaluated. (Two-way Anova, p<0.05). This reduction was also observed for individual bacteria and F. nucleatum and V. dispar were not detected on biofilms exposed to DC. It was observed a gradual increase of C. albicans count in biofilms of experimental group while, in control group, Candida counts decreased and it was not observed viable cells after seven experimental days. Additionally, extracellular polysaccharides concentration was significantly higher in experimental group after 7 days of treatment (Two way Anova, p<0.05). The microscopy images revealed a remarkable presence of hyphae in experimental group. In clinical study, it was observed a reduction on total microorganisms and total streptococci. However, no difference was observed in Candida spp. counts (paired t-test, p<0.05). It can be concluded that daily exposure to DC reduced total microorganisms on multispecies biofilms but did no demonstrated efficacy on Candida / Doutorado / Protese Dental / Doutora em Clínica Odontológica

Este estudo clínico randomizado avaliou o efeito de soluções químicas, quanto à remoção de biofilme e ação antimicrobiana, na higienização das próteses totais superiores e escovas específicas. Quarenta e cinco participantes foram orientados a escovar suas próteses (escova específica para prótese e sabonete neutro) três vezes ao dia e imergí-las, uma vez ao dia, nas soluções: Grupo I- Solução salina (controle negativo); Grupo II- Hipoclorito de sódio 0,2% (controle positivo); Grupo III- Peróxido Alcalino (Efferdent® Power Clean Crystals); Grupo IV- Ricinus communis a 6,25%. Além disso, os participantes também foram randomizados para a imersão (n=23) ou não imersão (n=22) das escovas específicas nas soluções, juntamente às próteses, para avaliação das escovas quanto à ação antimicrobiana e degradação das cerdas. As avaliações foram realizadas antes (Baseline) e após os 7 dias de uso de cada solução. Para a remoção de biofilme, as próteses foram evidenciadas (vermelho neutro 1%), fotografadas e a área de biofilme foi mensurada (Image Tool 3.00). A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de Candida spp. e Streptococcus mutans. Para coleta do biofilme das próteses, as mesmas foram escovadas (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubos de ensaio. As escovas foram preparadas, colocadas em meio de cultura Letheen Broth (20 mL) e levadas para cuba ultrassônica, seguido de agitação mecânica e centrifugação (6000 rpm, por 7 minutos). Diluições decimais (100 até 10-3) com alíquotas (50 L) de cada diluição foram cultivadas em placas de Petri contendo meio de cultura adequado, para posterior incubação (aerobiose) por 48hs e contagem do número de colônias. As diferenças entre imersão ou não imersão da escova foram avaliadas pelo teste de Mann-Whitney (&alpha;=0,05). As propriedades de remoção de biofilme e ação antimicrobiana foram avaliadas pelo teste de Friedman, seguido pelo teste de Wilcoxon (&alpha;=0,05). Os resultados mostraram que, para a propriedade de remoção de biofilme, em ambos os grupos (com e sem imersão da escova), as soluções de hipoclorito de sódio a 0,2% [com imersão: posto-médio (PM)=1,41; sem imersão: PM=1,48], Efferdent® (com imersão: PM =2,41; sem imersão: PM =2,25) e Ricinus communis a 6,25% (com imersão: PM=2,48; sem imersão: PM=2,77) foram eficazes e semelhantes (p<0,001). Para as próteses, foi verificada ação antimicrobiana frente a Candida spp. para todas as soluções (hipoclorito de sódio a 0,2%: com imersão PM=2,22, sem imersão PM=2,09; Efferdent®: com imersão PM=2,24, sem imersão PM=2,57; Introdução | 22 Ricinus communis a 6,25%: com imersão PM=2,20, sem imersão PM=2,75). Frente a S. mutans, as soluções de hipoclorito de sódio a 0,2% (com imersão: PM=2,13, sem imersão: PM=1,96) e Efferdent® (com imersão: PM=2,26, sem imersão: PM=2,18) foram as mais eficazes e a solução de Ricinus communis a 6,25% (com imersão: PM=2,39, sem imersão: PM=2,75) apresentou valores intermediários (p<0,001). Não houve diferença significante na contagem UFC/mL de Candida spp. para as escovas, tanto para o grupo que não realizou a imersão das escovas (p=0,108), como para os que realizaram o procedimento (p=0,467). Para S. mutans, não houve diferença significante entre as soluções (p<0,001) para o grupo que não realizou a imersão das escovas, enquanto que para o grupo com imersão da escova o Efferdent e hipoclorito de sódio a 0,2% mostraram redução na contagem UFC/mL de S. mutans quando comparado ao grupo Controle (p=0,001). A solução de Ricinus communis a 6,25% apresentou valores intermediários. As imagens em microscopia eletrônica mostraram grande deterioração das cerdas após 7 dias de uso, e a solução de hipoclorito de sódio promoveu um maior número de ranhuras nas cerdas quando imersas. Concluiu-se que todas as soluções foram efetivas na remoção do biofilme e frente a Candida spp., no entanto, frente a S. mutans, as soluções de hipoclorito de sódio a 0,2% e Efferdent® foram efetivas, enquanto a solução de Ricinus communis a 6,25% promoveu ação intermediária. Em relação as escovas, não houve diferença entre os grupos em relação ao protocolo de imersão e na redução de UFC/mL de Candida spp. e S. mutans / This randomized clinical study evaluated the effect of chemical hygiene solutions on biofilm removal and antimicrobial action of denture and specific brushes. Forty-five participants were instructed to brush their dentures (specific brush and liquid soap) three times a day and to soak them, once a day, in the solutions: Group I- Saline solution (negative control); Group II - Sodium hypochlorite 0.2% (positive control); Group III - Alkaline Peroxide (Efferdent® Power Clean Crystals); Group IV Ricinus communis 6.25%. In addition, the participants were also randomized to immersion (n=23) or non-immersion (n=22) of the specific brushes in the solutions, with the dentures, to evaluate the brushes for antimicrobial action and bristle degradation. Evaluations were performed before (Baseline) and after 7 days of use of each solution. For the biofilm removal, the dentures were disclosed (1% neutral red), photographed and the biofilm area was measured (Image Tool 3.00). The antimicrobial action was evaluated by counting Candida spp. and Streptococcus mutans. To collect denture biofilm, dentures were brushed (Tek brush and saline solution) for 2 minutes, and the suspension transferred to test tubes. The brushes were prepared and placed at Letheen Broth (20 mL) and taken to ultrasonic vessel, followed by mechanical shaking and centrifugation (6000 rpm for 7 minutes). Decimal dilutions (100 to 10-3) with aliquots (50 L) of each dilution were grown in Petri dishes containing suitable culture medium, for further incubation (aerobiose) for 48 h and counting the number of colonies. The differences between brushes immersion or non-immersion by the Mann-Whitney test (&alpha;=0.05). The properties of biofilm removal and antimicrobial action were evaluated by Friedman test, followed by the Wilcoxon test ( &alpha;= 0.05). The results showed that, for the biofilm removal property, in both groups (brush immersion or non-immersion), 0.2% sodium hypochlorite [immersion: Mean-Rank (MR)=1.41; non-immersion: MR=1.48], Efferdent® (immersion: MR=2.41, non-immersion: MR=2.25) and 6.25% Ricinus communis (immersion: MR=2.48; non-immersion: MR=2.77) were effective and similar (p <0.001). For dentures, was founded antimicrobial action against Candida spp. for all solutions (0.2% sodium hypochlorite: immersion: MR=2.22, non-immersion: MR=2.09; Efferdent ®: immersion: MR=2.24, non-immersion: MR=2.57; 6.25% Ricinus communis: immersion: MR=2.20, non-immersion: MR=2.75). Against S. mutans, 0.2% sodium hypochlorite (immersion: MR=2.13, Introdução | 26 non-immersion MR=1.96) and Efferdent® (immersion: MR=2.26, non-immersion: MR=2.18) were the most effective and 6.25% Ricinus communis (immersion: MR=2.39, non-immersion: MR=2.75) showed intermediate values. There was no significant difference in the brushes CFU/mL of Candida spp. for group that did not perform brush immersion (p=0.108), as well as for those who performed the procedure (p=0.467). For S. mutans, there was no significant difference between the solutions (p <0.001) for the group that did not immerse the brushes, whereas for the brush-immersion group, Efferdent and 0.2% sodium hypochlorite showed a reduction in the UFC / mL count of S. mutans when compared to the Control group (p=0.001). 6.25% Ricinus communis presented intermediate values. The electron microscopy images showed a great deterioration of the bristles after 7 days of use, and the sodium hypochlorite solution promoted a greater number of grooves in the bristles. It was concluded that all solutions were effective for biofilm removal and Candida spp.. However, for S. mutans 0.2% sodium hypochlorite and Efferdent® were effective, whereas 6.25% Ricinus communis showed intermediate action. Regarding the brushes, there was no difference between the groups in relation to the immersion protocol and in the reduction of CFU/mL of Candida spp. and S. mutans

O objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a efetividade antimicrobiana de higienizadores à base de peróxidos frente a biofilme multiespécies e o impacto dessas soluções na redução da carga microbiana, atividade metabólica e do biofilme agregado. A partir de matrizes circulares metálicas (15 x 3 mm), foram confeccionados corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável os quais foram esterilizados em micro-ondas (650W, por 6 minutos) e inoculados com suspensão de 105 UFC/mL de Candida albicans (Ca) e 106 UFC/mL de Staphylococcus aureus (Sa) e de Pseudomonas aeruginosa (Pa). Após contaminação, os corpos de prova foram incubados a 37 ºC por 20 h e, em seguida, por meio de uma cesta de aço inoxidável, foram imersos em Béquer com as seguintes soluções, de acordo com as instruções do fabricante (n=9): Grupo CP (Controle positivo) - imersão em PBS (Phosphate-Buffered Saline); Grupo MI NitrAdine e Grupo FX Fixodent. Em seguida, foram lavados (PBS) e imersos em meio de cultura Letheen, para a avaliação da esterilidade e obtenção de diluições seriadas (100 a 10-3), as quais foram semeadas em meios de cultura específicos: CHROMagar Candida para C. albicans, Manitol Salt Agar para S. aureus e Agar Cetrimide para P. aeruginosa. Após incubação, de acordo com morfologia típica, o número de colônias características foi mensurado e o número de UFC/mL calculado. A avaliação da atividade metabólica foi realizada pelo método de redução do XTT e a viabilidade celular foi avaliada por microscopia de epifluorescência (n=2). Os dados obtidos para as variáveis de UFC/mL (Sa e Pa), Unidades de Absorbância e Percentual de Área, foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (=0,05). Para comparação entre os dados vinculados (Percentual de área de células vivas e totais) empregou-se também o teste de Wilcoxon. Os dados da variável de UFC/mL para C. albicans foram avaliados pelo teste de ANOVA e pós-teste de Tukey, uma vez que apresentaram distribuição normal. Os resultados de UFC/mL mostraram diferença significativa entre os grupos (Ca p=0,002, Pa p<0,001e Sa p<0,001) havendo redução significante do número de UFC/mL de C. albicans [MI: 2,13 (1,17)], de P. aeruginosa [FX: 2,96 (1,76 4,17) e MI: 0,00 (-0,43 2,06)] e S. aureus [FX: 3,59 (2,97 4,31) e MI: 1,90 (0,40 3,01)], quando comparado aos grupos controles [CP:Ca: 4,02 (0,85), CP:Pa: 6,43 (6,02 6,61) e CP:Sa: 5,67 (5,41 6,31)]. Houve redução da atividade metabólica do biofilme multiespécies (p<0,001), em ambas as soluções higienizadoras [FX: 0,001 (-0,006 0,058) e MI: 0,000 (- 0,002 0,066)] quando comparadas ao Grupo Controle [CP: 0,068 (0,046 0,190)]. As imagens da microscopia de epifluorescência revelaram redução significativa da área de biofilme agregado sobre os corpos de prova após a imersão nos higienizadores [FX: 85,19 (77,23 86,42) e MI: 78,42 (70,91 81,65)] quando comparados ao grupo controle (p<0,001). Na comparação entre as áreas de biofilme vivo e total pode-se observar diferenças entre as áreas do biofilme multiespécies (p<0,001), após a imersão nos higienizadores avaliados. Conclui-se que os higienizadores de prótese conseguiram reduzir a atividade metabólica bem como o biofilme agregado, embora nenhum higienizador tenha conseguido remover completamente o biofilme multiespécies. O higienizador NitrAdine foi o mais efetivo na redução da carga microbiana do biofilme multiespécies. A P. aeruginosa foi mais suscetível a ação dos higienizadores do que o S. aurueus e C. albicans, quando associada em biofilme multiespécies / The objective of this in vitro study was to evaluate the peroxides soluions antimicrobial effectiveness of against the viability of multispecies biofilm and the impact of these solutions on the reduction of microbial load, metabolic activity and biofilm aggregate. Acrylic resin specimens were obtained by a circular metal matrix (15 × 3 mm), sterilized with microwave irradiation (650 W, 6 min) and contaminated with contaminated with 105 CFU/mL suspension of Candida albicans (Ca) and 106 CFU/mL suspensions of Staphylococcus aureus (Sa) and Pseudomonas aeruginosa (Pa). After contamination, the specimens were incubated at 37 ° C for 20 hours and then immersed in Becker through a stainless-steel basket, on the following solutions according to the manufacturer\'s instructions (n=9): Group CP (positive control) immersion in PBS (Phosphate-Buffered Saline); Group MI NitrAdine and Group FX - Fixodent. The specimens were washed (PBS) and immersed in Letheen culture medium, to evaluate sterility and obtain serial dilutions (100 to 10-3), that were seed into specific medium: CHROMagar Candida for C. albicans, Manitol Salt Agar for S. aureus and Agar Cetrimide for P. aeruginosa. After incubation, in accordance with characteristic morphology, the number of characteristic colonies was counted and the number of CFU/mL calculated. The evaluation of metabolic activity was performed by the XTT reduction assay and cell viability was evaluated by epifluorescence microscopy. The data obtained for the variables of CFU (Sa and Pa), Absorption Units and Area Percentage were evaluated by the Kruskal-Wallis test, followed by the Dunn test (=0.05). The Wilcoxon test was used to compare the paired data (percentage of live and total cell area). Data from the variable of UFC/mL for C. albicans were evaluated by the Anova test and Tukey\'s post-test, since they presented a normal distribution. The results of UFC/mL showed significant differences between groups (Ca p=0.002, Pa p<0.001e Sa p<0.001) with significant reduction in the number of CFU/mL of C. albicans [MI: 2.13 (1.17)], P. aeruginosa [FX: 2.96 (1.76 4.17); MI: 0.00 (-0.43 2.06)] and S. aureus [FX: 3.59 (2.97 4.31); MI: 1.90 (0.40 3.01)], when compared with control group [CP:Ca: 4.02 (0.85), CP:Pa: 6.43 (6.02 6.61) e CP:Sa: 5.67 (5.41 6.31)]. There was reduction in the metabolic activity of the multispecies biofilm in both denture cleanser [FX: 0.001 (-0.006 0.058) e MI: 0.000 (- 0.002 0.066)] when compared with control group [CP: 0.068 (0.046 0.190)]. The epifluorescence microscopy images revealed a significant reduction of the biofilm area on the specimens after immersion in the denture cleansers [FX: 85.19 (77.23 86.42) e MI: 78.42 (70.91 81.65)] when compared with control group (p<0.001). In live and total biofilm areas comparison it was possible to observe differences between the areas of the multispecies biofilm (p<0,001), after immersion in the denture cleansers evaluated. It was concluded that the denture cleansers were able to reduce metabolic activity as well as the aggregate biofilm, although none of the cleansers was able to completely remove the multispecies biofilm. NitrAdine was the most effective in reducing the microbial load of multispecies biofilm. P. aeruginosa was more susceptible to the action of denture clenasers than S. aureus and C. albicans, when associated with multispecies biofilms

A utilização de métodos químicos para higienização de próteses é fundamental para a longevidade do tratamento reabilitador. Entretanto, pouco foi relatado a respeito da ação antimicrobiana das pastilhas efervescentes em estruturas metálicas de Prótese Parcial Removível. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação antimicrobiana de 5 higienizadores à base de peróxido alcalino na desinfecção de discos metálicos (12 mm x 3 mm) de Cobalto-Cromo (Co-Cr), obtidos a partir de padrões de cera, confeccionados em matriz metálica. Foram obtidos 252 espécimes de liga de Co-Cr (Degussa), polidos de forma padronizada, divididos aleatoriamente em 24 grupos (n=10) e 4 grupos de controle negativo (CN, n=3), e esterilizados por óxido de etileno. Cada grupo experimental, exceto CN, foi inoculado com: Candida albicans (Ca), Candida glabrata (Cg), Streptococcus mutans (Sm) ou Staphylococcus aureus (Sa). A adesão dos microrganismos ocorreu em 1 hora e 30 minutos em estufa incubadora a 37ºC. A maturação do biofilme foi obtida em 48 horas, com troca de meio após 24 horas, também a 37ºC, sendo que para Sm o processo ocorreu em microaerofilia. Os espécimes contaminados foram imersos por 5 minutos nas soluções: Polident 3 minutes® (P3), Polident for partials® (PP), Efferdent® (EF), Steradent® (ST) e Corega tabs® (CT) e água deionizada estéril (controle positivo, CP). Após as higienizações, os espécimes foram imersos em meio de cultura Letheen broth e levados à cuba ultrassônica para desprendimento dos microrganismos ainda viáveis. As suspensões obtidas foram diluídas, em 100, 10-1, 10-2 e 10-3, e semeadas para determinação da quantidade de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL). A partir dos valores de UFC foram calculados os valores de Log10(UFC+1) para análise estatística. A distribuição dos dados para Ca, Cg e Sa apresentou-se não normal tendo-se utilizado o teste de Kruskal-Wallis (&alpha;=0,05), seguido pelo teste de Dunn. Para Sm a distribuição dos dados apresentou-se normal, tendo sido utilizados ANOVA (&alpha;=0,05) e teste de Tukey. De acordo com os resultados, não houve diferença significativa para Ca (p=0,15). Para Cg (p=0,00) houve redução significativa de UFC, com EF e CT, em relação a CP. Para Sa (p=0,006) houve redução significativa de UFC com ST em relação a CP. Para Sm (p=0,00) houve redução significativa de UFC, com PP e ST, em relação a CP. Conclui-se que, embora alguns higienizadores tenham tido ação antimicrobiana em relação a Cg, Sm e Sa, nenhum foi capaz de reduzir o número de UFC de Ca. Desta forma, os peróxidos alcalinos estudados não devem ser utilizados como agentes de desinfecção de estruturas de Co-Cr unicamente em imersões de 5 minutos, pois não apresentaram ampla ação antimicrobiana sobre todos os microrganismos avaliados. / The use of chemical methods for denture hygiene is essential to the longevity of prosthetic treatment. However, few have been reported about the antimicrobial action of effervescent tablets on metal structures of partial denture. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of 5 alkaline peroxide denture cleansers on disinfection of metal disks (12 mm x 3 mm) made of Cobalt-Chromium (Co-Cr) obtained from wax patterns made up in a metal matrix. There were obtained 252 Co-Cr alloy specimens (Degussa) polished in a standard way, randomly divided into 24 groups (n = 10) and 4 negative control groups (NC, n = 3) all sterilized by ethylene oxide. Each experimental group, except CN, was inoculated with: Candida albicans (Ca), Candida glabrata (Cg), Streptococcus mutans (Sm) or Staphylococcus aureus (Sa). The adhesion of microorganisms occurred in 1 hour and 30 minutes in an incubator oven at 37°C. The biofilm growth occurred on 48 hours, with medium change every 24 hours, also at 37°C, while Sm process occurred in microaerophilic. Contaminated specimens were immersed for 5 minutes in those solutions: Polident 3 minutes® (P3), Polident for partials® (PP), Efferdent® (EF), Steradent® (ST) and Corega tabs® (CT) and sterile deionized water (positive control, PC). After hygienisation the specimens were immersed in the Letheen broth culture medium and taken to the ultrasonic tank to release the still viable microorganisms. The obtained suspensions were diluted, in 100, 10-1, 10-2 and 10-3, then seeded to determine the number of Colony Forming Units (CFU / mL). From the CFU values, were calculated values of Log10(CFU+1) for statistical analysis. Not-normal distribution of data to Ca, Cg and Sa was observed, having been used the Kruskal-Wallis test (&alpha; = 0.05) followed by Dunn\'s post test. Sm had normal data distribution and was used ANOVA test (&alpha; = 0.05) and Tukey post test. According to the results there was no significant difference for Ca (p = 0.15). For Cg (p = 0.00) significant reduction of CFUs was observed with EF and CT in relation to PC. Sa (p = 0.006) had significant reduction of CFUs with ST when compared to CP. For Sm (p = 0.00) was observed significant reduction of CFUs with PP and ST in relation to PC. It was concluded that although some denture cleansers had antimicrobial activity against Cg, Sm and Sa, none were able to reduce the CFU number of Ca. Thus, the studied alkaline peroxides should not be used as disinfectant agents with Co-Cr structures solely in 5 minutes immersions, since they dont presented antimicrobial action on all evaluated microorganisms.

O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de estudo laboratorial e clínico, a eficácia de soluções de hipoclorito alcalino (0,25% e 0,5%) e à base de mamona (Ricinus communis) a 10% quanto à ação antimicrobiana frente a micro-organismos específicos, por meio da contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC). No estudo laboratorial, a partir de matrizes metálicas quadrangulares (10 x 2 mm), foram confeccionados 360 corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550), os quais foram esterilizados em micro-ondas (650W, por 6 minutos), contaminados com cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis e Candida glabrata e imersos (20 minutos) em soluções higienizadoras (n=10): Grupo A - Hipoclorito de sódio 0,25%; Grupo B - Hipoclorito de sódio 0,5%; Grupo C - Solução de mamona a 10%; Grupo D (Controle positivo) - solução salina e Grupo E (Controle negativo) - sem contaminação e imerso em solução salina (n=5). Em seguida, foram lavados em solução salina e imersos em meio de cultura líquido (Letheen), a partir do qual foram obtidas diluições seriadas (100 e 10-3), as quais foram semeadas em meios de cultura seletivos. Após incubação a 37ºC por 24 horas, as colônias foram contadas e os valores de UFC/mL calculados. No estudo clínico, 64 pacientes, usuários de próteses totais, foram orientados a escovar suas próteses (escova Bitufo® e sabonete líquido neutro) três vezes ao dia e imergí-las (20 minutos), uma vez ao dia, em soluções: Solução 1 - Hipoclorito de sódio 0,25%; Solução 2 - Hipoclorito de sódio 0,5%; Solução 3 - Solução de mamona a 10% e Solução 4 - solução salina (controle). De acordo com uma sequência aleatorizada, cada solução foi utilizada por 7 dias, com um período de wash out entre elas. A avaliação da ação antimicrobiana foi realizada antes dos uso dos produtos (Baseline) e após os 7 dias de uso de cada uma das soluções, por meio da contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de Streptococcus mutans, Candida spp. e gram negativos. Para coleta do biofilme, cada prótese total superior foi colocada em placa de Petri e a superfície interna escovada (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubo de ensaio. Após diluições decimais (100 até 10-3), alíquotas de 50 &mu;L foram semeadas em placas de Petri contendo Mitis Salivarius Agar Base, Chromagar® Candida e Mac Conkey Agar para a detecção de Streptococcus mutans, Candida spp. ou gram negativo, respectivamente. Após incubação a 37ºC (em microaerofilia durante 48-72 horas para grupo mutans e aerobiose durante 48 horas para Candida spp. e gram negativo), de acordo com morfologia típica, o número de colônias características foi mensurado e o número de UFC/mL calculado. Os dados obtidos foram transformados de acordo com a fórmula log10 (UFC+1) e analisados estatisticamente por meio do teste t de Student (&alpha;=0,05), para a análise laboratorial, e teste de Friedman (&alpha;=0,05), para a análise clínica. Os resultados mostraram que, no estudo laboratorial, as soluções de hipoclorito de sódio (0,25% e 0,5%) eliminaram completamente todos os micro-organismos. A solução de mamona eliminou completamente B. subtilis, não apresentou efeito sobre E. faecalis e apresentou ação antimicrobiana moderada frente às demais cepas, havendo redução significante (p < 0,05) do número de UFC quando comparado com o grupo D (controle positivo). No estudo clínico, houve diferença significante entre as soluções (P < 0,001), sendo que o hipoclorito de sódio a 0,5% apresentou ação efetiva sobre todos os micro-organismos avaliados (Candida spp., S. mutans e gram negativos); o hipoclorito de sódio 0,25%, ação efetiva sobre S. mutans e moderada sobre Candida spp. e gram negativos, e a solução de mamona, ação efetiva sobre S. mutans e moderada contra Candida spp. A espécie de Candida mais frequentemente isolada foi C. albicans, seguida pelas espécies C. tropicalis e C. glabrata. Concluiu-se que a solução de hipoclorito de sódio 0,5% foi a mais efetiva, apresentando ação antimicrobiana sobre ambos os biofilmes (in vitro e in vivo), seguida pela solução de hipoclorito de sódio 0,25% que apresentou ação antimicrobiana sobre o biofilme in vitro e sobre S. mutans (biofilme in vivo). A solução de mamona (10%) foi a menos efetiva, apresentando ação antimicrobiana sobre B. subtilis (biofilme in vitro) e S. mutans (biofilme in vivo). / The objective of this study was to evaluate, through laboratory and clinical study, the efficacy of alkaline hypochlorite solutions (0.25% and 0.5%) and 10% castor oil solution (Ricinus communis) about the antimicrobial action against specific microorganisms, by counting the number of Colony Forming Units (CFU). In the laboratory study, 360 denture base acrylic resin specimens (Lucitone 550) were obtained from square metal matrix (10 mm x 2 mm), which were sterilized with microwave (650W, for 6 minutes), contaminated with Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis and Candida glabrata and immersed (20 minutes) in the hygiene solutions (n = 10): Group A - 0.25% Sodium Hypochlorite; Group - B - 0.5% Sodium hypochlorite; Group C - 10% Castor oil solution; Group D (Positive Control) - saline and Group E (Negative Control) - no contamination and immersed in saline (n = 5). The specimens were washed in saline solution and immersed in liquid culture medium (Letheen), from which were obtained serial dilutions (100 to 10-3) and seeded into selective solid media. After incubation at 37º C for 24 hours, the colonies were counted and the values of CFU/mL calculated. In the clinical study, 64 complete denture wearers were instructed to brush their dentures (Bitufo ® brush and liquid neutral soap) three times a day and to soak them (20 minutes), once a day, in the solutions: Solution 1 - 0.25% Sodium Hypochlorite; Solution 2 - 0.5% Sodium hypochlorite; Solution 3 - 10% Castor oil and Solution 4 - saline (control). According to a randomized sequence, each solution was used for 7 days, with a period of wash out between them. The evaluation of the antimicrobial action was performed before the use of the products (Baseline) and after 7 days after using each solution, by counting the Colony Forming Units (CFU) of Streptococcus mutans, Candida spp. and gram negative. For collection of the biofilm, each upper complete denture was placed in a Petri dish, the internal surface was brushed with saline solution for 2 minutes and the suspension was transferred to a test tube. After decimal dilutions (100 to 10-3), aliquots of 50 uL were seeded inside Petri dishes containing Mitis Salivarius Agar Base, Candida Chromagar ® and Mac Conkey Agar for the detection of Streptococcus mutans, Candida spp. or gram negative, respectively. After incubation at 37° C (in microaerophilic conditions for 48-72 hours for mutans and aerobiosis for 48 hours for Candida spp. and gram negative), in accordance with characteristic morphology, the number of characteristic colonies was countedand the number of CFU/ml calculated. Data were processed following transformation into the formula log10 (CFU +1) and statistically analyzed using the Student t test (&alpha; = 0.05) for laboratory analysis, and Friedman test (&alpha; = 0.05), for clinical analysis. The results showed that, in the laboratory study, sodium hypochlorite (0.25% and 0.5%) eliminated completely all microorganisms. The Castor oil solution eliminated B. subtilis, had no effect on E. faecalis and showed moderate antimicrobial activity against other strains, with a significant reduction (p <0.05) in the number of CFU compared with group D (positive control). In the clinical study, there was significant difference between the solutions (P <0.001), and 0.5% sodium hypochlorite had effective action on all evaluated microorganisms (Candida spp., S. mutans and gram negative); 0.25% sodium hypochlorite had effective action on S. mutans and moderate on Candida spp. and gram negative, and the castor oil solution had effective action on S. mutans and moderate against Candida spp. . The Candida species most often isolated was C. albicans, followed by the species C. tropicalis and C. glabrata. It was concluded that the solution of 0.5% sodium hypochlorite was the most effective presenting antimicrobial action on both biofilms (in vitro and in vivo), followed by 0.25% sodium hypochlorite solution that showed antimicrobial activity on biofilms in vitro and on S. mutans (biofilm in vivo). The 10% castor oil was less effective, with antimicrobial action on Bacillus subtilis (biofilm in vitro) and S. mutans (biofilm in vivo).

A utilização de métodos químicos para higienização de próteses é fundamental para a longevidade do tratamento reabilitador. Entretanto, pouco foi relatado a respeito da ação antimicrobiana das pastilhas efervescentes em estruturas metálicas de Prótese Parcial Removível. O objetivo deste trabalho foi avaliar a ação antimicrobiana de 5 higienizadores à base de peróxido alcalino na desinfecção de discos metálicos (12 mm x 3 mm) de Cobalto-Cromo (Co-Cr), obtidos a partir de padrões de cera, confeccionados em matriz metálica. Foram obtidos 252 espécimes de liga de Co-Cr (Degussa), polidos de forma padronizada, divididos aleatoriamente em 24 grupos (n=10) e 4 grupos de controle negativo (CN, n=3), e esterilizados por óxido de etileno. Cada grupo experimental, exceto CN, foi inoculado com: Candida albicans (Ca), Candida glabrata (Cg), Streptococcus mutans (Sm) ou Staphylococcus aureus (Sa). A adesão dos microrganismos ocorreu em 1 hora e 30 minutos em estufa incubadora a 37ºC. A maturação do biofilme foi obtida em 48 horas, com troca de meio após 24 horas, também a 37ºC, sendo que para Sm o processo ocorreu em microaerofilia. Os espécimes contaminados foram imersos por 5 minutos nas soluções: Polident 3 minutes® (P3), Polident for partials® (PP), Efferdent® (EF), Steradent® (ST) e Corega tabs® (CT) e água deionizada estéril (controle positivo, CP). Após as higienizações, os espécimes foram imersos em meio de cultura Letheen broth e levados à cuba ultrassônica para desprendimento dos microrganismos ainda viáveis. As suspensões obtidas foram diluídas, em 100, 10-1, 10-2 e 10-3, e semeadas para determinação da quantidade de Unidades Formadoras de Colônias (UFC/mL). A partir dos valores de UFC foram calculados os valores de Log10(UFC+1) para análise estatística. A distribuição dos dados para Ca, Cg e Sa apresentou-se não normal tendo-se utilizado o teste de Kruskal-Wallis (&alpha;=0,05), seguido pelo teste de Dunn. Para Sm a distribuição dos dados apresentou-se normal, tendo sido utilizados ANOVA (&alpha;=0,05) e teste de Tukey. De acordo com os resultados, não houve diferença significativa para Ca (p=0,15). Para Cg (p=0,00) houve redução significativa de UFC, com EF e CT, em relação a CP. Para Sa (p=0,006) houve redução significativa de UFC com ST em relação a CP. Para Sm (p=0,00) houve redução significativa de UFC, com PP e ST, em relação a CP. Conclui-se que, embora alguns higienizadores tenham tido ação antimicrobiana em relação a Cg, Sm e Sa, nenhum foi capaz de reduzir o número de UFC de Ca. Desta forma, os peróxidos alcalinos estudados não devem ser utilizados como agentes de desinfecção de estruturas de Co-Cr unicamente em imersões de 5 minutos, pois não apresentaram ampla ação antimicrobiana sobre todos os microrganismos avaliados. / The use of chemical methods for denture hygiene is essential to the longevity of prosthetic treatment. However, few have been reported about the antimicrobial action of effervescent tablets on metal structures of partial denture. The aim of this study was to evaluate the antimicrobial activity of 5 alkaline peroxide denture cleansers on disinfection of metal disks (12 mm x 3 mm) made of Cobalt-Chromium (Co-Cr) obtained from wax patterns made up in a metal matrix. There were obtained 252 Co-Cr alloy specimens (Degussa) polished in a standard way, randomly divided into 24 groups (n = 10) and 4 negative control groups (NC, n = 3) all sterilized by ethylene oxide. Each experimental group, except CN, was inoculated with: Candida albicans (Ca), Candida glabrata (Cg), Streptococcus mutans (Sm) or Staphylococcus aureus (Sa). The adhesion of microorganisms occurred in 1 hour and 30 minutes in an incubator oven at 37°C. The biofilm growth occurred on 48 hours, with medium change every 24 hours, also at 37°C, while Sm process occurred in microaerophilic. Contaminated specimens were immersed for 5 minutes in those solutions: Polident 3 minutes® (P3), Polident for partials® (PP), Efferdent® (EF), Steradent® (ST) and Corega tabs® (CT) and sterile deionized water (positive control, PC). After hygienisation the specimens were immersed in the Letheen broth culture medium and taken to the ultrasonic tank to release the still viable microorganisms. The obtained suspensions were diluted, in 100, 10-1, 10-2 and 10-3, then seeded to determine the number of Colony Forming Units (CFU / mL). From the CFU values, were calculated values of Log10(CFU+1) for statistical analysis. Not-normal distribution of data to Ca, Cg and Sa was observed, having been used the Kruskal-Wallis test (&alpha; = 0.05) followed by Dunn\'s post test. Sm had normal data distribution and was used ANOVA test (&alpha; = 0.05) and Tukey post test. According to the results there was no significant difference for Ca (p = 0.15). For Cg (p = 0.00) significant reduction of CFUs was observed with EF and CT in relation to PC. Sa (p = 0.006) had significant reduction of CFUs with ST when compared to CP. For Sm (p = 0.00) was observed significant reduction of CFUs with PP and ST in relation to PC. It was concluded that although some denture cleansers had antimicrobial activity against Cg, Sm and Sa, none were able to reduce the CFU number of Ca. Thus, the studied alkaline peroxides should not be used as disinfectant agents with Co-Cr structures solely in 5 minutes immersions, since they dont presented antimicrobial action on all evaluated microorganisms.

Submitted by Maike Costa (maiksebas@gmail.com) on 2017-03-06T13:18:25Z No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1622677 bytes, checksum: 4910b306e46e741a75cc3d2047affa2c (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-06T13:18:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 arquivo total.pdf: 1622677 bytes, checksum: 4910b306e46e741a75cc3d2047affa2c (MD5) Previous issue date: 2015-08-17 / Introduction: Faced with limitations to the use of sodium hypochlorite in the disinfection of dental prostheses and the need to control fungal proliferation in these sites, it is necessary to study new substances for this purpose. Objectives: To evaluate the antifungal activity, mechanism of action, cytotoxicity and antibiofilm action of chloramine T (CAT) on Candida spp. The minimum inhibitory concentration (MIC) of the substance on Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei and Candida glabrata was determined by the microdilution technique and the minimum fungicidal concentration (CFM) was calculated through the subculture in Sabouraud Dextrose Agar (ASD) . The growth inhibition kinetics of C. albicans were evaluated by the method of counting colony forming units (CFU) at different times and concentrations. A microculture of C. albicans was performed on fowl agar plus tween 80 to evaluate the possible alteration of micromorphology against different concentrations of the substance. The possible mechanism of action on wall and fungal cell membrane was verified by the determination of MIC in the presence of sorbitol and ergosterol respectively. The inhibition of the initial adherence of fungal cells, formation and reduction of C. albicans biofilm were evaluated after short (1 min) and prolonged (8 h) contact with the substance and formation of the biofilm was measured by absorbance at 600 nm, Transformed into scores referring to the percentage of inhibition obtained based on the values ​​of the control group. The cytotoxicity of the substance was evaluated by the hemolysis method. Nystatin and sodium hypochlorite were used as positive controls. A descriptive and inferential analysis was performed considering α = 5%. Results: The CIM75% found for CAT was 781.3 μg / mL and the CFM / MIC ratio suggests a fungicidal activity against most of the strains tested, with probable action on cell wall and membrane. The substance showed immediate and prolonged action on the kinetic test and caused reduction of the filamentous form and inhibition of chlamydoconidia. In the biofilm assay, it presented similar results to sodium hypochlorite for inhibition of initial adherence and formation of mature biofilm (p> 0.05) and was more effective in reducing mature biofilm in the short contact groups at MIC concentration x2 (24 H) and CIM x 4 (48 h) (p <0.05). Conclusion: CAT shows antifungal activity on Candida spp. And shows fungicidal action on most of the strains tested. Its action is immediate and prolonged in the inhibition of C. albicans growth and probably occurs both in the wall and in the cell membrane. CAT causes alterations in the micromorphology of C. albicans and has antibiofilm activity, being effective in inhibiting the initial adherence of fungal cells, as well as in the formation and reduction of biofilm. / Introducao: Diante das limitacoes para o uso do hipoclorito de sodio na desinfeccao de proteses dentarias e da necessidade do controle da proliferacao fungica nestes sitios, faz-se necessario o estudo de novas substancias para este fim. Objetivos: Avaliar a atividade antifungica, mecanismo de acao, citotoxicidade e acao antibiofilme da cloramina T (CAT) sobre Candida spp. Materiais e Metodos: Foi determinada a concentracao inibitoria minima (CIM) da substancia sobre Candida albicans, Candida tropicalis, Candida krusei e Candida glabrata pela tecnica da microdiluicao e calculada a concentracao fungicida minima (CFM) atraves do subcultivo em Agar Sabouraud Dextrose (ASD). Foi avaliada a cinetica de inibicao do crescimento de C. albicans pelo metodo de contagem de unidades formadoras de colonias (UFC) em diferentes tempos e concentracoes. Foi realizado microcultivo de C. albicans em agar fuba acrescido de tween 80 para avaliacao da possivel alteracao da micromorfologia frente a diferentes concentracoes da substancia. O possivel mecanismo de acao sobre parede e membrana celular fungica foi verificado atraves da determinacao da CIM na presenca, respectivamente, de sorbitol e ergosterol. A inibicao da aderencia inicial de celulas fungicas, formacao e reducao do biofilme de C. albicans foram avaliados apos contato curto (1 min) e prolongado (8 h) com a substancia e a formacao do biofilme foi mensurada atraves de absorbancia a 600 nm, transformada em escores referentes a porcentagem de inibicao obtida com base nos valores do grupo controle. A citotoxicidade da substancia foi avaliada pelo metodo da hemolise. Nistatina e hipoclorito de sodio foram utilizados como controles positivos. Foi realizada analise estatistica descritiva e inferencial, considerando α=5%. Resultados: A CIM75% encontrada para a CAT foi de 781,3 µg/mL e a relacao CFM/CIM sugere uma atividade fungicida frente a maioria das cepas testadas, com provavel acao em parede e membrana celulares. A substancia mostrou acao imediata e prolongada no teste de cinetica e provocou reducao da forma filamentosa e inibicao de clamidoconidios. No ensaio do biofilme, apresentou resultados semelhantes ao hipoclorito de sodio para inibicao da aderencia inicial e formacao do biofilme maduro (p>0,05) e foi mais efetiva na reducao do biofilme maduro nos grupos de contato curto na concentracao CIM x 2 (24 h) e CIM x 4 (48 h) (p < 0,05). Conclusao: A CAT apresenta atividade antifungica sobre Candida spp. e apresenta acao fungicida sobre a maioria das cepas testadas. Sua acao e imediata e prolongada na inibicao do crescimento de C. albicans e provavelmente ocorre tanto em parede quanto em membrana celular. A CAT causa alteracoes na micromorfologia de C. albicans e possui atividade antibiofilme, sendo efetiva na inibicao da aderencia inicial das celulas fungicas, bem como na formacao e reducao do biofilme.

O objetivo deste trabalho foi avaliar, por meio de estudo laboratorial e clínico, a eficácia de soluções de hipoclorito alcalino (0,25% e 0,5%) e à base de mamona (Ricinus communis) a 10% quanto à ação antimicrobiana frente a micro-organismos específicos, por meio da contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC). No estudo laboratorial, a partir de matrizes metálicas quadrangulares (10 x 2 mm), foram confeccionados 360 corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550), os quais foram esterilizados em micro-ondas (650W, por 6 minutos), contaminados com cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis e Candida glabrata e imersos (20 minutos) em soluções higienizadoras (n=10): Grupo A - Hipoclorito de sódio 0,25%; Grupo B - Hipoclorito de sódio 0,5%; Grupo C - Solução de mamona a 10%; Grupo D (Controle positivo) - solução salina e Grupo E (Controle negativo) - sem contaminação e imerso em solução salina (n=5). Em seguida, foram lavados em solução salina e imersos em meio de cultura líquido (Letheen), a partir do qual foram obtidas diluições seriadas (100 e 10-3), as quais foram semeadas em meios de cultura seletivos. Após incubação a 37ºC por 24 horas, as colônias foram contadas e os valores de UFC/mL calculados. No estudo clínico, 64 pacientes, usuários de próteses totais, foram orientados a escovar suas próteses (escova Bitufo® e sabonete líquido neutro) três vezes ao dia e imergí-las (20 minutos), uma vez ao dia, em soluções: Solução 1 - Hipoclorito de sódio 0,25%; Solução 2 - Hipoclorito de sódio 0,5%; Solução 3 - Solução de mamona a 10% e Solução 4 - solução salina (controle). De acordo com uma sequência aleatorizada, cada solução foi utilizada por 7 dias, com um período de wash out entre elas. A avaliação da ação antimicrobiana foi realizada antes dos uso dos produtos (Baseline) e após os 7 dias de uso de cada uma das soluções, por meio da contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC) de Streptococcus mutans, Candida spp. e gram negativos. Para coleta do biofilme, cada prótese total superior foi colocada em placa de Petri e a superfície interna escovada (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubo de ensaio. Após diluições decimais (100 até 10-3), alíquotas de 50 &mu;L foram semeadas em placas de Petri contendo Mitis Salivarius Agar Base, Chromagar® Candida e Mac Conkey Agar para a detecção de Streptococcus mutans, Candida spp. ou gram negativo, respectivamente. Após incubação a 37ºC (em microaerofilia durante 48-72 horas para grupo mutans e aerobiose durante 48 horas para Candida spp. e gram negativo), de acordo com morfologia típica, o número de colônias características foi mensurado e o número de UFC/mL calculado. Os dados obtidos foram transformados de acordo com a fórmula log10 (UFC+1) e analisados estatisticamente por meio do teste t de Student (&alpha;=0,05), para a análise laboratorial, e teste de Friedman (&alpha;=0,05), para a análise clínica. Os resultados mostraram que, no estudo laboratorial, as soluções de hipoclorito de sódio (0,25% e 0,5%) eliminaram completamente todos os micro-organismos. A solução de mamona eliminou completamente B. subtilis, não apresentou efeito sobre E. faecalis e apresentou ação antimicrobiana moderada frente às demais cepas, havendo redução significante (p < 0,05) do número de UFC quando comparado com o grupo D (controle positivo). No estudo clínico, houve diferença significante entre as soluções (P < 0,001), sendo que o hipoclorito de sódio a 0,5% apresentou ação efetiva sobre todos os micro-organismos avaliados (Candida spp., S. mutans e gram negativos); o hipoclorito de sódio 0,25%, ação efetiva sobre S. mutans e moderada sobre Candida spp. e gram negativos, e a solução de mamona, ação efetiva sobre S. mutans e moderada contra Candida spp. A espécie de Candida mais frequentemente isolada foi C. albicans, seguida pelas espécies C. tropicalis e C. glabrata. Concluiu-se que a solução de hipoclorito de sódio 0,5% foi a mais efetiva, apresentando ação antimicrobiana sobre ambos os biofilmes (in vitro e in vivo), seguida pela solução de hipoclorito de sódio 0,25% que apresentou ação antimicrobiana sobre o biofilme in vitro e sobre S. mutans (biofilme in vivo). A solução de mamona (10%) foi a menos efetiva, apresentando ação antimicrobiana sobre B. subtilis (biofilme in vitro) e S. mutans (biofilme in vivo). / The objective of this study was to evaluate, through laboratory and clinical study, the efficacy of alkaline hypochlorite solutions (0.25% and 0.5%) and 10% castor oil solution (Ricinus communis) about the antimicrobial action against specific microorganisms, by counting the number of Colony Forming Units (CFU). In the laboratory study, 360 denture base acrylic resin specimens (Lucitone 550) were obtained from square metal matrix (10 mm x 2 mm), which were sterilized with microwave (650W, for 6 minutes), contaminated with Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis and Candida glabrata and immersed (20 minutes) in the hygiene solutions (n = 10): Group A - 0.25% Sodium Hypochlorite; Group - B - 0.5% Sodium hypochlorite; Group C - 10% Castor oil solution; Group D (Positive Control) - saline and Group E (Negative Control) - no contamination and immersed in saline (n = 5). The specimens were washed in saline solution and immersed in liquid culture medium (Letheen), from which were obtained serial dilutions (100 to 10-3) and seeded into selective solid media. After incubation at 37º C for 24 hours, the colonies were counted and the values of CFU/mL calculated. In the clinical study, 64 complete denture wearers were instructed to brush their dentures (Bitufo ® brush and liquid neutral soap) three times a day and to soak them (20 minutes), once a day, in the solutions: Solution 1 - 0.25% Sodium Hypochlorite; Solution 2 - 0.5% Sodium hypochlorite; Solution 3 - 10% Castor oil and Solution 4 - saline (control). According to a randomized sequence, each solution was used for 7 days, with a period of wash out between them. The evaluation of the antimicrobial action was performed before the use of the products (Baseline) and after 7 days after using each solution, by counting the Colony Forming Units (CFU) of Streptococcus mutans, Candida spp. and gram negative. For collection of the biofilm, each upper complete denture was placed in a Petri dish, the internal surface was brushed with saline solution for 2 minutes and the suspension was transferred to a test tube. After decimal dilutions (100 to 10-3), aliquots of 50 uL were seeded inside Petri dishes containing Mitis Salivarius Agar Base, Candida Chromagar ® and Mac Conkey Agar for the detection of Streptococcus mutans, Candida spp. or gram negative, respectively. After incubation at 37° C (in microaerophilic conditions for 48-72 hours for mutans and aerobiosis for 48 hours for Candida spp. and gram negative), in accordance with characteristic morphology, the number of characteristic colonies was countedand the number of CFU/ml calculated. Data were processed following transformation into the formula log10 (CFU +1) and statistically analyzed using the Student t test (&alpha; = 0.05) for laboratory analysis, and Friedman test (&alpha; = 0.05), for clinical analysis. The results showed that, in the laboratory study, sodium hypochlorite (0.25% and 0.5%) eliminated completely all microorganisms. The Castor oil solution eliminated B. subtilis, had no effect on E. faecalis and showed moderate antimicrobial activity against other strains, with a significant reduction (p <0.05) in the number of CFU compared with group D (positive control). In the clinical study, there was significant difference between the solutions (P <0.001), and 0.5% sodium hypochlorite had effective action on all evaluated microorganisms (Candida spp., S. mutans and gram negative); 0.25% sodium hypochlorite had effective action on S. mutans and moderate on Candida spp. and gram negative, and the castor oil solution had effective action on S. mutans and moderate against Candida spp. . The Candida species most often isolated was C. albicans, followed by the species C. tropicalis and C. glabrata. It was concluded that the solution of 0.5% sodium hypochlorite was the most effective presenting antimicrobial action on both biofilms (in vitro and in vivo), followed by 0.25% sodium hypochlorite solution that showed antimicrobial activity on biofilms in vitro and on S. mutans (biofilm in vivo). The 10% castor oil was less effective, with antimicrobial action on Bacillus subtilis (biofilm in vitro) and S. mutans (biofilm in vivo).

Orientador: Altair Antoninha Del Bel Cury / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-21T03:58:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Porta_SheilaRodriguesdeSousa_D.pdf: 1066971 bytes, checksum: 162caaa354cf796e000458fc34d4abd9 (MD5) Previous issue date: 2012 / Resumo: Estratégias que visem prevenir e reduzir a formação de biofilmes sobre próteses são necessárias, pois estas podem atuar como reservatório de micro-organismos. Outro aspecto importante é o estabelecimento de um protocolo de higienização que além de eficiente também seja bem aceito pelos pacientes. Assim, objetivou-se avaliar o efeito do hipoclorito de sódio (NaOCl) a 0,5% sobre o biofilme, estabilidade de cor e rugosidade de superfície (Ra) de próteses totais removíveis e a satisfação do paciente com o tratamento. Foram selecionados 15 voluntários que, após aceitar e assinar as condições do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da FOP/UNICAMP, foram orientados a complementar a higiene de suas próteses com a imersão em NaOCl 0,5%, durante 3 minutos, uma vez ao dia. O período experimental foi de 90 dias e as variáveis resposta foram mensuradas antes do início do uso do NaOCl e após 30, 60 e 90 dias. A avaliação microbiológica foi realizada no biofilme da prótese e na saliva do voluntário. Toda a superfície da prótese era percorrida por um cotonete de algodão que, em seguida, era individualmente acondicionado em tubo estéril contendo 3 mL de PBS. Amostras da saliva foram acondicionadas em tubos estéreis. Todos os tubos foram sonicados (7W, 30 s), as soluções iniciais serialmente diluídas e plaqueadas, em triplicata, em CHROMagar e ágar sangue. Após um período de incubação de 48 h a 37°C, o número de unidades formadoras de colônia foi determinado. A estabilidade de cor foi avaliada com o uso de um espectrofotômetro de refletância, mensurada no sistema CIELab e correlacionada para o ambiente clínico de acordo com as unidades da National Bureau of Standards (NBS). Para avaliação da Ra, foi realizado um delineamento in situ e espécimes (5 x 5 x 2mm) (n = 90) de resina acrílica termo-polimerizável foram confeccionados e colados na superfície vestibular das próteses inferiores. A rugosidade de superfície foi mensurada com o auxílio de um rugosímetro de contato. Para avaliar a aceitação do paciente com relação ao protocolo, foi pedido aos voluntários que traduzissem em valores o seu grau de satisfação com o tratamento em um intervalo variando de 0 (totalmente insatisfeito) a 10 (totalmente satisfeito). Uma redução significativa no número de micro-organismos totais (ANOVA; p? 0,05) e Candida spp foi observada ao longo do tratamento. Embora tenham sido observadas alterações nos valores de L*, a* e b* nas mensurações de cor, não houve diferença significativa na cor das bases das próteses (Friedman; p? 0,05). Não houve diferença significante na rugosidade de superfície (Kruskal Wallis; p ? 0,05). A satisfação do voluntário com o método de limpeza aumentou durante o período avaliado, chegando a 87% de indivíduos totalmente satisfeitos. Conclui-se que o método de higienização proposto com NaOCl teve ampla aceitação pelos voluntários; além de ser efetivo na redução de micro-organismos, a alteração de cor exibida foi clinicamente aceitável, bem como não houve alteração significativa na rugosidade de superfície / Abstract: Strategies to prevent and to reduce biofilm formation on dentures are necessary, since they may become a reservoir of microorganisms. Additionally, it is important, in establishing a protocol for denture cleaning, to evaluate the effect of the cleaning agent on the prosthetic material and the patients' acceptability. Therefore, the objective of this study was to evaluate the effect of sodium hypochlorite (NaOCl) 0.5% on biofilm, color stability and surface roughness (Ra) of removable dentures besides the patients' satisfaction with the treatment. Fifteen volunteers were recruited and, after accepting the conditions of the Term of Consent approved by the Ethics Committee of FOP / UNICAMP, were instructed to daily immerse their dentures in a 0.5% NaOCl solution for 3 minutes. The follow-up time was 90 days and outcome variables were measured on baseline and on days 30, 60 and 90. For microbiological evaluation, samples were obtained from dentures and saliva. Swabs were taken from the whole surface of the dentures and, then, individually placed in a sterile tube containing 3 ml of PBS. Next, each volunteer was asked to spit into an empty sterile tube. All tubes were sonicated (7W, 30 s), the initial solutions serially diluted and plated in triplicate on blood agar and CHROMagar and, after an incubation period of 48 h at 37°C, the number of colony forming units (cfu/mL) was determined. Color stability was measured with a reflectance spectrophotometer and evaluated using the CIELab system. It was also quantified in accordance with units of the National Bureau of Standards (NBS). To Ra assessment, an in situ design was developed. Specimens (5 x 5 x 2 mm) (n = 90) of heat-polymerized acrylic resin were fabricated and fixed in the buccal posterior surface of lower dentures. The surface roughness was measured using a profilometer. To evaluate the acceptability of the cleaning protocol, each volunteer was asked to translate in values their degree of satisfaction with the treatment at an interval ranging from 0 (totally dissatisfied) to 10 (totally satisfied). A significant reduction in the number of total micro-organisms (ANOVA; p ? 0.05) and Candida spp was observed throughout the treatment. Although changes had been observed in L *, a * b * values, there were no significant color changes (Friedman; p ? 0.05). The surface roughness did not present significant changes after the evaluation period (Kruskal Wallis; p ? 0.05). The volunteers' satisfaction increased throughout the experimental period, reaching 87% of individuals totally satisfied. Data revealed that the 0.5% NaOCl immersion protocol was effective in reducing microorganisms, color changes exhibited for all dentures can be considered clinically acceptable and the surface roughness did not show significant changes. Also, the cleaning method was well accepted by volunteers / Doutorado / Protese Dental / Doutora em Clínica Odontológica

Este estudo avaliou os efeitos de pastilhas efervescentes na superfície de liga de cobalto cromo (Co-Cr) e resina termopolimerizável, simulando um período de até 5 anos de imersão, como também analisar sua ação antimicrobiana. A partir de uma matriz metálica, padrões de cera circulares (12 x 3 mm) foram obtidos e fundidos em liga de Co-Cr (DeguDent®). As amostras foram imersas em: Polident 3 minutes® (P3M), Steradent® (St), Polident for Partials® (PP), Efferdent® (Ef), Corega Tabs® (CT), Nitradine® (Ni), Fixodent® (Fi) e Kukident® (K). Foi avaliada a resistência à corrosão (Ecorr, Ipass) (n=5) por meio do Potenciostato/Galvanostato. Foram realizadas análises qualitativas complementares com Microscópio Eletrônico de Varredura (MEV) e Espectrometria de Energia Dispersiva de Raios-X (EDS). Após o ensaio de corrosão, cada disco metálico foi incluído em mufla preparada por matrizes circulares de cera (20 x 5 mm), incorporando-o à resina acrílica termopolimerizável (Clássico Ltda®). Os grupos das 4 pastilhas que apresentaram a menor taxa de corrosão e da água destilada (controle) (n=9) foram analisados quanto à rugosidade da superfície metálica e da resina acrílica (Sa, &micro;m) por meio de microscopia confocal a laser. Foram avaliadas a alteração de cor (&Delta;E) da resina por meio de espectrocolorímetro no início e após a simulação de ½, 1, 2, 3, 4 e 5 anos e alteração de massa (g), no início e final, em balança de alta precisão. Para avaliação antimicrobiana, por meio da contagem de Unidades Formadoras de Colônia (UFC/mL), os espécimes mistos foram contaminados com biofilme misto composto por: S. mutans (Sm), S. aureus (Sa), C. albicans (Ca) e C. glabrata (Cg) e, posteriormente, imersos nas soluções higienizadoras, onde foram semeados em meios específicos para contagem das UFC. De acordo com os resultados obtidos (&alpha;=0,05), P3M causou a menor taxa de corrosão e Ni, o menor potencial de corrosão. Com o MEV, verificou-se evidenciação da microestrutura da liga metálica. Quanto à rugosidade superficial do metal, CT (p=0,009) e Ni (p=0,036) causaram aumento na rugosidade em relação ao tempo (Friedman). Na resina, houve aumento da rugosidade após 5 anos (p<0,01). Entre as soluções (Kruskal-Wallis), não houve diferença para ambos os materiais. Não houve diferença na cor da resina acrílica, tanto em relação às soluções (Kruskal Wallis) quanto aos tempos (Friedman). Não foram observadas alterações de massa (Kruskal-Wallis). Quanto à ação antimicrobiana (Kruskal-Wallis), Ni propiciou redução de UFC de Sm (p=0,001). Conclui-se que, embora todas as pastilhas efervescentes não tenham alterado a superfície do metal e da resina acrílica de maneira significativa, nenhuma apresentou ação antimicrobiana contra os microrganismos avaliados do biofilme misto; somente Ni reduziu a quantidade de S. mutans / The aim of this study were: to evaluate the effects of denture cleansers on the surface of cobalt chromium (Co-Cr) and heat-polymerized acrylic resin, simulating a period until 5 years of immersion, as well as to analyze its antimicrobial action. From a metal matrix, disc-shaped wax patterns (12 x 3 mm) were made and later were casting in Co-Cr alloy (DeguDent&trade;). The specimes were immersed in: Polident 3 minutes&trade; (P3M), Steradent&trade; (St), Polident for Partials&trade; (PP), Efferdent&trade; (Ef), Corega Tabs&trade; (CT), Nitradine&trade; (Ni), Fixodent&trade; (Fi) and Kukident&trade; (K). The corrosion resistance (Ecorr, Ipass) (n = 5) was evaluated by Potentiostat / Galvanostat. Further qualitative analyzes were performed with scanning electronic microscopy (SEM) and energy dispersive x-ray spectrometry (EDS). After the corrosion test, each metal disk was included in heat-cured acrylic resin (Clássico Ltda&trade;) using moulds previously prepared from circular wax matrices (20 x 5 mm). The four dentures cleansers with the lowest corrosive potential were analyzed for surface roughness of the metal and acrylic resin (Sa, &micro;m) by laser confocal microscopy. The color change (&Delta;E) of the resin was evaluated by means of a spectrocolorimeter at the beginning and after the simulation of ½, 1, 2, 3, 4 and 5 years and mass change (g), at the beginning and end, in high-precision balance. For antimicrobial evaluation, the mixed specimens (n = 9) were contaminated with multispecies biofilm [S. mutans (Sm), S. aureus (Sa), C. albicans (Ca) and C. glabrata (Cg)] and subsquently immersed in denture cleansers, where they were seeded in specific CFU / mL media. According to the results obtained (&alpha;=0.05), there was a significant difference: P3M presented the lowest corrosion rate and Ni, the lowest corrosion potential. According to SEM, the tablets effervescent provided evidence of the microstructure of the alloy. As for the surface roughness in the metal surface, CT (p = 0.009) and Ni (p = 0.036) showed increase in roughness in relation to time (Friedman). At the resin surface, the roughness growed after 5 years. Among the solutions (Kruskal-Wallis), there was no difference for both materials. There was no difference in the color of the acrylic resin (&delta;E), both for solution (Kruskal-Wallis), and for time (Friedman). Differences in weight weren\'t observed (Kruskal-Wallis). In antimicrobial action (Kruskal-Wallis), Ni group showed significant reduction for Sm (p=0.001). It\'s concluded that, although all the denture cleansers didn\'t significantly changed the surface of the metal and acrylic resin, none showed antimicrobial action against the evaluated microorganisms of the mixed biofilm; only Ni reduced the amount of S. mutans