Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo5218_1.pdf: 1609522 bytes, checksum: f6a31b681ad5e8d7777d12b831c3590a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Esta tese define um método de implementação orientado a aspectos que guia a implementação de requisitos (concerns) de comunicação (distribuição), gerenciamento de dados e de controle de concorrência como aspectos. Um aspecto é um novo mecanismo de abstração adicionado pelo paradigma orientado a aspectos estendendo o paradigma orientado a objetos. O objetivo desta nova abstração é aumentar a modularidade do software e, portanto, sua manutenibilidade. A modularidade alcançada pelo uso de aspectos permite que programadores adicionem ou modifiquem a funcionalidade do software com mudanças não-invasivas, as quais mantém o código base livre de detalhes sobre estas mudanças e, portanto, mais fácil de entender e modificar. Além disso, este tipo de mudança evita que códigos de diferentes requisitos (concerns) fiquem misturados com o código base e entre si e que fiquem espalhados por vários módulos do software. Também definimos como o método de implementação pode ser composto com o processo de desenvolvimento RUP, de modo a ajustar atividades de gerenciamento, levantamento de requisitos, análise e de projeto para que possam suportar a aplicação do método num contexto do desenvolvimento de software. Além disso, o método apresenta uma abordagem de implementação alternativa que tenta antecipar mudanças de requisitos através da implementação de protótipos funcionais mais precocemente do que numa abordagem regular. Desta forma, clientes e desenvolvedores podem testar o software antes de aplicar esforço adicional para implementar requisitos de distribuição, persistência e de controle de concorrência. Um estudo foi executado de modo a caracterizar quão útil é esta abordagem alternativa, provendo um suporte para a tomada de decisões sobre quando utilizar a abordagem alternativa ou a regular. Em adição, o método provê suporte automatizado para a geração de tipos do software base e de aspectos para implementar requisitos de gerenciamento de dados, comunicação e de controle de concorrência. De fato, esta ferramenta guia a aplicação do método e o uso de um framework de aspectos gerado pelo método, o qual permite um reuso de parte dos aspectos gerados neste trabalho. O método de implementação foi definido com base numa arquitetura de software específica que apesar de específica pode ser utilizada pra implementar vários tipos de softwares

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2016-08-18T18:50:03Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESECouto,FMMBIBLIOTECA.pdf: 2624941 bytes, checksum: bb7fcea419304e7ea3eff4866c1b56e8 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-18T18:50:03Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) TESECouto,FMMBIBLIOTECA.pdf: 2624941 bytes, checksum: bb7fcea419304e7ea3eff4866c1b56e8 (MD5) Previous issue date: 2013-02-13 / CAPES / Fungemia, presença de fungos no sangue, tem incidência crescente nas últimas décadas, acarretando sério problema em pacientes hospitalizados, sobretudo com câncer. Novos compostos antifúngicos e antitumorais têm sido propostos para tratamento destas doenças. Assim, o propósito desta pesquisa foi diagnosticar e traçar dados epidemiológicos de fungemia, assim como avaliar a ação antifúngica e antitumoral de isoflavonas da soja (daidzeína e genisteína) e hidroxipiridonas (ciclopirox olamina e octopirox olamina). Foram analisadas amostras de sangue de pacientes internados em hospital universitário de Recife-PE, Brasil e realizado antifungigrama dos agentes etiológicos com fluconazol, anfotericina B, isoflavonas da soja e hidroxipiridonas. Ainda, as isoflavonas e hidroxipiridonas foram avaliadas quanto à citotoxicidade às células neoplásicas (pulmão, laringe e cólon) e a ação da octopirox olamina contra candidemia e tumor sarcoma 180 em análises experimentais. Oito casos de fungemia foram diagnosticados tendo Candida, Histoplasma, Trichosporon, Cryptococcus e um fungo demáceo como agentes etiológicos. A maioria dos pacientes pertencia a idade adulta, sexo masculino e eram portadores da síndrome da imunodeficiência adquirida. Nenhuma das isoflavonas apresentou atividade antifúngica, contudo, a genisteína foi efetiva para câncer de laringe. Em contrapartida, as hidroxipiridonas, sobretudo, octopirox olamina, apresentaram já em baixas concentrações, ação antifúngica e antitumoral in vitro e in vivo. Para tratamento de neoplasias associadas à candidemia, octopirox olamina pode ser uma alternativa promissora. / Fungemia, presence of fungi in the blood, has a rising incidence in recent decades, causing serious problem in hospitalized patients, especially cancer. New antifungal and antitumor compounds have been proposed for treating these diseases. Thus, the purpose of this research was to diagnose and trace epidemiological data fungemia as well as evaluate the antifungal and antitumour of soy isoflavones (daidzein and genistein) and hydroxypyridones (ciclopirox olamine and octopirox olamine). We analyzed blood samples from patients admitted to a university hospital in Recife-PE, Brazil and performed in vitro the antifungal susceptibility of the etiologic agent fluconazole, amphotericin B, and soy isoflavones hydroxypyridones. Still, isoflavones and hydroxypyridones were evaluated for cytotoxicity to tumor cells (lung, larynx and colon) and the action of candidemia and octopirox olamine against sarcoma 180 tumor in experimental analyzes. Were diagnosed eight cases of fungemia with Candida, Histoplasma, Trichosporon, Cryptococcus and a dematiaceous fungus as etiological agents. Most patients belonged to adulthood, males and were carriers of acquired immunodeficiency syndrome. None of isoflavones showed antifungal activity, however, genistein was effective for larynx cancer. In contrast, hydroxypyridones especially octopirox olamine in already at low concentrations has antifungal and antitumor in vitro and in vivo. For treatment of malignancies associated with candidemia, octopirox olamine may be a promising alternative.

Se conocen como técnicas de resolución subpíxel aquellas que son capaces de detectar objetos o movimientos capturados por una cámara digital con una resolución superior a la definida por un único sensor. Dado que estas técnicas son capaces de detectar información por encima de la resolución límite teórica del sistema, se engloban dentro de los llamados métodos superresolventes (“Superresolución,” 2019). Las técnicas subpíxel para medidas no invasivas se utilizan desde que se empezó a considerar insuficiente la resolución de la imagen digital para ciertas aplicaciones. Esto ocurre porque en una imagen digital, a priori, no es posible distinguir detalles entre dos puntos del objeto de interés si ambos coinciden dentro del mismo píxel en la imagen, ya que cada píxel proporciona una información única y uniforme para toda su superficie. Originalmente, se comenzaron a utilizar técnicas de correlación para obtener una resolución ampliada (Pearson et al., 1977) y seguidamente, empezaron a aparecer trabajos que trataban de aprovechar las limitadas posibilidades de los sistemas digitales de imagen. Al aumentar el desarrollo tecnológico, empieza a ser más fácil la implementación de métodos de detección de objetos. La mayoría de estudios que utilizan estas técnicas intentan detectar dianas específicas con formas conocidas que se utilizarán como referencia para centrar y guiar sistemas de detección y posicionamiento de objetos con precisión subpíxel. La tecnología de la imagen digital se ha expandido y mejorado enormemente en las últimas décadas, perfeccionando tanto la capacidad de los sistemas de captación y procesado como la calidad de las imágenes obtenidas. Actualmente, los sensores digitales de imágenes están muy extendidos y sus resoluciones espaciales igualan e incluso mejoran la resolución esperada con las películas analógicas tradicionales, aunque, a pesar de estas mejoras, las técnicas subpíxel siguen siendo necesarias ya que muchas limitaciones prácticas permanecen. La localización y detección de movimientos de objetos con precisión subpíxel será de utilidad cuando la amplitud de dichos movimientos en el plano de la imagen sea de una fracción de píxel, por lo que no se podría detectar a priori. No obstante, en cuanto ese movimiento produzca un cambio en la respuesta del sensor de la cámara, esa variación será detectable y el desplazamiento subpíxel quedará registrado. Si este proceso se repite en el mismo u otro píxel, se registrarán movimientos sucesivos y podrá determinarse, mediante el análisis matemático pertinente, la trayectoria del objeto observado. Bajo esta premisa, se pueden encontrar diferentes métodos para el seguimiento de objetos en una imagen. Si en la escena se incluye una diana que tenga una forma matemáticamente descriptible, se podrían utilizar las restricciones geométricas que definen el objeto para detectar de manera precisa su posición o desplazamiento (Espinosa et al., 2015). Por ejemplo, un segmento recto mantiene todos los puntos alineados, de modo que una ligera desviación en la posición de los píxeles que registran el objeto podría interpretarse como un desplazamiento o un giro, aunque no haya un desplazamiento claro de un píxel a otro. Para efectuar esta detección podrían utilizarse técnicas de reconocimiento de formas o técnicas estadísticas como el cálculo del centro de masas o del centroide. Desafortunadamente, no siempre es posible reconocer el objeto de interés porque puede no estar bien contrastado o aislado del fondo o bien, porque no tiene una forma matemáticamente descriptible. En estos casos, se puede utilizar un modelo del objeto obtenido, por ejemplo, a partir de una imagen de la secuencia grabada para detectar el movimiento y localizarlo luego mediante la correlación cruzada mejorada con un ajuste del pico para poder describir el movimiento a nivel subpíxel. También pueden ser útiles las técnicas basadas en la detección local de vibraciones, donde no será necesario conocer la forma del objeto, sino detectar zonas o incluso píxeles aislados que muestren una oscilación periódica en la luminancia (Ferrer et al., 2013). La hipótesis principal de este trabajo consiste en que, mediante la detección de pequeños cambios de intensidad luminosa en el sensor de la cámara, se pueden identificar y seguir los movimientos producidos en el objeto de interés incluso con errores inferiores al tamaño del píxel en la imagen. La finalidad es estudiar teórica y experimentalmente los métodos de detección y seguimiento de objetos con precisión subpíxel sin identificación previa del objeto. Para ello, los dos objetivos principales son estudiar y optimizar los métodos de seguimiento con precisión subpíxel e implementarlos después experimentalmente. Para desarrollar estos objetivos, es imprescindible realizar una búsqueda bibliográfica exhaustiva de las técnicas subpíxel desarrolladas y empleadas por otros grupos de investigación. Se ha visto con esta búsqueda que el método principal de medida de desplazamientos en imágenes es la correlación cruzada entre una imagen de referencia y su versión desplazada, aunque para conseguir una resolución subpíxel es necesario introducir un ajuste en el entorno del pico de correlación para recalcular la nueva posición del máximo. Así, se explicará de modo pormenorizado esta técnica resaltando sus ventajas e inconvenientes, así como las diferentes técnicas que se utilizan para superar dichos problemas (Tomás et al., 2020). La búsqueda bibliográfica ha revelado que algunos autores aseguran que desenfocar ligeramente el objeto de interés puede mejorar la detección con precisión subpíxel de la correlación cruzada (Michaelis et al., 2016; Overmars et al., 2010; Zhou et al., 2015), aunque no especifican el nivel de desenfoque. Por ello, se ha llevado a cabo un estudio teórico para poder proporcionar unos valores de desenfoque que mejoren dicha detección. Para ello, se han generado 5 tests binarios con un desplazamiento dado y se han evaluado sus errores al realizar la correlación cruzada utilizando tres tipos de interpolaciones del pico de correlación con diferentes tamaños de la matriz alrededor del pico y con 6 niveles de desenfoque distintos (contando también sin desenfocar) introducido mediante un filtro de desenfoque gaussiano. En segundo lugar y para obtener unos resultados directamente comparables con los que se presentan en la bibliografía, se ha estudiado el método utilizando 5 secuencias de imágenes con speckle procedentes de un banco de imágenes público (“Previous DIC Challenge 1.0 Data,” 2020). Estas secuencias suelen ser empleadas para validar los métodos de seguimiento con precisión subpíxel ya que en el banco de imágenes se proporcionan los datos de desplazamiento, ruido y contraste de las imágenes. El estudio plantea la correlación con un ajuste analítico del área local alrededor del pico de correlación. Se ha analizado tanto el efecto del tamaño de la zona de análisis como el método de ajuste del entorno a una función continua para relocalizar el pico de correlación. Para ello, se han implementado los tres métodos de ajuste más utilizados en la bibliografía (Michaelis et al., 2016; Roesgen, 2003; Nobach et al., 2005) como son el ajuste del pico de correlación por splines, el ajuste a una función polinómica y el ajuste a una función gaussiana. Como resultado de este estudio (Tomás et al., 2020), se ha obtenido que, según el tipo de ajuste utilizado, puede ser mejor que el objeto de interés esté ligeramente desenfocado o no. Además, para cada ajuste, la matriz de píxeles alrededor del pico de correlación utilizada para el interpolado es óptima con un tamaño distinto. En el caso del ajuste con splines, se han obtenido mejores resultados con vecindarios en torno al pico de correlación de gran tamaño y con un nivel alto de desenfoque. Las características particulares de los splines hacen que este tipo de ajuste se adapte mucho a la forma del pico, por lo que sus resultados son muy variables en función del objeto que se tenga. En cuanto al ajuste polinómico, los mejores resultados ocurren con tamaños de matriz de ajuste pequeños y desenfoques altos. Por último, en el ajuste gaussiano se han obtenido buenos resultados (los mejores de todo el estudio) con tamaños de matriz de ajuste grandes y sin desenfocar, aunque para este ajuste, la selección de los diferentes parámetros es mucho más crítica que en las otras dos interpolaciones, produciendo resultados muy malos si los parámetros no son los óptimos. Se debe tener en cuenta también que los objetos con speckle utilizados en este estudio no son siempre los que se encontrarán en los experimentos reales y que, con otro tipo de objetos, estos resultados podrían verse ligeramente modificados. Siguiendo con el método de la correlación cruzada junto con un ajuste del pico de correlación, se ha llevado a cabo un experimento práctico para medir la expansión de una roca arenisca al hincharse por hidratación estando parcialmente sumergida en agua (Ferrer et al., 2021). Este trabajo tiene gran interés en el campo de la restauración de edificios históricos para evaluar el estado de deterioro de las construcciones (Di Benedetto et al., 2015). Además, el método estándar para medir esta expansión por hidratación en muestras de roca consiste en la utilización de un transformador diferencial variable lineal (LVDT por sus siglas en inglés) que, colocado en la parte superior de la muestra, permite medir movimientos verticales, pero para medir también los horizontales se debe realizar un montaje bastante sofisticado. Realizar esta medida mediante imágenes permite reducir costes económicos y complejidad de montaje experimental, además de proporcionar resultados de desplazamientos tanto horizontales como verticales con solo un montaje sencillo. En este estudio experimental se ha obtenido que los resultados son parecidos a aquellos medidos con el LVDT, por lo que se está introduciendo una mejora en el proceso de medida al ser un experimento más sencillo que proporciona unos resultados similares. Además, si se quisiera realizar este mismo experimento fuera del laboratorio sobre la roca utilizada como material de construcción de una edificación, sería factible realizar esta medida y analizarla posteriormente grabando solo la zona de interés de la roca. Sin embargo, realizar esta medida con el palpador, implicaría un montaje mucho más sofisticado incluyendo la extracción de una muestra, lo que puede ser problemático en un edificio histórico. Por otra parte, se ha realizado otro estudio experimental para determinar si la textura propia del hormigón puede ser utilizada como diana natural utilizando el método de la correlación cruzada junto con un ajuste del pico de correlación. Para ello, se han evaluado un total de 21 probetas de hormigón generadas con distintas técnicas de encofrado, compactación y consistencia del hormigón y se han grabado distintas secuencias estáticas de cada probeta de hormigón variando la iluminación y el desenfoque en condiciones de laboratorio. El objetivo final de este estudio sería analizar la viabilidad de utilizar la correlación cruzada para analizar los movimientos de un objeto con textura de hormigón en condiciones reales, esto es, al aire libre y a gran distancia del objeto. No obstante, este objetivo final tiene muchas incertidumbres ya que al aire libre no se pueden controlar muchas variables del ensayo como la iluminación, el viento sobre el trípode de la cámara, el ruido o la distorsión atmosférica, entre otras. Por ello, se ha evaluado en primer lugar la viabilidad de la medida con la textura de hormigón en condiciones controladas de laboratorio y, tras obtener un resultado positivo, ya es posible realizar medidas más complejas y con más variables en juego. Finalmente, se ha encontrado en la bibliografía reciente una nueva técnica para medidas de desplazamientos con precisión subpíxel basada en el análisis de la diferencia en la luminancia entre dos imágenes (Wan et al., 2020). Este análisis de la luminancia se realiza calculando la diferencia de nivel de gris entre las imágenes en horizontal y en vertical para poder determinar el desplazamiento en ambas direcciones. La ventaja principal de este método es su rapidez en el cálculo, aunque presenta los inconvenientes de que es muy sensible al ruido y a cambios de iluminación en la escena y que necesita una calibración previa. Una medida experimental previa para utilizarla como calibración no siempre será posible, ya que las medidas pueden consistir en tests destructivos o procesos irreversibles. Así pues, nos hemos planteado realizar una precalibración digital mediante secuencias de movimiento subpíxel generadas por ordenador. Para ello, hemos implementado dos métodos diferentes, uno basado en propiedades de la Transformada de Fourier y otro con interpolación de rejilla. Con este análisis, se demuestra que el método de rejilla que utiliza el algoritmo griddedInterpolant de Matlab es efectivo para realizar un desplazamiento digital del objeto que sirva como calibración. De este modo, se ha procedido a comparar de manera numérica y experimental el nuevo método con el de la correlación anteriormente presentado. En la prueba teórica se ha obtenido que, en general, el método basado en la diferencia de imágenes proporciona mejores resultados que el basado en la correlación. No obstante, las diferencias son pequeñas y podrían ser irrelevantes a nivel experimental. Para las pruebas de laboratorio se utilizaron los mismos objetos empleados en la evaluación de la precalibración digital, pero esta vez desplazados con un motor micrométrico y controlando la iluminación para que el contraste entre el objeto y el fondo sea máximo y obtener, de esta forma, unos resultados comparables a los obtenidos utilizando la correlación cruzada. Los resultados mostrados con este nuevo método son que no presenta el error de atrapamiento de pico y que, en general, es más robusto con imágenes reales respecto del método de la correlación, aunque debe controlarse muy bien el contraste de las imágenes grabadas. Por otra parte, aunque este nuevo método proporcione resultados similares o incluso mejores a los de la correlación cruzada, presenta los inconvenientes que ya se han comentado, como son: insensibilidad a la dirección del movimiento, sensibilidad al ruido y a cambios de iluminación y necesidad de una calibración previa para poder conocer la cantidad de movimiento que se está produciendo en el objeto. Para finalizar, y tras realizar experimentos con los distintos métodos subpíxel para evaluar su funcionamiento, llegamos a la conclusión de que las técnicas subpíxel estudiadas en este trabajo de tesis son adecuadas para medir movimientos con una resolución por encima de la resolución nominal determinada por el sistema de captación de imágenes utilizado. No obstante, es importante continuar investigando en la aplicación práctica de estas técnicas para poder utilizarlas en entornos menos controlados en los que las condiciones de iluminación o contraste no puedan mantenerse constantes durante todo el experimento. / Cofinanciada por: La Generalitat Valenciana y el Fondo Social Europeo a través de la subvención para la contratación de personal investigador de carácter predoctoral, ACIF/2018/211.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O rápido crescimento da população humana durante os últimos dois séculos criou desafios significativo para a produção agrícola. Insetos-praga de culturas agrícolas representam impacto direto no sistema de produção agrícola global, e quanto as pragas invasoras, uma invasão bem-sucedida em um novo ambiente representa uma preocupação de biossegurança significativa. As medidas de biossegurança buscam proteger a economia, ambiente e sociedade de introduções intencionais ou acidentais de pragas invasoras que podem colocar o sistema em risco. Mais do que nunca, as altas demandas de produtividade agrícola demandam inovação no controle de organismos exóticos invasores, tais como ervas daninhas, doenças, insetos e outras pragas que são capazes de desenvolver mecanismos adaptativos tais como a resistência a diferentes medidas de controle. Uma porcentagem dessas espécies pode se espalhar rapidamente para além das suas áreas introduzidas e se tornar espécie invasora. As invasões biológicas constituem um dos principais fatores para a alterações ambientais, afetando a conservação, a saúde humana e a agricultura. Técnicas gnéticas se usadas corretamente, podem proporcionar confirmações efetivas e rápidas da presençca/ausencia de determinadas espécies praga invasoras/exóticas contribuindo para que potencias perdas economicas sejam evitadas. Além disso, podem contribuir para o monitorizamento e gestão eficaz de espécies de pragas exóticas, uma vez identificados e marcadores apropriados desenvolvidos. Gestores que procuram controlar e/ou mitigar a propagação de espécies pragas invasoras irão se beneficiar de informações que ajudam a identificar populações de origem e rotas incursão. Ferramentas genéticas eficazes também pode fornecer informações sobre a potencial origem de uma espécie invasora, determinar se a introdução foi intencional ou não intencional, e/ou por meio de escape de cativeiro. Isto também pode ter implicações para identificar a rota de entrada e auxiliar na prevenção de invasões adicionais da mesma origem. O Brasil tem um alto risco para a introdução e estabelecimento de insetos exóticos devido as suas dimensões continentais, grande região de fronteira e diversas zonas climáticas. Esse trabalho visa preencher algumas das lacunas que existem na compreensão dos riscos de biossegurança envolvendo pragas invasoras na América do Sul. O potencial de uso de ferramentas moleculares para identificar e estudar a genética de populações de duas pragas invasoras na América do Sul foi explorado. O objetivo foi fornecer rápida confirmação de espécie utilizando NGS e marcadores moleculares e, especificamente, entender a diversidade genética dessas espécies pragas invasoras, gerando conhecimento necessário para melhorar as estratégias de biossegurança utilizadas nos países da América do Sul. As espécies utilizadas neste estudo foram, portanto, escolhidas com base em seu impacto econômico nas regiões onde foram encontradas. O primeiro estudo teve como alvo a mosca da haste Melanagromyza sojae, a qual foi encontrada danificando lavouras de soja no sul do Brasil. Na falta de especialistas para identificar espécies de Melanagromyza spp. no Brasil, a identificação morfológica foi realizada com o suporte do pesquisador Hugh Brier, Entomologista Senior no Queensland Department of Agriculture and Fisheries, Australia, antes do início da caracterização molecular do genoma mitochondrial no CSIRO (Commonwealth Scientific and Industry Research Organization) in Canberra, Australia. Os insetos suspeitos foram identificados por caracteres morfológicos larvais como M. sojae e os genomas mitocondrias completes (mtDNA) de três M. sojae coletadas de soja (Glycine max L.) no Brasil foram sequenciados utilizando a plataforma Illumina MiSeq NGS, e a sequência específica do gene mitocondrial COI foi caracterizado. O anotação completa do mtDNA também proporcionou a oportunidade para anotar todos os 13 genes que codificam proteínas de M. sojae, bem como a estimativa das taxas de polimorfismo no mitogenome completo. Marcadores de DNA robustos para identificação de M. sojae e estudos genéticos foram desenvolvidos e uma filogenia de máxima verossimilhança utilizando sequências parciais mtDNA COI de um indivíduo representativo foi construído para inferir a posição filogenética do espécime brasileiro de M. sojae, e também para determinar se essa espécie de mosca já tinha tido essa região do gene mitocondrial (COI) previamente caracterizado. Após confirmada a ocorrência de M. sojae no Rio Grande do Sul e Santa Catarina, o segundo estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética da população de M. sojae utilizando o marcador molecular específico mtCOI-SSF recém-desenvolvido e discutir as implicações potenciais de biossegurança de incursões por M. sojae no Brasil. As populações brasileiras de M. sojae apresentaram tanto alta diversidade de nucleotídeos como elevado número de haplótipos nas duas amostras de campo preliminares e relativamente pequenas pesquisadas, apontando para vários fundadores com populações estabelecidas. O estudo também identificou um haplótipo COI-mitocondrial compartilhado com dois indivíduos de M. sojae amostrados anteriormente da Austrália, e demonstrou a importância de integrar a pesquisa taxonômica tradicional com abordagem de NGS para confirmar inequivocamente a espécie de um inseto praga emergente em nível agrícola global. A espécie praga invasiva global Helicoverpa armigera (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) foi o alvo do terceiro e último estudo. A presença desta espécie de mariposa foi confirmada na América do Norte, Sul e América Central (no Brasil em 2013; no Paraguai em 2013; na Argentina em 2014 e nos EUA em 2015), trazendo sérias implicações em termos da gestão e manejo de inseto pragas nas principais culturas agrícolas cultivadas nessas áreas. Os dados da seqüência genética de parte do gene mitocondrial COI de espécimes de H. armigera coletados do Uruguai, Argentina, Paraguai, e também de três estados do Sul do Brasil (Paraná, Rio Grande do Sul e Santa Catarina) foram analisados com o objetivo de melhor caracterizar a diversidade genética de H. armigera na região do Cone Sul. Os principais resultados deste estudo foram: (i) confirmação, em nível molecular, de que H. armigera está presente em lavouras de soja no Uruguai e Paraguai, e também nos estados brasileiros do Rio Grande do Sul (RS), Santa Catarina (SC) e Paraná (PR); (ii) primeira caracterização molecular da diversidade genética de H. armigera na região do Cone Sul (incluindo indivíduos provenientes da Argentina); (iii) detecção de inesperada diversidade de haplótipos únicos em populações de H. armigera do Uruguai, Argentina e Paraguai; e (iv) as populações de H. armigera no continente sul-americano provavelmente representam vários eventos de incursão independentes. Os resultados que as populações de H. armigera no continente sul-americano provavelmente são resultado de vários eventos de incursão independentes terão implicações significativas no manejo das estratégias de resistência dessa praga no Novo Mundo.

O controle de qualidade de laranjas desde a colheita até a comercialização é realizado com base em análises físico-químicas. Todavia, estas análises são destrutivas. Neste cenário, sistemas não invasivos para aferir a qualidade, são alternativas promissoras. O objetivo do trabalho foi avaliar os métodos de análises não destrutivas como a Ressonância Magnética em baixo campo (RMN) e espectroscopias de infravermelho médio (MIR) e próximo (NIR), associadas à quimiometria, para analisar parâmetros de qualidade de laranjas de forma não invasiva. O experimento ocorreu na unidade da Embrapa Instrumentação em São Carlos, SP. Foram coletadas 470 laranjas, obtidas em cultivos comerciais no interior do estado de São Paulo. As frutas passaram pelas etapas de seleção, higienização e sanitização. Em seguida, foram submetidas à análise não invasiva pelos equipamentos de RMN, NIR e MIR. Os parâmetros de qualidade avaliados foram, massa fresca, diâmetros longitudinal e transversal do fruto, teor de sólidos solúveis (SST), pH, acidez total titulável (ATT), índice de maturação (ratio) e rendimento de suco. Para os sinais de RMN foi aplicada a suavização de Savitzky-Golay com largura de janela de 21 pontos. Para os sinais de NIR foi aplicado a variação normal padrão (SNV) e para os sinais de MIR foi aplicada a normalização (0-1), seguido da segunda derivada. O modelo de predição foi construído utilizando a regressão por mínimos quadrados parciais (PLS) para cada parâmetro de qualidade. Os modelos desenvolvidos por RMN-PLS validados para predição foram: massa fresca; coeficiente de Pearson da predição (r) = 0,97, erro padrão da predição (SEP) = 13,57. Diâmetro longitudinal; r = 0,91 e SEP = 3,37. Diâmetro transversal; r = 0,92 e SEP = 2,73. SST; r = 0,81 e SEP = 0,88. Rendimento de suco; r = 0,78 e SEP = 3,26 e pH r = 0,74 e SEP = 0,17. Os parâmetros de índice de maturação e ATT não puderam ser validados utilizando RMN-PLS. Os modelos de NIR-PLS validados foram: SST; r = 0,92 e SEP = 0,71. ATT; r = 0,92 e SEP = 0,30. Os demais parâmetros não puderam ser validados por NIR-PLS. Para os modelos de MIR-PLS, o melhor resultado encontrado foi para validação interna do modelo de pH, r Validação = 0,80 e erro padrão da validação (SEV) de 0,16. A classificação desenvolvida utilizando os modelos de parâmetros físicos de RMN-PLS apresentaram acurácia para diâmetro transversal de 80,00%. As classificações por parâmetros químicos, como teor de sólidos solúveis revelou acurácia de 81,10% e para pH de 61,11%. Para as classificações por PLS-NIR para o ratio a acurácia foi igual a 87,95%. Os frutos classificados de forma não invasiva para a análise sensorial no teste de comparação pareada, apresentaram respostas significativas para sucos classificados pelos modelos de RMN-PLS a nível de p=0,05. Para os frutos classificados pelo NIR-PLS de forma não invasiva, a resposta ao segundo teste sensorial foi significativa a nível de p=0,05. Estes resultados comprovam a aplicabilidade destas técnicas como análises não invasivas para mensurar a qualidade de laranjas e classifica-las por parâmetros físico-químicos percebidos por provadores. / The quality control for oranges, after the harvest until commercialization are carried based on physical-chemical parameters. However, these analyzes are invasive. In this scenario, non-invasive systems to measure quality are promising options. Nuclear Magnetic Resonance (NMR) at low field and infrared spectroscopy (mid-infrared - MIR and near-infrared - NIR) were associated with chemometrics to analyze quality parameters in intact oranges. The experiment was carried at Embrapa São Carlos, SP. Four hundred and seventy oranges were obtained from commercial crops in the state of São Paulo. Samples were selected, cleaned and sanitized and then were submitted to non-invasive analysis by NMR, NIR and MIR equipment\'s. The evaluated reference quality parameters were fresh weight, longitudinal and transversal diameter, total soluble solids (TSS), pH, titratable acidity (TA), maturation index (ratio) and juice yield (%). For the non-invasive methods was applied pre-processing techniques on the signal. In NMR signal was applied Savitzky-Golay smoothing with 21 points width of window. For NIR signal was applied standard normal variant (SNV) and on the MIR signal normalization was applied (0-1), followed by the second derivative. The prediction model was constructed using partial least squares regression (PLS) for each quality reference parameter. The models developed by NMR-PLS validated by prediction were: fresh weight; Pearson coefficient prediction (r) = 0.97, standard error of prediction (SEP) = 13.57. Longitudinal diameter; r = 0.91 and SEP = 3.37. Transverse diameter; r = 0.92 and SEP = 2.73. SST; r = 0.81 and SEP = 0.88. Juice yield; r = 0.78 and SEP = 3.26. pH r = 0.74 and SEP = 0.17. The maturation index and titratable acidity parameters could not be validated using PLS-NMR. The validated NIR-PLS models were: SST; r = 0.92 and SEP = 0.71. ATT; r = 0.92 and SEP = 0.30. The others reference quality parameters were not validated by NIR-PLS. For models using MIR-PLS, the best result was found for internal validation of the pH model, r = 0.80 and standard validation error (SEV) 0.16. The classification models developed using NMR-PLS physical parameters showed accuracy in transverse diameter of 80.00%. The classifications by chemical parameters such as soluble solids revealed accuracy of 81.10% and 61.11% for pH. For classifications by PLS-NIR for the accuracy ratio was equal to 87.95%. Fruit classified noninvasively for sensory analysis in paired comparison test, showed significant responses to juices classified by NMR-PLS models at the level of p = 0.05. For fruit classified by NIR-PLS noninvasively, the answer to the second sensory test was significant at the level of p = 0.05. These results demonstrate the applicability of these techniques as non-invasive tests to measure the quality of oranges and sorts them by physicochemical parameters perceived by tasters.

O controle de qualidade de laranjas desde a colheita até a comercialização é realizado com base em análises físico-químicas. Todavia, estas análises são destrutivas. Neste cenário, sistemas não invasivos para aferir a qualidade, são alternativas promissoras. O objetivo do trabalho foi avaliar os métodos de análises não destrutivas como a Ressonância Magnética em baixo campo (RMN) e espectroscopias de infravermelho médio (MIR) e próximo (NIR), associadas à quimiometria, para analisar parâmetros de qualidade de laranjas de forma não invasiva. O experimento ocorreu na unidade da Embrapa Instrumentação em São Carlos, SP. Foram coletadas 470 laranjas, obtidas em cultivos comerciais no interior do estado de São Paulo. As frutas passaram pelas etapas de seleção, higienização e sanitização. Em seguida, foram submetidas à análise não invasiva pelos equipamentos de RMN, NIR e MIR. Os parâmetros de qualidade avaliados foram, massa fresca, diâmetros longitudinal e transversal do fruto, teor de sólidos solúveis (SST), pH, acidez total titulável (ATT), índice de maturação (ratio) e rendimento de suco. Para os sinais de RMN foi aplicada a suavização de Savitzky-Golay com largura de janela de 21 pontos. Para os sinais de NIR foi aplicado a variação normal padrão (SNV) e para os sinais de MIR foi aplicada a normalização (0-1), seguido da segunda derivada. O modelo de predição foi construído utilizando a regressão por mínimos quadrados parciais (PLS) para cada parâmetro de qualidade. Os modelos desenvolvidos por RMN-PLS validados para predição foram: massa fresca; coeficiente de Pearson da predição (r) = 0,97, erro padrão da predição (SEP) = 13,57. Diâmetro longitudinal; r = 0,91 e SEP = 3,37. Diâmetro transversal; r = 0,92 e SEP = 2,73. SST; r = 0,81 e SEP = 0,88. Rendimento de suco; r = 0,78 e SEP = 3,26 e pH r = 0,74 e SEP = 0,17. Os parâmetros de índice de maturação e ATT não puderam ser validados utilizando RMN-PLS. Os modelos de NIR-PLS validados foram: SST; r = 0,92 e SEP = 0,71. ATT; r = 0,92 e SEP = 0,30. Os demais parâmetros não puderam ser validados por NIR-PLS. Para os modelos de MIR-PLS, o melhor resultado encontrado foi para validação interna do modelo de pH, r Validação = 0,80 e erro padrão da validação (SEV) de 0,16. A classificação desenvolvida utilizando os modelos de parâmetros físicos de RMN-PLS apresentaram acurácia para diâmetro transversal de 80,00%. As classificações por parâmetros químicos, como teor de sólidos solúveis revelou acurácia de 81,10% e para pH de 61,11%. Para as classificações por PLS-NIR para o ratio a acurácia foi igual a 87,95%. Os frutos classificados de forma não invasiva para a análise sensorial no teste de comparação pareada, apresentaram respostas significativas para sucos classificados pelos modelos de RMN-PLS a nível de p=0,05. Para os frutos classificados pelo NIR-PLS de forma não invasiva, a resposta ao segundo teste sensorial foi significativa a nível de p=0,05. Estes resultados comprovam a aplicabilidade destas técnicas como análises não invasivas para mensurar a qualidade de laranjas e classifica-las por parâmetros físico-químicos percebidos por provadores. / The quality control for oranges, after the harvest until commercialization are carried based on physical-chemical parameters. However, these analyzes are invasive. In this scenario, non-invasive systems to measure quality are promising options. Nuclear Magnetic Resonance (NMR) at low field and infrared spectroscopy (mid-infrared - MIR and near-infrared - NIR) were associated with chemometrics to analyze quality parameters in intact oranges. The experiment was carried at Embrapa São Carlos, SP. Four hundred and seventy oranges were obtained from commercial crops in the state of São Paulo. Samples were selected, cleaned and sanitized and then were submitted to non-invasive analysis by NMR, NIR and MIR equipment\'s. The evaluated reference quality parameters were fresh weight, longitudinal and transversal diameter, total soluble solids (TSS), pH, titratable acidity (TA), maturation index (ratio) and juice yield (%). For the non-invasive methods was applied pre-processing techniques on the signal. In NMR signal was applied Savitzky-Golay smoothing with 21 points width of window. For NIR signal was applied standard normal variant (SNV) and on the MIR signal normalization was applied (0-1), followed by the second derivative. The prediction model was constructed using partial least squares regression (PLS) for each quality reference parameter. The models developed by NMR-PLS validated by prediction were: fresh weight; Pearson coefficient prediction (r) = 0.97, standard error of prediction (SEP) = 13.57. Longitudinal diameter; r = 0.91 and SEP = 3.37. Transverse diameter; r = 0.92 and SEP = 2.73. SST; r = 0.81 and SEP = 0.88. Juice yield; r = 0.78 and SEP = 3.26. pH r = 0.74 and SEP = 0.17. The maturation index and titratable acidity parameters could not be validated using PLS-NMR. The validated NIR-PLS models were: SST; r = 0.92 and SEP = 0.71. ATT; r = 0.92 and SEP = 0.30. The others reference quality parameters were not validated by NIR-PLS. For models using MIR-PLS, the best result was found for internal validation of the pH model, r = 0.80 and standard validation error (SEV) 0.16. The classification models developed using NMR-PLS physical parameters showed accuracy in transverse diameter of 80.00%. The classifications by chemical parameters such as soluble solids revealed accuracy of 81.10% and 61.11% for pH. For classifications by PLS-NIR for the accuracy ratio was equal to 87.95%. Fruit classified noninvasively for sensory analysis in paired comparison test, showed significant responses to juices classified by NMR-PLS models at the level of p = 0.05. For fruit classified by NIR-PLS noninvasively, the answer to the second sensory test was significant at the level of p = 0.05. These results demonstrate the applicability of these techniques as non-invasive tests to measure the quality of oranges and sorts them by physicochemical parameters perceived by tasters.

Made available in DSpace on 2016-06-02T20:21:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 5005.pdf: 2296978 bytes, checksum: 77a669d7d6cbf4916130d05c32dc1e39 (MD5) Previous issue date: 2013-02-28 / Universidade Federal de Minas Gerais / The loss and fragmentation of habitat due to intensive human intervention are the main threats to natural populations. Species with low density and large home range, like felids, are the most threatened species by these changes. In an attempt to minimize this impact, detection of population density and genetic characterization are necessary to propose conservation measures. Thus, the main objective of this study was to characterize the populations of two species of felines, cougars (Puma concolor) and ocelots (Leopardus pardalis) of Caetetus Ecological Station (EEC - SP, one of the last remnants of Atlantic Forest within the state of São Paulo), about their demographic and genetic characteristics from non-invasive samples (feces and hairs).We collected the samples on EEC tracks and identified the species, individualized each sample, sexed each individual and calculated the genetic diversity of the population using molecular markers. Abundance was estimated from the capture-recapture historic, with opened and closed population models. We identified 17 samples of feces cougar and 12 of ocelot. Of these samples, six individuals were individualized as cougar and five as ocelot, these numbers represent the minimum population sizes for the entire sample period (18 months). The values of abundance and density estimated using the model of closed population was more similar to that found in genetic individualization, five individuals for each species and densities of 4.92/100 km2 (P. concolor) and 19.51/100 km2 (L. pardalis). The genetic diversity of the two species was lower than that from other studies, probably due the landscape´s fragmentation, which reduces the gene flow with others populations. Also, the genetic diversity for L. pardalis was lower than P. concolor, which is possibly related to the ocelot behavior of avoid opened and disturbed areas, which can reduce the potential for gene flow. Furthermore, we also observed structure of P. concolor from EEC with populations from other locations, but we also identified gene flow, including relatedness. Thus, the results of genetic diversity and demographics demonstrate the importance of the Ecological Station Caetetus for these species and also underscores the importance of establishing measures to enable the viability of its populations over long term, as facilitating gene flow with individuals from others locations. / A perda e fragmentação do habitat, decorrentes da intensa intervenção antrópica, estão entre as principais ameaças às populações naturais. Espécies com baixa densidade e grandes áreas de vida, como os felinos, são ainda mais prejudicadas por essas mudanças. Na tentativa de minimizar esse impacto, a detecção da densidade populacional e a caracterização genética são necessárias para que medidas de conservação sejam propostas. Nesse sentido, o objetivo principal deste trabalho foi caracterizar populações de duas espécies de felinos, onça-parda (Puma concolor) e jaguatirica (Leopardus pardalis) da Estação Ecológica dos Caetetus (EEC SP, um dos últimos remanescentes de Mata Atlântica no interior do estado de São Paulo), quanto às suas características demográficas e genéticas, a partir de amostras não invasivas (fezes e pelos). Coletamos as amostras nas trilhas da EEC, das quais pudemos identificar as espécies, individualizar, sexar cada indivíduo e calcular a diversidade genética da população utilizando marcadores moleculares. A abundância foi estimada a partir do histórico de captura-recaptura com modelos de população aberta e fechada. Identificamos geneticamente 17 amostras de fezes de onça-parda e 12 de jaguatirica. Dessas amostras, individualizamos seis indivíduos de onça-parda e cinco de jaguatirica, sendo esses os tamanhos populacionais mínimos para todo o período de amostragem (18 meses, entre dezembro de 2010 a maio de 2013). Os valores de estimativa de abundância e densidade utilizando o modelo de população fechada foram mais próximos ao encontrado na individualização genética, sendo cinco indivíduos para cada espécie e densidades de 4,92/100 km2 (P. concolor) e 19,51/100 km2 (L. pardalis). A diversidade genética encontrada para as duas espécies foi menor quando comparada com outros trabalhos, provavelmente ao menor fluxo gênico com outras populações devido à fragmentação da paisagem. Além disso, a diversidade genética encontrada para L. pardalis foi menor quando comparada a P. concolor, possivelmente relacionado ao hábito da espécie em evitar áreas mais abertas e antropizadas, o que pode reduzir o potencial de fluxo gênico. Já para P. concolor foi encontrada estruturação com populações de outras localidades, mas também identificamos fluxo gênico, inclusive com relações de parentesco. Dessa forma, os resultados obtidos de demografia e diversidade genética demostram a importância da Estação Ecológica dos Caetetus para essas espécies e também ressalta a importância da criação de medidas que permitam a viabilidade de suas populações a longo prazo, como as que facilitem fluxo gênico com indivíduos de outras localidades.

Nas últimas décadas, tem sido relatado o aumento de casos de infecções fúngicas invasivas por agentes oportunistas, tais como Aspergillus spp., Fusarium spp. e fungos da ordem Mucorales, em pacientes hospitalizados, particularmente os imunocomprometidos. Como os sintomas são frequentemente inespecíficos, esses patógenos não são identificados inicialmente como agentes causais. Além disso, muitas vezes o diagnóstico só é estabelecido em estágios tardios da infecção, pois as metodologias diagnósticas de rotina, como cultura e microscopia, apresentam limitações caracterizadas, sobretudo, por baixa sensibilidade e especificidade. Os métodos moleculares, incluindo as amplificações de material genômico por PCR, em tecidos a fresco e parafinados, têm sido mais aplicados para a melhoria na detecção e identificação desses patógenos. A técnica de PCR em tempo real apresenta a vantagem de fornecer resultados com rapidez e elevada sensibilidade, além de minimizar os riscos de contaminação ambiental das amostras. Para aprimorar o conhecimento sobre a eficácia desta técnica na detecção e identificação dos patógenos, neste estudo foram utilizados camundongos da linhagem BALB/c para o desenvolvimento de modelos de infecção invasiva por Aspergillus fumigatus, Rhizopus arrhizus e Fusarium solani. Após inoculação dos fungos por via intravenosa, os órgãos (pulmão, fígado, rins, cérebro e coração) foram retirados para realização dos exames de cultura, histopatologia, PCR semi-nested e PCR em tempo real. As culturas foram realizadas em ágar Sabouraud dextrose e incubadas por 3 a 5 dias à temperatura ambiente. Para as análises histopatológicas, uma parte dos órgãos foi emblocada em parafina e cortes foram submetidos às colorações por hematoxilina-eosina e Gomori-Grocott. Para as análises moleculares, foram realizadas clonagens dos amplicons obtidos com os mesmos primers gênero-específicos (Aspergillus spp. e Fusarium spp.) e ordem-específicos (mucoráceos) empregados nas reações de PCR. Os clones foram empregados na técnica de PCR em tempo real para avaliação da sensibilidade analítica dos ensaios e como controles positivos. Os tecidos a fresco e parafinados foram submetidos a extrações de DNA, e as amostras foram avaliadas por PCR do tipo semi-nested, e por PCR em tempo real, empregando-se os primers gênero e ordem-específicos. Após 48-72 horas, observou-se crescimento fúngico nas culturas, porém a identificação macroscópica foi possível somente após 96 horas. Nos exames histopatológicos foram observadas presença de estruturas fúngicas e alterações na morfologia tecidual, confirmando a disseminação da infecção nos três modelos experimentais. Os dois métodos de PCR (convencional e tempo real) empregando os primers para Aspergillus e mucoráceos demonstraram 100% de especificidade. Além disso, os primers para mucoráceos amplificaram amostras de DNA dos gêneros Rhizopus, Mucor e Lichtheimia, confirmando serem ordem-específicos. Por outro lado, os testes moleculares com emprego de diversos primers de Fusarium apresentaram reatividade cruzada, principalmente com amostras de DNA de Aspergillus e Rhizopus. O limiar de detecção (LD) das PCR semi-nested para Aspergillus e Rhizopus foi de 50 fentogramas de DNA, enquanto na PCR em tempo real o LD foi de 20 fentogramas de DNA e 2x102 plasmídios/ul. Os dois métodos moleculares detectaram DNA de Aspergillus e Rhizopus, em 100% das amostras de tecido a fresco e parafinado, corroborando com os resultados de cultura e histopatologia. Os resultados do estudo demonstraram que a PCR em tempo real foi capaz de detectar e diferenciar Aspergillus e Rhizopus nos tecidos a fresco e parafinados, com 100% de especificidade e maior sensibilidade analítica quando comparada à PCR semi-nested. Entretanto, os resultados obtidos com diversos primers de Fusarium utilizados nos ensaios de PCR foram inconsistentes em relação à especificidade das amplificações. A PCR em tempo real constituiu um método rápido para diagnosticar, com acurácia, aspergilose e mucormicose em tecidos, podendo ser implementada como alternativa na rotina diagnóstica de laboratórios de patologia ou microbiologia. Por outro lado, a técnica apresentou baixa especificidade com os primers de Fusarium selecionados neste estudo. Outras sequências gênicas deste fungo deverão ser avaliadas na técnica molecular para se atingir resultados precisos / Increase of invasive fungal infections by opportunistic agents, such as Aspergillus sp., Fusarium sp. and fungi from the order Mucorales, in immunocompromised patients has been reported in the last decades. As the symptoms are often non-specific, diagnosis are only established in late stages of infection. Routine diagnostic methodologies, such as culture and direct microscopy, have limitations due to their low sensitivity and specificity. Molecular methods, including amplifications of nucleic acids by PCR in fresh and paraffined tissues, have been more frequently applied to improve the detection and identification of these pathogens. The real-time PCR (qPCR) technique has the advantage of providing fast results with high sensitivity, as well as minimizing the risks of environmental contamination of the samples. This study aimed to evaluate the effectiveness of this technique for detection and discrimination of the fungal pathogens in tissues taken from BALB/c mice intravenously inoculated with Aspergillus fumigatus, Rhizopus arrhizus and Fusarium solani. The organs (lung, liver, kidneys, brain and heart) were removed from animals and analysed by culture, histopathology, semi-nested PCR and qPCR. Recombinant plasmid clones containing small sequences of Aspergillus, Fusarium and mucoraceous were used to draw qPCR standard curves and to evaluate the analytical sensitivity of the assays. The fresh and paraffined tissues were submitted to DNA extractions, and samples were evaluated by semi-nested PCR and qPCR with genus-specific primers for Aspergillus and Fusarium, and order-specific primers for mucoraceous. Cultures were positive for all fresh tissue samples. Presence of typical fungal structures and alterations in tissue morphology were observed in the histopathological examinations, confirming the dissemination of infection in the three experimental models. Both PCR assays employing Aspergillus and mucoraceous primers demonstrated 100% specificity. On the other hand, molecular tests using at least six different Fusarium primers showed cross reactivity, mainly with Aspergillus and Rhizopus DNA samples. The limit of detection (LD) of the semi-nested PCR for Aspergillus and Rhizopus was 50 femtograms of DNA, while for the qPCR it was 20 femtograms of DNA, and 2x102 plasmids/?l. Both molecular methods detected Aspergillus and Rhizopus DNA in 100% of fresh and paraffined tissue samples, corroborating the results with cultures and histopathology. The results of the study demonstrated that qPCR assay was able to detect and differentiate Aspergillus and Rhizopus in fresh and paraffined tissues, with 100% of specificity and higher analytical sensitivity when compared to semi-nested PCR assay. However, the results obtained with several Fusarium primers in the PCR assays were inconsistent regarding specificity of the amplifications. Real-time PCR assay is a fast and accurate method to diagnose aspergillosis and mucormycosis in tissues, and could be implemented as an alternative tool for diagnostic routine in pathology or microbiology laboratories. On the other hand, the technique showed low specificity with the Fusarium primers selected in this study. Other gene sequences should be evaluated by PCR assays techniques to achieve accurate results

As infecções fúngicas invasivas (IFIs) são um problema de saúde pública e representam uma importante causa de morbidade e mortalidade. A Anfotericina B (AnfB) é a droga de escolha no tratamento das IFIs. Apesar da sua eficácia, a AnfB está associada com efeitos adversos como a nefrotoxicidade. Com o número elevado de pacientes suscetíveis às IFIs, estudos foram desenvolvidos e demonstraram que a nefrotoxicidade pode ser prevenida através do uso de AnfBs modificadas. Dessas modificações, a AnfB incorporada à uma emulsão lipídica (AnfB/EL) apresenta baixo custo e similar eficácia. Existe uma alta prevalência de deficiência de vitamina D (dVD) na população mundial. Sendo assim, a hipovitaminose D pode acelerar a progressão da doença renal e refletir em mau prognóstico em casos de nefrotoxicidade. Esse trabalho visa analisar se a deficiência da vitamina D pode induzir a nefrotoxicidade da AnfB/EL. Ratos Wistar foram divididos em quatro grupos: controle, animais que receberam dieta padrão por 34 dias; AnfB/EL, animais que receberam dieta padrão por 34 dias e injeção intraperitoneal de AnfB/EL (5mg/kg/dia) nos últimos 4 dias; dVD, animais que receberam dieta depletada em vitamina D por 34 dias; e dVD+AnfB/EL, animais que receberam dieta depletada em vitamina D por 34 dias e a injeção intraperitoneal de AnfB/EL (5mg/kg/dia) nos últimos 4 dias. Amostras de sangue, urina e tecido renal foram coletadas para a análise dos efeitos da droga sobre a função, hemodinâmica e morfologia renal. A associação de AnfB/EL com a hipovitaminose D levou a injúria renal, lesão tubular discreta, hiperfosfatúria, hipermagnesiúria, hipertensão e comprometimento do mecanismo de concentração urinária. Dessa forma, é essencial monitorar os níveis de vitamina D em pacientes tratados com AnfB/EL, uma vez que a deficiência dessa vitamina é um fator indutor de nefrotoxicidade associada ao uso da AnfB/EL / Invasive fungal infections (IFI) have become a worldwide serious health problem and represent a significant cause of morbidity and mortality. Amphotericin B (AmB) is the drug of choice for the treatment of IFI. Despite its efficacy, use of AmB has been associated with adverse reactions such as nephrotoxicity The increasing number of high-risk patients, who are more susceptible to IFI and are more likely to use AmB, has enabled the development of modified AmBs in order to reduce nephrotoxicity. Among these formulations, an extemporaneous lipid emulsion preparation of AmB (AmB/LE) is a lower cost alternative with similar benefits. Moreover, studies have shown a high prevalence of vitamin D deficiency (VDD) in immunocompromised individuals and patients hospitalized in intensive care units. Thus, vitamin D deficiency or insufficiency may hasten the progression of kidney disease and reflect on a worse prognosis in cases of acute kidney injury and drug-induced nephrotoxicity. In view of the high worldwide incidence of hypovitaminosis D, the aim of this study was to investigate whether vitamin D deficiency may induce AmB/LE-related nephrotoxicity. Wistar rats were divided into four groups: control, received a standard diet for 34 days; AmB/LE, received a standard diet for 34 days and AmB/LE (5mg/kg/day) intraperitoneally in the last 4 days; VDD, received a vitamin D-free diet for 34 days; and VDD+AmB/LE, received a vitamin D-free diet for 34 days and AmB/LE (5mg/kg/day) intraperitoneally in the last 4 days. Blood, urine and renal tissue samples were collected in order to evaluate the effects of the drug on renal function, hemodynamic and morphology. Association of AmB/LE and vitamin D deficiency led to impaired renal function, mild tubular injury, hypertension and urinary concentration defect. Hence, it is important to monitor vitamin D levels in AmB/LE treated patients, since vitamin D deficiency induces AmB/LE nephrotoxicity