Corrosion of steel reinforcements is a phenomenon that can greatly reduce the lifespan of any reinforced concrete structure or structural element. The mechanical, functional and aesthetic capacity of the material are negatively affected by the loss of section and adhesion as a consequence of corrosion procceses or by cracks produced in the surrounding matrix due to stresses caused by corrosion products. Therefore, the study of these processes and of the methods that reduce corrosion kinetics are of utmost importance in the field of architecture and engineering. In the first part of this thesis, new methods for analysing corrosion processes are studied through the joint use of electrochemical techniques and advanced statistics. This combination yields qualitative and quantitative information which is more complete and useful than that obtained by traditional methodologies. In the second part of the paper, a series of organic amine and carboxylate compounds are selected to act as corrosion inhibitors. Different protocols for the monolayer binding of these compounds to the steel reinforcements are developed, optimised and described, proving their effectiveness after subjecting them to chemical attack in solutions with different mechanisms and levels of aggressiveness. Next, the effectiveness of the inhibitor coating is studied in reinforcements embedded in mortar and concrete specimens. For that purpose, classic working protocols are used to monitor the corrosion processes. Lastly, the response of the monolayers to static and dynamic tensile loads applied to the steel rods is analysed, as well as the behaviour and influence of the coatings on the adhesion of the concrete-steel system. / La corrosión de las armaduras es un fenómeno que puede reducir en gran medida la vida útil de cualquier estructura o elemento constructivo de hormigón armado. La pérdida de sección y de adherencia como consecuencia de procesos de corrosión, o las fisuras producidas en la matriz envolvente debido a las tensiones generadas por los productos de corrosión, afectan negativamente a la capacidad mecánica, funcional y estética del material. Por tanto, el estudio de dichos procesos y de métodos que permitan reducir la cinética de corrosión, son de suma importancia en el ámbito de la arquitectura y la ingeniería. En la primera parte de esta Tesis se estudia el empleo de nuevos métodos para el ánalisis de los procesos de corrosión, mediante el uso conjunto de técnicas electroquímicas y estadísticas avanzadas. Esta combinación genera una información cualitativa y cuantitativa, que demuestra ser más completa y útil que la obtenida mediante las metodologías tradicionales. En la segunda parte del trabajo se selecciona una serie de compuestos orgánicos tipo amina y carboxilato para que actúen como inhibidores de la corrosión. Con ellos se desarrollan, optimizan y describen diferentes protocolos de fijación de monocapas sobre las armaduras de acero, comprobando su efectividad tras someterlas al ataque químico en disoluciones con diferentes mecanismos y niveles de agresividad. A continuación, se estudia la efectividad del recubrimiento inhibidor en armaduras embebidas en probetas de mortero y hormigón. Para ello, se utilizan los protocolos clásicos de trabajo para el seguimiento de los procesos de corrosión. Finalmente, se prosigue con el análisis de la respuesta de las monocapas bajo cargas estáticas y dinámicas de tracción en las barras, y con la comprobación del comportamiento e influencia de los revestimientos generados sobre la adherencia del sistema hormigón-acero. / La corrosió de les armadures és un fenomen que pot reduir en gran manera la vida útil de qualsevol estructura o element constructiu de formigó armat. La pèrdua de secció i d'adherència com a conseqüència de processos de corrosió, o les fissures produïdes en la matriu envolupant a causa de les tensions generades pels productes de corrosió, afecten negativament a la capacitat mecànica, funcional i estètica del material. Per tant, l'estudi d'aquests processos i de mètodes que permeten reduir la cinètica de corrosió, són de summa importància en l'àmbit de l'arquitectura i l'enginyeria. En la primera part d'aquesta Tesi s'estudia l'ocupació de nous mètodes per a l'anàlisi dels processos de corrosió, mitjançant l'ús conjunt de tècniques electroquímiques i estadístiques avançades. Aquesta combinació genera una informació qualitativa i quantitativa, que demostra ser més completa i útil que l'obtinguda mitjançant les metodologies tradicionals. En la segona part del treball se selecciona una sèrie de compostos orgànics tipus amina i carboxilato perquè actuen com a inhibidors de la corrosió. Amb ells es desenvolupen, optimitzen i descriuen diferents protocols de fixació de monocapes sobre les armadures d'acer, comprovant la seua efectivitat després de sotmetre-les a l'atac químic en dissolucions amb diferents mecanismes i nivells d'agressivitat. A continuació, s'estudia l'efectivitat del recobriment inhibidor en armadures embegudes en provetes de morter i formigó. Per a açò, s'utilitzen els protocols clàssics de treball per al seguiment dels processos de corrosió. Finalment, es prossegueix amb l'anàlisi de la resposta de les monocapes baix càrregues estàtiques i dinàmiques de tracció en les barres, i amb la comprovació del comportament i influència dels revestiments generats sobre l'adherència del sistema formigó-acer. / Monzón Bello, P. (2017). Análisis de la corrosión de las armaduras de acero en el hormigón: generación de monocapa inhibidora sobre la superficie de acero [Tesis doctoral no publicada]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/90422 / TESIS

Este trabajo de tesis se basó en el diseño y síntesis de compuestos bioactivos, a partir de estructuras inspiradas en productos naturales, con el propósito de contribuir al descubrimiento de nuevos inhibidores de colinesterasas de carácter multifuncional, con potencial aplicación para la terapia de la enfermedad de Alzheimer. En primer lugar, en el capítulo III de esta tesis se llevó a cabo la optimización mediante calentamiento con equipo de microondas, de la síntesis de derivados de azaestilbeno mediante la incorporación de un espaciador y una amina terciaria a una estructura análoga al azaresveratrol, de conocida actividad biológica. Se obtuvieron 19 compuestos, todos resultaron inhibidores de acetilcolinesterasa (ACE) y butirilcolinesterasa (BuCE). El derivado con un anillo de piperidina unido al azaestilbeno por un espaciador de siete carbonos (12b) fue el inhibidor más potente para ACE. Asimismo mostró inhibición significativa de ACE en células de neuroblastoma humanas SH-SY5Y, sin efecto citotóxico. A su vez, el estudio cinético enzimático mostró una inhibición no competitiva y el modelado molecular reveló interacciones con el sitio activo catalítico así como también con el sitio aniónico periférico de ACE. El estudio de dinámica molecular de los derivados con piperidina y linker de seis (11b), siete (12b) y ocho carbonos (13b) mostró que la conformación que adopta 12b permite interacciones más efectivas que los otros análogos, justificando así su mayor potencia de inhibición observada experimentalmente. Por otro lado, el derivado con pirrolidina y un espaciador de siete carbonos (12a) fue el inhibidor más potente para BuCE. Continuando con la misma estrategia de diseño, en el capítulo IV se obtuvieron 14 análogos de azobenceno mediante la síntesis asistida por microondas comprendida en dos etapas, en un tiempo total no superior a 40 minutos. Todos los compuestos resultaron potentes inhibidores de ACE. El derivado de azobenceno disustituído con dos linkers de cinco carbonos unidos a un anillo de piperidina, 21b, fue el inhibidor más potente. Mediante exposición con luz UV, se logró la fotoisomerización E→Z de los derivados 18b y 20b evaluada por espectroscopia UV-Vis y RMN de 1H. Ambos, mostraron una mayor potencia de inhibición enzimática en su configuración Z comparada con la E. De esta manera, el mejor resultado de IC50 de toda la serie (E y Z) se obtuvo para el isómero Z del compuesto 20b. En el capítulo V, mediante síntesis asistida por microondas se obtuvieron 6 nuevos compuestos híbridos de teofilina y pirrolidina, con una cadena hidrocarbonada de 3 a 8 carbonos. El derivado 27a con un linker de siete carbonos fue el inhibidor más potente de la serie. Por otro lado, 25a, que presenta un espaciador de cinco carbonos, activó el receptor muscular de acetilcolina (nAChR) a concentraciones muy bajas (de 0,01 pM) y a la concentración más alta probada (30 μM) se observó una disminución en la duración media de apertura, lo que sugiere que este compuesto actúa como un agonista del receptor y también un bloqueador de canal abierto. Por último, la síntesis one pot de nuevas bislofinas es abordada en el capítulo VI, la cual se optimizó mediante calentamiento por microondas logrando una importante disminución de los tiempo de reacción y evitando el uso del ácido de Lewis como catalizador. Tres de los seis compuestos sintetizados resultaron inhibidores selectivos de BuCE. Por otro lado, de la serie completa de los derivados de bislofina evaluados como inhibidores enzimáticos, el compuesto IIIB fue el inhibidor selectivo más potente de BuCE, a escala nanomolar. El estudio cinético enzimático de este mostró una inhibición no competitiva. / This work was based on the design and synthesis of bioactive compounds, inspired by natural products structures, with the aim of contributing to the discovery of new multifunctional cholinesterase inhibitors, with potential application in the Alzheimer’s disease therapy. Initially, in chapter III this thesis describes the optimization of the synthesis of azaestilbene derivatives, by microwave-assisted reactions. A spacer and a tertiary amine were incorporated into a structure analogous to azaresveratrol, a compound of known biological activity. Nineteen new compounds were obtained, all of them were able to inhibit both acetyl- and butyrylcholinesterase. For acetylcholinesterase, the best inhibition was achieved with the derivative 12b with a seven-carbon spacer connecting the amine with the azastilbene portion. In addition, compound 12b elicited significant inhibition of acetylcholinesterase activity in SH-SY5Y human neuroblastoma cells, with no cytotoxicity. In turn, the enzymatic kinetic study showed non-competitive inhibition and the molecular modeling revealed interactions with the catalytic active site as well as with the peripheral anionic site of the enzyme. The molecular dynamic study of the derivatives with piperidine and linker of six (11b), seven (12b) and eight carbons (13b) was carried out. This study showed that the conformation that 12b adopts allows more effective interactions than the other analogues. In this way, the greater inhibition efficiency observed experimentally for 12b, is justified. On the other hand, the pyrrolidine derivative with a seven-carbon spacer (12a) was the most potent inhibitor for butyrylcholinesterase. Continuing with the same design strategy, in Chapter IV, fourteen new azobenzene analogs were obtained by microwave-assisted synthesis. This synthesis was based on two steps, with a total reaction time no longer than 40 minutes. All the derivatives were potent acetylcholinesterase inhibitors. The azobenzene derivative disubstituted with two five-carbon linkers attached to a piperidine ring, 21b, was the most potent inhibitor. Upon UV-light irradiation, isomerization from the E-form to the Z-form of derivatives 18b and 20b was achieved. The E-Z isomerization was corroborated by UV−Vis spectroscopy and 1H NMR spectra. Both compounds showed a higher potency of enzyme inhibition in their Z configuration compared to E. Thus, the best IC50 value of the entire series (E and Z) corresponds to the Z isomer of compound 20b. Chapter V details the microwave-assisted synthesis of five new hybrid compounds of theophylline and pyrrolidine, with a hydrocarbon chain of three to seven carbons. Derivative 27a with a seven-carbon linker was the most powerful inhibitor in the series. On the other hand, 25a, which has a five-carbon spacer, activated muscle nAChR at an extremely low concentrations (from 0.01 pM). At the highest tested concentration (30 μM) a decrease in the mean open duration was observed, which suggest that 25a also acts as an open channel blocker. Finally, the one-pot synthesis of new bislofinas is addressed in chapter VI. This synthesis was optimized by microwave heating, getting a significant reduction in reaction time and avoiding the use of Lewis acid as a catalyst. Three of the six synthesized compounds were selective butyrylcholinesterase inhibitors. On the other hand, compound IIIB was the most potent selective butyrylcholinesterase inhibitor in the whole series evaluated, with an IC50 value in the nanomolar scale. Its enzymatic kinetic study showed non-competitive inhibition

Unidad de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico / No autorizada por el autor para ser publicada a texto completo en el Portal de Tesis Electrónicas / Actualmente no existe un único criterio de designación para el concepto de “enfermedad rara”, sin embargo, a nivel internacional se suele aceptar que para catalogar así a una determinada afección, ésta debe tener una prevalencia de, a lo sumo, 5 pacientes por cada 10.000 habitantes en la región y poner en riesgo la vida de quienes la padecen. Los medicamentos destinados a prevenir, diagnosticar y/o tratar este tipo de enfermedades son conocidos como “drogas huérfanas” o “medicamentos huérfanos”, porque probablemente en condiciones normales de mercado no les resulta rentable a las industrias farmacéuticas comercializarlos, debido a que el pequeño número de pacientes que lo utilizarían podrían no proporcionarles las ganancias suficientes para recuperar el capital invertido en su desarrollo. Por esta razón es que algunos países han legislado con respecto a esta materia, y han acordado dotar de ciertos beneficios a las industrias farmacéuticas que investiguen, descubran y desarrollen nuevas drogas huérfanas para sus mercados, tales como financiamiento y/o subsidio por parte del Estado, asistencia regulatoria, exención de tasas y/o exclusividad comercial, entre otros. A diferencia de otros países, Chile actualmente no cuenta con una política nacional de enfermedades raras que permita la obtención de registros sanitarios de drogas huérfanas a través de un procedimiento especial, por lo que GlaxoSmithKline solicitó al Instituto de Salud Pública (ISP) el registro sanitario de su medicamento antagonista del receptor de endotelina, clasificado según criterios internacionales como droga huérfana, a través del procedimiento ordinario establecido en el Decreto Supremo Nº 3/2010 del Ministerio de Salud que regula los productos farmacéuticos. Para obtener este registro se debió poner a disposición de esta autoridad sanitaria todos los antecedentes necesarios para avalar la calidad, seguridad y eficacia del medicamento; pagar los aranceles correspondientes a las diferentes fases del proceso; y aprobar cada una de ellas satisfactoriamente. La solicitud de registro sanitario fue evaluada por el ISP, y dicho registro fue concedido a través de la respectiva resolución exenta

The plant Garcinia gardneriana (Planch. & Triana) Zappi, popularly known in Brazil as "bacupari" has traditionally been used for various types of inflammatory diseases and the evaluation of their chemical composition, mainly of leaves, has resulted in biflavonoids as major compounds. These phenolic compounds have shown anti-inflammatory activity validating the popular use of the plant. In this work was isolated from dried branches of Garcinia gardneriana the biflavonoids: morelloflavone, that is an naringenin covalently linked to luteolin, Gb-2a which is an naringenin linked to eriodictyol and Gb-2a- 7-O-glucose. These compounds have been previously evaluated in various activities such as anti-inflammatory and anti-antioxidants but there is no report of its activity as enzymatic inhibitors. However, the monomers that form it, have been evaluated in the inhibition of aromatase and antidepressant activity with positive outcome, which commonly are used MAO-A inhibitors. In the isolation process were also founded terpenoid compounds as lupeol and friedelin The isolated and purified biflavonoids were used to evaluate enzyme inhibition "in vitro" in monoamine oxidases (MAO-A MAO-B) and aromatase. The compounds showed a positive response even of IC50 5,47 μM and 1,35 μM for MAO-A inhibition of and aromatase enzyme respectively; discovering a way for a new proposal to link both enzymes for treatment of hormone-dependent cancers and anxiety and depression disorders. / La planta Garcinia gardneriana (Planch. & Triana) Zappi, popularmente conocida en Brasil como "bacupari" ha sido tradicionalmente usada para varios tipos de enfermedades inflamatorias y la evaluación de su composición química, principalmente de las hojas, ha resultado en biflavonoides como compuestos mayoritarios. Estos compuestos fenólicos han demostrado actividad anti-inflamatória validando el uso popular de la planta. En este trabajo se asilaron a partir de tallos secos de la Garcinia gardneriana los biflavonoides: moreloflavona, que consiste en una naringenina unida covalentemente a luteolina, Gb-2a que es un compuesto que consiste en una naringenina unida a un eriodictyol y Gb-2a-7-O-glucose. Estos compuestos ya han sido previamente evaluados en diversas actividades como anti inflamatorios y anti antioxidantes pero no se tiene reporte de su actividad como inhibidores enzimáticos. Sin embargo, los monomeros que los conforman han sido evaluados en la inhibición de la aromatasa y con resultados positivos como en la actividad antidepresiva, para la cual comúnmente son usados los inibidores de MAO-A. En el proceso de aislamiento también fueron encontrados compuestos terpenoides como lupeol y friedelina. Los biflavonoides aislados y purificados se usaron para evaluar la inhibición enzimática “in vitro” en monoaminooxidasas (MAO-A, MAO-B) y aromatasa. Los compuestos presentaron una respuesta positiva calculada con IC50 de hasta 5,47 μM y 1,35 μM para la inhibición de las enzimas MAO-A y aromatasa respectivamente, abriendo el camino a una nueva propuesta de relacionar estas dos enzimas para tratamiento de cánceres hormonodependientes y transtornos de ansiedad y depresión.

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A pesar del continuo progreso en quimioterapia, radioterapia y cirugía, las tasas de sobrevida para pacientes con tumores sólidos son aun insatisfactorias. Investigaciones recientes han mostrado áreas moleculares más específicas que son potenciales blancos para la intervención terapéutica: en particular, las señales intracelulares de los factores de crecimiento que regulan la proliferación celular. Un desequilibrio en esas vías intracelulares puede resultar en proliferación celular descontrolada llevando al desarrollo de tumores. EGFR es un excelente “target” para la terapia del cáncer debido a que es el receptor mas frecuentemente expresado en una variedad de canceres. De manera importante, en ciertos tumores, la expresión de EGFR esta asociada con enfermedad avanzada y pobre pronostico clínico. Esta asociación ha llevado al desarrollo de un número de terapias innovadoras que hacen blanco en este factor de crecimiento y sus vías intracelulares activadas.

The plant Garcinia gardneriana (Planch. & Triana) Zappi, popularly known in Brazil as "bacupari" has traditionally been used for various types of inflammatory diseases and the evaluation of their chemical composition, mainly of leaves, has resulted in biflavonoids as major compounds. These phenolic compounds have shown anti-inflammatory activity validating the popular use of the plant. In this work was isolated from dried branches of Garcinia gardneriana the biflavonoids: morelloflavone, that is an naringenin covalently linked to luteolin, Gb-2a which is an naringenin linked to eriodictyol and Gb-2a- 7-O-glucose. These compounds have been previously evaluated in various activities such as anti-inflammatory and anti-antioxidants but there is no report of its activity as enzymatic inhibitors. However, the monomers that form it, have been evaluated in the inhibition of aromatase and antidepressant activity with positive outcome, which commonly are used MAO-A inhibitors. In the isolation process were also founded terpenoid compounds as lupeol and friedelin The isolated and purified biflavonoids were used to evaluate enzyme inhibition "in vitro" in monoamine oxidases (MAO-A MAO-B) and aromatase. The compounds showed a positive response even of IC50 5,47 μM and 1,35 μM for MAO-A inhibition of and aromatase enzyme respectively; discovering a way for a new proposal to link both enzymes for treatment of hormone-dependent cancers and anxiety and depression disorders. / La planta Garcinia gardneriana (Planch. & Triana) Zappi, popularmente conocida en Brasil como "bacupari" ha sido tradicionalmente usada para varios tipos de enfermedades inflamatorias y la evaluación de su composición química, principalmente de las hojas, ha resultado en biflavonoides como compuestos mayoritarios. Estos compuestos fenólicos han demostrado actividad anti-inflamatória validando el uso popular de la planta. En este trabajo se asilaron a partir de tallos secos de la Garcinia gardneriana los biflavonoides: moreloflavona, que consiste en una naringenina unida covalentemente a luteolina, Gb-2a que es un compuesto que consiste en una naringenina unida a un eriodictyol y Gb-2a-7-O-glucose. Estos compuestos ya han sido previamente evaluados en diversas actividades como anti inflamatorios y anti antioxidantes pero no se tiene reporte de su actividad como inhibidores enzimáticos. Sin embargo, los monomeros que los conforman han sido evaluados en la inhibición de la aromatasa y con resultados positivos como en la actividad antidepresiva, para la cual comúnmente son usados los inibidores de MAO-A. En el proceso de aislamiento también fueron encontrados compuestos terpenoides como lupeol y friedelina. Los biflavonoides aislados y purificados se usaron para evaluar la inhibición enzimática “in vitro” en monoaminooxidasas (MAO-A, MAO-B) y aromatasa. Los compuestos presentaron una respuesta positiva calculada con IC50 de hasta 5,47 μM y 1,35 μM para la inhibición de las enzimas MAO-A y aromatasa respectivamente, abriendo el camino a una nueva propuesta de relacionar estas dos enzimas para tratamiento de cánceres hormonodependientes y transtornos de ansiedad y depresión.

The plant Garcinia gardneriana (Planch. & Triana) Zappi, popularly known in Brazil as "bacupari" has traditionally been used for various types of inflammatory diseases and the evaluation of their chemical composition, mainly of leaves, has resulted in biflavonoids as major compounds. These phenolic compounds have shown anti-inflammatory activity validating the popular use of the plant. In this work was isolated from dried branches of Garcinia gardneriana the biflavonoids: morelloflavone, that is an naringenin covalently linked to luteolin, Gb-2a which is an naringenin linked to eriodictyol and Gb-2a- 7-O-glucose. These compounds have been previously evaluated in various activities such as anti-inflammatory and anti-antioxidants but there is no report of its activity as enzymatic inhibitors. However, the monomers that form it, have been evaluated in the inhibition of aromatase and antidepressant activity with positive outcome, which commonly are used MAO-A inhibitors. In the isolation process were also founded terpenoid compounds as lupeol and friedelin The isolated and purified biflavonoids were used to evaluate enzyme inhibition "in vitro" in monoamine oxidases (MAO-A MAO-B) and aromatase. The compounds showed a positive response even of IC50 5,47 μM and 1,35 μM for MAO-A inhibition of and aromatase enzyme respectively; discovering a way for a new proposal to link both enzymes for treatment of hormone-dependent cancers and anxiety and depression disorders. / La planta Garcinia gardneriana (Planch. & Triana) Zappi, popularmente conocida en Brasil como "bacupari" ha sido tradicionalmente usada para varios tipos de enfermedades inflamatorias y la evaluación de su composición química, principalmente de las hojas, ha resultado en biflavonoides como compuestos mayoritarios. Estos compuestos fenólicos han demostrado actividad anti-inflamatória validando el uso popular de la planta. En este trabajo se asilaron a partir de tallos secos de la Garcinia gardneriana los biflavonoides: moreloflavona, que consiste en una naringenina unida covalentemente a luteolina, Gb-2a que es un compuesto que consiste en una naringenina unida a un eriodictyol y Gb-2a-7-O-glucose. Estos compuestos ya han sido previamente evaluados en diversas actividades como anti inflamatorios y anti antioxidantes pero no se tiene reporte de su actividad como inhibidores enzimáticos. Sin embargo, los monomeros que los conforman han sido evaluados en la inhibición de la aromatasa y con resultados positivos como en la actividad antidepresiva, para la cual comúnmente son usados los inibidores de MAO-A. En el proceso de aislamiento también fueron encontrados compuestos terpenoides como lupeol y friedelina. Los biflavonoides aislados y purificados se usaron para evaluar la inhibición enzimática “in vitro” en monoaminooxidasas (MAO-A, MAO-B) y aromatasa. Los compuestos presentaron una respuesta positiva calculada con IC50 de hasta 5,47 μM y 1,35 μM para la inhibición de las enzimas MAO-A y aromatasa respectivamente, abriendo el camino a una nueva propuesta de relacionar estas dos enzimas para tratamiento de cánceres hormonodependientes y transtornos de ansiedad y depresión.

Determina las condiciones de aplicación que afectan los niveles de colinesterasa, y que generan un riesgo neurotóxico por el uso de carbamatos y organofosforados a los agricultores de tomate. La técnica que se utiliza es la espectrofotometría. El examen de colinesterasa se realiza a los pacientes expuestos a los insecticidas organofosforados y carbamatos. Se utiliza el método cinético - espectrofotométrico (405 nm a 37°C). Mediante análisis factorial, prueba de Kruskal Wallis y de correlaciones se determina las variables que más afectan los niveles de colinesterasa. Para el análisis neurotoxicologica se aplica el cuestionario Psychologisch Neurologischeò Fragebogen (PNF) a cada uno de los agricultores, lo que nos permite determinar la presencia de alteraciones clínicas, conductuales y neurológicas de los trabajadores expuestos a plaguicidas organofosforados y carbamatos. / Tesis

Vibrio cholerae y Shigella dysenteriae, entre otras bacterias enteropatógenas, causan enfermedades gastrointestinales, la segunda causa de muerte en niños menores de cinco años en el mundo. Los sucesos de gastroenteritis que desencadenan dichos microorganismos son mediados por la acción molecular de toxinas secretadas de tipo AB, CTX y STX, respectivamente para V, cholerae y S, dysenteriae. Dichas toxinas causan desbalances iónicos y lisis celular, generando deshidratación, pérdida de electrolitos y nutrientes. El correcto funcionamiento de ambas toxinas requiere una relación estricta de cinco subunidades de la proteína B por cada subunidad A, sin embargo, los mecanismos moleculares que regulan la expresión y mantienen la relación 5:1 entre las subunidades son poco entendidos. El objetivo de este estudio es analizar la regulación post transcripcional de las toxinas CTX y STX mediante aproximaciones experimentales in vitro y usando reacciones libres de células, en un entorno altamente puro y controlado. Nuestros resultados in vitro indican que CTX se expresa de manera más eficiente que STX. En el caso de CTX, la subunidad B tuvo mayor expresión que A, con una relación cercana a 5:1 como visto en estudios previos realizados in vivo. Por el contrario, STX fue sintetizada con baja eficiencia independientemente de la presencia o ausencia de la región codificantes para STXA, desviándose notablemente de una relación activa de 5 B por cada subunidad A. La adición de ppGpp, molécula implicada en la respuesta al estrés en bacterias, resultó en una ligera disminución de la expresión de ambas toxinas. En conclusión, nuestros resultados indican que la relación de 5 a 1 entre B y A de las toxinas CTX de V. cholerae es regulada durante la síntesis de proteínas. Por el contrario, la ausencia de regulación a nivel transcripcional o traduccional de STX del presente estudio in vitro, fue también observada en estudios in vivo, indicando que en la célula existen otros factores que podrían modular la estequiometría de síntesis. Si bien ambas toxinas, CTX y STX, permanecen a la misma familia de exotoxinas, los resultados del presente estudio indican que la regulación de su expresión difiere ampliamente entre ellas. Los resultados aquí reportados brindan nuevas perspectivas para el desarrollo de moléculas inhibidoras, con especial énfasis en perturbar el ribosoma de V, cholerae, para un desbalance en la síntesis de la toxina CTX y así reducir la patogenicidad de la bacteria. / Vibrio cholerae and Shigella dysenteriae, among other enteropathogenic bacteria, cause gastrointestinal diseases, the second cause of death in children under five years of age in the world. The events of gastroenteritis that trigger these microorganisms are mediated by the molecular action of secreted toxins of type AB, CTX and STX, respectively for V. cholerae and S. dysenteriae. These toxins cause ionic imbalances and cell lysis, generating dehydration, loss of electrolytes and nutrients. The correct functioning of both toxins requires a strict relationship of five subunits of protein B for each subunit A, however, the molecular mechanisms that regulate expression and maintain the 5: 1 ratio between the subunits are poorly understood. The objective of this study is to analyze the post transcriptional regulation of CTX and STX toxins by in vitro experimental approaches and using cell-free reactions, in a highly pure and controlled environment. Our in vitro results indicate that CTX is expressed more efficiently than STX. In the case of CTX, subunit B had greater expression than A, with a ratio close to 5: 1 as seen in previous studies conducted in vivo. In contrast, STX was synthesized with low efficiency regardless of the presence or absence of the region coding for STXA, deviating markedly from an active ratio of 5 B for each subunit A. The addition of ppGpp, a molecule involved in the stress response in bacteria, resulted in a slight decrease in the expression of both toxins. In conclusion, our results indicate that the ratio of 5 to 1 between B and A of CTX toxins of V. cholerae is regulated during protein synthesis. On the contrary, the absence of transcriptional or transcriptional STX regulation of the present in vitro study was also observed in in vivo studies, indicating that the cell may harbor other factors that could modulate the synthesis stoichiometry. Although both toxins, CTX and STX, belong to the same family of exotoxins, the results of the present study indicate that the regulation of their expression differs widely. The results reported here provide new perspectives for the development of inhibitory molecules, with special emphasis on disturbing the ribosome of V. cholerae, to provoke an imbalance in the synthesis of CTX toxin and thus to reduce the pathogenicity of the bacteria. / Tesis