Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / INTRODUCCIÓN: La periodontitis crónica es una enfermedad de origen infeccioso caracterizada por la interacción entre bacterias patógenas y mecanismos de defensa del hospedero. Se ha demostrado que las citoquinas IL-6, IL-21, y TGF-β participan en la diferenciación de células Th17, mientras que TGF-β , en ausencia de las otras mencionadas, induce la diferenciación de células Treg. Esto indica una fuerte relación entre células Th17 y Treg: si se favorece la producción de las primeras se fomenta la destrucción tisular, mientras que las Treg, se asocian a una respuesta protectora para los tejidos. El objetivo de este trabajo fue identificar a IL-21 y cuantificar los niveles de IL-21, IL-17, IL-6, IL-10 y TGF-β en fluido gingival crevicular (FGC) de sujetos con periodontitis crónica e individuos periodontalmente sanos. METODOLOGÍA: Se seleccionaron 20 sujetos sin periodontitis y 20 con diagnóstico de periodontitis crónica según criterios de inclusión y exclusión. Se obtuvieron muestras de FGC usando tiras de papel en sacos ≥ 5mm en enfermos, y en sitios sin signos clínicos de inflamación ni destrucción periodontal en el grupo control. La presencia de las citoquinas se determinó mediante Western-blot, y la cuantificación se realizó mediante test de ELISA. Los valores obtenidos fueron analizados con los test estadísticos correspondientes (Shapiro-Wilk y MannWhitney), considerando un p<0,05 como estadísticamente significativo. RESULTADOS: Al realizar el Western-blot fue posible identificar todos los mediadores inflamatorios mencionados. Los niveles detectados de IL-6 (1,27(1,70) pg/mL v/s 7,66(7,66) pg/mL), IL-21 (16,16(13,75) pg/mL v/s 11,38(3,21) pg/mL) e IL-10 (48,0(55,33) pg/mL v/s 4,67(7,33) pg/mL) fueron mayores en muestras de sujetos con periodontitis crónica, con una diferencia estadísticamente significativa respecto a los sanos. IL-17 (156,52(164,35) pg/mL) y TGF-β (6,92(9,63) pg/mL) fueron medibles en FGC de enfermos, pero indetectables en el de sujetos sanos. CONCLUSIÓN: Los resultados obtenidos indican que existe un desbalance entre las citoquinas relacionadas con Treg y Th17 en el FGC de individuos enfermos, con respecto a sujetos periodontalmente sanos. Esto podría ser un indicio del posible desequilibrio de estas células en periodontitis crónica, con una t endencia a la diferenciación de Th17 y, por ende, a la inflamación y destrucción tisular característica de esta patología.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Autor no autoriza el acceso a texto completo de su documento / Introducción: Los linfocitos T helper 17 (Th17) participan en los mecanismos de reabsorción ósea característicos de patologías inflamatorias, incluida la periodontitis apical (PA). Otros estudios han asociado a esta célula con la presencia de dolor en PA. En otras patologías diferentes a PA, se ha detectado interleuquina 21 (IL-21), citoquina responsable de la inducción de células Th17. Actualmente, la presencia de IL-21 en lesiones periapicales (LPA) y su asociación con sintomatología dolorosa en PA se desconocen. Objetivo: Determinar los niveles y formas moleculares de IL-21 en LPA y examinar su relación con la presencia de sintomatología en PA. Métodos: Se seleccionaron pacientes con diagnóstico de PA sintomática (n=13) y asintomática (n=9) e indicación de endodoncia, y se obtuvieron muestras de exudado periapical. Adicionalmente, se seleccionaron pacientes con PA y LPA e indicación de exodoncia, y se recolectaron biopsias de las LPA (n=14) y muestras de ligamento sano (LS) (n=13) provenientes de dientes con indicación de exodoncia por ortodoncia. Se determinaron las formas moleculares de IL-21 por Western blot y los niveles de IL-21 fueron determinados por Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA). Los resultados se analizaron con el programa PRISMA 5.0. Resultados: Se observaron bandas de IL-21 de 20 kDa para todas las muestras estudiadas. Los niveles de IL-21 fueron más altos en LPA que en LS, y en PA sintomática que en asintomática (p<0.05). Conclusiones: IL-21 podría participar en la patogénesis de las LPA y podría tener un rol en la presencia de sintomatología en PA.

S100B é uma citocina produzida e secretada por astrócitos, que está envolvida no ciclo de citocinas desencadeado pela IL-1β na doença de Alzheimer. Entretanto, a secreção de S100B seguida de estímulo pela IL-1β não tem sido demonstrado diretamente. Nós investigamos a secreção de S100B em culturas gliais e fatias hipocampais expostas a IL-1β. Culturas corticais primárias de astrócitos, células de glioma C6 e fatias hipocampais agudas de ratos Wistar expostas a IL-1β (de 1 pg a 10ng/mL) foram utilizadas.S100B extracelular foi medida por ELISA. Migração nuclear de NF-κB foi investigada por imunocitoquímica e immunoblotting. A secreção de S100B também foi avaliada na presença de inibidores de NF-κB e MAPK. A análise estatística foi realizada utilizando teste t de Student ou ANOVA de uma via, assumindo p< 0.05. A secreção de S100B foi estimulada por IL-1β em todas as preparações. Migração nuclear de NF-κB também foi observada nessas condições experimentais. PDTC (inibidor de NF-κB) e PD98059 (inibidor da via ERK) foram hábeis em inibir o aumento da secreção do S100B. Níveis micromolares de S100B, assim como IL-1β, induziram a produção de óxido nítrico. Nossos dados demonstram que a IL-1β induz um aumento da secreção basal de S100B nos três diferentes modelos in vitro utilizados: astrócitos corticais primários, células C6 e fatias hipocampais de ratos, e que esse aumento na secreção foi mediado pela via de sinalização MAPK-ERK/NFκB. Astrócitos primários e glioma C6 exibiram diferente sensibilidade a IL-1β na modulação tanto da secreção, quanto da expressão de S100B. Esses resultados sugerem que S100B extracelular pode contribuir para respostas reparativas em lesões cerebrais agudas, bem como para desordens neurodegenerativas em lesões crônicas. O mecanismo de indução de secreção de S100B por IL-1β suporta a hipótese de um "ciclo de citocinas", proposto na gênese da doença de Alzheimer. / S100B is an astrocyte-derived cytokine, which has been implicated in the IL-1β- triggered cytokine cycle in Alzheimer’s disease. However, the secretion of S100B following stimulation by IL-1β has not been directly demonstrated. We investigated S100B secretion in glial preparations and hippocampal slices exposed to IL-1β. Cortical primary astrocyte cultures, C6 glioma cells and acute hippocampal slices from the brain of Wistar rats exposed to IL-1β (from 1pg to 10ng/mL) were utilized. Extracellular S100B was measured by ELISA. Nuclear migration of NF-κB was investigated by immunocytochemistry and immunoblotting. S100B secretion was also evaluated in the presence of specific inhibitors for NF-κB and MAPK. Statistical analyses were carried out by Student t test or one-way ANOVA, assuming p < 0.05. IL-1β-stimulated S100B secretion was observed in all preparations. Nuclear migration NF-κB was also observed under these experimental conditions. PDTC (an inhibitor of NF-κB) and PD 98059 (an inhibitor of ERK) inhibited S100B secretion stimulated by IL-1β. S100B, at micromolar levels, like IL-1β, was able to induce NO production. Our data demonstrate IL-1β-induced S100B secretion in three different in vitro preparations: cortical primary astrocytes, C6 glioma cells and hippocampal slices of rats; this secretion was mediated by MAPK-ERK/NF-κB signalling. Primary astrocytes and C6 cells exhibited different sensitivities to IL-1β concerning S100B expression and secretion. These results suggest that extracellular S100B could contribute to a reparative response in acute brain injury, as well as in neurodegenerative disorders due to chronic injury. The mechanism of IL-1β-induced S100B secretion supports the hypothesis for a “cytokine cycle”, proposed in the genesis of Alzheimer disease.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:33Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-07-28 / A resposta inflamatória é modulada durante a sepse e a regulação positiva ou negativa da atividade celular depende das células e funções avaliadas. IFN-γ e IL-17 são citocinas características das subpopulações de linfócitos Th1 e Th17, respectivamente, e desempenham papel importante na resposta imune, ligando a imunidade inata e adaptativa. Objetivo: Avaliar a presença das células Th1 e Th17 em pacientes sépticos na admissão do estudo (D0) comparado-a com sadios e após 7 dias (D7) de seguimento. Casuística e Métodos: Foram incluídos 59 pacientes sépticos no D0, dos quais 31 tiveram amostras colhidas no D7, e 30 indivíduos sadios. As células mononucleares do sangue periférico foram separadas e congeladas em nitrogênio líquido. Após descongelamento e ajuste da concentração para 1x106 células/mL, as células foram estimuladas ou não com PMA/ionomicina e mantidas por 30 minutos em estufa a 37ºC a 5% CO2. Foi acrescentado brefeldina A e incubadas por mais 15 horas. Em seguida, foi feita marcação de superfície para a identificação dos linfócitos TCD4 (CD3+CD8-). As células foram permeabilizadas e marcadas para detecção de IL-17A e IFN-γ intracelular. As amostras foram lidas em citômetro FACSCanto e analisadas no programa FlowJo. Resultados: A produção basal de IFN-γ e IL-17A foi maior nos pacientes comparado aos sadios (P=0,002 e P<0,001, respectivamente). Após estímulo, a produção de IL-17A foi maior nos pacientes (P=0,027) enquanto a de IFN-γ foi superior nos sadios (P=0,001). Ao comparar os diferentes estadios da sepse, foi observado aumento na produção de IFN-γ após estímulo com PMA/ionomicina nos pacientes em choque séptico em relação aos pacientes em sepse grave (P=0,039). A produção de IFN-γ basal e após estímulo mostrou-se aumentada no D7 em relação ao D0 (P=0,007 e P=0,018, respectivamente). Em contraste, a produção de IL-17 após estímulo foi maior no D0 comparado ao D7 (P=0,003), mas não foi encontrada diferença significativa na condição basal. Nos pacientes que evoluíram a óbito, as amostras do D0 apresentaram menor produção constitutiva de IFN-γ em relação ao D7 (P=0,023), mas após estímulo não foi encontrada diferença. Nos pacientes que sobreviveram, não houve diferença na condição basal e após estímulo com PMA/ionomicina. A produção de IL-17, após estímulo foi maior na amostra D0 em relação ao D7 (P=0,006) nos pacientes que sobreviveram, já na condição basal não houve diferença. Os pacientes que evoluíram a óbito não apresentaram diferença na condição basal e após estímulo com PMA/ionomicina. Conclusão: Os resultados basais com maior produção de citocinas nos sépticos refletem o grau de inflamação característico da sepse. Observamos uma dicotomia entre as respostas Th1 e Th17 após PMA/ionomicina nos pacientes sépticos, com aumento da população Th17 e diminuição da Th1 em relação aos sadios. Aumento da população Th1 no D7 foi relacionado com mortalidade, enquanto diminuição da população Th17 foi relacionada com sobrevida, indicando que a persistência ou exacerbação das respostas Th1 e Th17 podem ser deletérias. Estes achados sugerem regulação da resposta inflamatória na sepse das populações Th1 e Th17. / The inflammatory response is modulated during sepsis and up or down regulation of cell activity depends on cells and functions evaluated. IFN-g and IL-17 are cytokines characteristics of lymphocyte subsets Th1 and Th17, respectively, and play an important role in immune response, linking innate and adaptative immunity. Objective: To evaluate the presence of Th1 and Th17 cells in septic patients at admission of the study (D0) compared it with healthy volunteers and after 7 days (D7) follow-up. Material and Methods: We included 59 septic patients on D0, of which 31 had samples collected on D7, and 30 healthy individuals. The peripheral blood mononuclear cells were separated and frozen in liquid nitrogen. After thawing and adjust the concentration to 1x106 cells/mL, cells were stimulated or not with PMA/ionomycin for 30 minutes and maintained at 37oC 5% CO2. Brefeldin A was added and cells were incubated for another 15 hours. Then cells were surface stained for identification of TCD4 lymphocytes (CD3+CD8-). Cells were permeabilized and stained for detection of IL-17A and IFN-g intracellular. The samples were read in FACSCanto cytometer and analyzed with FlowJo program. Results: The basal production of IFN-g and IL-17A was higher in patients compared to healthy volunteers (P=0,002 e P<0,001, respectively). After stimulation, the production of IL-17A was higher in patients (P=0,027) while the IFN-g was higher in healthy (P=0,001). An increase IFN-g production after stimulation with PMA/ionomycin was found in patients with septic shock compared to severe sepsis (P=0,039). The baseline production of IFN-g and after PMA/Ionomycin stimulation was found to be increased in D7 in relation to D0 (P=0,007 e P=0,018, respectively). In contrast, the production of IL-17 after stimulation was higher in D0 compared to D7 (P=0,003). In patients who died, the D0 samples showed lower constitutive IFN-g production compared to D7 (P=0,023), but after a stimulus, no difference was found. In patients who survived, there was no difference at baseline and after stimulation with PMA/ionomycin. The IL-17 production, after stimulation, was higher in D0 sample compared to D7 (P=0,006) in patients who survived. No difference between D0 and D7 was found in patients who survived. Conclusion: The results with higher basal detection of IFN-g and IL-17 producing cells in septic patients reflect the degree of inflammation characteristic of sepsis. A dichotomy between Th1 and Th17 responses after PMA/ionomycin stimulation was found in septic patients, with increased Th17 population and decreased Th1 compared to healthy individuals. A higher proportion of Th1 in D7 was observed in patients who died; while a decrease of Th17 population was observed in patients who survived, indicating that the persistence or higher Th1 and Th17 responses may be deleterious. These findings suggest regulation of the inflammatory response in sepsis of Th1 and Th17 populations. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

FREITAS, Helano Carioca. Envolvimento da interleucina-18 (IL-18) na patogênese da mucosite gastrointestinal induzida pelo cloridrato de irinotecano (CPT-11). 2007. 105 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Universidade Federal do Ceará. Faculdade de Medicina, Fortaleza, 2007. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2012-04-02T15:54:30Z No. of bitstreams: 1 2007_dis_hcfreitas.pdf: 13077439 bytes, checksum: c3cb63e93c6e7c247752adbdd02afc64 (MD5) / Approved for entry into archive by Eliene Nascimento(elienegvn@hotmail.com) on 2012-04-04T11:27:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_dis_hcfreitas.pdf: 13077439 bytes, checksum: c3cb63e93c6e7c247752adbdd02afc64 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-04-04T11:27:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_dis_hcfreitas.pdf: 13077439 bytes, checksum: c3cb63e93c6e7c247752adbdd02afc64 (MD5) Previous issue date: 2007 / The term GIM refers to the adverse effects of cancer chemotherapy on mucosal surfaces, affecting different portions of the alimentary tract. 15% to 40% of patients in chemotherapy present some degree of mucositis. By now, much of GIM pathophysiology remains unknown. IL-18 is a pleiotropic cytokine that exerts regulatory functions over the immune system and is also involved in inflammation. Purpose: The aim of the present study was to elucidate the involvement of IL-18 in the pathogenesis of CPT-11-induced mucositis. Materials and methods: Male IL-18 wild type (Wt) or IL-18 knockout (KO) Balb/C mice received CPT-11 (60mg/kg/day, i.p.) or vehicle (0.5ml, i.p.) in a four day schedule. A group of IL-18Wt also received IL-18 binding protein (IL-18Bp, 200 µg, i.p., 1h before CPT-11). Animals were sacrificed on the fifth day. The following parameters were assessed: histologycal analysis, diarrhea, survival curve, leucogram, myeloperoxidase (MPO) activity assay, ileum levels of TNF-α and IL-1β by ELISA, immunohistochemistry for TNF-α and IL-1β and contractility assay. Results: IL-18Wt animals receiving CPT-11 presented diarrhea and intense histological alterations in the ileum (shortening of villi, flattening and vacuolization of enterocytes, cript necrosis and the presence of inflammatory infiltrate). There was also increased MPO activity, increased levels of TNF-α and IL-1β and strong immunostaining for TNF-α and IL-1β in the ileum. In addition, the CPT-11 treated mice presented increased intestinal contractility when stimulated with cholinergic drugs (bethanecol, BCh and acetylcholine, ACh). In contrast, IL-18KO animals treated with the same dose of CPT-11 presented less diarrhea and less intestinal histological alterations. There was no increase in MPO activity nor in TNF levels, but in IL-1 levels. In addition, TNFα and IL-1β immunostaining was weaker IL-18KO animals. Also, the intestinal contractility in IL-18KO animals was not exarcerbated after a cholinergic challenge. IL-18Wt animals receiving CPT-11 and IL-18Bp did not present significant diarrhea and there was no significant alterations on intestinal contractility after Ach administration. Although MPO activity was not increased in IL-18Bp treated animals, the ileal mucosa presented moderate to severe histological alterations. Conclusion: IL-18 participates in the CPT-11-induced GIM. IL-18Bp attenuates some inflammatory (cell infiltrate) and functional (diarrhea and contractility) events of CPT-11-induced GIM. The contractility alterations in CPT-11 treated animals seem to have an inflammatory related component. / MGI é o termo que descreve os efeitos da quimioterapia antineoplásica nas mucosas, podendo acometer o trato alimentar de maneira global ou localizada. 15 a 40% dos pacientes em quimioterapia apresentam algum grau de mucosite. Muito da fisiopatologia da MGI permanece desconhecido. A IL-18 é uma citocina pleiotrópica, com função regulatória sobre o sistema imune e envolvimento nas fases iniciais da inflamação. Objetivo: Avaliar o envolvimento de IL-18 na patogênese da MGI induzida por CPT-11. Materiais e Métodos: camundongos Balb/C IL-18Wt ou IL-18KO, machos, foram tratados durante quatro dias consecutivos com CPT-11 (60mg/Kg, i.p.) ou veículo (0,5 mL, i.p.). Um grupo de animais IL-18Wt recebeu, além do CPT-11, a proteína ligante de IL-18 (IL-18Bp; 200 µg, i.p.). Os seguintes parâmetros foram avaliados: diarréia, leucograma, sobrevida, análise histopatológica, atividade de mieloperoxidade (MPO), dosagem de citocinas (TNF-α, IL-1β ) por ELISA e imunoistoquímica para TNF-α e IL-1β nas mucosas ileais. Resultados: CPT-11 induziu diarréia significante e promoveu alterações intestinais exuberantes (encurtamento de vilos, achatamento e vacuolização de enterócitos, necrose em criptas e infiltrado inflamatório de leucócitos polimorfonucleares e células mononucleares) Observou-se aumento da atividade de MPO e dos níveis tissulares de TNF-α e IL-1β dosados por ELISA e intensa imunomarcação com anticorpos anti-TNFα e anti-IL-1β nesses animais. Além disso, tais animais apresentaram resposta contrátil intestinal exacerbada ao estímulo com colinérgicos (acetilcolina e betanecol). Os animais IL-18KO tratados com CPT-11 apresentaram diarréia estatisticamente menos severa e menor intensidade de alterações morfométricas e histológicas. Não houve aumento de TNF-α, mas houve de IL-1β , a atividade de MPO não diferiu da observada nos animais que receberam veículo e não houve aumento de resposta contrátil ao estímulo colinérgico. Os animais que receberam CPT-11 e IL-18Bp apresentaram diarréia estatisticamente menos intensa que aqueles que receberam apenas CPT-11, resposta contrátil estatisticamente menos acentuada e menor atividade de MPO. Entretanto, as alterações morfométricas e histológicas não diferiram das encontradas nos animais tratados só com CPT-11. Conclusão: IL-18 está envolvida na patogênese da MGI induzida por CPT-11. IL-18Bp atenua os eventos envolvidos na MGI induzida por CPT-11 e é um possível candidato a modulador farmacológico desse processo. As alterações contráteis no intestino promovidas pelo CPT-11 parecem ter um componente inflamatório.

TEIXEIRA, Maraiza Alves. Papel de receptores CXCR2 na mucusite intestinal induzida por irinotecano. 2015. 94 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T13:35:18Z No. of bitstreams: 1 2015_dis_mateixeira.pdf: 2275440 bytes, checksum: 14899bf8302a4a676758288d6cf00415 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T14:24:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_dis_mateixeira.pdf: 2275440 bytes, checksum: 14899bf8302a4a676758288d6cf00415 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T14:24:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_dis_mateixeira.pdf: 2275440 bytes, checksum: 14899bf8302a4a676758288d6cf00415 (MD5) Previous issue date: 2015 / Introduction: Irinotecan is an anticancer agent used in first and second line treatment protocols for colorectal cancer. However, a major side effect associated with irinotecan, intestinal mucositis, has negatively impacted on patient’s quality of life and limiting the therapeutic outcome. The literature reports the involvement of several inflammatory mediators in the pathogenesis of intestinal mucositis, including IL-1, IL-18, IL-33, nitric oxide and several others, whose pharmacological inhibition prevents neutrophil infiltration and leads to mucositis improvement. However, the role of chemokine receptors that are important to neutrophil recruitment, such as CXCR2, in intestinal mucositis is unknown. Aims: To study the role of CXCR2 receptors in the pathogenesis of irinotecan-induced intestinal mucositis. Methods: Male C57BL/6 mice (n = 6) were divided into groups and injected with either saline (5ml / kg, ip) or irinotecan (75, 90, 105 or 120 mg/kg ip) for 4 days. The dose of 120 mg/kg reproduced the inflammatory condition of mucositis, so it was used in association with SB225002, a CXCR2 antagonist. Body mass variation, diarrhea scores and leukocyte count were recorded. Following euthanasia, intestinal samples were collected for histopathological analysis, mieloperoxidase activity (MPO), IL-1β, KC and IFN-γ levels. In addition, the length of the small intestine was measured so was the weight of its solid contents. Bacteremia was further carried out. Additionally, we measured the expression of CXCR2 and CCR2 receptors on neutrophils surface. We also performed the in vitro chemotaxis assay, using neutrophils isolated from bone marrow of mice treated with IRI or IRI + SB225002 (Study approval number: 58/14). Results: IRI produced a significant (P <0.05) weight loss and leukopenia in all doses tested. However, only the doses of 105 and 120 mg/kg reduced (P<0.05) the villus/crypt ratio and increased (P<0.05) neutrophil infiltration (MPO assay). None of the doses promoted diarrhea. The dose of 120 mg/kg was the best in reproducing the typical histopathological damage seen during intestinal mucositis, thus this dose was chosen for further analysis. The treatment with SB225002 did not protect the animals from the weight loss, leukopenia, histopathological damage (measured by the villus/crypt ratio), reduction of the small intestine length or weight reduction of the small intestine content induced by IRI. There was no difference between IRI or IRI + SB225002 groups in regard to these parameters. In regard to neutrophil infiltration, SB225002 prevented the increase in MPO activity as early as 24 hours post 1st dose of IRI (P<0.05) vs IRI group, but failed to do so in late mucositis. In addition, IRI led to CXCR2 internalization followed by an increased expression of CCR2 receptor on neutrophils harvested from IRI-treated mice. Accordingly, in vitro neutrophil migration towards MIP-2, a CXCR2 ligand, was reduced. We also observed that mice injected with IRI or SB225002+IRI showed bacteremia when compared to the saline group. Conclusion: CXCR2 receptors only participate in the early phases of intestinal mucositis, likely due to the downregulation of these receptors, which are replaced by CCR2 on the surface of neutrophils. / Introdução: O irinotecano é um antineoplásico usado no tratamento de primeira e segunda linha do câncer colorretal. No entanto, um importante efeito colateral associado ao irinotecano, a mucosite intestinal, tem impactado negativamente na qualidade de vida dos pacientes e no sucesso terapêutico. Trabalhos anteriores demonstraram que na patogênese da mucosite intestinal há a participação de mediadores pró-inflamatórios, como IL-1, IL-18, IL-33, óxido nítrico dentre outros, cuja modulação leva à redução do infiltrado neutrofílico no intestino e melhora do dano tecidual. Entretanto, o papel de receptores de quimiocinas, como o CXCR2, importantes no recrutamento de neutrófilos, ainda não foram investigados no contexto da mucosite. Objetivos: Avaliar o papel de receptores CXCR2 na mucosite intestinal induzida pelo Irinotecano. Métodos: Camundongos C57BL/6 machos, 18-25g, foram divididos em grupos (n=6), administrados por 4 dias com salina (5mL/kg, i.p) ou com irinotecano (75, 90, 105 ou 120 mg/kg, i.p). A dose de 120 mg/kg foi a que melhor reproduziu o quadro inflamatório característico da mucosite, sendo então utilizada nos ensaios posteriores em associação ao SB225002, um antagonista de receptores CXCR2. Os animais foram analisados quanto ao peso corpóreo, escores de diarreia, contagem de leucócitos. Após a eutanásia, uma amostra de intestino foi coletada para análise histopatológica e morfométrica, dosagem de mieloperoxidase e níveis de IL-1β, IFN-γ e KC. Além disso, o comprimento do intestino delgado foi mensurado, bem como o peso do conteúdo sólido. Avaliou-se também a bacteremia. Adicionalmente, realizou-se a quantificação dos receptores CXCR2 e CCR2, além do ensaio de quimiotaxia in vitro de neutrófilos isolados de camundongos tratados com IRI ou com IRI+SB225002. (Protocolo CEPA 58/14). Resultados: O IRI em todas as doses avaliadas promoveu uma significativa (P<0,05) perda ponderal e leucopenia. Sendo que, apenas as doses de 105 e 120 mg/kg foram capazes de reduzir de forma significativa (P<0,05) a razão vilo/cripta e de aumentar (P<0,05) o infiltrado neutrofílico (ensaio de MPO). Nenhuma das doses avaliadas promoveu diarreia nos camundongos desse experimento. A dose de 120 mg/kg foi que a melhor reproduziu o dano histopatológico típico da mucosite intestinal, sendo a dose escolhida para as demais análises. O uso do antagonista dos receptores CXCR2, o SB225002, associado ao IRI não protegeu os animais da perda de peso, da leucopenia, do dano histopatológico (mensurado pela razão vilo/cripta), da redução do comprimento do intestino delgado nem da redução do peso do conteúdo do delgado. Todos esses parâmetros apresentaram-se de forma semelhante nos animais tratados apenas com IRI ou em associação IRI+SB225002. Quanto ao infiltrado neutrofílico, observamos que o uso do SB225002 no D2, 24h após a 1ª administração do IRI, foi capaz de reduzir a atividade da MPO (P<0,05). Tal redução não foi observada nos tempos subsequentes. Observou-se que o tratamento com irinotecano levou à internalização de CXCR2 e aumento da expressão do CCR2 nos neutrófilos de animais tratados com o antineoplásico. Houve, ainda, uma redução da migração de neutrófilos do quinto para o sétimo dia após a injeção do IRI. Corroborando com esse dado, houve redução da migração dos neutrófilos (isolados da medula óssea de camundongos tratados com irinotecano) ao MIP-2, um ligante de CXCR2. Observamos, ainda, que os camundongos injetados com IRI apresentaram bacteremia, quando comparados ao grupo salina. Conclusão: O receptor CXCR2 participa somente da fase precoce da mucosite intestinal, provavelmente devido a uma internalização deste receptor, o qual é substituído pelo CCR2 na superfície dos neutrófilos.

Made available in DSpace on 2015-06-17T19:33:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-15. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-18T12:47:57Z : No. of bitstreams: 1 000830096.pdf: 323394 bytes, checksum: d31a089f3bf47b648bbfdf120de818b3 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da periodontite apical e/ou doença periodontal associadas à diabetes na quantificação sérica da citocina pró-inflamatória IL-17 e na glicemia. Foram utilizados 80 ratos da linhagem Wistar divididos em 8 grupos de 10 ratos: G1 - ratos normoglicêmicos ; G2 - ratos com infecção endodôntica; G3 - ratos com infecção periodontal; G4 - ratos com infecção endodôntica e periodontal; G5 - ratos diabéticos; G6 - ratos diabéticos com infecção endodôntica; G7 - ratos diabéticos com infecção periodontal; G8 - ratos diabéticos com infecção endodôntica e periodontal. A diabetes foi induzida pela aplicação de estreptozotocina via veia peniana, cujo desenvolvimento da doença foi confirmado no sexto e último dia do experimento pela avaliação glicêmica no sangue por meio de uma punção na extremidade da cauda do animal, seguida de pequena compressão para a obtenção de uma gota de sangue. A infecção endodôntica foi induzida pela exposição pulpar do primeiro molar superior direito. A infecção periodontal foi induzida por meio da confecção de uma amarria junto ao colo dentário do segundo molar superior esquerdo. Com 30 dias pós-operatórios foi realizada a glicemia novamente e a coleta de sangue pela punção cardíaca para a quantificação da citocina IL-17 empregando a técnica de ELISA de captura. Os resultados foram analisados do pelo teste de análise de variância e teste de Tukey (p<0,05). O nível glicêmico foi maior em ratos diabéticos quando comparados com ratos controle aos 6 e 30 dias (p<0,05). Entretanto, aos 30 dias nos grupos de ratos diabéticos, observou-se que a presença da infecção periodontal isolada (G7) ou associada à endodôntica (G8) aumentou de forma significante a glicemia quando... / The aim of the study was to evaluate the influence of periapical lesions and/or periodontal disease on the IL-17 serum and dosage glycemic a rat model of diabetes mellitus. Eighty male Wistar rats were divided into eight groups of ten animals each: normal rats (G1), rats with pulpal infection (G2), rats with periodontal disease (G3), rats with pulpal infection and periodontal disease (G4), diabetic rats (G5), diabetic rats with pulpal infection (G6), diabetic rats with periodontal disease (G7), diabetic rats with pulpal infection and periodontal disease (G8). Diabetes was induced using streptozotocin, pulpal infection were induced by dental pulp exposure to the oral environment and the periodontal disease by periodontal ligature. Blood glucose was measured by means of a perforation in the tail of the animal after 0, 6 and 30 days post-operative. The animals were sacrificed after 30 days and the IL-17 levels were measured by ELISA. The total assessed values was tabulated according to each experimental group and statistically analyzed by analysis of variance (ANOVA) followed by Tukey test (p<0.05). Glucose levels were higher in diabetic rats compared to control rats at 6, and 30 days (p <0.05). However, at 30 days, and among the groups of diabetic rats, it was observed that the presence of periodontal infection alone (G7) or associated with endodontic (G8) increased significantly the blood glucose compared to diabetic rats without oral infections (G5 ) (p <0.05). The presence of systemic disease diabetes was not able to increase the level of serum IL-17 (p <0.05). However, the presence of the associated oral infections (G4, G8) significantly elevated the serum level of IL-17, regardless of the presence of diabetes (p <0.05). It can be concluded that the endodontic infection when associated with periodontal disease may increase blood glucose levels in diabetic rats and the serum level of IL-17 in normoglycemic or diabetic rats

S100B é uma citocina produzida e secretada por astrócitos, que está envolvida no ciclo de citocinas desencadeado pela IL-1β na doença de Alzheimer. Entretanto, a secreção de S100B seguida de estímulo pela IL-1β não tem sido demonstrado diretamente. Nós investigamos a secreção de S100B em culturas gliais e fatias hipocampais expostas a IL-1β. Culturas corticais primárias de astrócitos, células de glioma C6 e fatias hipocampais agudas de ratos Wistar expostas a IL-1β (de 1 pg a 10ng/mL) foram utilizadas.S100B extracelular foi medida por ELISA. Migração nuclear de NF-κB foi investigada por imunocitoquímica e immunoblotting. A secreção de S100B também foi avaliada na presença de inibidores de NF-κB e MAPK. A análise estatística foi realizada utilizando teste t de Student ou ANOVA de uma via, assumindo p< 0.05. A secreção de S100B foi estimulada por IL-1β em todas as preparações. Migração nuclear de NF-κB também foi observada nessas condições experimentais. PDTC (inibidor de NF-κB) e PD98059 (inibidor da via ERK) foram hábeis em inibir o aumento da secreção do S100B. Níveis micromolares de S100B, assim como IL-1β, induziram a produção de óxido nítrico. Nossos dados demonstram que a IL-1β induz um aumento da secreção basal de S100B nos três diferentes modelos in vitro utilizados: astrócitos corticais primários, células C6 e fatias hipocampais de ratos, e que esse aumento na secreção foi mediado pela via de sinalização MAPK-ERK/NFκB. Astrócitos primários e glioma C6 exibiram diferente sensibilidade a IL-1β na modulação tanto da secreção, quanto da expressão de S100B. Esses resultados sugerem que S100B extracelular pode contribuir para respostas reparativas em lesões cerebrais agudas, bem como para desordens neurodegenerativas em lesões crônicas. O mecanismo de indução de secreção de S100B por IL-1β suporta a hipótese de um "ciclo de citocinas", proposto na gênese da doença de Alzheimer. / S100B is an astrocyte-derived cytokine, which has been implicated in the IL-1β- triggered cytokine cycle in Alzheimer’s disease. However, the secretion of S100B following stimulation by IL-1β has not been directly demonstrated. We investigated S100B secretion in glial preparations and hippocampal slices exposed to IL-1β. Cortical primary astrocyte cultures, C6 glioma cells and acute hippocampal slices from the brain of Wistar rats exposed to IL-1β (from 1pg to 10ng/mL) were utilized. Extracellular S100B was measured by ELISA. Nuclear migration of NF-κB was investigated by immunocytochemistry and immunoblotting. S100B secretion was also evaluated in the presence of specific inhibitors for NF-κB and MAPK. Statistical analyses were carried out by Student t test or one-way ANOVA, assuming p < 0.05. IL-1β-stimulated S100B secretion was observed in all preparations. Nuclear migration NF-κB was also observed under these experimental conditions. PDTC (an inhibitor of NF-κB) and PD 98059 (an inhibitor of ERK) inhibited S100B secretion stimulated by IL-1β. S100B, at micromolar levels, like IL-1β, was able to induce NO production. Our data demonstrate IL-1β-induced S100B secretion in three different in vitro preparations: cortical primary astrocytes, C6 glioma cells and hippocampal slices of rats; this secretion was mediated by MAPK-ERK/NF-κB signalling. Primary astrocytes and C6 cells exhibited different sensitivities to IL-1β concerning S100B expression and secretion. These results suggest that extracellular S100B could contribute to a reparative response in acute brain injury, as well as in neurodegenerative disorders due to chronic injury. The mechanism of IL-1β-induced S100B secretion supports the hypothesis for a “cytokine cycle”, proposed in the genesis of Alzheimer disease.

S100B é uma citocina produzida e secretada por astrócitos, que está envolvida no ciclo de citocinas desencadeado pela IL-1β na doença de Alzheimer. Entretanto, a secreção de S100B seguida de estímulo pela IL-1β não tem sido demonstrado diretamente. Nós investigamos a secreção de S100B em culturas gliais e fatias hipocampais expostas a IL-1β. Culturas corticais primárias de astrócitos, células de glioma C6 e fatias hipocampais agudas de ratos Wistar expostas a IL-1β (de 1 pg a 10ng/mL) foram utilizadas.S100B extracelular foi medida por ELISA. Migração nuclear de NF-κB foi investigada por imunocitoquímica e immunoblotting. A secreção de S100B também foi avaliada na presença de inibidores de NF-κB e MAPK. A análise estatística foi realizada utilizando teste t de Student ou ANOVA de uma via, assumindo p< 0.05. A secreção de S100B foi estimulada por IL-1β em todas as preparações. Migração nuclear de NF-κB também foi observada nessas condições experimentais. PDTC (inibidor de NF-κB) e PD98059 (inibidor da via ERK) foram hábeis em inibir o aumento da secreção do S100B. Níveis micromolares de S100B, assim como IL-1β, induziram a produção de óxido nítrico. Nossos dados demonstram que a IL-1β induz um aumento da secreção basal de S100B nos três diferentes modelos in vitro utilizados: astrócitos corticais primários, células C6 e fatias hipocampais de ratos, e que esse aumento na secreção foi mediado pela via de sinalização MAPK-ERK/NFκB. Astrócitos primários e glioma C6 exibiram diferente sensibilidade a IL-1β na modulação tanto da secreção, quanto da expressão de S100B. Esses resultados sugerem que S100B extracelular pode contribuir para respostas reparativas em lesões cerebrais agudas, bem como para desordens neurodegenerativas em lesões crônicas. O mecanismo de indução de secreção de S100B por IL-1β suporta a hipótese de um "ciclo de citocinas", proposto na gênese da doença de Alzheimer. / S100B is an astrocyte-derived cytokine, which has been implicated in the IL-1β- triggered cytokine cycle in Alzheimer’s disease. However, the secretion of S100B following stimulation by IL-1β has not been directly demonstrated. We investigated S100B secretion in glial preparations and hippocampal slices exposed to IL-1β. Cortical primary astrocyte cultures, C6 glioma cells and acute hippocampal slices from the brain of Wistar rats exposed to IL-1β (from 1pg to 10ng/mL) were utilized. Extracellular S100B was measured by ELISA. Nuclear migration of NF-κB was investigated by immunocytochemistry and immunoblotting. S100B secretion was also evaluated in the presence of specific inhibitors for NF-κB and MAPK. Statistical analyses were carried out by Student t test or one-way ANOVA, assuming p < 0.05. IL-1β-stimulated S100B secretion was observed in all preparations. Nuclear migration NF-κB was also observed under these experimental conditions. PDTC (an inhibitor of NF-κB) and PD 98059 (an inhibitor of ERK) inhibited S100B secretion stimulated by IL-1β. S100B, at micromolar levels, like IL-1β, was able to induce NO production. Our data demonstrate IL-1β-induced S100B secretion in three different in vitro preparations: cortical primary astrocytes, C6 glioma cells and hippocampal slices of rats; this secretion was mediated by MAPK-ERK/NF-κB signalling. Primary astrocytes and C6 cells exhibited different sensitivities to IL-1β concerning S100B expression and secretion. These results suggest that extracellular S100B could contribute to a reparative response in acute brain injury, as well as in neurodegenerative disorders due to chronic injury. The mechanism of IL-1β-induced S100B secretion supports the hypothesis for a “cytokine cycle”, proposed in the genesis of Alzheimer disease.

Submitted by Ramon Santana (ramon.souza@ufpe.br) on 2015-03-10T14:04:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação André Luiz do Nascimento.pdf: 1065082 bytes, checksum: 3e568aaa2cfa948099820d855d5dc347 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-10T14:04:16Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação André Luiz do Nascimento.pdf: 1065082 bytes, checksum: 3e568aaa2cfa948099820d855d5dc347 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2013-02-27 / CAPES / Por tratar-se de uma doença crônica que essencialmente afeta os pulmões, a tuberculose (TB) produz em seu curso profundas alterações no sistema imunológico. A susceptibilidade à TB tem sido associada com polimorfismos de citocinas em diferentes populações. Polimorfismos de Base Única na região promotora do gene da citocina imunoregulatória IL-10 (-1082 G/A) tem sido associados com diferentes níveis circulantes desta molécula. O presente estudo objetivou a avaliar associação entre o polimorfismo genético da IL-10 com o risco de desenvolvimento da TB pulmonar em indivíduos sintomáticos respiratórios (SRs) provenientes de unidades de saúde da cidade do Recife-PE. Foi realizado um estudo do tipo caso-controle, envolvendo 71 pacientes com TB pulmonar (caso), 53 indivíduos SRs com prova tuberculínica reatora (controle 1) e 57 SRs com prova tuberculínica não reatora (controle 2). O estudo foi realizado no período de fevereiro a dezembro de 2012. Nossos resultados mostraram que a média de idade entre os pacientes com TB pulmonar foi 43 ±15.2 anos, enquanto que para os controles 1 e 2 foi de 48 ± 20.2 e 51 ±16.8 anos, respectivamente. Observamos que tanto o alelo A (p = 0.014; odds ratio [OR] 2.0; intervalo de confiança (IC) 95% [1.11-3.65] como genótipo -1082 AA (p= 0.02; OR = 4.55; IC95% [1.1- 27.52] estavam associados com o aumento do risco de susceptibilidade à TB pulmonar. Nossos achados sugerem que tanto o alelo A quanto o genótipo -1082AA podem ser importantes marcadores genéticos relacionados com o aumento da susceptibilidade à TB.