Cette thèse a pour but de démontrer l'ensemble des différentes techniques de séparation de protéines que nous avons dû mettre au point pour obtenir une fraction très hautement purifiée d'inhibine à partir de liquide folliculaire de porc. Utilisant le système des cellules adénohypophysaires de rat en culture primaire comme principal essai biologique et en mesurant par radioimmunoessai (RIA) la baisse de sécrétion spécifique de la FSH sur des niveaux de base, nous avons pu déterminer de façon précise et reproductible l'activité biologique de l'inhibine contenue dans chacune des différentes fractions que nous avons obtenues au cours des nombreuses étapes de purification. Exploitant tour à tour chacune des propriétés physicochimiques caractéristiques des protéines biologiques en solution (solubilité, charge électrique, hydrophobicité, forme et masse moléculaire, groupements fonctionnels), nous avons pu purifier un ensemble homogène de glycoprotéines hydrophobes possédant une activité inhibine très élevée. Ainsi, par différentes méthodes d'extraction, d'adsorption spécifique sur chromatographie d'affinité, de séparation électrocinétique et de chromatographie d'hydrophobicité, nous avons obtenu une fraction 485 fois purifiée par rapport au matériel de départ, avec une activité spécifique de l'ordre de 100,000 U/mg. Ainsi, seulement 10 ng/ml d'inhibine purifiée sont nécessaires pour abaisser de 50% la sécrétion de base de FSH, comparativement à un peu moins de 5.0 ug/ml pour le liquide folliculaire initial. L'inhibine ainsi purifiée possède un poids moléculaire d'environ 140,000 daltons et un point isoélectrique de 5.5-5.6. Puis, dans une seconde partie, nous avons abordé l'étude du mécanisme d'action de l'inhibine au niveau hypophysaire ainsi que de ses interactions avec les stéroïdes sexuels et la neurohormone LHRH sur la réponse de LH et de FSH aussi bien sur des niveaux de base que sur des niveaux stimulés par LHRH. Comme l'inhibine peut abaisser la sécrétion de la FSH de façons pécifique dans des conditions de base, il devenait intéressant d'observer l'implication que pouvaient avoir les différents stéroïdes sexuels sur cet effet inhibiteur. Ainsi, nous avons démontré qu'en aucun cas, ni... / Montréal Trigonix inc. 2018

L’objectif de cette thèse était d’identifier une mutation nommée FecLL affectant le nombre d’ovulations et la prolificité des brebis de race Lacaune et d’en analyser les conséquences physiologiques. En associant des approches de génétique et de biologie fonctionnelle à haut débit telles que le séquençage Roche 454 et la spectrométrie de masse, j’ai mis en évidence que la mutation FecLL est un haplotype de 2 SNPs présents dans des régions non-codantes d’un locus de 194,6kb porté par le chromosome 11 ovin. Cette mutation induit la surexpression ovarienne et l’activité du gène B4GALNT2 (beta-1,4-N-acetyl-galactosaminyl transferase 2) codant une enzyme de glycosylation capable de transférer un sucre N-acétyl-galactosamine sur des glycoprotéines cibles, dont l’inhibine A, une hormone importante pour la fonction ovarienne. Les conséquences de cette glycosylation atypique sont une altération de la production d’inhibine A chez les brebis Lacaune mutées, proposée comme mécanisme initiateur de leur hyper-prolificité. / The aim of this thesis was to identify a mutation called FecLL affecting ovulation rate and prolificacy of Lacaune sheep and to study its physiological consequences. By combining genetics and functional highthroughput biology approaches such as Roche 454 sequencing and mass spectrometry, I evidenced the FecLL mutation as a 2 SNP haplotype present in non-coding regions of a 194.6 kb locus on ovine chromosome 11. This mutation induces ectopic overexpression and ovarian activity of the B4GALNT2 (beta-1,4-N-acetylgalactosaminyl transferase 2) gene encoding a glycosylation enzyme capable of transferring a N-acetylgalactosamine sugar on target glycoproteins. Among those targets, I highlighted inhibin A, an important hormone in ovarian function. The consequences of this atypical glycosylation lead to impaired production of inhibin A in Lacaune mutated sheep proposed as an initiator mechanism of their hyper- prolificacy.

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