Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2006. / Submitted by mariana castro (nanacastro0107@hotmail.com) on 2009-12-16T14:20:01Z No. of bitstreams: 1 YVONE MAIA BRUSTOLONI.pdf: 1628321 bytes, checksum: 5482ca541aca8986f18eba24f5bb5173 (MD5) / Approved for entry into archive by Daniel Ribeiro(daniel@bce.unb.br) on 2009-12-21T23:31:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 YVONE MAIA BRUSTOLONI.pdf: 1628321 bytes, checksum: 5482ca541aca8986f18eba24f5bb5173 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-21T23:31:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 YVONE MAIA BRUSTOLONI.pdf: 1628321 bytes, checksum: 5482ca541aca8986f18eba24f5bb5173 (MD5) Previous issue date: 2006-09-29 / A faixa etária pediátrica é especialmente atingida pela leishmaniose visceral (LV), uma doença atualmente em franca expansão no Mato Grosso do Sul e em outras localidades brasileiras. O diagnóstico e o tratamento da LV em crianças foram estudados retrospectivamente, através da análise dos dados de pacientes internados no Hospital Universitário da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, no período de janeiro de 1998 a fevereiro de 2005, o que resultou em cinco estudos. No primeiro estudo, identificou-se a forma de apresentação da patologia nas crianças do Estado. A LV vem se apresentando como uma doença de evolução rápida nessa região, evidenciando um padrão diferente do considerado típico para a patologia, habitualmente prolongada e de longa duração. O diagnóstico de pacientes em fase evolutiva não muito adiantada e o tratamento adequado dos casos resultaram em uma doença de baixa mortalidade (2,6%). Os métodos convencionalmente utilizados no diagnóstico da LV foram analisados. A combinação de dois testes tradicionais, como a microscopia direta do aspirado medular e a sorologia por Imunofluorescência, possibilitou a confirmação do diagnóstico na quase totalidade dos casos em que esses exames foram realizados (98,5%). Enfatiza-se a necessidade da obtenção da sorologia, frequentemente colocada em segundo plano, devido à preferência dos profissionais locais pela realização do mielograma como única forma de diagnóstico. Pela primeira vez no Estado, utilizou-se um método de biologia molecular no estudo de casos de LV. A utilização da PCR (reação em cadeia da polimerase) na detecção de DNA de Leishmania em lâminas de aspirado medular, coradas por Giemsa e estocadas, foi avaliada. O teste foi altamente sensível (92,3%) e específico (97,7%), mostrando-se útil na elucidação de casos difíceis. Os aspectos mais importantes relacionados ao tratamento da doença foram avaliados, descrevendo-se as drogas utilizadas, seus efeitos adversos, a resposta terapêutica, o tempo de tratamento e as dificuldades no manejo do mesmo. O antimoniato de meglumina mostrou-se eficaz e seguro na infância e, apesar da existência atual de novas opções para tratamento, sua indicação como primeira escolha terapêutica em crianças é ainda a mais adequada em nosso meio. O problema da recidiva após o tratamento também foi enfocado; são descritos 4 casos em crianças, com discussão de aspectos recentes sobre o assunto. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The pediatric age range is particularly affected by visceral leishmaniasis, a disease that is currently spreading steadily in the state of Mato Grosso do Sul and in other areas in Brazil. The diagnosis and treatment of the disease in childhood were investigated retrospectively by analyzing data of patients admitted to the Teaching Hospital of Universidade Federal de Mato Grosso do Sul from January 1998 to February 2005. The investigation was composed of five studies. The clinical presentation of the pathology in children in Mato Grosso do Sul was identified. Visceral leishmaniasis has been exhibiting fast evolution in the region, with a mode of presentation that differs from the pattern viewed as typical for the pathology, usually of long-lasting course. Diagnosis of patients in a not much advanced phase of the disease and the availability of suitable treatment have resulted in an illness of low mortality. The methods conventionally employed in the diagnosis of visceral leishmaniasis were analyzed. The combination of two traditional tests—direct microscopy of bone marrow aspirates (BMAs) and immunofluorescence serology—allowed diagnosis to be reached in nearly all the cases for which these tests were performed (98.5%). Emphasis is placed on the need for conducting serological testing, a procedure often assigned secondary importance, as local health professionals tend to favor the use of myelograms as the only diagnostic method. For the first time in Mato Grosso do Sul a molecular biology method has been applied to the study of cases of visceral leishmaniasis. The use of polymerase chain reaction (PCR) for detection of Leishmania DNA in archived Giemsa-stained BMA slides was evaluated. The technique was found to be useful in the diagnostic clarification of difficult cases, given its high sensitivity (92.3%) and specificity (97.7%). The most important aspects related to treatment of the disease were evaluated, along with a description of the drugs prescribed and their adverse effects, therapeutic response, length of treatment, and difficulties posed for the management of treatment. Meglumine antimoniate was found to be effective and safe in pediatric patients and, despite the current availability of new treatment options, its indication as first-line therapy in the treatment of childhood visceral leishmaniasis is still the most suitable in our setting. The issue of post-treatment relapse was also addressed in one the study; four cases of relapse in children are described, with a discussion on recently addressed aspects.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2009-09-25T19:44:43Z No. of bitstreams: 1 2006_Maria Elizabeth M C Dorval.pdf: 5823254 bytes, checksum: d0288003f2151f98537c46e000f4a4c1 (MD5) / Approved for entry into archive by Tania Milca Carvalho Malheiros(tania@bce.unb.br) on 2009-09-28T13:15:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2006_Maria Elizabeth M C Dorval.pdf: 5823254 bytes, checksum: d0288003f2151f98537c46e000f4a4c1 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-09-28T13:15:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006_Maria Elizabeth M C Dorval.pdf: 5823254 bytes, checksum: d0288003f2151f98537c46e000f4a4c1 (MD5) Previous issue date: 2006 / Os estudos epidemiológicos realizados permitiram o isolamento e a identificação de Leishmania (Leishmania) amazonensis em pacientes procedentes do município de Bela Vista, Mato Grosso do Sul, ampliando-se, portanto, o conhecimento da distribuição geográfica desta espécie de parasito. As capturas de flebotomineos foram realizadas no período de fevereiro de 2004 a janeiro de 2006, na mata, utilizando-se armadilhas automáticas luminosas (AAL), de Shannon e de Disney, e em abrigo de animais domésticos, com AAL. Com o emprego dos três tipos de armadilhas capturou-se 1.999 espécimes pertencentes a três subtribos, oito gêneros e 19 espécies de Phlebotominae. Brumptomyiina: Brumptomyia avellari, Br. brumpti e Brumptomyia sp; Lutzomyiina: Evandromyia aldafalcaoae, Ev. bourrouli, Ev. cortelezzii, Ev. evandroi, Ev. lenti, Ev. teratodes, Ev. termitophila, Lutzomyia longipalpis, Pintomyia christenseni e Sciopemyia sordellii; Psychodopygina: Bichromomyia flaviscutellata, Nyssomyia whitmani, Psathyromyia aragaoi, Ps. campograndensis, Ps. punctigeniculata e Ps. shannoni. Do total de espécimes capturados, 22,7% foram nas armadilhas de Shannon (33,9% das fêmeas de Ps. punctigeniculata; 7,7% de Bi. flaviscutellata e 4,4% de Lu. longipalpis), 17,7% nas AALs (na mata, 70,6% dos espécimes de Brumptomyia e em abrigos de animais domésticos, 80,2% de Lu. longipalpis) e 59,6% nas armadilhas de Disney (57,6% de Ev. bourrouli e 41,4% de Bi. flaviscutellata, sendo 81,7% das fêmeas, desta espécie). Pela primeira vez, se registra a presença de Ev. evandroi no Estado. Bi. flaviscutellata esteve distribuída em todos os ambientes de mata amostrados, com freqüência mais regular nos meses secos, porém, mostrou pico em março. Não foi observada a infecção natural por Le .(Le.) amazonensis em Bi. flaviscutellata, porém, seu pico de captura coincidente com o período da infecção natural em hamsters (Mesocricetus auratus) sentinelas, permitem supor a existência de um ciclo enzoótico na área, com a infecção acidental e periódica do homem que adentra a área, uma vez que fêmeas deste flebotomíneo compareceram, embora com freqüência baixa, em armadilhas de Shannon, sugerindo a sua antropofilia. Além da presença de vetores de Le. (Le.) amazonensis e Le. (Le.) chagasi, constatou-se ainda a presença de Ny. whitmani, reconhecido vetor de Le. braziliensis, no entanto, em baixa freqüência. ______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The epidemiological studies undertaken permitted the isolation and identification of Leishmania (Leishmania) amazonensis in patients from the municipality of Bela Vista, Mato Grosso do Sul State, Brazil, thus expanding our knowledge of this parasite’s distribution. The captures of phlebotomines were undertaken from February 2004 to January 2006, using automatic light traps (ALTs), Shannon traps and Disney traps in forested environments and ALTs in domestic animal shelters. With the three types of traps, a total of 1,999 specimens belonging to three subtribes, eight genera and 19 species of Phlebotominae were captured: Brumptomyiina: Brumptomyia avellari, Br. brumpti and Brumptomyia sp; Lutzomyiina: Evandromyia aldafalcaoae, Ev. bourrouli, Ev. cortelezzii, Ev. evandroi, Ev. lenti, Ev. teratodes, Ev. termitophila, Lutzomyia longipalpis, Pintomyia christenseni and Sciopemyia sordellii; Psychodopygina: Bichromomyia flaviscutellata, Nyssomyia whitmani, Psathyromyia aragaoi, Ps. campograndensis, Ps. punctigeniculata and Ps. shannoni. Of this total, 22.7% were captured on the Shannon traps (33,9% of the females being of Ps. punctigeniculata; 7.7% of Bi. flaviscutellata and 4.4% of Lu. longipalpis); 17.7% in the ALTs (in the forest 70.6% of the specimens captured belonged to Brumptomyia and in the domestic animal shelters, 80.2% belonged to Lu. longipalpis) and 59.6% in the Disney traps (57.6% of Ev. bourrouli and 41.4% of Bi. faviscutellata; 81.7% of the females being of this species). The occurrence of Ev. evandroi in the State is here registered for the first time. Bi. Flaviscutellata occurred in all the forested environments sampled, with more regular frequencies during the dry period of the year, though showing a peak in March. No natural infection by Le. amazonensis was observed in Bi. flaviscutellata, however its peak of capture coincident with the period of natural infection in hamsters (Mesocricetus auratus) used as bait in Disney traps, suggests the existence of an enzootic cycle in the area, with periodic and accidental infection of people who enter it, since females of this sandfly were captured (although in low frequency) on the Shannon traps, indicating their anthropophily. Besides the presence of the vectors of Le. amazonensis and Le. chagasi, Ny. whitmani, a known vector of Le. braziliensis, was found, albeit in very low frequency.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. ____________________________________________________________________________________________________ / Em atenção aos artigos 11 e 96 da Lei nº 9.279/96 (Lei da Propriedade Industrial) e em consonância com a Resolução CAD 005/2008 da Universidade de Brasília, informamos que o presente trabalho somente foi publicado na data indicada neste informativo. A respectiva defesa, para obtenção do título pretendido, foi realizada na modalidade de sessão fechada, conforme a documentação anexada, de forma que o requisito da novidade, exigida nos referidos artigos da Lei, foi devidamente preservado. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-12-02T16:09:04Z No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-01-04T20:37:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-01-04T20:37:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_HerickSampaioMüller_Parcial.pdf: 2537971 bytes, checksum: 0e36706acc171881428e752f4348e1a4 (MD5) / A leishmaniose é uma antropozoonose que possui diferentes manifestações clinicas, sendo transmitida durante o repasto sanguíneo de flebotomíneos e causada por várias espécies de parasitos do gênero Leishmania. Esta doença causa grandes agravos na saúde humana em escala global, com altas taxas de mortalidade anualmente. Inúmeros fatores de risco impulsionam a transmissão do parasito para áreas anteriormente não endêmicas provocados tanto pelo ser humano quanto por variações naturais do ambiente. O controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se faz por meio da detecção e eliminação dos reservatórios da doença, controle das populações de vetor, prevenção do contato com vetores infectados e tratamento dos casos humanos. No entanto, essas medidas são aplicadas frequentemente de forma isolada e tem-se mostrado limitadas. Como consequência, observase a manutenção ou mesmo expansão da LV para áreas onde sua ocorrência não era registrada. Nesse contexto, medidas que visem à redução da transmissão e suas aplicações de forma integrada são de fundamental importância, tais como o diagnóstico precoce e com alta sensibilidade dos humanos e dos cães infectados, tratamento eficaz e o emprego de vacinas. O diagnóstico tradicional da LV é baseado na presença de anticorpos anti-Leishmania e o padrão-ouro é a visualização de formas amastigotas do parasito em amostras biológicas. No entanto, a introdução da vacinação de cães nos últimos anos gera a necessidade de novos métodos sorológicos capazes de diferenciar entre animais vacinados e infectados. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a metalopeptidase mitocondrial zinco dependente, secretada de L. infantum como marcador para diagnóstico sorológico de LV. A análise in sílico revelou que a proteína teria 47,35% de resíduos de aminoácidos expondo sua superfície ao solvente e nestas áreas foram encontradas possíveis zonas para epitopos de células B, sítios de glicosilação e fosforilação. A expressão das proteínas em sistemas diferentes possibilitou avaliar a imunogenicidade das proteínas heterólogas com e sem modificações pós-traducionais contra soro de cães infectados e sadios. O resultado do ensaio de ELISA mostrou altos índices de anticorpos específicos contra as proteínas heterólogas e a comparação dos resultados indicou que a proteína heteróloga expressa em modelo procarioto identificou todos os animais infectados nas diluições 1:50 e 1:100 de soro. Os dados estatísticos do teste t mostraram p value < 0.01, dando credibilidade na hipótese de uso desta proteína em possível diagnóstico para LV. O estudo realizado apresenta informações relevantes sobre o uso da metalopeptidase estudada para que possa ser associada ao melhoramento do diagnóstico da LV. Testes para definição da sensibilidade e especifidade fazem-se necessários em futuros trabalhos. / Leishmaniasis is a anthropozoonosis with different clinical manifestations, being transmitted by sandfly during blood feeding and caused by several species of parasites of the genus Leishmania. This disease causes major health problems on a global scale, with high mortality rates annually. Several risk factors drive the transmission of the parasite to areas not previously endemic due to man activities and by natural environmental variations. Control of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is made through the detection and elimination of disease reservoirs, control of vector populations, preventing contact with infected vectors and treatment of human cases. However, these measures are often applied in isolation and has shown limited 0efficacy. As a result, there is the maintenance or expansion of the VL to areas where their occurrence was not recorded. In this context, measures aimed to reduce transmission and its applications in an integrated manner are of fundamental importance, such as early diagnosis with high sensitivity of humans and infected dogs, effective treatment and the use of vaccines. Traditional diagnosis of VL is based on the presence of anti-Leishmania antibodies and the gold standard is the visualization of amastigote forms of the parasite in biological samples. However, the introduction of vaccination of dogs in recent years creates the need for new serological methods able to differentiate between vaccinated and infected animals. The objective of this study was to evaluate the metallopeptidase zinc dependent secreted from L. infantum, as a marker for serological diagnosis of VL. In silico analysis revealed that the protein had 47.35% of amino acid residues exposed to the solvent, exhibiting on your surface areas for possible B cell epitopes, glycosylation and phosphorylation sites. The expression of proteins in different systems allowed to assess the immunogenicity of the heterologous proteins, with and without post-translational modifications, against sera from infected and healthy dogs. The results of the ELISA assay showed high levels of specific antibodies against heterologous proteins and the comparison of the results shows that heterologous protein expressed in a prokaryotic model was able to differentiate all infected animals at dilutions 1:50 and 1: 100 serum. Statistical analysis emphasize the potential of this protein to be used in diagnosis for VL. The study presents relevant information on the use of metallo-peptidase studied so it can be associated with the improvement of the diagnosis of VL. Tests to define the sensitivity and specificity are made necessary in future work.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Camila Duarte (camiladias@bce.unb.br) on 2017-02-06T14:14:04Z No. of bitstreams: 1 2016_FabrícioClaudinoEstrelaTerraTheodoro.pdf: 1528155 bytes, checksum: 7e2bf484d829a436b7529442a92e6883 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-02-09T17:12:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_FabrícioClaudinoEstrelaTerraTheodoro.pdf: 1528155 bytes, checksum: 7e2bf484d829a436b7529442a92e6883 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-09T17:12:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_FabrícioClaudinoEstrelaTerraTheodoro.pdf: 1528155 bytes, checksum: 7e2bf484d829a436b7529442a92e6883 (MD5) / Introdução: a Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença negligenciada tanto em relação a métodos diagnósticos de baixa complexidade como em relação ao tratamento pelo uso de medicação extremamente tóxica e sem esquemas terapêuticos com associações medicamentosas há mais de 100 anos. O diagnóstico preciso das formas clínicas de LTA é importante porque a forma mucosa requer maior tempo de tratamento com drogas tóxicas, tem uma evolução crônica, uma alta taxa de recorrência, podendo gerar deformidades e morte. Métodos: nosso objetivo foi estudar o perfil clínico e exames laboratoriais de pacientes tratados em clínica de referência para LTA no HUB-UnB, no Centro-Oeste do Brasil entre 2001-2014, para diferenciar a forma mucosa (LM) da cutânea (LC), utilizando análise multivariada. Resultados: de 1019 pacientes com lesões suspeitas, 737 tiveram LTA. A análise univariada mostrou que os pacientes com LM, quando comparado aos LC, tinham maior idade média (p <0,001), maior duração da doença (p <0,001), menor número de lesões (p <0,001), maior diâmetro no teste de Montenegro (IDRM) e maiores títulos na imunofluorescência indireta (IFA) (p = 0,001). A análise multivariada mostrou que um fator de confusão pode ter influenciado os resultados da análise univariada e os valores tornaram-se não significativos. Conclusões: maior diâmetro da IDRM, títulos elevados da IFA, bem como os pacientes de maior duração idade e da doença, estão associados à forma LM, mas não podem ser utilizados como único critério para diferenciação. / Introduction: the American Cutaneous Leishmaniasis (ACL) is a neglected disease both in relation to low-complexity diagnostic methods as compared to treatment by the use of highly toxic drug with no therapeutic regimens in combination therapy for over 100 years. The accurate diagnosis of the clinical forms of ATL is important because the mucosal form requires longer treatment with toxic drugs, has a chronic evolution, a high recurrence rate and cause disfiguring scars and death. Methods: Our objective was to study the clinical profile and laboratory tests from patients treated at a referral clinic for ATL at HUB-UnB in Midwest Brazil from 2001 to 2014 to differentiate mucosal (ML) from cutaneous (CL) forms using a multivariate analysis. Results: Of 1019 patients with suspicious lesions, 737 had ATL. Univariate analysis showed that patients with ML, when compared to CL, were older (p<0.001), had longer disease duration (p < 0.001), lower number of lesions (p<0.001), higher values of Montenegro skin test (MST) (p=0.042) and tittles of indirect immunofluorescence assay (IFA) (p=0.001). Multivariate analysis showed that a confounder influenced the univariate analysis result. Conclusions: High titles of MST and IFA, as well as patients with higher age and disease duration, could be associated with the form ML, but this information cannot be used as the sole criterion for differentiation.

A leishmaniose tegumentar americana (LTA), uma das formas clínicas das leishmanioses, está em expansão no Brasil e representa importante causa de morbidade para populações residentes em áreas endêmicas. Avaliações do perfil epidemiológico, dos serviços de diagnóstico e tratamento são necessárias para o estabelecimento de estratégias de controle da doença, assim como o emprego de novas ferramentas laboratoriais, como a PCR. Neste trabalho foram avaliados os aspectos epidemiológicos, de diagnóstico e tratamento de pacientes com LTA de diferentes regiões de Minas Gerais, além do uso de diferentes técnicas de extração de DNA e de iniciadores na PCR para a identificação e diferenciação do agente etiológico. Adicionalmente, foi comparada a positividade dos iniciadores dirigidos para a região conservada (150/152) e variável (13Y/13Z) do minicírculo do kDNA de Leishmania em amostras biológicas de pacientes sugestivos para LTA. Foi realizado levantamento epidemiológico, de diagnóstico e tratamento de 824 pacientes portadores de LTA, sendo 261 da região sul e sudoeste do estado de Minas Gerais (SSMG) e 563 do Vale do Rio Doce (VRD). Os dados foram obtidos através das fichas de notificação das Gerências Regionais de Saúde (GRS) do SSMG e do ambulatório de Leishmanioses “Dr. Paulo Araújo Magalhães” de Caratinga (VRD) entre 2002 e 2006. Trinta e nove pacientes com lesões sugestivas para LTA, provenientes destas regiões foram submetidos a exames laboratoriais, além da PCR. As amostras de DNA foram extraídas por aquecimento, pela técnica do fenol/clorofórmio, proteinase K e kit Wizard, e posteriormente usadas na PCR e PCR-RFLP. No período analisado, foi observada diminuição de 59,7% dos casos de LTA no SSMG e de até 25,7% no VRD. A forma clínica cutânea foi a predominante, com 91,9 e 93,6% no SSMG e VRD respectivamente. No SSMG, a maioria dos pacientes (51,7%) tem residência urbana, enquanto que no VRD a rural foi predominante (95,7%). No SSMG houve positividade em 55,6, 10,7 e 19,5% dos casos de LTA no Teste de Montenegro (TM), nos exames parasitológico e histopatológico, respectivamente. No VRD a positividade dos casos de LTA foi de 84,0 no TM e 73,0% no exame parasitológico. A alta por cura com a medicação empregada variou de 71,8 a 92,0% no SSMG e chegou a 78,0% no VRD. Dos 39 pacientes sugestivos, 32 foram confirmados para LTA. As extrações permitiram observar que mesmo a partir de DNA total degradado foi possível detectar kDNA de Leishmania. Nas amostras sugestivas, a positividade com 13Y/13Z e 150/152 foi de 56,4 e 76,9% respectivamente. Nos pacientes confirmados para LTA, a positividade com 13Y/13Z foi de 68,7% e com 150/152 foi de 93,7%. O emprego dos iniciadores 150/152 foi mais viável, o que não descarta o uso de 13Y/13Z, dada a expressiva positividade alcançada em amostras que requerem extração simplificada de DNA e com baixo custo. A PCR-RFLP possibilitou a identificação de L. (V.) braziliensis nas amostras biológicas dos pacientes com LTA. Os dados do presente trabalho também reforçam a necessidade de ações que estabeleçam um centro de referência no diagnóstico e tratamento da LTA no SSMG. / The american tegumentary leishmaniasis, (ATL), one of clinic forms of leishmaniasis, is in expansion in Brazil and represent important cause of morbidity for populations who live in endemic areas. Profile epidemiological studies, health services and treatment are needs to establish strategies of disease control, as well as to employ new tools laboratorials, like PCR ones. This research evaluated the epidemiological aspects, diagnoses and treatment from patients with ATL from different regions Minas Gerais, beyond to use varied extraction techniques DNA and different primers in PCR to make possible the identification and differentiation of the etiological agents. Additionally, it compared the positivity of the primers addressed to the conserved (150/152) and variable (13Y/13Z) region of the Leishmania kDNA minicircle in biological samples of patients suggestive to ATL. It was to carried out epidemiological studies, diagnoses and treatment of 824 patients with ATL, being 261 from Southern and Southwestern regions of Minas Gerais state (SSMG) and 563 from river Doce valley (VRD). The data were obtained from notification files Regional Health Authorities – RHA of SSMG and from Leishmaniasis ambulatory “Dr. Paulo Araújo Magalhães” at Caratinga city (VRD) between 2002 and 2006. Thirty nine patients from these regions and with suggestive ATL lesions were submitted to laboratorial exams, beyond of the PCR. The DNA samples extracted by heating, phenol/ chloroform technique, proteinase K and by Wizard kit, and later used in the PCR and PCR-RFLP. In the period analyzed, it was observed decrease of 59.7% of ATL cases in SSMG and of up to 25.7% in VRD. The cutaneous clinic form was predominant with 91.9 and 93.6% in SSMG and VRD respectively. The greatest part of the patients from SSMG has urban residence (51.7%) while in VRD the rural was predominant (95.7%). In the SSMG there was positivity in 55.6, 10.7 and 19.5% of ATL cases in the Montenegro test (MT), parasitological and histopatological exams, respectively. In the VRD the positivity was 84.0 in the MT and 73.0% in the parasitological exam. Discharge from the treatment due to cure varied of 71.8 to 92.0% in the SSMG and reached 78.0% in VRD. From the 39 suggestive patients, 32 were confirmed to ATL. The DNA extractions allowed observing that even starting from total degraded DNA was possible to detect kDNA of Leishmania. In the suggestive samples, the positivity of DNA with 13Y/13Z and 150/152 was about 56.4 and 76.9% respectively. In the confirmed patients to ATL, the positivity to 13Y/13Z was about 68.7% and to 150/152 was of 93.7%. The employment of the primers 150/152 was viable, what doesn't discard the use of 13Y/13Z, given the expressive positivity reached in samples that request simplified extraction of DNA and with low cost. PCR-RFLP made possible the identification of L. (V.) braziliensis in the patients' biological samples with LTA. The data of the present work they also reinforce the need of actions that establish a reference center in the diagnosis and treatment of LTA in SSMG. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Resumo: Este trabalho traz uma revisão sistemática e crítica de parte da produção científica de seu autor. O trabalho incluiu três linhas de pesquisa, incluindo a salmonelose, brucelose e leishmaniose. Cada uma destas linhas é discutida em um capítulo individual. A maior parte dos dados discutidos neste trabalho se referem a patologia, patogênese, interação patógeno-hospedeiro, imunidade inata e diagnóstico destas doenças. Ao invés de serem organizados como revisão de literatura tradicional, os capítulos enfatizam a contribuição científica das publicações do autor nestas áreas do conhecimento / Abstract: This work provides a systematic and critical review of part of the scientific production of its author. It includes three research topics, namely salmonellosis, brucellosis, and leishmaniasis. Each one of these topics is discussed in individual chapters. Most of the data discussed here refers to pathology, pathogenesis, hostpathogen interactions, innate immunity, and diagnosis of these diseases. Instead of being organized as a traditional literature reviews, the chapters actually emphasize the scientific contribution of the author's publications in each of these fields

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-07-06Bitstream added on 2014-06-13T19:49:57Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_fm_me_araca.pdf: 788257 bytes, checksum: 350efb1f930e09b50897c9123c540f6f (MD5) / A leishmaniose visceral é uma doença em franca expansão no Brasil e que tem a participação de algumas espécies animais na manutenção de seu ciclo. Este trabalho objetivou investigar a presença de Leishmania spp. em morcegos de área endêmica para leishmaniose visceral e investigar a participação destes animais como possíveis reservatórios desta zoonose. Avaliou-se a presença de DNA dos parasitas, por meio da PCR, em amostras de baço e pele de 375 quirópteros originários de 19 cidades do Estado de São Paulo, Brasil, áreas endêmicas e com transmissão intensa para leishmaniose visceral. A amplificação de kDNA de Leishmania spp. por PCR foi positiva em 4,53% dos quirópteros, sendo que a maior positividade foi observada em amostras de baço (94,1%) e dois animais foram positivos tanto para amostras de pele como de baço; a presença de DNA do gene SSU 18S rRNA de Trypanosoma spp., também investigada, foi positiva em 4,53% das amostras sendo 23,5% positivas somente na amostra de baço, 76,5% somente na amostra de pele. Um animal apresentou positividade tanto para Leishmania spp. como para Trypanosoma spp. Os resultados indicam a ocorrência de Leishmania spp. em quirópteros da área endêmica para leishmaniose visceral, indicando a possibilidade de serem reservatórios desta zoonose / Visceral leishmaniasis is a disease with increasing incidence in Brazil and that has some animal species contributing to its maintenance. This study aimed at investigating the presence of Leishmania spp. in bats from an endemic area for visceral leishmaniasis, in order to assess its participation as possible potential reservoirs for this zoonosis. We collected spleen and skin samples of 375 bats from 19 cities in the State São Paulo, Brazil, areas of intense visceral leishmaniasis transmission. kDNA Leishmania ssp. amplification by PCR was positive in 4.53% bats and a higher positivity was seen in spleen samples (94.1%); two bats were positive for both skin and spleen samples. Trypanosoma spp. genomic DNA amplification was also investigated and 4.53% of the samples were positive, 23.5% of these were positive only for spleen, 76.5% for skin. One bat was positive for both Leishmania spp. and Trypanosoma spp. DNA amplification. These results demonstrate the occurrence of Leishmania spp. in bats from endemic area for visceral leishmaniasis, indicating the possibility of these being reservoirs of this zoonosis

Made available in DSpace on 2015-11-11T12:04:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 23.pdf: 6208595 bytes, checksum: 560226dd418c8b7cdf79aa7955f3ab5c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2014 / A detecção precoce das leishmanioses e a rápida instituição do tratamento são de suma importância para os indivíduos e comunidades afetadas, visto que pacientes contribuem para a manutenção do ciclo da doença. Diante das limitações apresentadas pelos métodos tradicionais de diagnóstico, a PCR tem se apresentado como ferramenta promissora para a detecção dos casos. No entanto, perdas de DNA durante o processo de purificação podem afetar mais significativamente o material genético dos parasitos, gerando resultados falso-negativos. Este estudo teve como objetivo desenvolver e avaliar dois protocolos de triplex PCR para investigar possíveis causas de negatividade no diagnóstico molecular das formas visceral (LV) e tegumentar (LT) das leishmanioses. Pares de primers para detecção de um controle interno (gene G3PD) e dois controles externos (DNA genômico de M. pachydermatis e plasmídeo comercial pUC18 foram adaptados a protocolos de PCR convencionais validados para a detecção de L. infantum e L.(V.) braziliensis e duas reações triplex foram otimizadas. Dados de sensibilidade (S), especificidade (E) e eficiência (e) dos novos sistemas foram calculados em 186 amostras de sangue coletadas de cães em áreas endêmicas, utilizando como referência protocolos de PCR e PCR em tempo real (qPCR) consagrados na literatura / A concordância entre os novos testes e os testes de referência foi determinada pelo cálculo do índice de Kappa. A tríplex PCR para o diagnóstico da LV mostrou S = 78.68 por cento, E= 85.29 por cento e e= 81.05 por cento com boa concordância (K = 0.60, p < 0.0001) com o conjunto de resultados PCR/qPCR. Para o diagnóstico da LT observou-se S = 97.29 por cento, E = 79.16 por cento, e = 90.16 por cento, com K = 0.78, (p < 0.0001) indicando excelente nível de concordância entre os testes. As novas ferramentas apresentadas podem ser aplicadas para aumentar a acurácia no diagnóstico das leishmanioses, contribuindo para a rápida implementação do tratamento e, reduzindo a longo prazo os índices de mortalidade e morbidade das leishmanioses

Orientador: Cáris Maroni Nunes / Banca: Elisa San Martin Mouriz Savani / Banca: Valéria Marçal Félix de Lima / Resumo: A leishmaniose visceral é uma doença em franca expansão no Brasil e que tem a participação de algumas espécies animais na manutenção de seu ciclo. Este trabalho objetivou investigar a presença de Leishmania spp. em morcegos de área endêmica para leishmaniose visceral e investigar a participação destes animais como possíveis reservatórios desta zoonose. Avaliou-se a presença de DNA dos parasitas, por meio da PCR, em amostras de baço e pele de 375 quirópteros originários de 19 cidades do Estado de São Paulo, Brasil, áreas endêmicas e com transmissão intensa para leishmaniose visceral. A amplificação de kDNA de Leishmania spp. por PCR foi positiva em 4,53% dos quirópteros, sendo que a maior positividade foi observada em amostras de baço (94,1%) e dois animais foram positivos tanto para amostras de pele como de baço; a presença de DNA do gene SSU 18S rRNA de Trypanosoma spp., também investigada, foi positiva em 4,53% das amostras sendo 23,5% positivas somente na amostra de baço, 76,5% somente na amostra de pele. Um animal apresentou positividade tanto para Leishmania spp. como para Trypanosoma spp. Os resultados indicam a ocorrência de Leishmania spp. em quirópteros da área endêmica para leishmaniose visceral, indicando a possibilidade de serem reservatórios desta zoonose / Abstract: Visceral leishmaniasis is a disease with increasing incidence in Brazil and that has some animal species contributing to its maintenance. This study aimed at investigating the presence of Leishmania spp. in bats from an endemic area for visceral leishmaniasis, in order to assess its participation as possible potential reservoirs for this zoonosis. We collected spleen and skin samples of 375 bats from 19 cities in the State São Paulo, Brazil, areas of intense visceral leishmaniasis transmission. kDNA Leishmania ssp. amplification by PCR was positive in 4.53% bats and a higher positivity was seen in spleen samples (94.1%); two bats were positive for both skin and spleen samples. Trypanosoma spp. genomic DNA amplification was also investigated and 4.53% of the samples were positive, 23.5% of these were positive only for spleen, 76.5% for skin. One bat was positive for both Leishmania spp. and Trypanosoma spp. DNA amplification. These results demonstrate the occurrence of Leishmania spp. in bats from endemic area for visceral leishmaniasis, indicating the possibility of these being reservoirs of this zoonosis / Mestre