A endometriose é um distúrbio ginecológico benigno, crônico e inflamatório definido pela presença de glândulas e estroma endometriais fora do sítio normal. Alterações inflamatórias e imunológicas nos níveis celular e molecular na endometriose podem contribuir para a sobrevivência e crescimento do implante endometriótico e uma variedade de citocinas e fatores de crescimento podem desempenhar este papel no desenvolvimento da doença, embora sua etiologia ainda seja desconhecida. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis séricos e no fluído peritoneal (FP) e a expressão gênica da interleucina-6 (IL6) em tecido adiposo (TA) subcutâneo e visceral e de focos endometrióticos de mulheres com endometriose pélvica e compará-las com mulheres hígidas. Foram incluídas no estudo 31 mulheres com endometriose e 18 mulheres com pelve normal. A endometriose foi diagnosticada por videolaparoscopia ou confirmada por exame histológico. Amostras de sangue venoso periférico foram coletadas imediatamente antes da laparoscopia, e o FP, imediatamente após ter iniciado o procedimento. Biópsias de TA e tecido endometrial eutópico e ectópico foram coletados para avaliação da expressão gênica por RT-PCR em tempo real. O TA subcutâneo e visceral de pacientes com endometriose não mostrou diferença nos níveis de expressão gênica de IL6 quando comparadas ao grupo controle. Da mesma forma, a expressão gênica foi similar em tecido endometrial eutópico e ectópico de pacientes com endometriose comparadas ao grupo com pelve normal. Não houve associação dos níveis de expressão gênica no TA com o grau de endometriose e tipo de lesão. Contudo, os níveis de IL6 no FP foram significativamente maiores no grupo endometriose em relação ao controle. Além disso, os níveis de IL6 foram maiores no grupo de pacientes com estágio III/IV da doença em relação ao estágio I/II ou pacientes controles. Uma correlação positiva da IL-6 no LP e o escore da severidade da doença também foi observada (r-ASRM, RS= 0.77; p=0.0001). Nossos achados sugerem que a IL6 pode estar associada com a endometriose pélvica e sua severidade. Estudos adicionais deverão esclarecer se a expressão da proteína da IL6 está alterada no endométrio eutópico e ectópico e o papel desempenhado por esta citocina na patogênese da endometriose. / Endometriosis is a gynecological benign disorder, chronic inflammatory and defined by the presence of endometrial glands and stroma outside the normal site. Inflammatory and immunological changes in the cellular and molecular levels in endometriosis may contribute to the survival and growth of endometriotic implants and a variety of cytokines and growth factors can play this role in the development of the disease, although its etiology is still unknown. The objective of this study was to evaluate serum levels and peritoneal fluid (PF) and eutopic and ectopic the gene expression of IL6 in subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) and endometriotic tissue of women with pelvic endometriosis and compare them with healthy women. Were included in the study 31 women with endometriosis and 18 women with normal pelvis. Endometriosis was diagnosed by laparoscopy or confirmed by histological examination. Peripheral venous blood samples were collected immediately before the laparoscopy and the PF immediately after having started the procedure. Adipose tissue biopsies and endometrial tissues were collected for evaluation of gene expression by real-time RT-PCR. Adipose tissue subcutaneous and visceral of patients with endometriosis showed no difference in gene expression levels of IL6 when compared to the control group. Similarly, the gene expression was similar in eutopic and ectopic endometrial tissue of patients with endometriosis compared to the group with normal pelvis. No association was observed in levels of gene expression in AT with the degree of endometriosis and type of injury. However, the levels of IL6 on the PF were significantly higher in endometriosis group relative to the control. In addition, the IL6 levels were higher in the group of patients with stage III/IV of the disease in relation to the stage I/II or patients controls. A positive correlation of IL6 on the PF and the score of the severity of the disease was also observed (r-ASRM, RS = 0.77; p = 0.0001). Our findings suggest that IL6 may be associated with pelvic endometriosis and its severity. Additional studies will clarify if the expression of IL6 protein is changed in endometrium and ectopic and eutopic the role played by this cytokine in the pathogenesis of endometriosis.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:49Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Colégio Doutoral Franco Brasileiro (CDFB) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A principal diferença entre Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) típica (tEPEC) e atípica (aEPEC) é a presença do plasmídeo EAF (EPEC adherence factor) apenas em tEPEC. Apesar de os dois grupos promoverem uma lesão denominada attaching and effacing (lesão A/E) no epitélio intestinal, algumas diferenças em relação aos demais mecanismos de virulência podem existir. Neste estudo, duas amostras selvagens de aEPEC (1711-4, sorotipo O51:H40, e 3991-1, O não tipável, não móvel) foram analisadas quanto à capacidade de aderir, invadir, persistir e induzir a produção de IL-8 em células intestinais T84 e Caco-2, diferenciadas in vitro. Os resultados foram comparados com os obtidos com a amostra protótipo de tEPEC E2348/69. O papel do flagelo nos processos de adesão, invasão e indução da produção de IL-8 e de um sistema de secreção tipo III (SST3) na indução da produção de IL-8 foram também investigados com aEPEC 1711-4, utilizando-se mutantes isogênicos deficientes em flagelina ou EscN, respectivamente. As amostras aEPEC 3991-1 e 1711-4 aderiram significativamente mais às células T84 do que em Caco-2. Entretanto, aEPEC 1711-4 foi mais invasiva do que aEPEC 3991-1 e tEPEC E2348/69. Além disso, as amostras de aEPEC persistiram em ambas as linhagens celulares por um mínimo de 48 h, mas o índice de persistência foi maior para aEPEC 3991-1 em células Caco-2. Nesta linhagem celular, a produção de IL-8 foi significativamente maior nos tapetes celulares infectados com a amostra selvagem aEPEC 1711-4 em 3 h do que naqueles infectados com as demais amostras. Além disso, o mutante aEPEC 1711-4 ΔfliC induziu menor estimulação da produção de IL-8 em fase precoce (3 h), mas não no período tardio (24 h) após infecção. O mutante aEPEC 1711-4 ΔescN estimulou níveis de IL-8, em três horas, significativamente mais elevados do que a amostra selvagem, o que sugere um papel antiinflamatório dos efetores injetados pelo SST3 durante a fase inicial da interação bactéria-célula hospedeira. Nossos achados indicam que aEPEC é um patotipo heterogêneo quanto a sua habilidade de aderir, invadir, persistir e induzir a produção de IL-8, e sugerem que algumas aEPEC podem ser mais eficientes em induzir resposta inflamatória do que a tEPEC protótipo E2348/69. Na infecção de enterócitos in vitro, a integridade do flagelo da aEPEC 1711-4 é necessária para adesão e invasão eficientes e estimulação precoce, mas não tardia, da produção de IL-8. / The main difference between typical (tEPEC) and atypical (aEPEC) enteropathogenic Escherichia coli is the presence of EPEC adherence factor (EAF) plasmid in tEPEC. Although both groups can promote attaching and effacing lesions in the intestinal epithelium, some differences concerning virulence mechanisms may exist. In this study two wild type aEPEC strains (1711-4, serotype O51:H40 and 3991-1, O non typeable non motile) were analyzed concerning their capacity to adhere to, invade, persist and stimulate IL-8 production by differentiated epithelial intestinal cells Caco-2 and T84 in vitro. Results obtained with aEPEC strains were compared to those obtained with the tEPEC prototype strain E2348/69. The role of flagellum in adhesion, invasion and stimulation of IL-8 production and that of a type III secretion system (T3SS) were also investigated with aEPEC 1711-4, using isogenic mutants deficient in flagellin or EscN, respectively. aEPEC strains 3991-1 and 1711-4 adhered significantly more to T84 than to Caco-2 cells. On the other hand, aEPEC 1711-4 was more invasive than aEPEC 3991-1 and tEPEC E2348/69. Besides that, aEPEC strains persisted in both cell lineages for a minimum of 48 hours, although this index was higher for aEPEC 3991-1 in Caco-2 cells. In this cell lineage, IL-8 production was significantly higher in monolayers infected with the wild type aEPEC strain 1711-4 in 3 hours after infection than in those monolayers infected with other strains. Moreover, the aEPEC mutant 1711-4 ΔfliC induced lower IL-8 levels in early phase (3 h) but not at late phase (24 h). The aEPEC mutant 1711-4 ΔescN stimulated IL-8 levels, in early phase, significantly higher than that induced by the wild type strain, indicating an anti-inflammatory role for the effectors injected by the T3SS during the initial interaction between bacteria and host cell. Our findings indicate that aEPEC is a heterogeneous group of pathogens concerning their ability to adhere to, invade, persist and stimulate IL-8 production and suggests that some aEPEC are more prone to induce inflammatory response than the prototype tEPEC strain E2348/69. In the in vitro infection model of enterocytes, the integrity of flagella of aEPEC 1711-4 is necessary for efficient adhesion, invasion and early but not late stimulation of IL-8 production. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:49:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-25 / Associação Fundo de Incentivo à Psicofarmacologia (AFIP) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudos demonstram que a privação de sono (PS) provoca alterações cognitivas, como o prejuízo de memória. A PS pode ainda alterar a concentração de mediadores inflamatórios, como por exemplo as citocinas, que, por sua vez, estão relacionadas ao funcionamento cognitivo. Apesar das evidências, a relação das citocinas com este efeito da PS ainda precisa ser esclarecida. Dessa maneira, o presente trabalho teve como objetivo estudar o envolvimento destes mediadores inflamatórios no prejuízo de memória de ratos privados de sono. Ratos machos Wistar de 3 meses de idade foram privados de sono pelo método das plataformas múltiplas modificado durante 96 horas, enquanto que seus respectivos controles permaneceram nas gaiolas-moradia. Para a avaliação de memória após a PS, todos os animais foram submetidos ao treino, e, 24 horas depois, ao teste da tarefa de esquiva inibitória. O peso dos animais foi registrado diariamente. No primeiro experimento os animais receberam uma administração aguda de lipopolissacarídeo (LPS) nas doses 50 ou 75 Qg/Kg (i.p.), 3 horas antes do treino de esquiva inibitória, para induzir a produção de mediadores inflamatórios. Dadas as evidências do envolvimento da citocina interleucina-6 (IL-6) nos efeitos da PS, realizou-se também o bloqueio agudo e crônico desta citocina através da administração de um anticorpo (Ac) anti-IL-6 na dose 2 Qg/Kg (i.p.). A administração aguda também ocorreu 3 horas antes do treino de esquiva inibitória, enquanto que no tratamento crônico as administrações foram realizadas em todos os dias do período de PS. No tratamento com LPS, apenas a dose de 75 Qg/Kg resultou em um efeito significativo nas avaliações de memória: houve atenuação do prejuízo de memória dos animais privados de sono. Com relação ao peso corporal observou-se que o LPS reduziu significativamente o peso dos grupos controle e privado de sono 24 horas após a administração. Nos tratamentos com o Ac anti-IL-6, não foram observadas alterações no desempenho cognitivo, no entanto, o Ac atenuou a perda de peso nos animais privados de sono. Dessa maneira, os resultados sugerem o envolvimento de mediadores inflamatórios na modulação do prejuízo de memória e redução de peso observados em ratos privados de sono. / FAPESP: 08/51656-5 / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

SILVEIRA, Virgínia Régia Souza da. Polimorfismos nos genes interleucina10, NOS2A e ESR2 em portadores de periodontite crônica e agressiva. 2015. 98 f. Tese (Doutorado em Odontologia) - Faculdade de Farmácia, Odontologia e Enfermagem, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2015. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-17T11:37:57Z No. of bitstreams: 1 2015_tese_vrssilveira.pdf: 1561293 bytes, checksum: 0a986c2265513567ad7dcd0581acee92 (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-17T11:38:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_tese_vrssilveira.pdf: 1561293 bytes, checksum: 0a986c2265513567ad7dcd0581acee92 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-17T11:38:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_tese_vrssilveira.pdf: 1561293 bytes, checksum: 0a986c2265513567ad7dcd0581acee92 (MD5) Previous issue date: 2015 / Some inflammatory mediators such as interleukin-10 (IL-10), the molecule of nitric oxide (NO) and the hormone estrogen can participate in the inflammatory periodontal disease (PD). This study aimed to: 1) review the relationship of IL 10, NO and estrogen as well as genetic polymorphisms linked to genes encoding IL 10, isoforms of NOS and estrogen receptors with the DP (Chapter 1); 2) to investigate the association of IL-10, NOS2A and ESR2 genes in chronic periodontitis (CP) and aggressive (AP) (Chapter 2); 3) assess the relationship between prior periodontal treatment (PPT) e oral hygiene habits in patients with generalized aggressive periodontitis (GAP) (chapter 3). In study 1 was carried out a literature review and included clinical studies in humans, with publications in the English language that investigated the role of IL 10, NO and estrogen and related genetic polymorphisms in PD. In study 2 were investigated SNPs (single nucleotide polymorphisms) -1087G> A (rs1800896), -819C> T (rs1800871) and -592C> A (rs1800872) in the IL10 gene, + 2087G> A (rs2297518) in NOS2A gene and + 1730G> A (rs4986938) in ESR2 gene in 50 AP patients, 61 CP patients and 61 control patients. In study 3, 55 patients with generalized aggressive periodontitis (GAP) were analyzed through clinical periodontal examination and collection of data of oral hygiene and prior periodontal treatment (PPT). Study 1 showed that levels of IL 10 and NO are correlated with the PC. Associations were found for SNPs -592 and -819 of the IL 10 gene with chronic periodontitis and haplotype ATA with chronic and aggressive periodontitis. There is positive evidence of the use of replacement therapy with estrogen on the periodontal tissues in postmenopausal women. In study 2 patients with genotype + 2087GG in NOS2A gene showed a trend toward a significant association with PD (p = 0.05; OR = 0.44; 95% CI = 0.20 to 0.95). There were no significant associations with PD in the genotype analysis of IL 10 and ESR2 genes or haplotypes of IL 10 gene. In study 3 patients who did not use dental floss had a reduced chance in 84% of undergoing TPP (p = 0.005; OR = 0.16; 95% CI = 0.04 to 0.59). It is concluded that high concentrations of IL-10 and NO can be found in inflamed periodontal tissues. Subjects with the GG genotype in the SPN +2087 NOS2A gene were protected against the development of PD. There was a significant relationship between the use of dental floss and the presence of previous periodontal treatment. / Alguns mediadores inflamatórios como a interleucina-10 (IL-10), a molécula do óxido nítrico (NO) e o hormônio estrógeno parecem participar do processo inflamatório da doença periodontal (DP). Este trabalho teve por objetivo: 1) revisar a relação coma DP da IL-10, NO e estrógeno, assim como polimorfismos presentes nesses genes, respectivamente: IL10, isoformas das óxido nítrico sintases (NOS) e receptores de estrógeno (ESR) (capítulo 1); 2) investigar a associação dos genes IL10, NOS2A e ESR2 na periodontite crônica (PC) e agressiva (PAg) (capítulo 2); 3) avaliar o tratamento periodontal prévio (TPP) e hábitos de higiene oral em portadores de periodontite agressiva generalizada (PAgG) (capítulo3). No estudo 1, foi realizada uma revisão de literatura incluindo estudos clínicos em humanos, com publicações na língua inglesa, que investigaram o papel da IL-10, do NO e estrógeno e polimorfismos genéticos relacionados a esses mediadores na DP. No estudo 2, foram investigados os SNPs (Single Nucleotide Polymorphism ou polimorfismos de base única) -1087G>A (rs1800896), -819C>T (rs1800871) e -592C>A (rs1800872) no promotor do gene IL10, +2087G>A (rs2297518) no gene NOS2A e +1730G>A (rs4986938) no gene ESR2 em 50 pacientes com PAg, 61 pacientes com PC e 61 pacientes-controle. No estudo 3, foram avaliados 55 pacientes com PAgG mediante exame clínico periodontal, hábitos de higiene oral e tratamento periodontal prévio (TPP). Os resultados mostraram no estudo 1, que níveis elevados de IL-10 e NO estão correlacionados com a PC. Foram encontradas associações dos SNPs -592 e -819 do gene IL10 com a periodontite crônica e do haplótipo ATA com a periodontite crônica e agressiva. Existem evidências positivas do uso da terapia de reposição com estrógeno sobre os tecidos periodontais em mulheres na pós-menopausa. No estudo 2, o genótipo +2087GG no gene NOS2A mostrou tendência a uma associação significante com a DP (p= 0,05; OR= 0,44; 95% IC= 0,20-0,95). Não foram encontradas associações com DP na análise de genótipos dos genes IL10 e ESR2 ou haplótipos do gene IL10. No estudo 3 os pacientes que não utilizavam o fio dental apresentavam uma chance reduzida em 84% de terem realizado TPP (p= 0,005; OR= 0,16; 95% IC= 0,04-0,59). Conclui-se que concentrações elevadas de IL-10 e NO podem ser encontradas nos tecidos periodontais inflamados e existem associações dos polimorfismos genéticos no promotor do gene Interleucina-10 com a periodontite crônica e agressiva. Indivíduos que carregam o genótipo GG no SNP +2087 do gene NOS2A tendem a serem mais protegidos contra o desenvolvimento de DP. Nos pacientes com PAgG houve uma relação significativa entre o uso de fio dental e a presença de TPP.

Trabajo de Investigación Requisito para optar al Título de Cirujano Dentista / Introducción: Para eliminar las tinciones intrínsecas, se requieren químicos como el peróxido de hidrógeno que penetran el esmalte y la dentina y decoloran o solubilizan los cromóforos. Se han descrito efectos adversos asociados al blanqueamiento intracoronario, estos efectos se explican por la toxicidad del peróxido de hidrógeno y su alta difusión entre las estructuras dentarias. Diversos autores sugieren que esto podría generar algún tipo de respuesta inflamatoria al difundir y alcanzar los tejidos periodontales. El presente estudio de seguimiento evaluó la respuesta tisular frente al uso de dos agentes blanqueadores, mediante la cuantificación de los niveles de la citoquina IL-1β hasta 1 año posterior al blanqueamiento intracoronario. Materiales y métodos: Se incluyeron 46 dientes tratados endodónticamente, y con blanqueamiento intracoronario realizado, en pacientes mayores de 18 años que participaron voluntariamente de un estudio anterior titulado “Efecto del blanqueamiento intra coronario sobre los niveles de IL-1β en el fluido gingival crevicular”. Los pacientes que participaron del estudio anterior posteriormente de firmar el consentimiento informado, y tener sus fichas clínicas completas, fueron divididos al azar en dos grupos (G1 y G2), y sometidos a la técnica de Walking bleach para el blanqueamiento intracoronario, en donde se utilizaron dos geles distintos, Peróxido de Hidrógeno al 35% (en el G1) o Peróxido de Carbamida al 37% (en el G2), dicho tratamiento fue realizado en 4 sesiones separadas de una semana. Para este estudio de seguimiento, se incluyeron distintas sesiones de control, posterior a procedimiento explicado anteriormente, para evaluar los niveles existentes de IL-1β mediante obtención de muestras de fluido gingival crevicular (FGC) en 6 sitios por diente, a los 3 meses, 6 meses y 1 año posterior al blanqueamiento intracoronario. Todas las mediciones fueron realizadas por un odontólogo entrenado. Se cuantificaron los niveles de proteínas totales usando el método de Bradford® y a partir de 100 μL de muestra eluída se midieron los niveles de IL-1β mediante ELISA (Quantikine®; R&D Systems Inc.). Resultados: Los niveles de IL-1β aumentaron significativamente respecto a los niveles obtenidos previos al blanqueamiento en todos los tiempos evaluados, 3 meses, 6 meses y 1 año, en ambos grupos (p<0,05). No hay diferencia estadísticamente significativa entre los niveles de IL-1β al comparar los grupos G1 Y G2 (p>0,05). Conclusiones: Los niveles de IL-1β aumentan en ambos grupos posterior al blanqueamiento intracoronario y hasta el año post-blanqueamiento. Los niveles de IL-1β alcanzados en el presente estudio son compatibles con inflamación. / Adscrito a Proyecto PRI-ODO No. 03/016

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-03Bitstream added on 2014-06-13T20:14:13Z : No. of bitstreams: 1 000739847.pdf: 1497375 bytes, checksum: 323121923378634f36af730ba11e938a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Proposição: As células epiteliais das vias respiratórias desempenham uma importante função na patogênese da asma. Elas são responsáveis pela liberação de mediadores químicos ativadores do sistema imunológico na resposta inflamatória das vias aéreas. Citocinas e quimiocinas produzidas por leucócitos ativam as células estruturais dos brônquios e incitam a síntese de outros mediadores químicos que potencializam a inflamação no local. A interleucina-9 (IL-9) é uma importante citocina ativadora das células epiteliais, regula a produção de muco e induz a expressão de quimiocinas e citocinas. Os objetivos deste estudo foram investigar se células epiteliais de pulmão murino (LA-4) estimuladas com a citocina IL-9 produzem a quimiocina do timo regulada por ativação (CCL17/TARC) e o mediador lipídico leucotrieno-C4 (LTC4), e quais vias de sinalização intracelular estariam envolvidas nesse processo. Julga-se que as proteínas quinases desempenhem uma função primordial na expressão e ativação de citocinas e quimiocinas nas vias aéreas, portanto, foi investigada a função da p38 proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK), MAPK p42/44, e fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) sobre o efeito da IL-9 na expressão da quimiocina CCL17/TARC em células LA-4. Abordagem experimental: a expressão de CCL17/TARC por LA-4 foi avaliada utilizando Reação em Cadeia da Polimerase Transcriptase Reversa (RT-PCR). A produção de leucotrieno C4 (LTC4) e CCL17/TARC foi avaliada por ELISA. As células LA-4 foram pré-tratados com o antagonista do receptor de cisteinil leucotrieno (CysLT) (MK 571) (10 μM), com o inibidor da p42/44 MAPK (PD98059) (30 μM), inibidor... / Background and propose: The airway epithelial cells play an important role in the pathogenesis of asthma, are responsible for the release of chemical mediators of the immune system triggers inflammation in the airways. Cytokines and chemokines produced by leukocytes activate structural bronchial cells and induce the synthesis of other chemical mediators which enhance the site inflammation. Interleukin-9 (IL-9) is an important cytokine activating epithelial cells, regulating mucus production and induces the expression of chemokines and cytokines. The objectives of this study were to investigate whether murine lung epithelial cells (LA-4) IL-9-stimulated produce the thymus and activation-regulated chemokines (CCL17/TARC) and lipid mediator leukotriene-C4 (LTC4) and what intracellular signaling pathways would be involved in this process. Kinases are believed to play a crucial role in the expression and activation of cytokines and chemokines in the airways. Therefore the role of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), p42/44 MAPK, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) upon the effect of IL-9 on the CCL17/TARC expression in murine lung alveolar epithelial cells (LA-4) was investigated. Experimental approach: CCL17/TARC expression in LA-4 was evaluated using Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Leukotriene C4 (LTC4) and CCL17/TARC production were assessed by ELISA. LA-4 had been pre-treated with cysteinyl leukotriene receptor antagonist (CysLT) (MK 571) (10 μM), p42/44 MAPK inhibitor (PD98059) (30 M), p38 MAPK inhibitor (SB203580) (30 M), and PI3K inhibitor (Wortmannin) (0.1 M) 30 min prior to IL-9 (40 ng.mL-1) stimulation. Key results: IL-9-stimulated LA-4 induced CCL17/TARC mRNA expression after 24 hours. PD98059 and...

Made available in DSpace on 2015-03-03T11:52:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-04-14Bitstream added on 2015-03-03T12:07:17Z : No. of bitstreams: 1 000798375.pdf: 1469647 bytes, checksum: 70098a0da83fc8bbed975941dbb5e4c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da infecção endodôntica associada ou não à diabetes, nos níveis da citocina pró-inflamatória IL-17, nos tecidos periapical, hepático e renal de ratos Wistar. Foram utilizados 40 ratos machos divididos em quatro grupos contendo 10 animais cada grupo: ratos normoglicêmicos (N); ratos normoglicêmicos com periodontite apical (N-PA); ratos com diabetes experimental (DE); ratos com diabetes experimental e com periodontite apical (DE-PA). A diabetes foi induzida por meio da administração de estreptozotocina via veia peniana. Foi realizada avaliação glicêmica, para confirmar o desenvolvimento da doença, no sexto e no último dia do experimento. A infecção endodôntica foi induzida por meio da exposição pulpar do primeiro molar superior direito ao meio bucal. Após 30 dias, foram coletados o fígado e o rim, para a quantificação da IL-17 pelo método ELISA, bem como a hemi-maxila direita para a quantificação da IL-17 pela técnica imunoistoquímica. Os valores obtidos nos testes paramétricos foram tabulados e analisados, estatisticamente, por meio dos testes de análise de variância (ANOVA) e teste de Tukey (p<0,05). Os valores obtidos em scores foram analisados, estatisticamente, por meio dos testes de Kruskal-Wallis e teste de Dun (p<0,05). Os resultados mostraram que os ratos diabéticos (DE e DE-PA) apresentaram maior quantidade de IL-17 nos tecidos hepático e renal quando comparados aos ratos normoglicêmicos (N e N-PA) (p<0,05). A análise histológica mostrou que a periodontite apical de ratos diabéticos (DE-PA) possui maior severidade quando comparada com a dos ratos normoglicêmicos (N-PA) (p<0,05), além disso, houve um aumento significativo dos níveis de IL-17 na periodontite apical dos ratos diabéticos (DE-PA) quando comparados aos... / The aim of this study was to evaluate the influence of endodontic infection with or without diabetes, in the levels of proinflammatory cytokine IL-17 in apical periodontitis and hepatic and renal tissues of Wistar rats. Forty male Wistar rats were divided into four groups of ten animals each: normoglycemic rats (N), normoglycemic rats with apical periodontitis (N-AP), rats with experimental diabetes (ED), rats with experimental diabetes and apical periodontitis (ED-AP). Diabetes was induced by injection of streptozotocin in the penile vein. Glycemic control was performed to confirm the development of the disease at the sixth and last day of the experimental period. The endodontic infection was induced by exposure of the upper right first molar to the oral environment. After 30 days, the hepatic and renal tissues were collected for the IL-17 quantification by ELISA, as well the right hemi-jaw for the IL-17 quantification by immunohistochemistry. The values obtained in parametric tests were tabulated and analyzed statistically by means of analysis of variance tests (ANOVA) and Tukey test (p<0.05). The values obtained for scores were statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Dun test (p<0.05). The results showed that diabetic rats (ED and ED-AP) showed a higher IL-17 levels in the hepatic and renal tissues compared to normoglycemic rats (N and N-AP) (p<0.05). The apical periodontitis in diabetic rats (ED-AP) had higher severity when compared to normoglycemic rats (N-PA) (p<0.05), furthermore, there was a large increase in IL-17 levels in apical periodontitis of diabetics rats (ED-AP) when compared with normoglycemic rats (N-AP) (p<0.05). However, the induced endodontic infection did not alter IL-17 levels in hepatic and renal tissues (p>0.05). It may be concluded that diabetes increases IL-17 levels in hepatic and renal tissues, as well as enhances... / FAPESP: 12/02565-2

A endometriose é caracterizada pela presença de tecido endometrial localizado fora da cavidade uterina como peritônio, ovários e septo reto-vaginal e sua prevalência gira em torno de 6% a 10%. Mulheres com endometriose podem ser assintomáticas ou apresentar queixas de dismenorréia, dispareunia, dor pélvica crônica e/ou infertilidade. Em relação à patogênese, a teoria da menstruação retrógrada é bem aceita, embora alterações na biologia molecular do endométrio pareçam ser fundamentais para o desenvolvimento dos implantes endometrióticos. Evidências indicam que a endometriose está associada com aumento das concentrações de citoquinas pró-inflamatórias, fatores de crescimento e de angiogênese no fluido peritoneal (FP). Entre as citoquinas, a leptina é uma proteína derivada do gene da obesidade (Ob) que, além de ações no balanço energético, ingestão alimentar e controle do peso corporal também apresenta atividades imunorregulatórias e angiogênicas. A interleucina-6 (IL-6) é uma glicoproteína secretada por diversos tipos de células, incluindo macrófagos peritoneais e células estromais endometriais. A IL-6 é um marcador da resposta inflamatória de fase aguda e tem diversas atividades biológicas como indução da expressão do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF), crescimento e diferenciação de linfócitos B e ativação de linfócitos T. Estas citoquinas podem ter um papel na endometriose através das suas propriedades inflamatórias e angiogênicas. No presente estudo, avaliamos a razão leptina/IMC e os níveis de IL-6 no soro e FP, bem como a expressão gênica da leptina e da forma longa do seu receptor (OB-RL) no endométrio tópico e ectópico de 30 mulheres com endometriose e 19 controles com pelve normal à laparoscopia. A razão leptina/IMC no soro foi significativamente maior no grupo com endometriose em relação às controles normais 0.61 (0.41 – 0.95) e 0.41 (0.22 – 0.71) P<0.05, respectivamente. A expressão gênica da leptina e do OB-RL foi significativamente maior no endométrio ectópico do que no endométrio tópico de pacientes com diferentes estágios da endometriose e controles. Uma correlação positiva entre níveis de RNAm da leptina e do OB-RL foi observada no endométrio ectópico e tópico das pacientes com endometriose e no endométrio tópico das controles. A imuno-histoquímica do OB-RL foi mais intensa nas células estromais e epiteliais do endométrio tópico das pacientes e controles com maiores níveis de leptina no FP. Os níveis de IL-6 no FP foram significativamente maiores no grupo com endometriose do que no controle e também nas pacientes com endometriose III e IV em comparação a I e II e controles. Houve uma correlação positiva e significativa entre os níveis de IL-6 no FP e o escore de gravidade da endometriose da American Society of Reproductive Medicine-revised (ASRM-r). Concluindo, nossos resultados sugerem que a razão leptina/IMC está associada com a presença da endometriose, o uso desta razão na prática clínica para predizer a presença de endometriose necessita ainda confirmação. Concentrações mais elevadas de leptina e OB-RL no endométrio ectópico sugerem uma modulação positiva entre a leptina e seu receptor ativo com um papel da leptina no desenvolvimento dos implantes endometrióticos. Finalmente, nosso estudo sugere que a IL-6 esteja associada com a presença da endometriose pélvica e sua gravidade. Estudos avaliando a expressão gênica e protéica da IL-6 no endométrio tópico e ectópico são necessários para melhor elucidar o papel desta citoquina na patogênese da endometriose. / Endometriosis is characterized by the presence of endometrial tissue, localized out of the uterine cavity, like peritoneum, ovaries, and rectum-vaginal septum, with a prevalence of about 6% to 10%. Women with endometriosis may be asymptomatic or present dysmenorrhea, dyspareunia, chronic pelvic pain and/or infertility. Concerning its pathogenesis, while the retrograde menses theory is well accepted, disruption on endometrial molecular mechanisms seems to be critical to development of endometrial ectopic implants. Evidences support that endometriosis is associated with abnormal levels of proinflammatory cytokines, growth and angiogenic factors on peritoneal fluid (PF). Leptin is an adipocyte derived protein and Ob-gene product. Besides the well established functions in energetic balance, food intake and body weight controls, leptin also presents imunoregulatory and angiogenic activities. Interleukin-6 (IL-6) is a glycoprotein secreted by several cell types, including peritoneal macrophages and endometrial stromal cells. IL-6 is a marker of the acute-phase inflammatory response and has several biologic activities including the induction of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression, growth and differentiation of B lymphocytes and activation of T lymphocytes. These cytokines may play a role in endometriosis through its inflammatory and angiogenic proprieties. In the present study, we assessed leptin/BMI ratio and IL-6 levels in serum and peritoneal fluid (PF) and evaluated the gene expression of leptin and its long form receptor (OB-RL) in eutopic and ectopic endometrium of 30 women with endometriosis and 19 controls with normal pelvis at laparoscopy. Serum leptin/BMI ratio was significantly increased in endometriosis in comparison with controls [0.61 (0.41 – 0.95); 0.41 (0.22 – 0.71) P<0.05]. Leptin and OB-RL gene expression was significantly higher in ectopic endometrium than in eutopic endometrium of patients with different stages of endometriosis and controls. A positive correlation between leptin mRNA and OB-RL mRNA expression was observed in ectopic and eutopic endometrium in patients and in eutopic endometrium in controls. OB-RL immunostaining was more intense in stromal and epithelial cells of eutopic endometrium in patients and controls with higher PF leptin levels. IL-6 levels in the PF were found to be significantly higher in endometriosis group than in controls. In addition, IL6 levels in PF were significantly higher in patients with endometriosis III and IV in comparison to I and II and normal pelvis controls. There was a positive and significant correlation between IL-6 levels in PF and endometriosis ASRM-r score of severity. In conclusion, our data suggest that serum leptin/BMI ratio is associated with the presence of endometriosis, although the clinical use of leptin/BMI ratio to predict endometriosis presence still needs confirmation. Moreover, the increased expression of leptin and OB-RL in ectopic endometrium suggests a modulatory interaction between leptin and its active receptor and a role of leptin in the development of endometrial implants. In addition, our study suggests that IL-6 may be associated with the presence of pelvic endometriosis and its gravity. Further studies evaluating IL-6 gene and protein expression in topic and ectopic endometrium are needed to better elucidate the role of this cytokine on the pathogenesis of endometriosis.

Resumo não disponível

Orientador: Sandra Helena Penha de Oliveira / Banca: Lucia Helena Faccioli / Banca: Ana Paula Campanelli / Resumo: Proposição: As células epiteliais das vias respiratórias desempenham uma importante função na patogênese da asma. Elas são responsáveis pela liberação de mediadores químicos ativadores do sistema imunológico na resposta inflamatória das vias aéreas. Citocinas e quimiocinas produzidas por leucócitos ativam as células estruturais dos brônquios e incitam a síntese de outros mediadores químicos que potencializam a inflamação no local. A interleucina-9 (IL-9) é uma importante citocina ativadora das células epiteliais, regula a produção de muco e induz a expressão de quimiocinas e citocinas. Os objetivos deste estudo foram investigar se células epiteliais de pulmão murino (LA-4) estimuladas com a citocina IL-9 produzem a quimiocina do timo regulada por ativação (CCL17/TARC) e o mediador lipídico leucotrieno-C4 (LTC4), e quais vias de sinalização intracelular estariam envolvidas nesse processo. Julga-se que as proteínas quinases desempenhem uma função primordial na expressão e ativação de citocinas e quimiocinas nas vias aéreas, portanto, foi investigada a função da p38 proteína quinase ativada por mitógeno (MAPK), MAPK p42/44, e fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) sobre o efeito da IL-9 na expressão da quimiocina CCL17/TARC em células LA-4. Abordagem experimental: a expressão de CCL17/TARC por LA-4 foi avaliada utilizando Reação em Cadeia da Polimerase Transcriptase Reversa (RT-PCR). A produção de leucotrieno C4 (LTC4) e CCL17/TARC foi avaliada por ELISA. As células LA-4 foram pré-tratados com o antagonista do receptor de cisteinil leucotrieno (CysLT) (MK 571) (10 μM), com o inibidor da p42/44 MAPK (PD98059) (30 μM), inibidor... / Abstract: Background and propose: The airway epithelial cells play an important role in the pathogenesis of asthma, are responsible for the release of chemical mediators of the immune system triggers inflammation in the airways. Cytokines and chemokines produced by leukocytes activate structural bronchial cells and induce the synthesis of other chemical mediators which enhance the site inflammation. Interleukin-9 (IL-9) is an important cytokine activating epithelial cells, regulating mucus production and induces the expression of chemokines and cytokines. The objectives of this study were to investigate whether murine lung epithelial cells (LA-4) IL-9-stimulated produce the thymus and activation-regulated chemokines (CCL17/TARC) and lipid mediator leukotriene-C4 (LTC4) and what intracellular signaling pathways would be involved in this process. Kinases are believed to play a crucial role in the expression and activation of cytokines and chemokines in the airways. Therefore the role of p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK), p42/44 MAPK, and phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) upon the effect of IL-9 on the CCL17/TARC expression in murine lung alveolar epithelial cells (LA-4) was investigated. Experimental approach: CCL17/TARC expression in LA-4 was evaluated using Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction (RT-PCR). Leukotriene C4 (LTC4) and CCL17/TARC production were assessed by ELISA. LA-4 had been pre-treated with cysteinyl leukotriene receptor antagonist (CysLT) (MK 571) (10 μM), p42/44 MAPK inhibitor (PD98059) (30 M), p38 MAPK inhibitor (SB203580) (30 M), and PI3K inhibitor (Wortmannin) (0.1 M) 30 min prior to IL-9 (40 ng.mL-1) stimulation. Key results: IL-9-stimulated LA-4 induced CCL17/TARC mRNA expression after 24 hours. PD98059 and... / Mestre