O presente trabalho apresenta resultados de simulações numéricas de uma célula TEM assimétrica aberta com o objetivo de otimizar seu desempenho. Entre as otimizações, é investigado o uso de fendas resistivas para estender a faixa de frequência de operação da célula. Além disso, otimiza-se o casamento de impedância entre o conector coaxial e a célula TEM. São apresentados os resultados medidos da transição otimizada em laboratório. Foi construída, também, uma célula TEM assimétrica e seu desempenho foi verificado em laboratório, obtendo-se uma perda de retorno maior que 10 dB na faixa de operação (30 MHz a 3 GHz). / This work presents numerical simulations of an open asymmetric TEM cell in order to optimize its performance. Among the optimizations, the use of resistive slots to increase the bandwidth of the TEM cell is investigated. Furthermore, the transition between the coaxial connector and the TEM cell is also optimized. Measurements of this optimized transition were performed in laboratory validating the simulations. A prototype TEM cell was built and its return loss was verified to be above 10 dB over its entire band of operation (30 MHz 3 GHz).

Em face da crescente dependência e utilização dos sistemas elétricos e eletrônicos nos veículos automotores modernos, ao se considerar os níveis de imunidade destes sistemas e a ampla variedade de fenômenos eletromagnéticos presentes nas cidades, deve-se destacar a importância da análise da influência do ambiente eletromagnético urbano nos estudos de compatibilidade eletromagnética (CEM) destes equipamentos. Diante deste cenário e devido à característica de mobilidade dos veículos automotores, este trabalho ressalta a importância da consideração da influência do ambiente eletromagnético (EM) de grandes centros urbanos na metodologia de análise de CEM em veículos e seus equipamentos embarcados. Assim, definiu-se como ambiente típico aquele relacionado às principais regiões urbanas do Brasil, com ênfase naquelas locali-zadas no Estado de São Paulo, selecionadas em função da severidade dos campos EM, tanto com relação à sua intensidade quanto à diversidade de fenômenos EM presentes. Neste trabalho são apresentados resultados práticos oriundos de diversas medi-ções, abrangendo regiões com características que variam de áreas residenciais e densamente povoadas, com grandes atividades comerciais e industriais, a aquelas relacionadas à áreas específicas e situadas na proximidade de linhas de transmissão de energia elétrica, antenas de rádio difusão e televisões, estações rádio base, regiões próximas a aeroportos, etc. Ressalta-se que os resultados apresentados abrangem a maioria dos eventos EM capazes de perturbar a eletrônica embarcada, proporcionando uma comparação das condições do ambiente eletromagnético brasileiro com as de outros países. Menciona-se que estes resultados são considerados de grande utilidade para o estabelecimento, melhoria e adequação das metodologias e regulamentações relaciona-das às avaliações de CEM aplicáveis à indústria automobilística brasileira. Uma análise crítica destes resultados é apresentada, bem como algumas reco-mendações relacionadas à análise de CEM em sistemas embarcados. / Facing the dependency and diversity of applications of the on-board electronics in the modern vehicles and taking into account their immunity level as well as the vari-ety of electromagnetic (EM) phenomena at the present time in the cities, the analysis of the influences from the urban electromagnetic environment have to be stressed in the electromagnetic compatibility (EMC) studies of those devices. Based on this picture and due to the mobility characteristics of the automobiles, this work emphasises the importance of the influences of EM environment of the urban areas in the methodology for EMC analysis of automobiles and its electronics equip-ment. Thus, the typical environment was defined as the one related to the main urban areas in Brazil, emphasising those located in São Paulo State and taking into considera-tion the intensity and variety of the EM sources. Results of many practical measurements, including those resultants of regions with high density of population, with commercial and industrial activities, closer to transmission lines and into substations, near to TV and radio broadcasting antennas, cellular radio base stations, airports, etc. The presented results embrace the main EM events that are capable to cause disturbances in the on-board electronics. These data enables a comparison of the brazilian EM environmental conditions with the analyses already performed in other Countries. By the way, the presented results are taken as useful for establishing, improving and adjusting the methodologies and regulations of EMC procedures that are applicable for the automotive industries in Brazil. A critical analysis of those results is presented as well as some recommendations related to the EMC analysis of the on-board devices.

Made available in DSpace on 2014-06-12T17:40:54Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo7085_1.pdf: 5617751 bytes, checksum: 13b747395cadea3f73a525d5b1fd2004 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / A digitalização de documentos originariamente em papel é a maneira mais eficiente que dispomos hoje como meio de preservar o seu conteúdo para as gerações futuras, bem como possibilitar o acesso e disseminação às informações via redes de computadores. A natureza do documento impõe técnicas diferentes para a digitalização e armazenagem destes. Em geral, objetivando possibilidades futuras, os documentos são digitalizados em cores (true color) e alta resolução (chegando hoje até mais de 1.000 pontos por polegada). Visando o acesso via redes, tais documentos são geralmente disponibilizados em sua versão monocromática, com 200 dpi de resolução e comprimidos em formato conveniente, geralmente TIFF (G4). Tal processo de diminuição do número de cores de documentos, no caso de conversão para monocromático conhecido como binarização, possui dificuldades para ser efetuado de maneira automática, caso o documento tenha sido escrito ou impresso em ambos os lados de papel translúcido, situação conhecida como interferência frenteverso. Os algoritmos de binarização hoje existentes nas ferramentas comerciais geram imagem onde as porções referentes à tinta na frente e no verso ficam sobrepostas, impossibilitando a leitura da imagem obtida. Embora tal problema tenha sido apresentado há mais de uma década, ainda hoje busca-se soluções melhores para ele. No caso de documentos históricos, a complexidade do problema é ainda maior, uma vez que há o escurecimento causado pelo envelhecimento do papel como fator complicador. Esta dissertação propõe um novo algoritmo baseado na entropia do histograma da imagem para a binarização da imagem de documentos históricos com interferência frente-verso. O algoritmo proposto é comparado com os seus antecessores descritos na literatura, gerando imagens de melhor qualidade que os seus congêneres

Orientador: Nobuo Oki / Banca: Cláudio Kitano / Banca: Márcio Barbosa Lucks / Resumo: Referências de tensão integradas com baixa sensibilidade à temperatura, tensão de a- limentação e eventos transitórios são componentes críticos na maioria dos circuitos integra- dos. Neste trabalho, além das restrições costumeiras, foi adicionada a preocupação com a in- terferência eletromagnética a qual vem ganhando muita importância devido a crescente polui- ção eletromagnética no ambiente. Assim, neste trabalho, propõe-se o projeto de uma referên- cia de tensão tipo bandgap com baixa susceptibilidade a interferência eletromagnética (EMI). O projeto deste circuito baseia-se na soma de duas correntes (referência de tensão baseada em corrente), uma com coeficiente complementar a temperatura absoluta (CTAT) e outra com coeficiente proporcional à temperatura absoluta (PTAT), aplicada sobre um resistor. Neste projeto, a susceptibilidade a interferência eletromagnética de uma referência de tensão band- gap é estudada por meio de simulação. Projetada para ser fabricada com a tecnologia CMOS 0,35 μm da AMS (Autriamicrosystems), a referência forneceu uma tensão de referência está- vel de 1,354 V em sua saída operando normalmente na faixa de temperatura de -40 a 150oC. Quando submetido à EMI, o circuito exibiu apenas 24,7 mV (quando filtros capacitivos são incluído) de offset induzido, para um sinal de interferência variando de 150 kHz a 1 GHz / Abstract: Integrated voltage references with low sensitivity to temperature, supply voltage and transient events are critical requirements in the most of integrated circuits. In this work, be- sides the usual restrictions, was added to concern with electromagnetic interference which is gaining much importance due to increasing electromagnetic pollution on the environment. So, in this work, proposes the design of a bandgap voltage reference with low susceptibility to electromagnetic interference (EMI) is proposed. The design of the circuit is based on the sum of two currents (current-based voltage reference), one with coefficient complementary to ab- solute temperature (CTAT) and the other with coefficient proportional to absolute temperature (PTAT) into a resistor. In this work, the susceptibility to electromagnetic interference in a bandgap voltage reference is evaluated by simulations. Designed to be implemented in AMS (Autriamicrosystems) 0,35 μm CMOS process, the reference provides a stable voltage refer- ence equal to 1,354 V in the output working properly in the temperature range of -40 to 150oC. When EMI is injected, the circuit exhibits only 24,7 mV (when capacitive filters are included) of induced offset, for an interference signal varying in the frequency range of 150 kHz to 1 GHz / Mestre

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-04-28T13:52:04Z No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:28:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-07-25T19:32:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-25T19:32:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Rosalina Coelho Jácome.pdf: 2670677 bytes, checksum: 66da53779dd052d3248ca10a3e1d7a9a (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / The gene therapy has emerged as a promising tool to handle, replace, remove or introduce genes into an organism for treatment of disease. Among the nucleic acids with therapeutic potential are the small interference molecules (siRNA) capable of causing the removal of messenger RNAs (mRNA) or to silence genes. The main challenge is the placement of these molecules for efficient transfection into target cells. The microemulsions have been widely used as carriers for topical drugs. They are colloidal systems with high solubilizing capacity and ability to control the rate of release of active molecules. Therefore, this study developed microemulsions containing siRNA for future topical application as a nanocosmetic. Two pseudoternary phase diagram were obtained using an aqueous phase of propylene glycol and water, Span 80 and Tween 80 as the mixture of surfactants and the canola oil as the oil phase. One received 5% polyethyleneimine (PEI) to aqueous phase to the synthesis of a polymeric system. The selected formulations were evaluated for conductivity, refractive index (RI), transmission electron microscopy (TEM), differential scanning calorimetry (DSC), droplet size, X-ray diffraction (XRD), polarized light microscopy (PLM) and stability, showing microemulsions of the type W/O. Furthermore, were performed studies of encapsulation efficiency and release of siRNA, which showed a great performance of the microemulsions as carriers of the interfering molecules. The presence of PEI provided strong electrostatic interaction with polynucleotides in order to not favor his release and reduced droplet size. The cytotoxicity assay demonstrated the cytoprotective effect of the formulations applied. The systems behaved as Newtonian fluids and low viscosity which facilitates topical application. Therefore, microemulsions are promising vehicles of siRNA for the purpose of skin therapy, with possible technological and socio-economic impact, given that this methodology has not been applied in the field of cosmetics. / A terapia gênica surgiu como uma ferramenta promissora a fim de manipular, substituir, suprimir ou introduzir genes em um organismo para o tratamento de doenças. Dentre os ácidos nucleicos com potencial terapêutico estão as pequenas moléculas interferentes (siRNA), capazes de ocasionar a eliminação de RNAs mensageiros (RNAm) anômalos ou silenciar genes. O principal desafio é a veiculação dessas moléculas para eficiente transfecção em células-alvo. As microemulsões têm sido amplamente utilizadas como carreadores de fármacos de uso tópico. Elas são sistemas coloidais com alta capacidade de solubilização e controle de liberação de moléculas ativas. Dessa forma, o presente trabalho desenvolveu microemulsões contendo siRNA para futura aplicação tópica como um nanocosmético. Dois diagramas de fases pseudoternário foram obtidos utilizando uma fase aquosa de propilenoglicol e água, Span 80 e Tween 80 como a mistura de tensoativos e o óleo de canola como a fase oleosa. Um deles recebeu polietilenoimina (PEI) 5% à fase aquosa para síntese de um sistema polimérico. As formulações selecionadas foram avaliadas quanto à condutividade, índice de refração (IR), microscopia eletrônica de transmissão (MET), calorimetria exploratória diferencial (DSC), tamanho de gotículas, difração de raios-X (DRX), microscopia de luz polarizada (MLP) e estabilidade, evidenciando ser microemulsões do tipo A/O. Além disso, foram realizados estudos de eficiência de encapsulação e liberação de siRNA, que demonstraram um ótimo desempenho das microemulsões como carreadores das moléculas interferentes. A presença do PEI proporcionou forte interação eletrostática com os polinucleotídeos de forma a não favorecer sua liberação, além de reduzir o tamanho das gotículas. O ensaio de citotoxicidade comprovou o efeito citoprotetor das formulações aplicadas. Os sistemas se comportaram como fluidos Newtonianos e de baixa viscosidade, o que favorece a aplicação tópica. Sendo assim, as microemulsões são veículos promissores de siRNA para fins de terapia cutânea, com possível impacto tecnológico e sócio-econômico, uma vez que esta metodologia ainda não foi aplicada na área dos cosméticos.

O presente trabalho apresenta resultados de simulações numéricas de uma célula TEM assimétrica aberta com o objetivo de otimizar seu desempenho. Entre as otimizações, é investigado o uso de fendas resistivas para estender a faixa de frequência de operação da célula. Além disso, otimiza-se o casamento de impedância entre o conector coaxial e a célula TEM. São apresentados os resultados medidos da transição otimizada em laboratório. Foi construída, também, uma célula TEM assimétrica e seu desempenho foi verificado em laboratório, obtendo-se uma perda de retorno maior que 10 dB na faixa de operação (30 MHz a 3 GHz). / This work presents numerical simulations of an open asymmetric TEM cell in order to optimize its performance. Among the optimizations, the use of resistive slots to increase the bandwidth of the TEM cell is investigated. Furthermore, the transition between the coaxial connector and the TEM cell is also optimized. Measurements of this optimized transition were performed in laboratory validating the simulations. A prototype TEM cell was built and its return loss was verified to be above 10 dB over its entire band of operation (30 MHz 3 GHz).

Em face da crescente dependência e utilização dos sistemas elétricos e eletrônicos nos veículos automotores modernos, ao se considerar os níveis de imunidade destes sistemas e a ampla variedade de fenômenos eletromagnéticos presentes nas cidades, deve-se destacar a importância da análise da influência do ambiente eletromagnético urbano nos estudos de compatibilidade eletromagnética (CEM) destes equipamentos. Diante deste cenário e devido à característica de mobilidade dos veículos automotores, este trabalho ressalta a importância da consideração da influência do ambiente eletromagnético (EM) de grandes centros urbanos na metodologia de análise de CEM em veículos e seus equipamentos embarcados. Assim, definiu-se como ambiente típico aquele relacionado às principais regiões urbanas do Brasil, com ênfase naquelas locali-zadas no Estado de São Paulo, selecionadas em função da severidade dos campos EM, tanto com relação à sua intensidade quanto à diversidade de fenômenos EM presentes. Neste trabalho são apresentados resultados práticos oriundos de diversas medi-ções, abrangendo regiões com características que variam de áreas residenciais e densamente povoadas, com grandes atividades comerciais e industriais, a aquelas relacionadas à áreas específicas e situadas na proximidade de linhas de transmissão de energia elétrica, antenas de rádio difusão e televisões, estações rádio base, regiões próximas a aeroportos, etc. Ressalta-se que os resultados apresentados abrangem a maioria dos eventos EM capazes de perturbar a eletrônica embarcada, proporcionando uma comparação das condições do ambiente eletromagnético brasileiro com as de outros países. Menciona-se que estes resultados são considerados de grande utilidade para o estabelecimento, melhoria e adequação das metodologias e regulamentações relaciona-das às avaliações de CEM aplicáveis à indústria automobilística brasileira. Uma análise crítica destes resultados é apresentada, bem como algumas reco-mendações relacionadas à análise de CEM em sistemas embarcados. / Facing the dependency and diversity of applications of the on-board electronics in the modern vehicles and taking into account their immunity level as well as the vari-ety of electromagnetic (EM) phenomena at the present time in the cities, the analysis of the influences from the urban electromagnetic environment have to be stressed in the electromagnetic compatibility (EMC) studies of those devices. Based on this picture and due to the mobility characteristics of the automobiles, this work emphasises the importance of the influences of EM environment of the urban areas in the methodology for EMC analysis of automobiles and its electronics equip-ment. Thus, the typical environment was defined as the one related to the main urban areas in Brazil, emphasising those located in São Paulo State and taking into considera-tion the intensity and variety of the EM sources. Results of many practical measurements, including those resultants of regions with high density of population, with commercial and industrial activities, closer to transmission lines and into substations, near to TV and radio broadcasting antennas, cellular radio base stations, airports, etc. The presented results embrace the main EM events that are capable to cause disturbances in the on-board electronics. These data enables a comparison of the brazilian EM environmental conditions with the analyses already performed in other Countries. By the way, the presented results are taken as useful for establishing, improving and adjusting the methodologies and regulations of EMC procedures that are applicable for the automotive industries in Brazil. A critical analysis of those results is presented as well as some recommendations related to the EMC analysis of the on-board devices.

O antimônio é um elemento encontrado em baixas concentrações no meio ambiente. No entanto, a sua determinação tem despertado grande interesse devido ao conhecimento de sua toxicidade e da crescente aplicação na indústria. A determinação de antimônio tem sido um desafio para os pesquisadores uma vez que o elemento é encontrado em baixas concentrações, o que faz de sua análise uma tarefa difícil. Portanto, embora a análise por ativação de nêutrons (NAA) seja um método adequado para a determinação de vários elementos em diferentes tipos de matriz, no caso de Sb, a análise apresenta algumas dificuldades. A principal dificuldade é devido às interferências espectrais. O objetivo desta pesquisa foi validar o método de NAA para a determinação de Sb em amostras ambientais. Para estabelecer condições adequadas para a determinação de Sb, ensaios preliminares foram realizados para posterior análise de materiais de referência certificados (MRC). O procedimento experimental consistiu em irradiar amostras juntamente com padrão sintético de Sb por períodos de 8 ou 16 horas no reator nuclear de pesquisa IEA-R1, seguido de espectrometria de raios gama. A quantificação de Sb foi realizada pela medição dos radioisótopos de 122Sb e 124Sb. Ensaios preliminares indicaram a presença de Sb em papel de filtro Whatman, utilizado no preparo do padrão, porém em teor muito baixo, podendo ser considerado desprezível. No caso do material plástico utilizado como invólucro para a irradiação da amostra, foi verificado que ele deve ser escolhido cuidadosamente, pois dependendo do plástico, este pode conter Sb. A análise da estabilidade da solução padrão diluída de Sb, dentro do período de oito meses, mostrou que não há alteração significativa na concentração deste elemento. Os resultados obtidos nas análises dos materiais de referência certificados indicaram a formação de radioisótopos de 76As e também de 134Cs e 152Eu, podendo interferir na determinação de Sb pela medição de 122Sb, devido à proximidade de energias dos raios gama emitidos. Além disso, a alta atividade do 24Na pode mascarar o pico do 122Sb e dificultar a sua detecção. As análises dos MRC indicaram que a exatidão e a precisão dos resultados de Sb dependem principalmente do tipo e composição da matriz, da sua concentração na amostra, do radioisotopo medido e do tempo de decaimento utilizado para a medição. A avaliação dos componentes que contribuem para a medição da incerteza da concentração de Sb, mostrou que a maior contribuição da incerteza é dada pela estatística de contagem da amostra. Os resultados da avaliação da incerteza indicaram também que o valor da incerteza padrão combinada depende do radioisótopo medido e do tempo de decaimento utilizado para as contagens. Este estudo mostrou que a NAA é um método bastante adequado na determinação de Sb em amostras ambientais, possibilitando a obtenção de resultados com baixos valores de incerteza e por ser uma técnica puramente instrumental, permite a análise de um grande número de amostras. / Antimony is an element found in low concentrations in the environment. However, its determination has attracted great interest due to the knowledge of its toxicity and increasing application in industry. The determination of antimony has been a challenge for researchers since this element is found in low concentrations which make its analysis a difficult task. Therefore, although neutron activation analysis (NAA) is an appropriate method for the determination of various elements in different types of matrix, in the case of Sb its analysis presents some difficulties, mainly due to spectral interferences. The objective of this research was to validate the NAA method for Sb determination in environmental samples. To establish appropriate conditions for Sb determinations, preliminary assays were carried out for further analysis of certified reference materials (CRM). The experimental procedure was to irradiate samples with a synthetic Sb standard for a period of 8 or 16 hours in the IEA-R1 nuclear research reactor, followed by gamma ray spectrometry. The quantification of Sb was performed by measuring the radioactive isotopes of 122Sb and 124Sb. The results of preliminary assays indicated the presence of Sb in Whatman no 40 filter paper used in the preparation of the synthetic standard, but at very low concentrations, which could be considered negligible. In the case of the plastic material used in bags for the sample irradiation, it should be chosen carefully, because depending on the thickness, they may contain Sb. The analyses of the stability of the diluted Sb standard solution showed no change in the Sb concentration within eight months after its preparation. Results obtained in the analysis of certified reference materials indicated the interference of 76As and also of 134Cs and 152Eu in the Sb determinations by measuring 122Sb, due to the proximity of the gamma ray energies. The high activity of 24Na can also mask the peak of 122Sb hindering its detection. The analysis of CRM indicated that the accuracy and precision of the results depend on the type of matrix analyzed, its concentration in the sample, radioisotope measured and of the decay time used for the measurements. The analysis of the components that contribute to the uncertainty of the Sb concentration indicated that the largest uncertainty contribution is given by statistical counting of the sample. The findings also showed that the value of combined standard uncertainty depends on the radioisotopes of Sb measured and the decay time used for counting. This study showed that NAA is a very adequate method for Sb determinations in environmental samples furnishing results with low uncertainty values.

SIMTar (SNPs Interfering in MicroRNA Targets) é uma ferramenta computacional que realiza a predição de interferência de SNPs em sítios alvos de miRNAs. Dada uma lista de SNPs, SIMTar analisa uma janela ao redor de cada SNP e verifica se tal SNP cria ou rompe um sítio de miRNA utilizando como base programas de predição de sítios de miRNAs nos vários alelos desta janela. Se o resultado da predição para um dado miRNA é diferente para diferentes alelos, então tal SNP está potencialmente interferindo em tal sítio. O presente trabalho teve como objetivo melhorar o processo de identificação de interferência de SNPs em sítios alvos de miRNAs, usando um novo programa de predição de sítios de miRNAs, assim como a incorporação de resultados biológicos experimentais. A hipótese deste trabalho é que com estas modificações poderia-se diminuir a expectativa de falsos positivos sem diminuir a sensibilidade. Os resultados obtidos validam a hipótese e ainda mostram que o SIMTar possui vantagens quando comparado com outras ferramentas ou bancos de dados de propósito similar. / SIMTar (SNPs Interfering in MicroRNA Targets) is a computational tool that performs the prediction of SNPs interference in miRNA target sites. Given a list of SNPs, SIMTar analyzes a window around each SNP and checks whether such SNP creates or breaks a miRNA site based on miRNA target prediction programs in the various alleles of this window. If the prediction result for a given miRNA is different for different alleles, then such SNP is potentially interfering in such site. The present study had the aim to improve the SNPs interference identification in miRNA sites, using a new prediction program of miRNAs targets, as well as the incorporation of experimental biological results. The hypothesis of this study is that with these modifications the expectation of false positives could be reduced without diminishing the sensitivity. The results obtained validate the hypothesis and also show that the SIMTar has advantages when compared to other tools or databases with similar purpose.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:12Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-29. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:08Z : No. of bitstreams: 1 Publico-12671a.pdf: 457809 bytes, checksum: 35d7f6ecc589fbb39e877e1738e1887f (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:09Z : No. of bitstreams: 2 Publico-12671a.pdf: 457809 bytes, checksum: 35d7f6ecc589fbb39e877e1738e1887f (MD5) Publico-12671b.pdf: 728280 bytes, checksum: 32a141c21db6ea49fb176e1f6dc3df99 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:09Z : No. of bitstreams: 3 Publico-12671a.pdf: 457809 bytes, checksum: 35d7f6ecc589fbb39e877e1738e1887f (MD5) Publico-12671b.pdf: 728280 bytes, checksum: 32a141c21db6ea49fb176e1f6dc3df99 (MD5) Publico-12671c.pdf: 1578441 bytes, checksum: ec8da9ba80d717052e7ce5a4dea5ed15 (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:09Z : No. of bitstreams: 4 Publico-12671a.pdf: 457809 bytes, checksum: 35d7f6ecc589fbb39e877e1738e1887f (MD5) Publico-12671b.pdf: 728280 bytes, checksum: 32a141c21db6ea49fb176e1f6dc3df99 (MD5) Publico-12671c.pdf: 1578441 bytes, checksum: ec8da9ba80d717052e7ce5a4dea5ed15 (MD5) Publico-12671d.pdf: 1855087 bytes, checksum: 67b34f9a1e733efa6279c9269310368a (MD5). Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:26:09Z : No. of bitstreams: 5 Publico-12671a.pdf: 457809 bytes, checksum: 35d7f6ecc589fbb39e877e1738e1887f (MD5) Publico-12671b.pdf: 728280 bytes, checksum: 32a141c21db6ea49fb176e1f6dc3df99 (MD5) Publico-12671c.pdf: 1578441 bytes, checksum: ec8da9ba80d717052e7ce5a4dea5ed15 (MD5) Publico-12671d.pdf: 1855087 bytes, checksum: 67b34f9a1e733efa6279c9269310368a (MD5) Publico-12671e.pdf: 132448 bytes, checksum: 7153a9583a94f50f2a56c79c6d7d320a (MD5) / O heparam sulfato (HS) tem importante papel no comportamento celular devido a sua capacidade de interagir com uma variedade de moléculas, tais como fatores de crescimento e enzimas. HS está envolvido na sinalização celular, e a ativação da cascata de sinalização está relacionada com a fosforilação de proteínas citosólicas, que levam à regulação gênica. Estudos anteriores mostram que o sindecam-4 (Syn4), um proteoglicano de heparam sulfato, está envolvido na modulação da adesão celular e na regulação do ciclo celular. Assim, o objetivo deste trabalho foi promover o “knock-down” do Syn4 em células endoteliais, pela utilização de pequenos RNAs em forma de grampo (shRNA) para um melhor entendimento da importância do Syn4 na sobrevivência celular. Células shRNA-Syn4-EC foram comparativamente estudadas com células endoteliais selvagens (EC), com células endoteliais que super-expressam o oncogene ras (EJ-ras-EC) e com células transfectadas com o plasmídeo vazio (mock EC). As diferentes células foram avaliadas por citometria de fluxo e microscopia confocal quanto à expressão da proteína Ras (Ras), integrina b1 (b1), fibronectina (FN), biglicam (Big), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), fator de Von Willebrand (vWF), além do esqueleto protéico do sindecam-4. Os clones foram selecionados por PCRsq para o Syn4 e incorporação de [35S]-sulfato nas cadeias de glicosaminoglicanos. A transfecção não alterou a expressão de vWF que é um marcador de células endoteliais. A expressão do sindecam-4 e incorporação de [35S]-sulfato variou nos diferentes clones de shRNA-Syn4-EC em até 80%. O “knock-down” do Syn4 levou à redução significativa na expressão de Ras, integrina b-1, e fibronectina, quando comparado com células endoteliais selvagens, bem como com EJ-ras-EC. Por outro lado, a super-expressão de Ras levou à superexpressão de Syn4, diminuição da expressão de VEGF e alteração na localização celular da integrina b-1. Além disso, as células shRNA-Syn4-EC apresentam fraca adesão ao substrato, indicando que a ausência de Syn4 leva à alteração nas interações célula-célula e célula-matriz. Todos esses resultados mostram claramente que o Syn4 exerce importante papel na biologia celular. / Heparan sulfate (HS) plays an important role in cell behavior due to its ability to interact with a variety of molecules modulating growth factors and enzymes. HS participates in cellular signaling, and the activation of downstream pathways is related to the phosphorylation of cytosolic proteins leading to gene regulation. Previous studies show that syndecan-4 (Syn4), a heparan sulfate proteoglycan, modulates cell adhesion and is involved in the regulation of cell cycle. Thus the aim of the present work was to promote Syn4 knock down on endothelial cells using small hairpin RNA (shRNA) in order to gather information on its effect on cell behavior. For comparison, shRNA-Syn4-EC cells were simultaneously investigated with wild type endothelial cells (EC), as well as endothelial cells that overexpress ras oncogene (EJ-ras-EC) and a control that was transfected with the empty plasmideo (mock EC). The different cells were evaluated regarding the expression of Ras protein (Ras), b1-integrin (b1), fibronectin (FN), biglycan (Big), vascular endothelial growth factor (VEGF), von Willebrand factor (vWF), besides the core protein for syndecan-4 (Syn4) by flow cytometry and confocal microscopy. Clones were selected through sqPCR for Syn4 and [35S]-sulfate incorporation into heparan sulfate (HS) and chondroitin sulfate (CS) chains. Regardless of the transfection, the expression of vWF, an endothelial cell marker, was maintained in all cells, confirming their endothelial origin. The expression of syndecan-4 and incorporation of [35S]- sulfate varied among the different clones of shRNA-Syn4-EC up to 80%. The knockdown of Syn4 lead to significant reduction in the expression of Ras, b-1 integrin and FN, when compared to wild type cells as well as EJ-ras-EC. The overexpression of Ras leads to an overexpression of Syn4 and a decrease in VEGF expression and cellular localization of b-1 integrin. Furthermore, shRNASyn4- EC shows weak adhesion to the substrate, indicating that the lack of Syn4 altered cell-cell and cell-matrix interactions. The combined results clearly show that Syn4 plays an important role in cellular biology. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações