Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-15T14:05:18Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1343500 bytes, checksum: 58f41cc305c0e551267e623ae275963e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T14:05:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1343500 bytes, checksum: 58f41cc305c0e551267e623ae275963e (MD5) Previous issue date: 1996-12-13 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho foi realizado com genótipos de soja com ausência de lipoxigenases (LOX) e das subunidades α' e G4 componentes das proteínas de reserva da soja, para verificar o efeito dessas ausências nas características físico-químicas das sementes. Também foi utilizada a técnica de RAPD-PCR para selecionar indivíduos geneticamente mais próximos do progenitor recorrente e na identificação de marcador RAPD ligado ao gene que codifica a subunidade α'. Os genótipos utilizados foram obtidos por meio de cruzamentos de progenitores contrastantes para os caracteres selecionados, seguidos de seleção por técnicas bioquímicas não destrutivas. Observou-se drástica redução na evolução de hexanal em genótipos sem lipoxigenases, indicando melhoria de sabor para alimentação humana. Não foi observada diminuição nos teores de proteína total da semente com a eliminação de lipoxigenases viiiou das subunidades α' e G4. A eliminação da subunidade G4 promoveu aumento do teor de metionina, enquanto com a eliminação de α' ocorreu diminuição no teor desse aminoácido. Foram utilizadas características fenotípicas e a técnica de RAPD-PCR para estimar as distâncias genéticas entre indivíduos das populações F 2 e F 3 (selecionados para ausência de LOX e das subunidades protéicas α' e G4) em relação à linhagem PB 2,3 (linhagem sem LOX 2 e 3) a ser usada como progenitor recorrente. Essas populações foram derivadas dos seguintes cruzamentos: 'PBTN' (sem LOX 1, 2 e 3)]. Tanto os caracteres fenotípicos quanto os marcadores RAPD permitiram a discriminação de indivíduos geneticamente mais próximos da linhagem PB 2,3, sendo sua em fase de repulsão ao gene que codifica a subunidade α'. / This work was carried out on soybean genotypes lacking lipoxygenases and the storage protein effect of this absence on the physical-chemical characteristics of seeds. The RAPD-PCR technique was also used to select individuals genetically more similar to the recurrent parent and to identify the RAPD marker linked to the gene which codifies the α' subunit. The genotypes were obtained from crosses among contrasting progenitors for the selected characters, followed by nondestructive biochemical analysis. A drastic reduction in the evolution of hexanal in genotypes without lipoxygenases was observed, indicating food flavor enhancement. No decrease in total seed protein content was observed with the elimination of lipoxygenases or α' and G4 subunits. The elimination of the G4 subunit promoted an increase in the methionine content where as elimination of the α' subunit caused a decrease in the amount of this amino acid. Phenotypic characteristics and the RAPD-PCR technique were used to estimate the genetic distances among individuals of the F 2 and F 3 populations (selected for the absence of LOX and of the α' and G4 protein subunits) in relation to PB 2,3 (a line without LOX 2 and 3) which will be used as recurrent parent. These populations were derived from the following crosses 'PBTN' (without LOX 1, 2 and 3)]. Both phenotypic characters and the RAPD markers allowed for discriminating individuals genetically more similar to the line PB 2,3, with their combined use being more efficient. The use of the Bulked Segregant Analysis technique made possible the identification of a RAPD marker linked in repulsion to the α' gene. / Tese antiga, sem ficha catalográfica e CPF autor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:53Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-21Bitstream added on 2014-06-13T19:43:43Z : No. of bitstreams: 1 000737473.pdf: 4424353 bytes, checksum: 83d4de348d8c1081e547b22ff3eab4d2 (MD5) / Lipoxigenases são enzimas que catalizam a oxido-redução de ácidos graxos poliinsaturados que contém em sua estrutura um ou mais grupos cis 1,4- pentadieno, produzindo hidroperóxidos através da incorporação de um oxigênio molecular. Durante anos a presença de lipoxigenase foi considerada exclusivamente eucariótica, presente em mamíferos, plantas, pequenos invertebrados marinhos e fungos. A função biológica dessas enzimas tem sido amplamente estudada. Porém, pouco tem sido descrito em organismos procariotos. O presente estudo teve por objetivos clonar e caracterizar bioquimicamente duas lipoxigenases de Shewanella woodyi ATCC 51908, caracterizar os produtos de reação destas enzimas e realizar um estudo filogenético e estrutural, comparando-as com lipoxigenases de eucariotos e procariotos. Parâmetros enzimáticos dessas enzimas foram descritos. A influência do pH e temperatura na atividade catalítica foram estudadas. Também foi determinado a preferência por substrato e o efeito da adição de vários íons divalentes que podem interferir na atividade catalítica. A enzima SWPrecLox de S. woodyi apresentou temperatura e pH ótimos de 31ºC e 8,0, respectivamente. Demonstrou afinidade por ácido linoleico, com uma Km de 0,47 mM e Vmax de 2,78 mmols min-1 mg-1. A enzima SWAracLOX teve ácido araquidônico como substrato preferente, com valores de Km 0,20 mM e Vmax 1,6 mmols min-1 mg-1. Atividade ótima foi alcançada com 27ºC e pH 7,0. A partir das estruturas moleculares das lipoxigenases de Plexaura homomalla e Pseudomonas aeruginosa, foram criados hipotéticos modelos estruturais de SWPrecLOX e SWAracLOX. / Lipoxygenases are enzymes that catalyze the oxido-reduction of polyunsaturated fatty acids in their structure that contains one or more groups cis 1,4- pentadiene, producing hydroperoxides from the incorporation of molecular oxygen. For years, the presence of lipoxygenases was considered a eukaryotic feature, present in mammals, plants, small marine invertebrates and fungi. The present study aimed to clone and characterize biochemically two lipoxygenases from Shewanella woodyi ATCC 51908, characterize the reaction products of these enzymes and conduct a phylogenetic and structural analysis, comparing them with eukaryotes and prokaryotes lipoxygenases. The biological function of these lipoxygenases has been widely studied. However, only few have been described in prokaryotes. Enzymatic parameters of these enzymes have been described. The influence of the pH and the temperature on the catalytic activity has been studied. Also has been studied the substrate preference and the effect of the addition of several divalent cations that can enhance or eliminate the catalytic activity. The enzyme SWPrecLox of S. woodyi showed temperature and pH optimum were 31 ºC and 8,0, respectively. Demonstrated substrate affinity for linoleic acid, with Km 0,47 mM and Vmax 2,78 mmols min-1 mg-1. The enzyme SWAracLox has arachidonic acid as preferred substrate, with Km 0,20 mM and Vmax 1,6 mmols min-1 mg-1. Optimum activity was reached at 27 ºC and pH 7,0. From the molecular structures of lipoxygenase Plexaura homomalla and Pseudomonas aeruginosa, were created a hypothetical structural model of the SWPrecLox and SWAracLox.

Orientadora: Maria Benincasa Vidotti / Co-orientadora: Angeles Manresa / Banca: Ana Claudia Barana / Banca: Vanildo Luiz Del Bianchi / Banca: Mariana Carina Frigieri / Banca: Janete Apparecida Desiderio / Resumo: Lipoxigenases são enzimas que catalizam a oxido-redução de ácidos graxos poliinsaturados que contém em sua estrutura um ou mais grupos cis 1,4- pentadieno, produzindo hidroperóxidos através da incorporação de um oxigênio molecular. Durante anos a presença de lipoxigenase foi considerada exclusivamente eucariótica, presente em mamíferos, plantas, pequenos invertebrados marinhos e fungos. A função biológica dessas enzimas tem sido amplamente estudada. Porém, pouco tem sido descrito em organismos procariotos. O presente estudo teve por objetivos clonar e caracterizar bioquimicamente duas lipoxigenases de Shewanella woodyi ATCC 51908, caracterizar os produtos de reação destas enzimas e realizar um estudo filogenético e estrutural, comparando-as com lipoxigenases de eucariotos e procariotos. Parâmetros enzimáticos dessas enzimas foram descritos. A influência do pH e temperatura na atividade catalítica foram estudadas. Também foi determinado a preferência por substrato e o efeito da adição de vários íons divalentes que podem interferir na atividade catalítica. A enzima SWPrecLox de S. woodyi apresentou temperatura e pH ótimos de 31ºC e 8,0, respectivamente. Demonstrou afinidade por ácido linoleico, com uma Km de 0,47 mM e Vmax de 2,78 mmols min-1 mg-1. A enzima SWAracLOX teve ácido araquidônico como substrato preferente, com valores de Km 0,20 mM e Vmax 1,6 mmols min-1 mg-1. Atividade ótima foi alcançada com 27ºC e pH 7,0. A partir das estruturas moleculares das lipoxigenases de Plexaura homomalla e Pseudomonas aeruginosa, foram criados hipotéticos modelos estruturais de SWPrecLOX e SWAracLOX. / Abstract: Lipoxygenases are enzymes that catalyze the oxido-reduction of polyunsaturated fatty acids in their structure that contains one or more groups cis 1,4- pentadiene, producing hydroperoxides from the incorporation of molecular oxygen. For years, the presence of lipoxygenases was considered a eukaryotic feature, present in mammals, plants, small marine invertebrates and fungi. The present study aimed to clone and characterize biochemically two lipoxygenases from Shewanella woodyi ATCC 51908, characterize the reaction products of these enzymes and conduct a phylogenetic and structural analysis, comparing them with eukaryotes and prokaryotes lipoxygenases. The biological function of these lipoxygenases has been widely studied. However, only few have been described in prokaryotes. Enzymatic parameters of these enzymes have been described. The influence of the pH and the temperature on the catalytic activity has been studied. Also has been studied the substrate preference and the effect of the addition of several divalent cations that can enhance or eliminate the catalytic activity. The enzyme SWPrecLox of S. woodyi showed temperature and pH optimum were 31 ºC and 8,0, respectively. Demonstrated substrate affinity for linoleic acid, with Km 0,47 mM and Vmax 2,78 mmols min-1 mg-1. The enzyme SWAracLox has arachidonic acid as preferred substrate, with Km 0,20 mM and Vmax 1,6 mmols min-1 mg-1. Optimum activity was reached at 27 ºC and pH 7,0. From the molecular structures of lipoxygenase Plexaura homomalla and Pseudomonas aeruginosa, were created a hypothetical structural model of the SWPrecLox and SWAracLox. / Doutor

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-06-09T15:54:19Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 566079 bytes, checksum: 9aa8db124f55d8bbff3b6e53ca3ab30b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-09T15:54:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 566079 bytes, checksum: 9aa8db124f55d8bbff3b6e53ca3ab30b (MD5) Previous issue date: 2011-06-01 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / As lipoxigenases (linoleato: oxigênio oxiredutase, EC 1.13.11.12) catalisam a adição do oxigênio molecular ao sistema cis, cis -1,4- pentadieno dos ácidos graxos poliinsaturados, formando hidroperóxidos dos ácidos graxos correspondentes. Estes hidroperóxidos estão envolvidos em reações enzimáticas que tem como produto aldeídos e cetonas, que são liberados e causam o “beany flavor” nos produtos de soja. Os produtos dessas enzimas participam também dos primeiros passos da rota de síntese do ácido jasmônico e ácido traumático, importantes sinalizadores sistêmicos de injúrias nas plantas, induzindo a síntese de compostos de defesa, como exemplo, os inibidores de proteases após injúrias e provocadas pela alimentação insetos herbívoros. O efeito da eliminação genética das lipoxigenases feita em plantas de soja, com o objetivo de reduzir o “beany flavor”, foi verificado na indução de defesa quando a planta é infestada com o herbívoro E. heros ou injuriada artificialmente através da comparação plantas normais. A atividade enzimática do “pool” de lipoxigenase e níveis de inibidores de protease foram determinados após 8 horas, no controle sem injúria e após injúrias nos grãos e nas folhas e infestadas com o percevejo marrom da soja E. heros. Foi também verificada a atividade de lipoxigenases e os níveis de inibidores de proteases em função do tempo no, genótipo regular para presença da enzima nos grãos. Os resultados desse trabalho sugerem que a ausência de lipoxigenases nos grãos afeta a indução de defesas nas plantas quando esta sofre injúrias e quando infestadas com o herbívoro. A diferença é ainda maior quando a resposta foi medida no local de ocorrência da injúria. As plantas de soja normais para presença das enzimas nas sementes responderam aos tratamentos de injúrias e infestação com E. heros com redução do “pool” de lipoxigenases e aumento nos níveis de inibidores de proteases no local onde foram aplicados os tratamentos. / The lipoxygenases (linoleate: oxygen oxidoreductases, EC 1.13.11.12) catalyze the addition of molecular oxygen to pentadiene of polyunsaturated fatty acids, forming hydroperoxides of related fatty acids. These hydroperoxides are involved in enzymatic reactions producing aldehydes (hexanal and nonenal) and ketones, which are released and cause the beany flavor in soy products. The products of these enzymes may also participate in the first steps of the jasmonic acid and traumatic acid pathway, eliciting response to systemic plant injury by inducing the synthesis of defense compounds such as protease inhibitors after injuries caused by artificial feeding herbivorous insects. The effect of genetic elimination of lipoxygenases made in soybean plants, aiming to reduce the beany flavor, was found in the induction of defense when the plant is infested with the herbivore E. heros or artificially injured by comparing normal plants. The enzyme activity of lipoxygenase and levels of protease inhibitors was measured after 8 hours in the control and without injury after treatment with artificial injuries in the pods and leaves and infested with brown stink bug, soybean E. heros. It was also verified the lipoxygenase activity and levels of protease inhibitors as a function of time in cultivating normal for the enzyme in the grains. The results of the study suggest that the absence of lipoxygenase in the grains affects the induction of defenses in plants when it suffers injuries and artificial when infested with the herbivore. The difference is even greater when the response was measured at the site of occurrence of injury. The normal soybean plants for the presence of enzymes in seeds responded to treatments for injuries and infestation with E. heros with a reduced pool of lipoxygenase and increased levels of protease inhibitors on the site where the treatments were applied. / Não foi localizado o CPF do autor.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-15T12:52:09Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 468933 bytes, checksum: 128ff5c3e55d1a3d284784b039daac3f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-15T12:52:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 468933 bytes, checksum: 128ff5c3e55d1a3d284784b039daac3f (MD5) Previous issue date: 1998-12-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / No presente trabalho foi avaliada a capacidade da planta de soja de responder ao ferimento mecânico através da via das lipoxigenases. Para isso, foi analisado o efeito do ferimento mecânico em folhas de soja sobre a atividade do “pool” de lipoxigenases (LOXs) e os possíveis produtos finais da via. Foram utilizados dois genótipos: um normal (variedade IAC-100) e outro com ausência de LOXs em suas sementes (linhagem IAC-100 TN). Folhas de plantas de soja dos dois genótipos foram submetidas a ferimento mecânico e coletadas 0, 6, 12, 24, 48 e 168 horas após o ferimento. Foram analisadas a resposta local e a resposta sistêmica. Os resultados do estudo bioquímico e cinético das LOXs de folhas de soja dos genótipos revelaram dois picos mais acentuados de atividade de LOXs a pH 4,5 e 6,0, tanto na resposta local quanto na sistêmica. O valor da temperatura ótima das isoenzimas de LOXs a pH 6,0 foi a 25 oC; valores de KM aparente na resposta local e na sistêmica aumentaram consideravelmente seis horas após o ferimento e diminuíram a partir de 12 horas, tendo em 168 horas o menor valor. O menor valor de KMapp em 168 horas sugere uma alteração do “pool” de LOXs em resposta ao ferimento nos dois genótipos analisados. Estes resultados indicam que a remoção genética das LOXs de semente de soja não está interferindo na expressão dos genes que codificam para as LOXs que atuam no mecanismo de defesa da planta de soja contra danos causados por ferimento. Os resultados do estudo dos produtos da via das lipoxigenases revelaram que nos dois genótipos ocorreu aumento de inibição tríptica após ferimento na resposta local e na sistêmica. Os valores em mg de tripsina inibida de proteína foram maiores em 6, 12, 24, 48 e 168 horas. Os resultados deste trabalho reforçam a hipótese de que em folhas de soja ocorre aumento da produção de inibidores de proteases em resposta a ferimento. Em ambos os genótipos estudados ocorreu ligeiro aumento dos níveis de hexanal em 48 e 168 horas e de aldeídos totais em 168 horas após tratamento. Neste estudo, os resultados mostraram que ocorreu aumento da atividade de lipoxigenases e de inibidores de proteases nas plantas de soja submetidas a ferimento. A remoção genética de LOXs da semente de soja no genótipo IAC 100 TN não interferiu na defesa da planta, pela via das lipoxigenases, em resposta ao ferimento mecânico. / In the present work the capacity of the soybean plant was evaluated to response to the mechanical wound through the pathway of the lipoxygenases. For that the effect of the mechanical wound was analyzed in soybean leaves about the activity of the " lipoxygenases pool " (LOXs) and the possible end products of the pathway. Was used: a normal genotype (variety IAC-100) and another with absence of LOXs in its seeds (lineage IAC-100 TN). Leaves of plants of soybean genotypes were submitted to mechanical and collected 0, 6, 12, 24, 48 and 168 hours, after the wound. The local response and response systemic were analyzed. The results of the biochemical and kinetic study of LOXs of leaves of soybean of the two genotypes revealed: two accentuated picks of activity of LOXs the pH 4,5 and 6,0, so much in the local response as in the systemic. The value of the great temperature of the enzymes of LOXs the pH 6,0 went for 25 oC, values of apparent KM in the local response and systemic increased considerably 6 hours after the wound and it decreased starting from 12 hours, tends in 168 hours the smallest value. The smallest value of KMapp in 168 hours suggests an alteration of the " pool " of LOXs in response to the wound in the two analyzed genotypes. These results indicate that the genetic removal of LOXs of soy seed is not interfering in the expression of the enzymes that act in the defense mechanism of the soybean plant to damages caused by wound. The results of the study of the products of the road of the lipoxygenases revealed that in the two genotypes happened increase of inhibition tryptic after wound in the local answer and systemic. The values in mg of inhibited trypsin of protein were larger in 6, 12, 24, 48 and 168 hours. Our results reinforce the hypothesis that in soybean leaves happens increase of the production of proteinases inhibitors in response to wound. In both studied genotypes it happened a slight increase of the levels of hexanal 48 and 168 hours and of total aldehydes in 168 hours after treatment. Our results showed that happened increase of the lipoxygenases activity and of proteinases inhibitors in the soybean plants submitted to wound. The genetic elimination of LOXs of the soybean seed didn't affect in the defense of the plant, for the pathway of the lipoxygenases, in response to the mechanical wound. / Não foi localizado o cpf do autor.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Agronomia, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-07-01T12:53:13Z No. of bitstreams: 1 2016_ElonhaRodriguesdosSantos.pdf: 1709458 bytes, checksum: 80ecf5b6705ab5bc678b1b48e81bd39e (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2016-07-26T22:10:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016_ElonhaRodriguesdosSantos.pdf: 1709458 bytes, checksum: 80ecf5b6705ab5bc678b1b48e81bd39e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T22:10:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016_ElonhaRodriguesdosSantos.pdf: 1709458 bytes, checksum: 80ecf5b6705ab5bc678b1b48e81bd39e (MD5) / A soja (Glycine max. (L.) Merrill) é uma importante alternativa alimentar na nutrição humana, apresenta alto teor e qualidade proteica, lipídios e vitaminas, além de ser considerada um alimento funcional. Entretanto, esse alimento é pouco usado pelos brasileiros devido ao sabor desagradável “beany flavor” atribuído pelas enzimas lipoxigenases. As lipoxigenases são dioxigenases que catalisam o oxigênio molecular aos ácidos graxos polinsaturados, formando compostos voláteis de cadeias curtas como aldeídos e cetonas, responsáveis pelos sabores indesejáveis. A inativação genética das lipoxigenases é considerada a alternativa mais eficiente de reduzir o sabor indesejável. Assim, a obtenção de cultivares de soja desprovidas dessas enzimas é um método interessante por manter as propriedades funcionais, contribuindo para otimização do sabor e aumentando sua aceitabilidade. Este trabalho teve como objetivo, obter genótipos de soja, com ausência das enzimas de lipoxigenases e que apresentem período juvenil longo com potencial para serem empregados no cultivo comercial, em regiões de baixa latitude no Cerrado Brasileiro. A etapa que analisou a introdução, crescimento e desenvolvimento da soja em baixa latitude foi realizada em Gurupi, TO. O desenho experimental foi de blocos ao acaso com quatro tratamentos e quatro repetições. Os tratamentos foram BRSMG 790A e BRS 257, cultivares de soja do tipo alimento: destinadas a alimentação; A7002 e M 8585, do tipo comum de grão, destinadas a produção de óleo e farelo. Avaliaram-se o crescimento e os componentes agronômicos. A análise de crescimento foi eficaz em avaliar a resposta biológica da soja do tipo de alimento, quando introduzida em baixas latitudes. As etapas seguintes que incluíram as hibridações, avanço das gerações F1 e F2 foram conduzidas em Brasília, DF. Os cruzamentos foram realizados em casa de vegetação usando genitores com período juvenil longo e genitores com ausência das enzimas lipoxigenases (destinadas ao consumo na alimentação humana). A geração F1 foi cultivada em canteiros na Estação de Biologia da UnB. Para realizar as avaliações agronômicas e determinação dos parâmetros genéticos foi instalado um experimento, na Fazenda Água Limpa (FAL), para avaliar as plantas da geração F2. Para determinar a presença e ausência das lipoxigenases foram realizadas analises, em laboratório, usando o método colorimétrico, nas progênies F2 com altura igual e superior a 70 cm. A análise dos componentes genéticos demostraram elevada probabilidade de ganhos por seleção evidenciada pelos elevados valores de herdabilidade, CVg/CVe nas populações F2, com seleção favorável para número de dias à maturação, altura de plantas, número de vagens por planta e rendimento. Entretanto, a influência ambiental elevada dificulta a seleção por altura de inserção de vagem. As correlações demostraram que é possível realizar seleções indiretas daqueles caracteres com menor herdabilidade para obter genótipos desejáveis. As hibridações entre cultivares de soja com período juvenil longo e cultivares com ausência de lipoxigenase, originaram na geração F2, 35 progênies de soja com período juvenil longo, com altura superior a 70 cm e ausência de lipoxigenases, com potencial de serem avançadas e lançadas como cultivar para a região do Cerrado. _______________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Soybean (Glycine max. (L.) Merrill) is an important alternative food in human nutrition, has high content and quality protein, lipids and vitamins, and is considered a functional food. However, this food is rarely used by Brazilians due to the unpleasant taste "beany flavor" provided by lipoxygenase. The lipoxygenases are dioxygenase catalyzing the molecular oxygen to polyunsaturated fatty acids, forming volatile compounds such as short chain aldehydes and ketones, responsible for undesirable tastes. Genetic inactivation of lipoxygenase is considered the most efficient alternative to reduce the undesirable taste. Thus, to obtain soybean cultivars lacking these enzymes is an interesting method for maintaining the functional properties, contributing to optimize the flavor and increasing their acceptability. This study aimed to obtain soybean genotypes with absence of the enzyme lipoxygenase and present long juvenile period with potential to be used in commercial cultivation in low-latitude regions in the Brazilian Cerrado. The step which analyzed the introduction, growth and soybean development in low latitude was held in Gurupi, TO. The experimental design was a randomized block design with four treatments and four replications. The treatments were BRSMG 790A and BRS 257, food type soybean cultivars intended for food; A 7002 and M 8585, the common type of grain intended for production of oil and meal. They evaluated growth and agronomic components. Growth analysis is effective in evaluating the biological response of soybean food type, when inserted in the lower latitudes. The following steps that included hybridizations, advancement of F1 and F2 generations were conducted in Brasilia, DF. The crosses were carried out in a greenhouse using parents with long juvenile period and parents with the free-lipoxygenase (intended for consumption as food). The F1 generation was grown in flower beds in the UNB Biology Station. To perform the agronomic evaluations and determination of genetic parameters was installed an experiment in, Água Limpa Farm (ALF), to evaluate plant of the F2 generation. To determine the presence and absence of lipoxygenase analyzes were performed in the laboratory using the colorimetric method, the F2 progeny in height and more than 70 cm. Analysis of genetic components demonstrated high probability of selection gains evidenced by the high heritability values, CVg / CVe in F2 populations with a favorable selection for number of days to maturity, plant height, number of pods per plant and yield. However, the high environmental influence difficult selection by pod insertion height. The correlations demonstrated that it is possible to indirect selections of those characters with lower heritability for desirable genotypes. Hybridizations between soybean cultivars with long juvenile period and cultivars free-lipoxygenase, originated in the F2 generation, 35 soybean progenies with long juvenile period, taller than 70 cm and free-lipoxygenase, with potential to be advanced and released as cultivate for the Cerrado region.

Orientador: Celio Kenji Miyasaka / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-03T20:55:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LucianoBrunodeCarvalho_M.pdf: 1363000 bytes, checksum: e8be41339935878e0220e14d99b01b70 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: A degradação oxidativa dos ácidos graxos da soja, ocorrida durante o processamento dos grãos, desenvolve o sabor de feijão verde ou de soja crua que altera a palatabilidade e conseqüentemente aceitabilidade dos produtos à base de soja, resultando em problemas para a indústria. A enzima lipoxigenase (linoleato: O2 oxirredutase, EC 1.13.11.12), catalizadora dessa reação, está presente na soja sob a forma de três isoenzimas caracterizada por três genes dominantes, LOX-1, LOX-2 e LOX-3. O objetivo do presente trabalho foi a identificação e determinação qualitativa e quantitativa das frações de lipoxigenases em sementes de soja Glycine Max provenientes da quarta geração do primeiro retrocruzamento (F4) dos mutantes isentos das respectivas LOX {PI-408251 (-LOX-1), PI-86023 (-LOX-2), TOHOKU nº 74 (-LOX- 3)}, com o cultivar comercial IAC-8, resultando nas linhagens IAC 97-3503, IAC 97- 3512, IAC 97-3545 e IAC 97-3803, fornecidas pelo Instituto Agronômico de Campinas (IAC). A análise qualitativa e quantitativa destes quatro genótipos e do IAC 8-2 foi realizada através de 1) Eletroforese em gel de poliacrilamida contendo SDS, para discriminar as bandas existentes; 2) Teste colorimétrico e; 3) Determinação da atividade enzimática em espectrofotometria na presença de: 3.1)substratos específicos e, 3.2) reação acoplada de descoramento do b-caroteno. Observou-se por eletroforese em gel as bandas correspondentes a cada isoenzima. A reação de oxidação da LOX sobre o b- caroteno (LOX-3) e azul de metileno (LOX-2 e LOX-1) foi sensível para a detecção da LOX-1 e LOX-3. O método de determinação de atividade enzimática com a utilização de substratos específicos (ácido linoléico para LOX-1 e LOX-3, e metil-linoleato para LOX- 2) também foi sensível somente para a detecção de LOX-1 e LOX-3. Através da reação de cooxidação do b-caroteno pela LOX-2 e LOX-3 foi possível determinar todas as isoenzimas, complementando os resultados obtidos através da eletroforese em gel de poliacrilamida. Constatou-se que através dos cruzamentos e retrocruzamentos realizados pelo IAC, na linhagem IAC 97-3503 não demonstrou atividade de LOX-1, não tendo ocorrido redução significativa (p<0,05) nos outras três linhagens estudadas. Evidenciou-se redução significativa (p<0,05) da LOX-2 nas linhagens IAC 97-3512 e IAC 97-3545, quando comparados ao padrão IAC 8-2. Para a LOX-3 ocorreu redução significativa (p<0,05) no cultivar IAC 97-3503, não ocorrendo diminuição nas outras três linhagens em estudo / Abstract: The oxidative degradation of the soybean fatty acids which has taken place at the grain processing, have developed the flavor of green been or raw soybean. This degradation alters the palatability and consequently the acceptability of the products made by soybean, resulting in some industries problems. The lipoxygenase enzyme (linolenato: O2 oxirredutase, EC 1.13.11.12), which is the component that catalyze the reaction, exists in soybean in the shape of 3 isoenzymes characterized by 3 dominant genes, LOX-1, LOX-2 and LOX-3. The main propose of this work was the identification and qualitative and quantitative determination of the lipoxygenase fractions in Glycine max soybean seeds, which had come from the fourth generation of the first crossing (F4) of the mutants that didn¿t have the respective LOX {PI-408251 (-LOX-1), PI-86023 (- LOX-2), TOHOKU no 74 (-LOX-3)}, using the commercial cultivar IAC-8, resulting in the seeds IAC 97-3503, IAC 97-3512, IAC 97-3545 and IAC 97-3808, which have been furnished by the Instituto Agronômico de Campinas (IAC). The qualitative and quantitative analysis of the samples were done beyond: 1)Electrophoresis in gel of poliacrilamida and SDS, to discriminate the existing bands; 2) color test and; 3) determination of the enzymatic activity using espectofotometric in the presence of: 3.1) specific subtracts and; 3.2) connected reaction of ß-carotene bleaching. It has been observed that beyond electrophoresis in gel each band corresponds to each isoenzyme. The oxidation reaction of LOX in the ß-carotene (LOX-3) and methyl blue (LOX-2 and LOX-1) was sensible for the detection of LOX-1 and LOX-3. The method for determination of enzymatic activities with utilization of substrates (linoleic acid for LOX-1 and LOX-3, and methyl-linoleate acid for LOX-2) it was sensible for detection of LOX-1 and LOX-3. Beyond the reaction of the co-oxidation of ß-carotene by LOX-2 and LOX-3, it was possible to determinate all the isoenzymes, adding the final result which was obtained first beyond electrophoresis in gel of poliacrylamide, and it has been saw that beyond the crossing and backcrosses been made by the IAC, the seed IAC 97-3503 haven¿t shown any activity of LOX-1, to he step of it hasn¿t been observed any significant reduction (p<0,05) in the others seeds that had been studied. A significant reduction had been shown (p<0,05) in LOX-2 in the seeds IAC 97-3512 and IAC 97- 3545 when they were compared to the standard IAC 8-2. To LOX-3 it had been observed a significant reduction (p<0,05) in the seed IAC 97-3503, and no reduction had taken place in the others cultures three seeds / Mestrado / Mestre em Alimentos e Nutrição

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-07-18T13:30:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 411024 bytes, checksum: e18556a527e2d31b711910c0cee97868 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-18T13:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 411024 bytes, checksum: e18556a527e2d31b711910c0cee97868 (MD5) Previous issue date: 2001-12-07 / Lipoxigenases (EC: 1.13.11.12) são enzimas que catalisam a dioxigenação estereoespecífica de ácidos graxos poliinsaturados que contêm o sistema cis,cis-1,4-pentadieno, formando hidroperóxidos que são posteriormente metabolizados, produzindo substâncias fisiologicamente ativas. A Via das Lipoxigenases promove a formação de compostos orgânicos voláteis responsáveis pelo beany flavor dos grãos de soja, o que limita a utilização dessa oleaginosa na alimentação humana. Outra barreira que limita o consumo da oleaginosa na dieta humana são os inibidores de proteases (KTI) que constituem um dos principais fatores antinutricionais da soja. A Via das Lipoxigenases está ligada a importantes processos fisiológicos da planta, tais como: crescimento, desenvolvimento, senescência e na biossíntese de moléculas regulatórias. É postulado que os inibidores de proteases atuam no mecanismo de defesa de plantas contra infestação de insetos e patógenos. Uma estratégia para eliminação do beany flavor e dos fatores antinutricionais é a retirada, pela manipulação genética, das lipoxigenases e dos inibidores de proteases (KTI) dos grãos de soja, desde que essa manipulação genética não altere as funções das lipoxigenases e dos inibidores de proteases presentes nas folhas de soja, tendo em vista suas participações nos mecanismos de defesa da planta a insetos-praga e patógenos. Esse trabalho avaliou a capacidade da planta da soja de responder ao ataque da lagarta da soja ( Anticarsia gemmatalis Hübner) através da Via das Lipoxigenases. Foram utilizados quatro genótipos da variedade CAC-1, contrastando para ausência e presença de genes que codificam as lipoxigenases e os inibidores de proteases nas sementes. As plantas de soja foram submetidas ao ataque da lagarta da soja ( Anticarsia gemmatalis Hübner) e os folíolos da primeira folha trifoliolar de plantas tratadas foram coletados em 6, 12 e 24 horas na presença do inseto e em 6, 12, 24 e 48 horas na ausência do inseto, com os seus respectivos controles. Análises bioquímico-cinéticas mostraram dois picos mais acentuados de atividade e atividade específica de lipoxigenases a pH 4,5 e 6,5, com temperatura ótima de atividade e atividade específica a 25°C. Para os quatro genótipos, as atividades foram maiores nos tratamentos que nos respectivos controles. Os resultados de atividade específica sugerem que a planta de soja respondeu ao ataque da lagarta pelo aumento da atividade de lipoxigenases. Para os quatro genótipos, os valores de K Mapp determinados no pool de lipoxigenases de folhas de soja em 6, 12 e 24 horas, em presença do inseto, e em 6, 12, 24 e 48 horas, na ausência do inseto, foram menores do que os respectivos controles. Houve um aumento nos níveis de inibidores de proteases para os quatro genótipos. A produção de hexanal e de aldeídos totais foi menor 48 horas após a retirada do inseto, indicando que ocorreu resposta da planta de soja ao ataque da lagarta pela Via das Lipoxigenases. / The lipoxygenases patway is responsible for the forming of organic compounds responsible for the beany flavor in the soybean seeds, which limits the usage of the oleaginous in the human alimentation. Another barrier that limits the consumption of the oleaginous in the human diets is the inhibitors of proteases (KTI), which constitutes one of the main anti-nutritional factors of the soybeans. The lipoxygenases patway is connected to chief physiological processes of the plant, such as: growth, development, senescence and the biosynthesis of the regulatory molecules. It is postulated that the proteases inhibitors act in the plants defense mechanism against the infestation of insects and p athogens. A strategy in the elimination of the beany flavor and the anti-nutritional factors is the removal, through genetic manipulation, of the lipoxygenases and the inhibitors of proteases (KTI) from the soybean seeds, provided that this genetic manipulation does not meddle with the functions of the lipoxygenases and the inhibitors of proteases present in the soybeans leaves, having in mind its partaking in the defenses mechanism towards the attack of the soybean caterpillar ( Anticarsia gemmatalis Hübner) through means of the lipoxygenases pathway. Four genotypes of the variety CAC-1 were used, contrasting to the absence and presence of gene that codify the lipoxygenases and the inhibitors of proteases in the seeds. The soybean plants were yielded to the attack of the soybean caterpillar ( Anticarsia gemmatalis Hübner) and the follicles of the first trifoliate leaf of the assisted plants were collected in 6,12 and 24 hours in the presence of the insect and 6, 12, 24 and 48 hours in the absence of the insect, with their respective controls. Biochemical-kinetic analyses displayed two more accentuated acme of activity and specific lipoxygenases activity at pH 4,5 and 6,5, with optimum activity temperature and specific activity at 25°C, on the four genotypes, the activities were greater in the treatment than on the respective controls. The results for specific activity suggest that the soybean plant responded to the attack of the caterpillar through the increase of lipoxygenases activity. On the four genotypes, the rates of K Mapp determined in the pool of lipoxygenases of soybean leaves, in 6, 12 and 24 hours, in the presence of the insect were smaller then respective controls. There was na increase in the proteases inhibition levels on the four genotypes. The production of hexanal and total aldehydes was fewer 48 hours after the removal of the insect, indicating that there happened a response from the soybean plant towards the attack from the caterpillar, through means of the lipoxygenases patway.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-06-15T16:44:39Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 493412 bytes, checksum: 82f744c7b2d321137b920948d0b0fe9d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-15T16:44:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 493412 bytes, checksum: 82f744c7b2d321137b920948d0b0fe9d (MD5) Previous issue date: 1997-11-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Foram conduzidos experimentos no Laboratório de Soja da Universidade Federal de Viçosa, com o objetivo de avaliar a qualidade fisiológica e sanitária das sementes de variedades e linhagens de soja, de ciclo precoce e tardio. Avaliaram-se sementes de três variedades e 13 linhagens de ciclo precoce, produzidas no ano agrícola de 1992/1993, das quais seis apresentaram ausência de lipoxigenases; e de 2 variedades e 14 linhagens de ciclo tardio e 2 variedades e 14 linhagens de ciclo precoce, produzidas no ano agrícola de 1994/1995. Dentre as linhagens de ciclo precoce, 11 apresentaram ausência de lipoxigenases. As sementes foram procedentes de experimentos de avaliação do comportamento de linhagens do Programa de Melhoramento da Soja da Universidade Federal de Viçosa, conduzidos em Capinópolis, Rio Paranaíba e Florestal, Minas Gerais, no delineamento experimental de blocos casualizados, com três repetições. As variedades e linhagens constituíram os tratamentos. Foram realizados o Teste-Padrão de Germinação e o Teste de Sanidade no Laboratório de Melhoramento de Soja da UFV. No Teste-Padrão de Germinação utilizaram-se oito repetições de 50 sementes de cada tratamento. No teste de sanidade utilizaram-se oito repetições de 25 sementes para cada tratamento e foram avaliados o total de fungos e as sementes infectadas com Phomopsis spp. e Fusarium spp. Sementes que apresentaram maior incidência de fungos apresentaram menor porcentagem de germinação. De maneira geral, a incidência de Phomopsis spp. decresceu entre os períodos de realização dos testes de sanidade, provavelmente, por causa do período de armazenamento de três meses. Sementes de melhor qualidade foram produzidas na localidade de Rio Paranaíba. De maneira geral, as sementes produzidas em Florestal apresentaram pior qualidade em relação as produzidas em Capinópolis e Rio Paranaíba, constatando-se maior incidência de fungos no ano agrícola de 1994/1995, para variedades e linhagens de ciclo precoce. A variedade Primavera apresentou alta incidência de Phomopsis spp. e Fusarium spp., com conseqüente diminuição na porcentagem de germinação. As variedades e linhagens de ciclo tardio apresentaram melhor qualidade de sementes que as variedades e linhagens de ciclo precoce, em todas as localidades. Apesar de as linhagens com ausência de lipoxigenases terem apresentado bom desempenho nos testes realizados, não foi possível estabelecer associação entre ausência e presença de lipoxigenases (Lox 2 e Lox 3) e qualidade das sementes, nas linhagens estudadas, por meio dos testes utilizados neste trabalho. / The experiments were conducted at the Laboratório de Soja of the and sanitary qualities of soybean lineage and varieties with the early and later cycle. Seeds of three varieties and thirteen lineages with early cycle which were produced in the agricultural year of 1992/1993 were evaluated. From these, six present lypoxygenase absence; from two varieties and 14 lineages with later cycle and two varieties and 14 lineages with early cycle, from which 11 present lypoxygenase absence, produced in the agriculture year of 1994/1995. The seeds proceeded from experiments on lineage behavior evaluation of the Programa de Melhoramento de Soja in the Universidade Federal de Viçosa, were carried out in Capinópolis, Rio Paranaíba an Florestal, in the State of Minas Gerais. The randomized block experimental design was used with four replicates, and the treatments were composed by the varieties and lineages. The Germination Standard-Test and the Sanitary Test were accomplished in the Laboratório de Melhoramento de Soja of UFV. For the Germination Standard Test, eight replicates with 50 seeds from each treatment were used. In the sanitary test, eight replicates with 25 seeds for each treatment were used and the total fungi and the seeds infected with Phomopsis spp. and Fusarium spp. were evaluated. The seeds presenting greater incidence of fungi showed a lower germination percentage. In general, the incidence of Phomopsis spp. decreased between the periods over which the sanitary tests were realized probably due to the storage period of three months. The better quality seeds were produced in Rio Paranaíba county. In general, the seeds produced in Florestal showed a worst quality in relation to those produced in Capinópolis and Rio Paranaíba, evidencing a higher fungi incidence in the agricultural year of 1994/1995 for the-earlier cycle varieties and lineages. The variety Primavera showed high incidence of Phomopsis spp. and Fusarium spp., with consequent decrease in the germination percentage. The later-cycle varieties and lineages presented a better seed quality than the early-cycle varieties and lineages, in all localities. In spite of the lineages with lypoxygenase absence presenting a satisfactory behavior in the realized tests, it was not possible to establish an association between the absence and presence of lypoxygenases (Lox 2 and Lox 3) with seed quality in the studied lineages, by means of the tests used in this study. / Dissertação antiga

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-10-27T15:46:47Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2280584 bytes, checksum: 9c9398a231a528e3fcdab696e4338b90 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-27T15:46:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2280584 bytes, checksum: 9c9398a231a528e3fcdab696e4338b90 (MD5) Previous issue date: 2002-04-12 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O presente trabalho teve como objetivo avaliar tecnologicamente uma farinha mista de trigo e de soja melhorada. Foram utilizadas uma linhagem de soja isenta de lipoxigenase (Doko RC TN) e uma variedade comercial contendo lipoxigenase (Doko RC). O produto consistiu de macarrão tipo espaguete preparado a partir da farinha mista de trigo e soja integral e desengordurada com três níveis de substituição de farinha de trigo por farinha de soja, 15%, 25% e 35% . A comparação da composição química das farinhas de soja com a farinha de trigo mostrou que as farinhas de soja contêm mais proteínas, lipídios e cinzas do que a farinha de trigo. A suplementação da farinha de trigo com farinhas de soja integral e desengordurada de Doko RC e de Doko RC TN causaram um aumento na absorção de água por parte das farinhas mistas, cujos valores foram acima de 60%. De acordo com os farinogramas das farinhas mistas observou-se que, quando adicionou farinha de soja integral ou desengordurada o tempo de mistura da massa, de um modo geral, foi maior quanto maior a porcentagem de farinha de soja. Quando adicionou farinha de soja integral ou desengordurada à farinha de trigo, a estabilidade da mistura apresentou-se menor do que sem adição, e foi tanto menor quanto maior a adição. A qualidade tecnológica da massa é caracterizada pela sua extensibilidade e elasticidade e são verificados através do extensograma. Com a adição de quantidades crescentes de farinha de soja integral ou desengordurada obteve-se valores menores de extensibilidade. Com relação às características tecnológicas das massas alimentícias, observou-se que o tempo de cozimento reduziu quando comparado ao macarrão controle, permanecendo em torno de 7 a 8 minutos, tanto para os macarrões produzidos com farinha integral e desengordurada de soja Doko RC quanto para as massas produzidas com farinha integral e desengordurada de soja Doko RC TN. Quanto à influência do tempo de armazenamento no tempo de cozimento das massas, observou-se uma tendência na redução no tempo de cozimento com o aumento do tempo de estocagem. A absorção de água pelos macarrões foi menor do que para o macarrão controle, os valores variaram em torno de 2,65 a 3,00. Para o parâmetro aumento de volume foi observado que os macarrões apresentaram valores que variaram em torno de 2,70 a 4,00 independente dos níveis de substituição e do tipo de farinha mista de trigo e soja. A perda de sólidos solúveis apresentou-se acentuada para todos os macarrões provenientes das farinhas mistas em todos os níveis de adição. O tempo de armazenamento influenciou significativamente a perda de sólidos solúveis pelos macarrões produzidos com farinhas mistas integrais ou desengorduradas de soja Doko RC e Doko RC TN. Quanto à composição centesimal, obteve-se macarrões com 23 g e 21,7 g de proteína provenientes da adição de 35% de farinha integral de soja Doko RC e de soja Doko RC TN, respectivamente. Os teores totais de isoflavonas nos macarrões (35%) foram de 1,28 mg /g de macarrão proveniente da farinha integral de soja Doko RC e de 3,92 mg/g de macarrão produzido com farinha integral de soja melhorada. Quanto ao teor de rafinose para macarrões produzidos com farinha integral de soja Doko RC os valores foram de 2,50, 2,81 e 4,36 mg/g de macarrão para os níveis de 15%, 25% e 35%, respectivamente. Para macarrões com farinha integral de soja melhorada os valores foram de 1,57, 2,32 e 3,14 mg/g de macarrão para os níveis de 15%, 25% e 35%, respectivamente. Os valores de estaquiose para macarrões com soja comercial foram 6,09, 10,06 e 16,19 mg/g de macarrão para os níveis de 15%, 25% e 35%, respectivamente. Para macarrões com soja melhorada estes valores foram 6,04, 10,49 e 14,46 mg/g de macarrão para os níveis de 15%, 25% e 35%, respectivamente. A acidez dos macarrões aumentou durante o armazenamento, especialmente para macarrões adicionados de farinha de soja Doko RC TN. Os macarrões produzidos com farinha de soja Doko RC e farinha de soja Doko RC TN obtiveram boa aceitação, situando-se na escala hedônica nas faixas “gostei ligeiramente” e “gostei moderadamente”. / Spaghetti was prepared from wheat flour blended with 15%, 25% and 35% of nonfatted or whole DOKO RC and DOKO RC TN soybean flours. Supplementing wheat flour caused an increase in farinograph water absorption in all blends. Dough development time and stability were lower for all blends containing DOKO RC or DOKO TN flours, and it was even lower as the percentage of blend increased. A decrease in the elasticity and extensibility of the doughs were obtained for all blends containing different levels of DOKO RC or DOKO RC TN flours. Cooked weight of fortified spaghetti showed a slightly decrease in all levels of supplementation with DOKO RC and DOKO RC TN flours as compared with a standard. Cooking time was significantly lower in all levels of blend with DOKO RC and DOKO RC TN. Cooking loss of all fortified spaghetti was higher as the level of substitution increased. It was observed that cooking loss was the highest for spaghetti made of all blends immediately after processing and after 30 days of storage. Sensory evaluation data of the fortified spaghetti were statistically analysed and the results showed that the 15% level of DOKO RC TN flour in spaghetti had better score, 7,23. Protein contents of spaghetti made with 15%, 25% and 35% of DOKO RC flour were 17,02%, 20,39% e 23,08%, respectively. Spaghetti fortified with 15%, 25% and 35% of DOKO RC TN flour showed protein levels of 16,56%, 18,85% and 21,50%, respectively. Daidzein and genistein levels were higher for spaghetti and of all blends of DOKO RC TN flours, except for glycitein. Raffinose and stachyose levels were higher for spaghetti fortified with all blends of DOKO RC TN flour.