A epidemia causada pelo vírus da imunodeficiência humana (HIV) é a mais importante das ultimas décadas. A despeito dos avanços no conhecimento da patogenia do vírus e da resposta imune à infecção, até o momento não existe uma vacina eficaz contra a aquisição do HIV. Diversas linhas de evidência indicam que anticorpos neutralizantes ou ligadores, linfócitos T CD4+ e T CD8+ desempenham um papel importante na imunidade contra o HIV. Os anticorpos que são capazes de neutralizar o HIV são direcionados principalmente à glicoproteína do envelope do vírus (env), mas os candidatos vacinais baseados na proteína de envelope gp120 monomérica testados até hoje falharam em induzir proteção nos ensaios de eficácia. Avanços no entendimento da estrutura e função da glicoproteína env tem facilitado o desenvolvimento de uma nova geração de imunógenos baseada em trímeros mais estáveis e solúveis da glicoproteína gp140. Em uma formulação vacinal além da escolha do antígeno, os adjuvantes desempenham um papel fundamental. Os adjuvantes são conhecidos por aumentar a imunogenicidade das vacinas, e nos últimos anos vários compostos, incluindo agonistas de receptores do tipo Toll (TLR) e NOD (NLR) têm demonstrado eficácia em ensaios clínicos. Em estudos prévios, nosso grupo demonstrou que a imunização de camundongos com uma vacina de DNA codificando 18 epítopos para linfócitos T CD4+ do HIV-1 (HIVBr18), foi capaz de induzir resposta específica e ampla de linfócitos T CD4+ e T CD8+. Devido ao importante papel do efeito auxiliar de linfócitos T CD4+ na resposta humoral nas imunizações assistidas por diversos adjuvantes, o objetivo central do trabalho foi verificar se a imunização inicial com a vacina de DNA HIVBr18 seria capaz de aumentar a magnitude/qualidade de resposta imune humoral e celular induzida pelo trímero de gp140 na presença de diferentes adjuvantes. Para tal, camundongos BALB/c foram imunizados inicialmente com a vacina HIVBr18 ou com o vetor vazio e posteriormente com a proteína gp140 na presença dos adjuvantes: completo de Freund (ACF), poly IC, CpG ODN 1826, Monofosforil lipídeo A (MPL), Muramildipeptídeo (MDP), Imiquimod (R837), e Resiquimod (R848). Observamos que a imunização inicial com HIVBr18 foi capaz de fornecer um auxílio cognato para a proliferação específica de linfócitos T CD4+ e T CD8+ e também para a produção da citocina IFNy. A análise da xx resposta humoral mostrou que a imunização inicial com a vacina HIVBr18, foi capaz de influenciar a produção das subclasses de imunoglobulinas, independente do adjuvante testado. No presente trabalho, também analisamos a influência dos adjuvantes na imunogenicidade da gp140. Os animais que receberam os adjuvantes MPL, poly IC e CpG ODN 1826 apresentaram títulos de anticorpos estatisticamente superiores quando comparados aos animais que receberam os adjuvantes Alum, MDP, R837 e R848. Observamos que os animais imunizados com a gp140 na presença dos diferentes adjuvantes desenvolveram células B do centro germinativo e células TCD4+ auxiliar foliculares. Estes resultados nos permitem concluir que a imunização inicial com HIVBr18 é capaz de alterar a qualidade da resposta humoral e celular gp140- específica. Assim, essa formulação poderia ser utilizada para auxiliar e/ou direcionar a resposta imune induzida por outros imunógenos como por exemplo o trímero de gp140. Podemos concluir também que diferentes formulações de adjuvantes que se encontram em ensaios clínicos como poly IC, CpG ODN e MPL podem ser capazes de induzir um resposta imune humoral e celular tão ou mais potente que aquela induzida pelo ACF / The epidemic caused by the human immunodeficiency virus (HIV) is the most important in the last decades. Despite advances in the knowledge about virus pathogenesis and immune response to infection, until now there is not an effective vaccine against HIV acquisition. Several evidences indicate that neutralizing or binding antibodies, CD4+ and CD8+ T lymphocytes play an important role in immunity against HIV. The antibodies that are able to neutralize HIV are primarily directed against the virus envelope glycoprotein (env), but the vaccine candidates based on monomeric gp120 envelope protein tested so far failed to induce protection in efficacy trials. Advances in understanding the structure and function of the env glycoprotein have facilitated the development of a new generation of immunogens based on trimers, a more stable and soluble form of gp140 glycoprotein. In a vaccine formulation, in addition to the antigen, adjuvants play a pivotal role. Adjuvants are known to increase the immunogenicity of vaccines and, in the last years, several compounds, including agonists of Toll-like receptors (TLR) and NOD (NLR), have presented efficacy in clinical trials. In previous work, our group demonstrated that immunization of mice with a DNA vaccine (HIVBr18) encoding 18 CD4+ T cells epitopes from HIV-1 was able to induce a broad CD4+ T and CD8+ T cells specific response.. Given the important role of CD4+ T cells in the humoral response after adjuvant-assisted immunization, the aim of the study was to verify whether an initial immunization with the DNA vaccine HIVBr18 could increase the magnitude/quality of humoral and cellular immune response induced by gp140 trimer in the presence of different adjuvants. Therefore, BALB/c mice were initially immunized with the vaccine HIVBr18 or empty vector and then with gp140 in the presence of the following adjuvants: Freund\'s complete (CFA), poly IC, CpG ODN 1826, monophosphoryl lipid A (MPL), Muramyl dipeptide (MDP), Imiquimod (R837), and Resiquimod (R848). We observed that initial immunization with HIVBr18 was able to provide cognate help for specific CD4+ and CD8+ T cells proliferation and also for IFN-y production. Analysis of humoral response showed that initial immunization with the HIVBr18 vaccine was able to alter the production of immunoglobulin subclasses independent of the adjuvant tested. This work also analyzed the influence of adjuvants on the immunogenicity of gp140. Mice that received the adjuvant MPL, poly IC and CpG ODN 1826 presented higher antibody titers when compared to animals that received Alum, MDP, R837 and R848. We observed that mice immunized with gp140 in the presence of all adjuvants tested developed germinal center B cells and follicular helper T cells (TFH). We conclude that initial immunization with HIVBr18 is able to alter the quality of specific humoral and cellular immune responses.. Therefore, this formulation could be used in combination with other immunogens, such as gp140, to help/redirect the immune response. We also conclude that the adjuvants that are in clinical trials such as poly IC, MPL and CpG ODN 1826 may be able to induce stronger humoral and cellular response than CFA

A síndrome de Rubinstein-Taybi (RTS, OMIM 180849) é uma doença autossômica dominante caracterizada por dismorfismos craniofaciais típicos, polegares e háluces alargados, infecções respiratórias recidivantes, retardo mental e de crescimento. RTS está associada com mutação no gene CREBBP. Na avaliação da imunocompetência de 17 portadores de RTS, observaram-se algumas alterações na resposta imune inata e adaptativa: leucocitose persistente, neutrófilos com desgranulopoiese, elevada concentração sérica de IgM e IgG1, produção normal de anticorpos contra antígenos protéicos e anti-polissacarídeos, elevados valores absolutos de células B totais, B \"naive\", B de memória, subpopulação B1 e de linfócitos B com IgM de membrana, e elevado percentual de apoptose de linfócitos B. DTH negativo para três antígenos e baixa resposta linfoproliferativa para antígenos protéicos. Diante do exposto, concluímos que os pacientes RTS apresentam alterações em vários mecanismos da resposta imune e principalmente, na imunidade humoral. Portanto, com este trabalho foi possível identificar as principais alterações imunológicas destes pacientes, e com isso, caracterizar quais os defeitos da resposta imune que pode estar associada com gene CREBBP. / Rubinstein-Taybi syndrome (RTS, OMIM 180849) is a dominant Mendelian disorder characterized by craniofacial dysmorphisms, broad thumbs and toes, mental retardation and growth and recurrent respiratory infections. RTS is classically associated with CREBBP gene mutations, but recently, p300 gene mutations were reported in three individuals. In imunonocompetence investigation of a group of 17 patient of the RTS, we found that the patients really show alterations in more than one arm of the immune response. The main alterations were found in: a) innate immunity, patients have defects in the distribution of the granules citoplasmatic and partial absence of F-actin filament part of its polymorphonuclear cells. In addition, some patients had decreased phagocytic activity, b) humoral immunity: elevated serum IgM antibodies and IgG1 subclass, normal production of antibodies for protein antigens and antipolysaccharide, high absolute values of B cell total, B \"naive\", B memory, subpopulation B1 and B lymphocytes with the membrane IgM, and high percentage of apoptosis of B lymphocytes; c) cellular immunity: delayed hypersensitivity skin tests negative for three antigens and low lymphoproliferative response to protein antigens. Values reduced percentage of CD45RA+ , CD45RO+ T cells and high doublepositive CD45RA+/CD45RO +) T cell. Ahead of the severe recurrent respiratory infections that affect the patients with RTS, and of the evaluation of immunocompetence of these patients, we find that they have several alterations in mechanisms of immune response and mainly in humoral immunity. Therefore, with this study was to identify the major immunological alterations of these patients, and with this, which characterize the main defects of the immune response of the patients RTS that can is associated with gene CREBBP.

A contribuição de células B para a memória imunológica se dá por duas distintas populações: células B de memória e células produtoras de anticorpos de longa vida (ASC). A inter-relação entre estas células bem como os mecanismos envolvidos para a manutenção destas tem sido pouco entendida. O veneno de Thalassophryne nattereri tem se mostrado capaz de induzir uma intensa resposta imune de memória. Nós avaliamos o efeito das Natterinas, que são as toxinas majoritárias e inéditas, na indução e manutenção da resposta imune de memória de células B. Este estudo, além de permitir um maior esclarecimento da resposta humoral de memória induzida pelo veneno do peixe T. nattereri, permitiu o estudo da complexa organização do compartimento de células B de memória e ASCs. Também evidenciamos a importância da atividade proteásica para a manutenção da cronicidade de resposta de células B no peritônio, no baço e na medula, como verificamos que a ativação de receptores inatos como osTLRs é decisiva para a geração e manutenção de ASCs B220pos/neg em resposta às Natterinas, dependentes das vias de sinalização MyD88 ou TRIF. Estas sinalizações controlam a magnitude, a qualidade e a longa duração da resposta humoral de memória. / The contribution of B cells for the immunological memory feels for two different populations: memory B cells and long-lived antibodies secreting cells (ASC). The interrelation among these cells as well as the mechanisms involved for the maintenance of these it has been little understood. The venom of Thalassophryne nattereri possesses the ability to induce an intense memory immune response. We evaluated the effect of Natterins that are majority toxins in the venom, in the induction and maintenance of the immune memory response of cells B. The study, besides allowing a larger explanation of the humoral memory response induced by the venom of the fish, it allowed the understanding of the complex organization of the memory B cells compartment, mainly of the subtype of long-lived cells (ASC). Also, we showed the importance of the protease activity of Natterins in the maintenance of the chronic B cell responses in the three analyzed compartments. We verify that the activation of Toll like receptors is decisive for the generation and maintenance of ASCs B220pos/neg in response to Natterins, dependent on the MyD88 or TRIF signaling that control the quality and the duration of the humoral memory response.

A contribuição de células B para a memória imunológica se dá por duas distintas populações: células B de memória e células produtoras de anticorpos de longa vida (ASC). A inter-relação entre estas células bem como os mecanismos envolvidos para a manutenção destas tem sido pouco entendida. O veneno de Thalassophryne nattereri tem se mostrado capaz de induzir uma intensa resposta imune de memória. Nós avaliamos o efeito das Natterinas, que são as toxinas majoritárias e inéditas, na indução e manutenção da resposta imune de memória de células B. Este estudo, além de permitir um maior esclarecimento da resposta humoral de memória induzida pelo veneno do peixe T. nattereri, permitiu o estudo da complexa organização do compartimento de células B de memória e ASCs. Também evidenciamos a importância da atividade proteásica para a manutenção da cronicidade de resposta de células B no peritônio, no baço e na medula, como verificamos que a ativação de receptores inatos como osTLRs é decisiva para a geração e manutenção de ASCs B220pos/neg em resposta às Natterinas, dependentes das vias de sinalização MyD88 ou TRIF. Estas sinalizações controlam a magnitude, a qualidade e a longa duração da resposta humoral de memória. / The contribution of B cells for the immunological memory feels for two different populations: memory B cells and long-lived antibodies secreting cells (ASC). The interrelation among these cells as well as the mechanisms involved for the maintenance of these it has been little understood. The venom of Thalassophryne nattereri possesses the ability to induce an intense memory immune response. We evaluated the effect of Natterins that are majority toxins in the venom, in the induction and maintenance of the immune memory response of cells B. The study, besides allowing a larger explanation of the humoral memory response induced by the venom of the fish, it allowed the understanding of the complex organization of the memory B cells compartment, mainly of the subtype of long-lived cells (ASC). Also, we showed the importance of the protease activity of Natterins in the maintenance of the chronic B cell responses in the three analyzed compartments. We verify that the activation of Toll like receptors is decisive for the generation and maintenance of ASCs B220pos/neg in response to Natterins, dependent on the MyD88 or TRIF signaling that control the quality and the duration of the humoral memory response.